Устанавливает метод определения содержания бензойной и сорбиновой кислот в молоке и молочных продуктах. Метод применим для молока, сухого молока, йогурта и других кисломолочных продуктов, для сыра и плавленого сыра и позволяет определять содержание сорбиновой и бензойной кислот в концентрациях более 5 мг/кг.
Идентичен ISO 9231/IDF 139:2008
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины и определения
4 Сущность метода
5 Реактивы
6 Аппаратура и оборудование
7 Отбор проб
8 Подготовка анализируемой пробы
9 Проведение измерений
10 Обработка результатов
11 Прецизионность метода
12 Оформление результатов
Приложение А (справочное) Результаты межлабораторных испытаний
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Библиография
14 страниц
Дата введения | 01.07.2017 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.02.2017 |
Актуализация | 01.01.2021 |
27.02.2015 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 75-П |
---|---|---|---|
16.06.2016 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 642-ст |
Разработан | Республиканское унитарное предприятие Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию | ||
Издан | Стандартинформ | 2016 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
ГОСТ ISO 9231 — 2015
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
(ISO 9231/IDF 139:2008, Milk and milk products — Determination of the benzoic and sorbic acids contents, IDT)
Издание официальное
Москва
Стаидартинформ
2016
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским унитарным предприятием «Республиканский научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию»
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 февраля 2015 г. № 75-П)
За принятие проголосовали: | ||||||||||||||||||||||||
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 июня 2016 г. № 642-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 9231-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 9231/IDF 139:2008 «Молоко и молочные продукты. Определение бензойной и сорбиновой кислот» («Milk and milk products — Determination of the benzoic and sorbic acids contents»).
Международный стандарт ISO 9231/IDF 139 был подготовлен Техническим комитетом ISO/ТС 34 «Пищевые продукты», Подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» и Международной молочной федерацией (IDF). Документ издается совместно ISO и IDF.
В разделе «Нормативные ссылки» и тексте стандарта ссылки на международный стандарт актуализированы.
В стандарт внесены незначительные редакционные изменения.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта в связи с особенностями системы межгосударственной стандартизации.
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международного стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном органе по техническому регулированиию и метрологии.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Используя линейный регрессионный анализ, была получена следующая линейная регрессия, х = Ь ♦ аус коэффициентом корреляции 0,9989653, для п = 7, s = 2,1815 и f0 95 = 2,57 (см рисунок А 2) для сорбиновой кислоты R = 8,9874655 ♦ 0,1304663jvs и для бензойной кислоты R = 8.9874965 ♦ 0,1304663 w^.
X — среднее значение (мг/кг)
У — повторяемость, г (мг/кг)
Рисунок А 1 — Повторяемости как функция среднего значения
X — среднее значение (мг/кг)
У — воспроизводимость. R (мг/кг)
Рисунок А 2 — Воспроизводимость как функция среднего значения
7
Приложение ДА (справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА 1 | |||||||||||||||
|
1) На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 707-2010 «Молоко и молочные продукты Руководство по отбору проб»
2) На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 2 Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений»
8
Библиография
(1J ИСО 707 | IDF 50 Milk and milk products — Guidance on sampling (Молоко и молочные продукты Руководство по отбору проб)
(2] ISO 5725-1 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General pnn-
ciples and definitions (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 1 Основные положения и определения]
(3] ISO 5725-2:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic meth
od for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 2 Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений]
(4] STIJVE Т. и HISCHENHUBER С. Определение низких уровней бензойной и сорбиновой кислот в йогуртах высокоэффективной жидкостной хроматографией. Deutsche Lebensmittel-Rundschau, 80 (1984), рр 81—84
(5] BUTIKOFER Н . BAUMANN Е и BOSSET F.O Mitt Gebiete Lebensm Hyg, 79 (1988). рр 392—405
