Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

19 страниц

Устанавливает общие требования к методу обнаружения и идентификации специфического микроорганизма Staphylococcus aureus в парфюмерно-косметической продукции. Микроорганизмы, рассматриваемые в стандарте, в зависимости от применяемой национальной практики или требований национальных регламентов в разных странах могут относиться или не относиться к специфическим.

Метод, установленный в стандарте, основан на обнаружении Staphylococcus aureus в неселективной жидкой среде (бульоне для обогащения) с последующим выделением микроорганизмов на селективной агаризованной среде. Можно применять и другие методы в зависимости от требуемого уровня обнаружения.

 Скачать PDF

Консультация по подбору ГОСТабесплатно

Оглавление

Введение

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Сущность метода

5 Разбавители и питательные среды

     5.1 Общие положения

     5.2 Разбавители для бактериальной суспензии (раствор хлорида натрия с триптоном)

     5.3 Питательные среды

6 Инструменты и стеклянная лабораторная посуда

7 Штаммы микроорганизмов

8 Обращение с парфюмерно-косметической продукцией и лабораторными пробами

9 Методика

     9.1 Общие рекомендации

     9.2 Приготовление исходной суспензии в бульоне для обогащения

     9.3 Инкубация инокулированного бульона для обогащения

     9.4 Обнаружение и идентификация Staphylococcus aureus

10 Представление результатов (обнаружение Staphylococcus aureus)

11 Нейтрализация антимикробных свойств продукции

     11.1 Общие положения

     11.2 Приготовление инокулята

     11.3 Пригодность метода обнаружения

12 Протокол испытания

Приложение А (справочное) Другие питательные среды

Приложение В (справочное) Нейтрализаторы антимикробной активности консервантов и промывные жидкости

Библиография

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международного и европейского стандартов межгосударственным стандартам

 

19 страниц

Дата введения01.02.2019
Добавлен в базу01.02.2020
Актуализация01.02.2020

Организации:

27.07.2018УтвержденЕвразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации110-П
РазработанБелГИМ

Perfume and cosmetic products. Microbiology. Detection of Staphylococcus aureus

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19

ЕВРАЗИЙСКИЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(ЕАСС)

EURO-ASIAN COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

(EASC)



МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ


ГОСТ

ISO 22718— 2018


ПРОДУКЦИЯ ПАРФЮМЕРНО-КОСМЕТИЧЕСКАЯ

Микробиология. Обнаружение Staphylococcus aureus


(ISO 22718:2015, IDT)


Издание официальное



Минск

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации


Предисловие

Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации (ЕАСС) представляет собой региональное объединение национальных органов по стандартизации государств, входящих в Содружество Независимых Государств. В дальнейшем возможно вступление в ЕАСС национальных органов по стандартизации других государств.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установпены ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки. принятия, обновления и отмены».

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт метрологии» (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

там голосования в АИС МГС (протоколом от 27 июля 2018 г. №110-П) За принятие стандарта проголосовали:_

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004—97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Кыргызстан

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Узбекистан

UZ

Узстандарт


3    ПРИНЯТ Евразийским советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результа

4    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 22717:2015 «Косметика. Микробиология. Обнаружение Pseudomonas aeruginosa» («Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa». IDT).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

Международный стандарт разработан техническим комитетом ISO/TC 217 «Косметика» Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международного и европейского стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

5    ВЗАМЕН ГОСТ ISO 22717-2013

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных (государственных) стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных (государственных) органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация также будет опубликована в сети Интернет на сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»

Исключительное право официального опубликования настоящего стандарта на территории указанных выше государств принадлежит национальным (государственным) органам по стандартизации этих государств.

11 Нейтрализация антимикробных свойств продукции

11.1    Общие положения

Описанные ниже процедуры демонстрируют, что микроорганизмы могут расти в условиях проведения анализа.

11.2    Приготовление инокулята

Перед проведением испытания засевают поверхность агаризованной среды с соево-казеиновым гидролизатом (SCDA) или другой подходящей среды (неселективной и не оказывающей нейтрализующего действия) штаммом Staphylococcus aureus. Инкубируют чашку при температуре (32,5 ± 2.5) °С в течение 18-24 ч.

Стерильной петлей штриховыми движениями снимают с поверхности среды выросшие колонии и ресуспендируют в разбавителе для приготовления стандартной суспензии с концентрацией 1 *10в КОЕ/см3 (например, используя спектрофотометр, см. ISO 21148:2005 (приложение С)).

Стандартную суспензию и ее разведения используют в течение 2 ч.

11.3    Пригодность метода обнаружения

11.3.1    Процедура

11.3.1.1    В пробирках, содержащих по 9 см3 разбавителя, готовят разведения стандартной суспензии. чтобы в конечном счете получить концентрацию, равную 100-500 КОЕ/см3. Для подсчета окончательного количества жизнеспособных микроорганизмов в разведенной стандартной суспензии вносят 1 см3 суспензии в чашку Петри и заливают 15-20 смэ расплавленной агаризованной среды, которая выдерживалась на водяной бане при температуре, не превышающей 48 °С. Дают среде в чашках застыть. а затем инкубируют при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 20-24 ч.

