Устанавливает метод подсчета колониеобразующих единиц дрожжей, плесеней и бактерий, которые могут существовать на корковых пробках и в спиртовом растворе и которые при определенных условиях могут экстрагироваться в течение трех месяцев после поставки. Стандарт применим ко всем типам корковых пробок, готовых к использованию, прошедших санитарную обработку и упакованных в надлежащих асептических и герметичных условиях. Стандарт устанавливает предельно допустимое количество колониеобразующих единиц дрожжей, плесеней и бактерий, которое может быть обнаружено на корковых пробках при проведении испытания в соответствии с методикой, изложенной в настоящем стандарте.
Идентичен ISO 10718:2015
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Пробки с низким содержанием микроорганизмов
4 Сущность метода
5 Реактивы и питательные среды
6 Оборудование
7 Отбор проб
8 Условия испытаний
9 Экстрагирование
10 Проведение испытаний
11 Контрольные испытания
12 Инкубация
13 Обработка результатов
14 Протокол испытаний
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
12 страниц
Дата введения | 01.12.2018 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.01.2019 |
Актуализация | 01.01.2021 |
28.02.2018 | Утвержден | Межгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации | 106-П |
---|---|---|---|
28.03.2018 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 155-ст |
Разработан | ТК 415 Средства укупорочные | ||
Разработан | ООО ЦСИ Продмаштест | ||
Издан | Стандартинформ | 2018 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
ГОСТ
ISO 10718-2018
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
Подсчет колониеобразующих единиц дрожжей, плесени и бактерий, способных как к экстрагированию, так и к росту в спиртовой среде, для определения характеристик пробок с низким содержанием микроорганизмов
(ISO 10718:2015, Cork stoppers — Characterization of a low-in-germs stopper, through the enumeration of colony-forming units of yeasts, moulds and bacteria, capable of both being extracted and growing in alcoholic medium, IDT)
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2018
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 415 «Средства укупорочные» (ООО «ЦСИ «Продмаштест») на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии международного стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 февраля 2018 г. № 106-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Молдова |
MD |
Институт стандартизации Молдовы |
Россия |
RU |
Росстандарт |
Таджикистан |
TJ |
Таджикстандарт |
Узбекистан |
UZ |
Узстандарт |
Украина |
UA |
Минэкономразвития Украины |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 марта 2018 г. № 155-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 10718-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 декабря 2018 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 10718:2015 «Пробки корковые. Определение характеристик пробок с низким содержанием микроорганизмов путем подсчета колониеобразующих единиц дрожжей, плесеней и бактерий, способных как экстрагироваться, так и расти в спиртовой среде» («Cork stoppers — Characterization of a low-in-germs stopper, through the enumeration of colony-forming units of yeasts, moulds and bacteria, capable of both being extracted and growing in alcoholic medium», IDT).
Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 87 «Пробка» Международной организации по стандартизации (ISO).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВЗАМЕН ГОСТ ISO 10718-2016
УДК 683.531.13:006.354 МКС 55.040 ЮТ
Ключевые слова: корковые пробки, микроорганизмы, колониеобразующие единицы (КОЕ) дрожжей, плесеней и бактерий, экстрагирование, рост в спиртовой среде, определение характеристик пробок, низкое содержание микроорганизмов 1
Редактор Л.И. Нахимова Технический редактор И.Е. Черепкова Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка И.А. Налейкиной
Сдано в набор 28.03.2018. Подписано в печать 29.03.2018. Формат 60><841/8. Гарнитура Ариал.
Уел. печ. л. 1,40. Уч.-изд. л. 1,26.
Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
© ISO, 2015. Все права сохраняются © Стандартинформ, оформление, 2018
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
1 Область применения.................................................................1
2 Нормативные ссылки.................................................................1
3 Пробки с низким содержанием микроорганизмов..........................................1
4 Сущность метода....................................................................1
5 Реактивы и питательные среды........................................................2
6 Оборудование......................................................................2
7 Отбор проб.........................................................................3
8 Условия испытаний..................................................................3
9 Экстрагирование....................................................................3
10 Проведение испытаний..............................................................3
11 Контрольные испытания.............................................................4
12 Инкубация.........................................................................4
13 Обработка результатов..............................................................4
14 Протокол испытаний................................................................5
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов
межгосударственным стандартам..........................................6
IV
Подсчет колониеобразующих единиц дрожжей, плесени и бактерий, способных как к экстрагированию, так и к росту в спиртовой среде, для определения характеристик пробок с низким содержанием микроорганизмов
Cork stoppers. Enumeration of colony-forming units of yeasts, moulds and bacteria, capable of both being extracted and growing in alcoholic medium for characterization of a low-in-germs stoppers
Дата введения —2018—12—01
Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета колониеобразующих единиц дрожжей, плесеней и бактерий, которые могут существовать на корковых пробках и в спиртовом растворе и которые при определенных условиях могут экстрагироваться в течение трех месяцев после поставки.
Настоящий стандарт применим ко всем типам корковых пробок, готовых к использованию, прошедших санитарную обработку и упакованных в надлежащих асептических и герметичных условиях.
Настоящий стандарт устанавливает предельно допустимое количество колониеобразующих единиц дрожжей, плесеней и бактерий, которое может быть обнаружено на корковых пробках при проведении испытания в соответствии с методикой, изложенной в настоящем стандарте.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие международные стандарты [для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных— последнее издание (включая все изменения к нему)]:
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for microbiological examinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и руководство по микробиологическим исследованиям)
ISO 17727, Cork — Cork stoppers for still wine — Sampling plan for the quality ontrol of cork stoppers (Кора пробковая. Корковые пробки для тихих вин. План выборочного контроля качества корковых пробок)
Корковые пробки, испытанные методами, установленными в настоящем стандарте, считают пробками с низким содержанием микроорганизмов, если получены следующие результаты:
- до 10 КОЕ бактерий на пробку (см. 13.1);
- до 10 КОЕ дрожжей и плесеней на пробку (см. 13.2).
Прямой подсчет колоний живых микроорганизмов (дрожжей, плесеней и бактерий) путем инкубации в специфической питательной среде после извлечения их из спиртового раствора с добавлением винной кислоты с последующей мембранной фильтрацией.
Издание официальное
5.1 Физиологический раствор (0,85 %-ный NaCI)2) или раствор Рингера (1/4 X)2) следующего
состава:
хлорид натрия 2,25 г/л
хлорид калия 0,105 г/л
хлорид кальция 6-водный 12 г/л
бикарбонат натрия 0,05 г/л
значение pH готового раствора (полученное определением в смеси) 7,0 ± 0,2
5.2 Среда WLD (для подсчета бактерий) следующего состава:
дрожжевой экстракт 4,0 г/л
гидролизат казеина 5,0 г/л
глюкоза 50,0 г/л
однозамещенный фосфат калия 0,55 г/л
хлорид калия 0,425 г/л
хлорид кальция 0,125 г/л
сульфат магния 0,125 г/л
сульфат марганца 0,0025 г/л
хлорид железа 0,0025 г/л
бромкрезоловый зеленый 0,022 г/л
циклогексимид (актидион) 0,004 г/л
значение pH готового раствора (полученное определением в смеси) 5,5 ± 0,2
5.3 Среда M-Green (для подсчета дрожжей и плесеней) следующего состава:
дрожжевой экстракт 9,0 г/л
глюкоза (церелоза) 50,0 г/л
пептон 10,0 г/л
сульфат магния 2,10 г/л
фосфат калия 2,0 г/л
диастаза (амилаза) 0,05 г/л
тиамин 0,05 г/л
бромкрезоловый зеленый 0,026 г/л
5.4 Винная кислота.