(6] CARLM и BUTIKOFER U Bulletin of the International Dairy Federation, publication in preparation
9
УДК 637.12.054:543.2(083.74)(476) МКС 67.100.01
ЮТ
Ключевые слова: молоко, продукты молочные, кислота бензойная, кислота сорбиновая
Редактор ТС Ложникова Корректор Е Р Ароян Компьютерная верстка Ю В Поповой
Сдано в набор 20 06 2016 Подписано в печать 29 06 2016 Фор*лат 60 « 84’/8 Гарнитура Ариал
Уел пен п. 1,63
Набрано в ИД «Юриспруденция». 115419. Москва, ул Орджоникидзе. 11 www junsizdat ru y-bookQmail ru
Издано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995, Москва. Гранатный пер . 4 wwwgostmfo.ru mfo@gostmfo ru
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты» В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты» Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
© Стандартинформ. 2016
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
III
1 Область применения..................................................................1
2 Нормативные ссылки..................................................................1
3 Термины и определения...............................................................1
4 Сущность метода.....................................................................1
5 Реактивы............................................................................1
6 Аппаратура и оборудование............................................................2
7 Отбор проб..........................................................................3
8 Подготовка анализируемой пробы.......................................................3
9 Проведение измерений................................................................3
10 Обработка результатов...............................................................4
11 Прецизионность метода..............................................................4
12 Оформление результатов.............................................................5
Приложение А (справочное) Результаты межлабораторных испытаний..........................6
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов
межгосударственным стандартам...........................................8
Библиография.........................................................................9
IV
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Определение содержания сорбиновой и бензойной кислот в молоке и молочных продуктах
Milk and milk products Determination of sorbic and benzoic acids in milk and dairy products
Дата введения — 2017—07—01
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания бензойной и сорбиновой кислот в молоке и молочных продуктах.
Метод применим для молока, сухого молока, йогурта и других кисломолочных продуктов, для сыра и плавленого сыра и позволяет определять содержание сорбиновой и бензойной кислот в концентрациях более 5 мг/кг.
Для применения данного стандарта необходимы следующие документы, которые представлены в виде ссылок. Для ссылок на публикации с указанием года их издания действительны только указанные издания. Для ссылок на публикации без указания года издания действительно последнее издание приведенной публикации (включая поправки и изменения).
ISO 1042 Посуда лабораторная стеклянная Мерные колбы с одной меткой
Для целей настоящего стандарта применяются следующие термины и определения:
3.1 содержание бензойной и сорбиновой кислот: Количество бензойной и сорбиновой кислот в миллиграммах на килограмм молока или молочного продукта, определенное по настоящему стандарту.
Жиры и белки удаляют из слабого щелочного раствора продукта осаждением растворами Карре-за. Надосадочную жидкость фильтруют и добавляют метанол. Бензойную и сорбиновую кислоты разделяют высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с применением обращенно-фазовой колонки С10. измеряя поглощение на длинах волн 227 и 250 нм.
Используют только реагенты признанной аналитической чистоты и дистиллированная или деионизированная вода или вода соответствующей чистоты.
Издание официальное
5.1 Метанол (СН3ОН)
5.2 Растворы для осаждения (растворы Карреза 1, 2)
5.2.1 Раствор гексацианоферрата калия (II)
В мерную колбу вместимостью 100 см3 (6.3) помещают 10.6 г гексацианоферрата (II) калия трехводного (K4(Fe(CN)6) ЗН20) и растворяют в воде. Доводят водой до метки и перемешивают.
Примечание — 100 см3 раствора достаточно для проведения 40 анализов
5.2.2 Раствор ацетата цинка
Растворяют 21,9 г ацетата цинка двухводного [(CHXOOJjZn 2Н20] и 32 см3 уксусной кислоты (СН3СООН) в воде в мерной колбе вместимостью 100 см3 (6.3).
Доводят водой до метки и перемешивают.