11.3.1.2    Готовят в двух повторностях исходную суспензию пробы в пробирке или колбе, соблюдая выбранные для анализа условия (не менее 1 г или 1 см3 испытуемой продукции и определенный объем бульона для обогащения). Если используют метод мембранной фильтрации, то фильтруют в двух повторностях не менее 1 см3 испытуемой продукции и переносят каждый мембранный фильтр в пробирку или колбу, содержащую бульон для обогащения в условиях, выбранных для проведения испытания.

11.3.1.3    Стерильно вносят 0,1 см3 разведенной стандартной суспензии (см. 11.3.1.1) микроорганизмов в одну пробирку или колбу (тест на пригодность). Перемешивают, затем инкубируют обе пробирки или колбы (тест на пригодность и контроль неконтаминированной пробы) при температуре (32.5 ± 2.5) °С в течение 20-24 ч.

11.3.1.4    Проводят выделение для каждой пробирки или колбы (тест на пригодность и контроль неконтаминированной пробы). Используя стерильную петлю, делают высев инкубированной смеси методом истощающего штриха (при таких же условиях, как в тесте) на поверхность агаризованной среды Байрд-Паркер, разлитой в чашки Петри (диаметром от 85 до 100 мм) в количестве приблизительно от 15 до 20 см3. Инкубируют чашки при температуре (32.5 ± 2.5) вС в течение 24-48 ч.

11.3.2 Интерпретация результатов теста на пригодность

Проверяют, что разведенная стандартная суспензия бактерий вида Staphylococcus aureus (см. 11.3.1.1) содержит от 100 до 500 КОЕ/см3.

Нейтрализация подтверждается и метод обнаружения является удовлетворительным, если ростовые характеристики Staphylococcus aureus наблюдаются на чашке, которая использовалась в тесте на пригодность, и если отсутствует рост на контрольной чашке.

Если обнаружен рост на контрольной чашке (контаминированная продукция), нейтрализация под-тверждается и метод обнаружения является удовлетворительным, если бактерии вида Staphylococcus aureus выделены на чашке Петри, используемой в тесте на пригодность.

Отсутствие роста на чашках Петри, используемых в тесте на пригодность, указывает на то. что антимикробная активность все еще не нейтрализована и требуется изменение условий метода путем увеличения объема питательного бульона (при этом количество продукции остается тем же), или путем добавления большего количества инактивирующего вещества в бульон для обогащения, или путем комбинации изменений, которые позволят обеспечить рост Staphylococcus aureus.

Если все еще невозможно выделить жизнеспособные культуры несмотря на введение подходящих инактивирующих веществ и значительное увеличение объема бульона, как описано выше, это указывает на малую вероятность контаминации продукции бактериями вида Staphylococcus aureus.

12 Протокол испытания

Протокол испытания должен содержать следующую информацию:

a)    ссылку на настоящий стандарт;

b)    всю информацию, необходимую для полной идентификации продукции;

c)    примененный метод;

d)    полученные результаты;

e)    все детали приготовления исходной суспензии;

О описание метода с указанием использованных нейтрализующих веществ и питательных сред; д) подтверждение пригодности метода, даже если испытание было выполнено отдельно; h) любые особенности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные. вместе с подробностями, которые могли повлиять на полученные результаты.

Другие питательные среды А.1 Другие бульоны для обогащения

А.1.1 Жидкая питательная среда с соево-казеиновым гидролизатом А.1.1.1 Состав

-    Панкреатический гидролизат казеина — 15,0 г;

-    папаиновый гидролизат соевой муки — 5.0 г;

-    хлорид натрия — 5,0 г;

-    вода — 1 ООО см3.

А.1.1.2 Приготовление

Растворяют последовательно все компоненты (или готовую сухую среду) в воде, нагревая при необходимости. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 ° С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7.3 ± 0.2 при измерении при комнатной температуре.

Разливают среду в подходящую лабораторную посуду.

А.1.2 Нейтрализующий бульон D/Е (нейтрализующий бульон Dey/Engley) [7]

А.1.2.1 Состав

-    Глюкоза — 10.0 г;

-    соевый лецитин — 7.0 г;

-    пятиводный тиосульфат натрия — 6.0 г;

-    полисорбат 80 — 5,0 г;

-    панкреатический гидролизат казеина — 5.0 г;

-    бисульфит натрия — 2.5 г;

-    дрожжевой экстракт — 2.5 г;

-    тиогликолят натрия — 1.0 г;

-    краситель бромкрезоловый пурпурный — 0,02 г;

-    вода — 1 000 см3.

А.1.2.2 Приготовление

Растворяют последовательно все компоненты или готовую сухую среду в кипящей воде до полного растворения. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7.6 ± 0.2 при измерении при комнатной температуре.

А.1.3 Модифицированный летиновый (Letheen) бульон А.1.3.1 Состав

-    Ферментативный гидролизат мяса — 20,0 г;

-    панкреатический гидролизат казеина — 5.0 г;

-    говяжий экстракт — 5.0 г;

-    дрожжевой экстракт — 2.0 г;

-    лецитин — 0,7 г;

-    полисорбат 80 — 5.0 г;

-    хлорид натрия — 5,0 г;

-    бисульфит натрия — 0.1 г;

-    вода — 1 000 см3.