5.5 Этиловый спирт (96 %-ный).
5.6 Увлажняющий реагент.
5.7 Триптоновый гель.
5.8 Дифенил.
5.9 Деминерализованная вода (или вода аналогичной чистоты).
Реактивы и питательные среды хранят в соответствии с указаниями изготовителя.
6 Оборудование
Рекомендуемое микробиологическое лабораторное оборудование, указанное ниже.
6.1 Система для мембранной фильтрации
Рекомендуется использовать одну из систем для мембранной фильтрации, указанных в 6.1.1 или 6.1.2.
6.1.1 Стерильная система для фильтрации, готовая к применению, включающая полипропиленовую воронку вместимостью не менее 100 мл, стерильную мембрану (с размером пор 0,45 мкм), стерильную чашку и вакуумный насос с трехходовым краном для отключения вакуума3).
6.1.2 Традиционная система для фильтрации, включающая воронку вместимостью не менее 100 мл (из нержавеющей стали, стекла или поликарбоната), которую можно стерилизовать в автоклаве
значение pH готового раствора (полученное определением в смеси) 4,6 ± 0,2
или сухожаровом шкафу, стерильную мембрану с размером пор 0,45 мкм, стерильную чашку Петри с фильтровальной бумагой и вакуумный насос.
6.2 Термостат, температура которого может поддерживаться на уровне (30 ± 2) °С.
6.3 Холодильник, температура в котором может поддерживаться в интервале от 2 °С до 8 °С.
6.4 Орбитальный шейкер с платформой или шейкер с имитацией движений кисти руки, или шейкер возвратно-поступательного типа, который, в зависимости от модели, может быть установлен на скорость от 140 до 160 об/мин или от 140 до 160 колебаний в минуту, или от 140 до 160 движений вперед и назад.
6.5 pH-метр с температурной компенсацией, с точностью измерения ± 0,1 при 25 °С.
6.6 Стеклянные колбы с винтовыми колпачками соответствующей вместимости, позволяющей погрузить четыре пробки в 100 мл раствора.
Отбор проб проводят в асептических условиях в соответствии с ISO 17727.
Образцы (пробы) до проведения испытаний хранят в стерильных сосудах при температуре от 2 °С до 8 °С.
Подготовку материалов к испытаниям и сами испытания проводят в асептических условиях и в соответствии с требованиями ISO 7218.
9.1 Готовят физиологический раствор или раствор Рингера (5.1). При перемешивании добавляют увлажняющий реагент (5.6) до достижения концентрации 10 г/л, затем добавляют триптоновый гель (5.7) до получения концентрации 1 г/л. После этого с использованием винной кислоты (5.4) доводят pH раствора до значения от 3 до 3,5. Наливают в каждую колбу (6.6) примерно 90 мл полученного раствора и подвергают стерилизации.
9.2 После охлаждения в каждую колбу в асептических условиях добавляют по 10 мл этилового спирта (5.5).
9.3 В каждую колбу помещают четыре корковые пробки, следя за тем, чтобы пробки были полностью погружены в раствор. Встряхивают колбы в течение 1 ч со скоростью от 140 до 160 об/мин при температуре от 20 °С до 25 °С. Количество колб зависит от выбранной схемы отбора проб. Половину колб используют для посева на среду WLD, другую половину — для посева на среду M-Green. Для каждой питательной среды готовят дополнительную колбу для контрольного опыта.
Испытания проводят в соответствии с 10.2 с использованием стерильной фильтрационной системы и стерильных питательных сред, готовых к применению.
При использовании системы для фильтрации, которую предстоит стерилизовать, и сухих питательных сред испытание проводят по 10.3.
готовых к применению стерильных питательных сред
Готовят фильтрационную систему (см. 6.1.1).
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 9. По окончании фильтрации отключают вакуум от линии отсасывания, чтобы установить равновесие с атмосферным давлением.