Если двухводный ацетат цинка полностью не растворяется, нагревают колбу и ее содержимое на водяной бане (6.2) при температуре 70° С и постоянном перемешивании. После растворения двухводного ацетата цинка раствор охлаждают до комнатной температуры. Доводят водой до метки и перемешивают.
Примечание — 100 см3 раствора достаточно для проведения 40 анализов
5.3 Фосфатный буферный раствор, pH 6,7
Растворяют 2.5 г дигидрофосфата калия (KHjPO^ и 2.5 г гидрофосфата калия трехводного (К2НР04 ЗН20) в 1 дм3 воды и перемешивают. Полученный раствор фильтруют с помощью системы фильтрации растворителей (6.8).
5.4 Подвижная фаза для ВЭЖХ
Смешивают 10 объемных частей метанола (5.1) с 90 объемными частями раствора фосфатного буфера (5.3). Излишки газа удаляют легким вакуумом.
5.5 Раствор гидроокиси натрия, c(NaOH) = 0,1 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 (6.3) помещают 4,0 г гранул гидроокиси натрия и растворяют в воде (6.3). Доводят водой до метки и перемешивают.
5.6 Серная кислота, c(H2S04) = 0,5 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 500 см3 (6.3), содержащую 250 см3 воды, осторожно вносят 15 см3 концентрированной серной кислоты с массовой долей от 95 до 98 % и охлаждают. Полученный раствор доводят водой до метки и перемешивают.
5.7 Стандартные растворы сорбиновой и бензойной кислот
5.7.1 Основной стандартный раствор
В мерную колбу вместимостью 100 см3 (6.3) помещают 50 мг сорбиновой кислоты и 50 мг бензойной кислоты и растворяют в метаноле (5.1). Доводят метанолом (5.1) до метки и перемешивают.
Основной стандартный раствор годен в течение трех недель при хранении в холодильнике при температуре 4—7 °С.
5.7.2 Рабочий стандартный раствор
Для получения водно-метанольного раствора с объемными долями 50 % смешивают 500 см3 метанола (5.1) с 500 см3 воды.
В день проведения испытания пипеткой отбирают 5 см3 основного раствора (5.7.1) и помещают в мерную колбу вместимостью 250 см3 (6.3). Доводят 50 % водно-метанольным раствором до метки и перемешивают. Полученный рабочий раствор содержит 10 мкг/ см3 сорбиновой и бензойной кислот.
6.1 Весы аналитические с наименьшим пределом взвешивания 1 мг и ценой деления 0.1 мг.
6.2 Водяная баня с возможностью поддерживания температуры (70 ± 2) °С.
6.3 Мерные колбы вместимостью 100, 250. 500 и 1000 см3, соответствующие требованиям ISO 1042 для класса А. 1
6.4 Жидкостной хроматограф, оснащенный насосом высокого давления с верхним пределом давления не менее 4.37 мПа (6000 PSI). двухволновым УФ-детектором или УФ-детектором с диодной матрицей. самописцем или интегратором.
Двухволновой детектор должен иметь длину оптического пути, равную 1 см. и возможность измерения оптической плотности на длине волны 227 нм—для бензойной кислоты и 250 нм—для сорбиновой кислоты.
6.5 Колонка для ВЭЖХ, изготовленная из нержавеющей стали, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4 мм. заполненная обращенно-фазовым кремниевым сорбентом с привитыми октадецильными группами, например, Micro-Bondapak С181) или ее аналог.
6.6 Шприц для ВЭЖХ
6.7 Набор мембранных фильтров для водных проб с размерами пор фильтра 0.45 мкм.
6.8 Система фильтрации растворов, включая мембранные фильтры для водных растворов, размером пор 0.45 мкм.
6.9 Ультразвуковая баня.
6.10 рН-метр.
В лабораторию направляется репрезентативная проба без повреждений или изменений во время транспортировки или при хранении.
Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора приведен в [1].