А.1.3.2 Приготовление

Растворяют последовательно в кипящей воде полисорбат 80 и лецитин до их полного растворения. Растворяют другие компоненты, перемешивая при нагревании. Перемешивают осторожно во избежание пенообразования. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7.2 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.

А.2 Другая селективная агаризованная среда

А.2.1 Солевой агар с маннитом (агар Chapman)

А.2.1.1 Состав

-    Говяжий экстракт — 1.0 г;

-    панкреатический гидролизат казеина — 5.0 г;

-    панкреатический гидролизат мяса — 5.0 г;

-    хлорид натрия — 75.0 г;

-    D-маннитол — 10.0 г;

-    агар — 15,0 г;

-    феноловый красный — 0.025 г;

-    вода — 1 000 см3.

А.2.1.2 Приготовление

Смешивают все компоненты, нагревают при интенсивном перемешивании и кипятят в течение 1 мин для растворения. Разливают по фпаконам и стерилизуют.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7,4 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.

А.2.2 Агаризованная среда Фогеля-Джонсона (Vogel-Johnson)

А.2.2.1 Состав

-    Панкреатический гидролизат казеина — 10.0 г;

-    дрожжевой экстракт — 5.0 г;

-    маннитол — 10,0 г;

-    однозамещенный фосфат калия — 5.0 г;

-    хлорид лития — 5.0 г;

-    глицин — 10,0 г;

-агар — 16.0 г;

-    феноловый красный — 0,025 г;

-    вода — 1 000 см3.

А.2.2.2 Приготовление

Кипятят раствор, состоящий из растворенных компонентов, в течение 1 мин. Стерилизуют, охлаждают до температуры 45 °С - 50 °С и добавляют 20 см3 стерильного раствора теллурита калия.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7,2 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.

Нейтрализаторы антимикробной активности консервантов и промывные жидкости

Консерванты

Химические вещества, способные нейтрализовать антимикробную активность консервантов

Примеры подходящих нейтрализаторов и промывных жидкостей (для методов мембранной фильтрации)

Фенольные соединения:

-парабены;

-    фе но кси этанол;

-    фенилэтанол;

-    и другие анилиды

Лецитин, полисорбат 80, конденсат этиленоксида жирного спирта. неионогенные поверхностноактивные вещества

Полисорбат 80. 30 г/дм3, + лецитин. 3 г/дм3. Конденсат этиленоксида жирного спирта.

7 г/дм3, + лецитин. 20 г/дм3. + полисорбат 80.4 г/дм3.

D/E-нейтрализующий бульон а>.

Промывная жидкость: дистиллированная вода; триптон. 1 г/дм3 + NaCI. 9 г/дм3; лоли-сорбат 80. 5 г/дм3

Четвертичные аммониевые соединения, катионогенные поверхностно-активные вещества

Лецитин, сапонин, полисорбат 80 додецилсульфат натрия

Конденсат этиленоксида жирного спирта

Полисорбат 80. 30 г/дм3 + додецилсульфат натрия, 4 г/дм3, + лецитин, 3 г/дм3. Полисорбат 80. 30 г/дм3, + сапонин.

30 г/дм3, + лецитин, 3 г/дм3. D/E-нейтрализующий бульона).

Промывная жидкость: дистиллированная вода: триптон. 1 г/дм3, + NaCI. 9 г/дм3; полисорбат 80. 5 г/дм3

Альдегиды, ингредиенты, выделяющие формальдегид

Глицин, гистидин

Лецитин. 3 г/дм3. + полисорбат 80, 30 г/дм3, + L-гистидин, 1 г/дм3.

Полисорбат 80. 30 г/дм3. + сапонин. 30 г/дм3, + L-гистидин, 1 г/дм3, + L-цистеин.

1 г/дм3.

D/E-нейтрализующий бульон *>.

Промывная жидкость: полисорбат 80.

3 г/дм3, + L-гистидин, 0.5 г/дм3

Окисляющие соединения

Тиосульфат натрия

Тиосульфат натрия. 5 г/дм3.

Промывная жидкость: тиосульфат натрия, 3 г/дм3

Изотиазолиноны,

имидазолы

Лецитин, сапонин

Амины, сульфаты, меркаптаны, бисульфит натрия, тиогликолят натрия

Полисорбат 80, 30 г/дм3, + сапонин,

30 г/дм3, + лецитин. 3 г/дм3.

Промывная жидкость: триптон, 1 г/дм3, ♦ NaCI. 9 г/дм3; полисорбат 80. 5 г/дм3

Бигуаниды

Лецитин, сапонин, полисорбат 80

Полисорбат 80. 30 г/дм3. + сапонин, 30 г/дм3, + лецитин, 3 г/дм3.