3
В среду WLD (5.2) непосредственно перед посевом добавляют дифенил (5.8), растворенный в 10 %-ном растворе этилового спирта, до достижения концентрации дифенила 30 млн'1. Вносят в воронку среду WLD, содержащуюся в ампуле, ненадолго подключают к вакууму для отсасывания, затем отключают вакуум. Удаляют фильтрационную установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не допустить реинфицирования. Убирают цилиндрическую часть воронки. Снимают крышку воронки и устанавливают ее на узел фильтр/чашка Петри.
Эту процедуру повторяют с каждой колбой.
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 9.
По окончании фильтрации отключают вакуум от линии отсасывания, чтобы установить равновесие с атмосферным давлением.
Добавляют в воронку питательную среду M-Green (5.3), содержащуюся в ампуле, ненадолго подключают к вакууму для отсасывания и затем отключают вакуум. Удаляют фильтрационную установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не допустить реинфицирования. Убирают цилиндрическую часть воронки. Снимают крышку воронки и устанавливают ее на узел фильтр/ чашка Петри. Эту процедуру повторяют с каждой колбой. Сухую питательную среду на мембране вновь растворяют с использованием стерилизованной деминерализованной воды.
и сухих питательных сред
Готовят и стерилизуют среды WLD (5.2) и M-Green (5.3) в соответствии с инструкциями изготовителя.
В среду WLD добавляют дифенил (5.8), растворенный в 10 %-ном растворе этилового спирта, до достижения концентрации дифенила 30 млн-1.
Готовят чашки Петри.
Стерилизуют и готовят фильтрационную систему (см. 6.1.2)
В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 9, используя стерильную мембрану.
Помещают мембрану на чашку Петри со средой WLD.
Данную процедуру проводят с каждой колбой.
В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 9, используя стерильную мембрану.
Помещают мембрану на чашку Петри со средой M-Green.
Данную процедуру проводят с каждой колбой.
Готовят контрольное испытание для каждой среды.
Переворачивают чашки Петри со средами WLD и M-Green и выдерживают в термостате (6.2) при температуре (30 ± 2) °С в течение трех дней.
Наблюдают за ростом и подсчитывают колонии на каждой чашке минимум каждые 24 ч.
По окончании заданного инкубационного периода подсчитывают колонии бактерий на каждой чашке со средой WLD, каждый раз сравнивая результат с последним действительным подсчетом.
4
Для каждой чашки число колониеобразующих единиц (КОЕ) на корковой пробке определяют по формуле
О)
Л/ь
4 ’
где Л/ь — общее число подсчитанных колоний бактерий;
4 — число испытанных корковых пробок.
За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов, полученных для каждой чашки, округленное в большую сторону до ближайшего целого числа.
После окончания инкубации подсчитывают колонии дрожжей и плесеней на каждой чашке со средой M-Green, каждый раз сравнивая результат с результатом предыдущего подсчета.
Для каждой чашки число колониеобразующих единиц (КОЕ) на корковой пробке определяют по следующей формуле
где Л/у m — общее число подсчитанных колоний дрожжей и плесеней;
4 — число испытанных корковых пробок.
За результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов, полученных для каждой чашки, округленное в большую сторону до ближайшего целого числа.
Протокол испытаний должен содержать:
a) ссылку на настоящий стандарт;
b) методику отбора образцов и все подробности, необходимые для идентификации образца;
c) дату проведения испытаний и полученные результаты;
d) все подробности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте, или любых выбранных операций;
e) любые факторы, которые могли повлиять на результаты испытаний. 4
Приложение ДА (справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА.1 | ||||||||||||
|
6
1
Создано в единичном исполнении ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» для комплектования Федерального информационного фонда стандартов, 123001 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru
2
) Этот продукт доступен для приобретения в коммерческой сети.
3
) Эта система доступна для приобретения в коммерческой сети.
4