При хранении испытуемого образца необходимо принимать меры, не допускающие порчи образца и изменения его состава.
8.1 Йогурты или другие кисломолочные продукты
Перед началом анализа образец гомогенизируют, осторожно нагревая при температуре 40 ’С при постоянном перемешивании. В мерную колбу вместимостью 100 см2 3 (6.3) помещают 20 ± 0.1 г гомогенизированного образца.
8.2 Другие молочные продукты
В стеклянный лабораторный стакан вместимостью 20 см3 помещают 3 ± 0.1 г пробы. Испытуемый образец полностью диспергируют в 10 см3 воды, добавляя воду небольшими порциями при постоянном перемешивании стеклянной палочкой.
Раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 (6.3), дважды ополоснув стакан 5 см3 воды
9.1 Осаждение жиров и белков и очистка
К испытуемой пробе (по 8.1 или 8.2) прибавляют 25 см3 раствора гидроокиси натрия (5.5) и перемешивают. Колбу и ее содержимое помещают в ультразвуковую баню (6.9) на 15 мин. или нагревают на водяной бане (6.2) при температуре 70 °С в течение 15 мин. Затем раствор охлаждают до комнатной температуры.
К испытуемому раствору при постоянном перемешивании добавляют раствор серной кислоты (5.6) и доводят pH раствора до 8 ± 1 ед. pH. Для осаждения жиров и белков добавляют 2 см3 раствора гексацианоферрата (II) калия (5.2.1) и 2 см3 раствора ацетата цинка (5.2.2). Энергично встряхивают и оставляют полученную суспензию для отстаивания на 15 мин. Затем добавляют 40 см3 метанола и перемешивают. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры.
Метанолом (5.1) доводят раствор до метки и снова перемешивают. Раствор оставляют на 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют при помощи мембранных фильтров (6.7).
9.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
ВЭЖХ-анализ проводят при комнатной температуре с использованием подвижной фазы (5.4) и скоростью потока 1.2 см3/мин. Перед началом анализа в течение 30 мин. хроматографическую систему промывают элюирующим раствором до установления стабильной нулевой линии.
Затем хроматографируют прозрачный раствор пробы, подготовленной по 9.1. и рабочий градуировочный раствор (5.7.2), инжектируя равные объемы в диапазоне от 5 до 20 мм3. Выходящий из колонки элюат анализируют УФ-детектором при длинах волн 227 и 250 нм, используя последовательное детектирование при настройках на две длины волны или одновременное двухволновое детектирование.
Примечание — Для проверки линейности градуировочного графика проводят точечную градуировку
Количество метанола в стандартных растворах и испытуемом образце намного выше, чем в подвижной фазе, что в некоторых случаях может повлиять на форму и разделение пиков. В таких случаях проверяют форму и разделение пиков, сравнивая их с пиками, полученными при хроматографировании стандартного раствора (5.7.1). в котором метанол (5.1) замещен на мобильную фазу (5 4) в эквивалентном количестве.
В данных условиях ориентировочное время удерживания бензойной и сорбиновой кислот составляет 5.5 и 7 мин. соответственно. Если пики выходят за пределы градуировочного графика, образец разбавляют необходимым объемом 50 % водного метанола и вводят в хроматограф от 5 до 20 мм3 полученного раствора для получения пиков нужной высоты.
Чтобы определить, элюируются ли в пробе какие-либо мешающие компоненты одновременно с сорбиновой кислотой, проверяют отношение УФ-сигналов при длине волны 250 и 227 нм.
В ходе анализа молока или сухого молока на хроматограмме после 8 мин. удерживания появляется третий пик. Этот пик соответствует природному продукту — гиппуровой кислоте. Пик гиппуровой кислоты может частично накладываться на сорбиновую кислоту. Поэтому разрешение сорбиновой и гиппуровой кислот на колонке должно быть больше 1.