Промывная жидкость: триптон. 1 г/дм3, + NaCI. 9 г/дм3; полисорбат 80. 5 г/дм3

Соли металлов (Си. Zn, Hg), ртутьоргани-ческие соединения

Бисульфат натрия. L-цистеин Сульфгидрильные соединения, тиогликолевая кислота

Тиогликолят натрия. 0.5 или 5 г/дм3. L-цистеин. 0.8 или 1,5 г/дм3. D/E-нейтрализующий бульон •>. Промывная жидкость: тиогликолят натрия. 0.5 г/дм3

Примечание — См (8J. [11]

а) D/Е-нейтрализующий бульон (Dey/Engley-нейтрализующий бульон) см в приложении А

Библиография


(1)

(21

[3]

[4]

[51

[61

[71

[81

[91

[101


COLIPA, Guidelines on Microbial Quality Management, published by the European Cosmetic,

Toiletry and Perfumery Association. 1997

(Руководство по менеджменту качества в микробиологии)

CTFA, Microbiology Guidelines, published by the Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association ISBN 1-882621-32-8,2001 (Руководство no микробиологии)

E P. Microbiological Examination of non-sterile products. 4th edition, published by the European Pharmacopoeia, 2002

(Микробиологическая экспертиза нестерильной продукции)

FDA. Bacteriological Analytical Manual. 8th edition, published by the U.S. Food and Drug Administration, 1995, http://www.cfsan.fda.gov/-ebam/bam-23.html (Руководство по бактериологическому анализу)

JP 14, General Tests — Microbial Limit test, published by the Japanese Pharmacopoeia, 2001 (Общие испытания. Испытания на предельное содержание микроорганизмов)

USP 28. Microbial Limit test (61). published by the U.S. Pharmacopoeia. 2005 (Испытания на предельное содержание микроорганизмов)

Atlas. R.M. Handbook of Microbiological Media. CRC Press. ISBN 0-8493-2944-2. 1993 (Справочник по микробиологическим средам)


Singer. S. The Use of Preservative Neutralizers in Diluents and Plating Media. Cosmetics and Toiletries. 102. 55. December 1987

(Применение нейтрализаторов консервантов в разбавителях и средах для чашек Петри. Косметика и туалетные принадлежности)


ISO 21149


ISO 18415


[111


EN 1040


[121


ISO 29621


Cosmetics — Microbiology — Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria

(Косметика. Микробиология. Подсчет и обнаружение аэробных мезофиль-ных бактерий)

Cosmetics — Microbiology — Detection of specified microorganisms and non-specified microorganisms

(Косметика. Микробиология. Обнаружение специфических и неспецифических микроорганизмов)

Chemical disinfectants and antiseptics — Basic bactericidal activity — Test method and requirements (phase 1)

(Средства химические дезинфицирующие и антисептики. Базовая бактерицидная активность. Метод испытания и требования (этап 1))

Cosmetics — Microbiology — Guidelines for the risk assessment and identification of microbiologically low-risk products

(Продукция косметическая. Микробиология. Руководящие указания по оценке риска и идентификации продукции с микробиологически низким риском)


Сведения о соответствии ссылочных международного и европейского стандартов межгосударственным стандартам

Таблица ДА 1

Обозначение ссылочного международного (европейского) стандарта

Степень

соответствия

Обозначение и наименование соответствующего межгосударственного стандарта

ISO 21148:2005

ЮТ

ГОСТ ISO 21148-2013 Продукция парфюмерно-косметическая Микробиология. Общие требования к микробиологическому контролю

EN 12353

ЮТ

ГОСТ EN 12353—2016 Средства химические дезинфицирующие и антисептические. Консервация тест-организмов, используемых для определения бактерицидной (включая Legionella), микобактерицидной, спорицидной, фунгицидной и вируцидной (включая бактериофаги) активности (EN 12353:2013)

Примечание — В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов - ЮТ — идентичные стандарты

УДК 665.57/ 58:579.861.2 083.12(083.74)(476)    МКС    07.100.99;    71.100.70    ЮТ

Ключевые слова: продукция парфюмерно-косметическая, микробиологические исследования, микроорганизмы, разбавители, питательные среды, штаммы микроорганизмов

Ответственный за выпуск О В Каранкевич

Сдано в набор 27 08 2018 Подписано в печать 10 09 2018 Формат бумаги 60*84/8 Бумага офсетная Гарнитура Anal Печать ризографическая Уел печ л. 2,33 Уч -изд л. 0,92 Тираж 2 экэ Заказ 1332

Издатель и полиграфическое исполнение:

Научно-производственное республиканское унитарное предприятие «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) Свидетельство о государственной регистрации издателя, изготовителя, распространителя печатных изданий

№1/303 от 22 04 2014 ул Мележа. 3. коми 406. 220113, Минск

Содержание

Введение.................................................................................................................................................IV

1    Область применения............................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки............................................................................................................................1

3    Термины и определения.......................................................................................................................2

4    Сущность метода..................................................................................................................................2

5    Разбавители и питательные среды.....................................................................................................2

5.1    Общие положения..........................................................................................................................2

5.2    Разбавители для бактериальной суспензии (раствор хлорида натрия с триптоном)..............2

5.3    Питательные среды........................................................................................................................3

6    Инструменты и стеклянная лабораторная посуда.............................................................................5

7    Штаммы микроорганизмов...................................................................................................................5

8    Обращение с парфюмерно-косметической продукцией и лабораторными пробами.....................5

9    Методика................................................................................................................................................5

9.1    Общие рекомендации....................................................................................................................5

9.2    Приготовление исходной суспензии в бульоне для обогащения...............................................5

9.3    Инкубация инокулированного бульона для обогащения............................................................6

9.4    Обнаружение и идентификация Staphylococcus aureus.............................................................6

10    Представление результатов (обнаружение Staphylococcus aureus)................................................6

11    Нейтрализация антимикробных свойств продукции..........................................................................7

11.1    Общие положения........................................................................................................................7

11.2    Приготовление инокулята............................................................................................................7

11.3    Пригодность метода обнаружения..............................................................................................7

12    Протокол испытания.............................................................................................................................8

Приложение А (справочное) Другие питательные среды......................................................................9

Приложение В (справочное) Нейтрализаторы антимикробной активности консервантов

и промывные жидкости..................................................................................................11

Библиография..........................................................................................................................................12

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международного

и европейского стандартов межгосударственным стандартам..............................13

Введение

Микробиологические исследования парфюмерно-косметической продукции должны выполняться на основании соответствующего анализа степени микробиологического риска, для того чтобы обеспечить ее качество и безопасность для потребителей.

Проведение анализа микробиологического риска обусловлено несколькими факторами, такими как:

-    возможное изменение парфюмерно-косметической продукции;

-    патогенность микроорганизмов;

-    область нанесения парфюмерно-косметической продукции (волосы, кожа, глаза, слизистые оболочки);

-    тип потребителей (взрослые, дети, включая детей до трех лет).

Для парфюмерно-косметической и другой аналогичной продукции важным является обнаружение кожных болезнетворных микроорганизмов, таких как Staphylococcus aureus. Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans, так как они могут вызвать инфекции на коже человека или в области глаз. Обнаружение других видов микроорганизмов также может представлять интерес, поскольку эти микроорганизмы (включая индикаторы фекального загрязнения, например Escherichia coli) указывают на несоблюдение гигиенических требований в процессе производства.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

ПРОДУКЦИЯ ПАРФЮМЕРНО-КОСМЕТИЧЕСКАЯ Микробиология. Обнаружение Staphylococcus aureus

ПРАДУКЦЫЯ ПАРФУМЕРНА-КАСМЕТЫЧНАЯ М1краб1ялопя. Выяуленне Staphylococcus aureus

Perfume and cosmetic products Microbiology. Detection of Staphylococcus aureus

Дата введения 2019-02-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает общие требования к методу обнаружения и идентификации специфического микроорганизма Staphylococcus aureus в парфюмерно-косметической продукции. Микроорганизмы, рассматриваемые в настоящем стандарте, в зависимости от применяемой национальной практики или требований национальных регламентов в разных странах могут относиться или не относиться к специфическим.

Чтобы обеспечить качество и безопасность продукции для потребителя, рекомендуется проводить соответствующий анализ микробиологического риска с целью определения видов парфюмернокосметической продукции, к которой применим настоящий стандарт. К продукции с низкой степенью микробиологического риска (см. ISO 29621) относится продукция с низкой водной активностью, продукция на спиртовой основе, продукция с крайними значениями pH и т. д.

Метод, установленный в настоящем стандарте, основан на обнаружении Staphylococcus aureus в неселективной жидкой среде (бульоне для обогащения) с последующим выделением микроорганизмов на селективной агаризованной среде. Можно применять и другие методы в зависимости от требуемого уровня обнаружения.

Примечание — Для обнаружения Staphylococcus auraus субкультуры могут быть пересеяны на неселективные питательные среды с последующей поэтапной идентификацией (например, с помощью идентификационных тестов)

Из-за большого разнообразия парфюмерно-косметической продукции в рассматриваемой области применения отдельные детали данного метода могут быть непригодными для некоторых видов продукции (например, для нерастворимой в воде продукции). Могут применяться другие стандарты (например. ISO 18415). Можно применять другие методы (например, автоматизированные) вместо представленных тестов, при условии, что была доказана их равнозначность или подтверждена пригодность должным образом.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).

ISO 21148:2005 Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination (Косметика. Микробиология. Общие указания по микробиологическому контролю)

EN 12353 Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of test organisms used for the determination of bactericidal (including Legionella), mycobactericidal. sporicidal. fungicidal and virucidal (including bacteriophages) activity (Средства дезинфицирующие химические и антисептики. Консервация тест-микроорганизмов. используемых для определения бактерицидной (включая микроорганизмы Legionella), микобактерицидной, спорицидной. фунгицидной и вируцидной (включая бактериофаги) активности)

Заменен на ISO 21148:2017. Однако для однозначного соблюдения требования настоящего стандарта, выраженного в датированной ссылке, рекомендуется использовать только указанное в этой ссылке издание

Издание официальное

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    продукция (product): Часть идентифицированной парфюмерно-косметической продукции, полученная лабораторией для испытания (анализа).

3.2    проба (sample): Часть продукции (не менее 1 г или 1 см3), которая используется при проведении испытаний для приготовления исходной суспензии.

3.3    исходная суспензия (initial suspension): Суспензия (или раствор) пробы в определенном объеме соответствующего бульона для обогащения.

3.4    разведение пробы (sample dilution): Разбавление исходной суспензии.