Содержание сорбиновой кислоты ws и/или бензойной кислоты wb. выраженное в миллиграммах на килограмм, рассчитывают по формуле:
H«mV2
где H(s — высота или площадь пика, в соответствующих единицах, полученные для испытуемого раствора (см. 9.2);
Hs( — высота или площадь пика, в соответствующих единицах, полученные для рабочего стандартного раствора (см. 9.2); ms — масса, в микрограммах, введенного рабочего стандартного раствора (5.7.2); т — масса, в граммах, испытуемого образца (см. 8.1 или 8.2);
У, — объем, в см3, экстракта, приготовленного в 9.1 (= 100 см3);
У2 — объем, в мм3, введенного испытуемого раствора;
1000 — коэффициент пересчета миллилитров в микролитры.
Результаты испытания представляют с точностью до целого числа.
11.1 Межлабораторные испытания
Значения, полученные в ходе межлабораторных испытаний, могут быть не применимы для иных, отличных от указанных, матриц и уровней содержания кислот.
Значения повторяемости и воспроизводимости были получены на основании результатов двух межлабораторных испытаний, проводимых в 1984 и 2004 годах (см. приложение А). Испытания проводились на образцах с уровнем содержания бензойной и сорбиновой кислот в пределах от 6 до 920 мг/кг. 4
11.2 Повторяемость
Абсолютная разность между результатами двух параллельных испытаний, полученными с использованием одного и того же метода в одной и той же пробе в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором, использующим то же самое оборудование, в короткий интервал времени, не должна превышать значения, рассчитанного по уравнению: (2,235 +0.031 ws) (или wb) мг/кг, более чем в 5 % случаев.
11.3 Воспроизводимость
Абсолютная разность между результатами двух отдельных испытаний, полученными с использованием одного и того же метода в одной и той же пробе в различных лабораториях различными операторами, использующими различное оборудование, не должна превышать значения, рассчитанного по уравнению: ||8.987 + 0,130 ws)) (или wb) мг/кг, более чем в 5 % случаев.
Протокол испытания должен содержать как минимум следующую информацию:
a) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
b) используемый метод отбора проб;
c) используемый метод испытания со ссылкой на этот стандарт;
d) все рабочие детали, не установленные в этом стандарте или рассматриваемые как факультативные, вместе с деталями всех нюансов, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;
e) полученные результаты анализа и. если выполняется условие повторяемости, окончательный средний результат. 5
Приложение А (справочное)
Результаты межлабораторных испытаний
Значения повторяемости и воспроизводимости были получены на основании результатов двух международных межлабораторных испытаний, проводимых в 1984 (4) и 2004 [6] годах соответственно
Результаты, полученные в ходе этих испытаний, были подвергнуты статистическому анализу в соответствии с [2)* и [3)*. Данные прецизионности приведены в таблице А 1
Таблица А1— Статистические результаты межлабораторных испытаний
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3 Образцы А и В Ароматизированный йогурт ь Образцы С и D Плавленый сыр (дополнительную информацию см в литературном источнике [6)) с В ходе подготовки пробы добавлена сорбиновая кислота до концентрации 40 мг/кг |
Используя линейный регрессионный анализ, была получена следующая линейная регрессия х - b * ау с коэффициентом корреляции 0.9973486 для п = 7. s = 0.8249 и /одб = 2.57 (см рисунок А 1) для сорбиновой кислоты г = 2,2354088 + 0,0307787 ws и для бензойной кислоты г = 2.2354088 ♦ 0,0307787 wb
1
2
Micro-Bondapak С18 Ф доступное коммерческое название продукта Эта информация дана для удобства пользователей стандарта, но не является рекомендацией названного продукта
3
4
5
В Российской Федерации действуют ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 1 Основные положения и определения», ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 2 Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений». ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 3 Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений» и ГОСТ Р ИСО 5725-4-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 4 Основные методы определения правильности стандартного метода».
6