3.5    специфические микроорганизмы (specified microorganisms): Мезофильные аэробные бактерии или дрожжи, нежелательные в парфюмерно-косметической продукции и признанные патогенными для кожи микроорганизмами, которые способны вызывать инфекции на коже человека или являются признаком нарушения гигиенических требований в процессе производства.

3.6    Staphylococcus aureus Грамположительные кокки, собранные в скопления, напоминающие гроздья винограда, образующие гладкие колонии, окрашенные обычно в желтый цвет.

Примечания

1    Основные характеристики для идентификации рост на специальной селективной среде, наличие ферментов каталазы и плазмокоагулазы

2    Бактерии вида Staphylococcus aureus для л кадей являются условно-патогенными бактериями, которые могут также присутствовать на коже здоровых лкэдей. не причиняя беспокойства Их присутствие неприемлемо в парфюмерно-косметической продукции по причине их потенциальной патогенности

3.7    бульон для обогащения (enrichment broth): Неселективная жидкая питательная среда, содержащая соответствующие нейтрализаторы и/или диспергирующие вещества, которая прошла проверку пригодности для испытуемой продукции.

4    Сущность метода

Первым этапом испытания является обогащение в неселективной питательной среде (бульоне) для увеличения числа микроорганизмов без риска ингибирования селективными ингредиентами, которые присутствуют в селективной/дифференциальной питательной среде.

Второй этап испытания (выделение) выполняется на селективной среде с последующей идентификацией.

Возможное ингибирования роста микроорганизмов пробой должно быть нейтрализовано для обеспечения обнаружения жизнеспособных микроорганизмов (1). Во всех случаях и независимо от применяемой методики должна быть проверена и доказана нейтрализация антимикробных свойств продукции (см. раздел 11).

5    Разбавители и питательные среды

5.1    Общие положения

Общие указания приведены в ISO 21148 Если в настоящем стандарте упоминается вода, то это означает, что применяют дистиллированную или очищенную воду, как установлено в ISO 21148.

Бульон для обогащения используют для диспергирования пробы и увеличения первоначальной микробной популяции. Он может содержать нейтрализаторы, если испытуемая проба обладает антимикробными свойствами. Эффективность нейтрализации должна быть доказана (см. раздел 11). Информация относительно подходящих нейтрализаторов приведена в приложении В.

Бульон для обогащения (см. 5.3.3.1) или любой из бульонов, приведенных в приложении А. пригоден для контроля наличия Staphylococcus aureus в соответствии с методом настоящего стандарта при условии, что он прошел проверку пригодности в соответствии с разделом 11.

Можно использовать другие разбавители и питательные среды, если была доказана их пригодность.

5.2    Разбавители для бактериальной суспензии (раствор хлорида натрия с триптоном)

5.2.1 Общие положения

Разбавитель используют для приготовления бактериальной суспензии, применяемой в процедуре теста на пригодность (см. раздел 11).

5.2.2    Состав

-    Триптон. панкреатический гидролизат казеина — 1.0 г;

-    хлорид натрия — 8,5 г;

-    вода — 1 ООО см3.

5.2.3    Приготовление

Растворяют компоненты в воде, перемешивая при нагревании. Разливают в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаиздения pH должен быть равен 7.0 ± 0.2 при измерении при комнатной температуре.

5.3    Питательные среды

5.3.1    Общие положения

Питательные среды могут быть приготовлены согласно описанию, приведенному ниже, или из сухой питательной среды согласно инструкциям изготовителя. Должны соблюдаться инструкции поставщика среды.

Примечание — Готовые к применению среды можно использовать, если их состав и/или ростовые свойства сопоставимы с данными, приведенными ниже

5.3.2    Агаризованная среда для теста на пригодность (см. раздел 11) [агаризованная среда с соевым и казеиновым гидролизатами (SCDA) или триптон-соевый агар (TSA)]

5.3.2.1    Состав

-    Панкреатический гидролизат казеина — 15.0 г;

-    папаиновый гидролизат соевой муки — 5.0 г;

-    хлорид натрия — 5,0 г;

-    агар —15.0 г;

-    вода — 1 000 см3.

5.3.2.2    Приготовление

Растворяют компоненты или готовую сухую среду в воде, перемешивая при нагревании. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7.3 ± 0.2 при измерении при комнатной температуре.

5.3.3 Бульон для обогащения

5.3.3.1    Бульон Эугон (Eugon) LT 100

5.3.3.1.1    Общие положения

Данная среда содержит ингредиенты (лецитин и полисорбат 80), которые нейтрализуют ингибирующие вещества, присутствующие в пробе, а также диспергирующий агент октоксинол 9.

5.3.3.1.2    Состав

-    Панкреатический гидролизат казеина — 15,0 г;

-    папаиновый гидролизат соевой муки — 5,0 г;

-    L-цистин — 0,7 г;

-    хлорид натрия — 4,0 г;

-    сульфит натрия — 0,2 г;

-    глюкоза — 5.5 г;

-    яичный лецитин — 1,0 г;

-    полисорбат 80 — 5,0 г;

-    октоксинол 9 — 1,0 г,

-    вода — 1 000 см3.

5.3.3.1.3    Приготовление

Растворяют последовательно компоненты (полисорбат 80. октоксинол 9 и яичный лецитин) в кипящей воде до их полного растворения. Растворяют остальные компоненты в воде, перемешивая при нагревании. Разливают среду в подходящую лабораторную посуду. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7,0 ± 0.2 при измерении при комнатной температуре.

5.3.3.2 Другие бульоны для обогащения

Можно использовать и другие подходящие бульоны для обогащения (см. приложение А).

5.3.4 Селективная агаризованная среда для выделения Staphylococcus aureus

5.3.4.1    Агаризованная среда Байрд-Паркер (Baird Parker)

5.3.4.1.1    Основная среда

5.3.4.1.1.1    Состав

-    Панкреатический гидролизат казеина — 10,0 г;

-    дрожжевой экстракт — 1.0 г;

-    мясной экстракт — 5.0 г;

-    пируват натрия — 10,0 г;

-    L-глицин — 12.0 г;

-    хлорид лития — 5.0 г;

-агар —от 12 до22 г;

-    вода — до конечного объема 950 см3.

5.3.4.1.1.2    Приготовление

Растворяют компоненты или готовую сухую основу среды в кипящей воде. Разливают среду по 100 см3 в колбы или флаконы соответствующей вместимости. Стерилизуют среду в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.

После стерилизации и охлаждения pH должен быть равен 7.2 ± 0,2 при измерении при комнатной температуре.

5.3.4.1.2    Раствор теллурита калия

5.3.4.1.2.1    Состав

-    Теллурит калия (КгТеОэ) — 1.0 г;

-    вода — 100 см3.

5.3.4.1.2.2    Приготовление

Растворяют полностью теллурит калия в воде при минимальном нагревании.

Стерилизуют раствор, используя мембранные фильтры с размером пор 0.22 мкм. Раствор может храниться при температуре (3 ± 2) ®С не более одного месяца. Если образуется белый осадок, то раствор не пригоден к использованию.

Твердые частички должны легко растворяться Если в воде присутствуют нерастворимые частицы белого цвета, то реактив не пригоден к использованию.

5.3.4.1.3    Эмульсия яичного желтка (концентрация около 20 % или согласно инструкциям изготовителя)

Если промышленность не выпускает данную среду, ее готовят согласно требованиям, приведенным ниже.

Берут куриные яйца с неповрежденной скорлупой. Очищают яйца щеткой и жидким моющим средством. Ополаскивают их проточной водой, затем дезинфицируют скорлупу, погружая яйца в раствор этилового спирта с объемной долей 70 % на 30 с. и дают им высохнуть на воздухе либо обрызгивают их спиртом и затем стерилизуют в пламени спиртовки. Продолжая приготовление в асептических условиях, разбивают каждое яйцо и отделяют желток от белка, перенося желток из одной половинки скорлупы в другую. Кладут желтки в стерильную колбу и добавляют в четыре раза больше по объему стерильной воды. Тщательно перемешивают. Выдерживают смесь при температуре 47 °С в течение 2 ч и оставляют на 18-24 ч при температуре (3 ± 2) °С. чтобы образовался осадок. Стерильно переносят супернатант в новый стерильный флакон.

Эмульсия может храниться при температуре (3 ± 2) °С не более 72 ч.

5.3.4.1.4    Полная среда

5.3.4.1.4.1    Состав

-    Основная среда (см. 5.3.4.1.1) — 100 см3;

-    раствор теллурита калия (см. 5.3.4.1.2) — 1.0 см3;

-    эмульсия яичного желтка (см. 5.3.4,1.3) — 5.0 см3.

5.3.4.1.4.2    Приготовление

Расплавляют основную среду (см. 5.3.4.1.1), затем охлаждают ее приблизительно до 47 °С. Добавляют в асептических условиях два других раствора (см. 5.3.4.1.2 и 5.3.4.1.3), каждый из которых предварительно прогревается при температуре 47 °С. хорошо перемешивая после каждого добавления.

5.3.4.2    Дополнительная селективная агаризованная среда

Могут использоваться другие селективные агаризованные среды (см. приложение А).

6    Инструменты и стеклянная лабораторная посуда

Используют лабораторное оборудование, инструменты и стеклянную посуду в соответствии С ISO 21148

7    Штаммы микроорганизмов

Для проверки пригодности условий проведения испытаний используют следующий референсный штамм: Staphylococcus aureus АТСС 16538 (эквивалентный штамм: CIP2) 4.83 или NCIMB 3: 9518).

Культуру следует восстановить согласно процедурам, представленным поставщиком референс-ного штамма.

Штамм может храниться в лаборатории в соответствии с EN 12353.

8    Обращение с парфюмерно-косметической продукцией и лабораторными пробами

При необходимости продукцию, подлежащую испытаниям, хранят при комнатной температуре.

Не следует выдерживать в термостате, охлаждать и замораживать продукцию и пробы ни до. ни после анализа.

Отбор проб парфюмерно-косметической продукции для анализа следует проводить в соответствии с ISO 21148 Анализируют пробы согласно ISO 21148 и методике, приведенной в разделе 9.

9    Методика

9.1    Общие рекомендации

Приготовление пробы, исходной суспензии и разведений выполняют с соблюдением условий асептики, используя стерильные материалы, оборудование. В случае приготовления исходной суспензии с использованием подходящего солюбилизирующего компонента время между окончанием приготовления суспензии и моментом ее внесения в бульон для обогащения не должно превышать 45 мин. если иное не оговорено в соответствующих протоколах или документах.

9.2    Приготовление исходной суспензии в бульоне для обогащения

9.2.1    Общие положения

Для обогащения вносят пробу (см. 3.2) хорошо перемешанной испытуемой продукции в количестве не менее 1 г или 1 см3 в бульон для обогащения объемом не менее 9 см3.

Отмечают S. точную массу или точный объем пробы.

При выполнении метода необходимо осуществлять контроль для гарантии того, что состав (с добавленным в конце приготовления нейтрализатором) и объем бульона удовлетворяют требованиям (см. 11.3).

Примечание —В некоторых случаях (когда это возможно) фильтруют парфюмерно-косметическую продукцию через мембранный фильтр, который затем погружают в бульон для обогащения, что облегчает нейтрализацию антимикробных свойств продукции (см 11 3)

9.2.2    Водорастворимая продукция

Переносят количество S пробы продукции в подходящую лабораторную посуду, содержащую соответствующий объем бульона.

9.2.3    Нерастворимая в воде продукция

Переносят количество S пробы продукции в подходящую лабораторную посуду, содержащую соответствующее количество солюбилизирующего компонента (например, полисорбат 80).

Диспергируют пробу в солюбилизирующем компоненте и добавляют соответствующий объем бульона.

9.2.4    Фильтруемая продукция

Используют мембранный фильтр с номинальным размером пор не более 0,45 мкм.

Переносят количество S пробы продукции на мембранный фильтр в фильтровальном аппарате (см. ISO 21148). Сразу же проводят фильтрацию и промывают мембранный фильтр, используя определенные объемы воды и/или разбавителя.

Переносят и погружают мембранный фильтр в пробирку или колбу подходящего размера, содержащие соответствующий обьем бульона.

9.3    Инкубация инокулированного бульона для обогащения

Инкубируют исходную суспензию, приготовленную в бульоне (см. 9.2), при температуре (32.5 ± 2,5) °С в течение не менее 20 ч, но не более 72 ч.

9.4    Обнаружение и идентификация Staphylococcus aureus

9.4.1 Выделение

Стерильной петлей делают пересев аликвоты инкубированного бульона для обогащения на поверхность агаризованной среды Байрд-Паркер, чтобы получить изолированные колонии.

Переворачивают чашку Петри и инкубируют при температуре (32.5 ± 2,5) °С в течение не менее 24 ч. но не более 48 ч.

Проверяют на наличие характерных колоний (см. таблицу 1).

Таблица 1— Морфологические характеристики Staphylococcus aureus на селективной среде

Селективная среда

Характеристика колоний Staphylococcus aureus

Агаризованная среда Байрд-Паркер

Черные блестящие колонии, окруженные прозрачными зонами размером от 2 до 5 мм

9.4.2 Идентификация Staphylococcus aureus

9.4.2.1    Общие положения

Проводят дальнейшее исследование подозрительных колоний, выделенных на агаризированной среде Байрд-Паркер. Наличие Staphylococcus aureus может быть подтверждено разными биохимическими и культуральными тестами.

9.4.2.2    Окраска по Граму

Следуют процедуре, установленной в ISO 21148 Проверяют на наличие грамлоложительных кокков. собранных в скопления, напоминающие гроздья винограда.

9.4.2.3    Тест на каталазу

Следуют процедуре, установленной в ISO 21148.

Проверяют на наличие положительной каталазной активности.

3.4.2.4    Тест на наличие фермента плазмокоагулазы

Используя микробиологическую петлю, переносят подозрительные хорошо изолированные колонии с поверхности агаризованной среды Байрд-Паркер в индивидуальные стерильные пробирки, в каждой из которых находится по 0.5 см3 плазмы млекопитающего, предпочтительно кролика или лошади, с соответствующими добавками или без них.

Проводят инкубацию при (37 ± 2) X и исследуют пробирки через 3. 4. 6 и до 24 ч. если реакция коагуляции не проявилась в течение 6 ч или иное не установлено изготовителем. Положительную реакцию коагуляции, появившуюся только через 24 ч. необходимо подтвердить.

Постановка данного теста для контрольных штаммов проводится одновременно с анализом подозрительных колоний в соответствии с рекомендациями изготовителя.

Контролируют наличие положительной реакции на плазмокоагулазу.

10 Представление результатов (обнаружение Staphylococcus aureus)

Если при идентификации колоний подтверждено наличие данного вида, результат представляют следующим образом: бактерии вида Staphylococcus aureus обнаружены в количестве S пробы.

Если после обогащения роста не наблюдалось и/или если идентификация колоний не подтвердила наличие данного вида, результат представляют следующим образом: бактерии вида Staphylococcus aureus не обнаружены в количестве S пробы.

1

АТСС — American Type Culture Collection (Американская коллекция типовых культур (микроорганизмов)

25 CIP — Institut Pasteur Collection (Коллекция института Пастера).

35 NCIMB — National Collection of Industrial and Manne Bacteria (Национальная коллекция промышленных и морских бактерий)