МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС) INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC)
	ГОСТ
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ	ISO/TS 15495/
СТАНДАРТ	IDF/RM 230—
	2012

МОЛОКО, МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИТАНИЕ ДЛЯ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии- тандемной масс-спекгрометрии (LC-MS/MS)

(ISO/TS 15495/1DF/RM 230, ЮТ)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2014

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Секретариатом ТК 470/МТК 532 «Молоко и продукты переработки молока» и ООО НТК «Молочная Индустрия»

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 15 ноября 2012 г. № 42-2012)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Киргизия KG Кыргызстандарт Россия RU Росстандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт Узбекистан UZ Узстандарт

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 15495/IDF/RM 230 Milk, milk products and infant formulae — Guidelines for the quantitative determination of melamine and cyanuric acid by LC-MS/MS [Молоко, молочные продукты и питание для детей раннего возраста. Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии (LC-MS|MS)].

Международный документ разработан подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты» Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной федерацией по молочному животноводству (IDF).

Перевод с английского языка (еп).

Официальные экземпляры международного документа, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в национальных (государственных) органах по стандартизации указанных выше государств.

Сведения о соответствии ссылочных межгосударственных стандартов международным стандартам приведены в приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1670-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS15495/IDF/RM 230—2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 года

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

A.4.4.2 Рабочий раствор циануровой кислоты I, соответствующий массовой концентрации 20 мкг циануровой кислоты на кубический сантиметр .

Пипеткой добавляют 4 см³ исходного стандартного раствора циануровой кислоты (А.4.4.1) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор I циануровой кислоты хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор I готовят еженедельно.

А.4.4.3 Рабочий раствор циануровой кислоты II, соответствующий массовой концентрации 2 мкг циануровой кислоты на миллилитр.

Пипеткой добавляют 1 см³ рабочего раствора 1 циануровой кислоты (А.4.4.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 10 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор II циануровой кислоты хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор II готовят еженедельно.

А.4.4.4 Рабочий раствор циануровой кислоты III, соответствующий 200 нг циануровой кислоты на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора циануровой кислоты I (А.4.4.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор III циануровой кислоты хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор III готовят еженедельно.

А.4.5 Меченая циануровая кислота (^СзНз^МзОз), изотопная чистота: ^Сз = 99 %; кольцо 15|\1з > 98 %; химическая чистота > 90 % по массе, 100 мкг/см³ в воде -1,2 см³.

А.4.5.1 Исходный стандартный раствор меченой циануровой кислоты, соответствующий массовой концентрации 100 мкг меченой циануровой кислоты на кубический сантиметр.

Готовый к применению исходный стандартный раствор меченой циануровой кислоты имеется в продаже. Хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Необходимо использовать IS (внутренний стандарт) одной и той же партии для приготовления стандартных градуировочных растворов, описанных в А.6.2, и введения в экстракты в соответствии с методикой экстракции, описанной в А.9.1.

А.4.5.2 Рабочий раствор меченой циануровой кислоты I, соответствующий массовой концентрации 20 мкг меченой циануровой кислоты на миллилитр.

Пипеткой добавляют 1 см³ от исходного стандартного раствора меченой циануровой кислоты (А.4.5.1) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 5 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор меченой циануровой кислоты I хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.4.5.3    Рабочий    раствор меченой циануровой кислоты II, соответствующий массовой

концентрации 2 мкг меченой циануровой кислоты на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора меченой циануровой кислоты I (А.4.5.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 5 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор меченой циануровой кислоты II хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.4.5.4    Рабочий    раствор меченой циануровой кислоты III, соответствующий массовой

концентрации 200 нг меченой циануровой кислоты на миллилитр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора меченой циануровой кислоты I (А.4.5.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Рабочий раствор меченой циануровой кислоты III хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.4.6 Меламин (C3H6N6), > 99 % по массе (CAS No. 108-78-1).

А.4.6.1 Исходный стандартный раствор меламина, соответствующий массовой концентрации 0,25 мг меламина на кубический сантиметр.

Взвешивают с точностью до 0,1 мг 62,5 мг меламина (А.4.6) и помещают в мерную колбу с одной меткой вместимостью 250 см³ (А.5.12). Растворяют и доводят до метки водой (А.4.1). Обрабатывают ультразвуком в течение не менее 15 мин до полного растворения. Хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий исходный раствор готовят еженедельно.

А.4.6.2 Рабочий раствор меламина I, соответствующий массовой концентрации 20 мкг меламина на миллилитр.

Пипеткой добавляют 4 см3 исходного стандартного раствора меламина (А.4.6.1) в мерную колбу

с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меламина I при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор меламина I готовят еженедельно.

А.4.6.3 Рабочий раствор меламина II, соответствующий массовой концентрации 2 мкг меламина на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 1 см³ рабочего раствора меламина I (А.4.6.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 10 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меламина II при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор меламина II готовят еженедельно.

А.4.6.4 Рабочий раствор меламина III, соответствующий массовой концентрации 200 нг меламина на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора меламина I (А.4.6.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меламина III при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий рабочий раствор меламина III готовят еженедельно.

А.4.7 Меченый меламин [^с N    изотопная    чистота:    ^С₃=99 %; амино- ^N₃= 98 %;

химическая чистота > 98 % по массе, 100 мг/см³ в воде -    1,2 см³, например, CNLM-8150-1.2¹).

А.4.7.1    Исходный раствор меченого меламина, соответствующий концентрации 10 мкг

меченого меламина на кубический сантиметр.

Хранят раствор при комнатной температуре в защищенном от света месте. Необходимо использовать IS (внутренний стандарт) одной и той же партии для приготовления стандартных градуировочных растворов в А.6.2 и введения в экстракты в соответствии с методикой экстракции, описанной в А.9.1.

А.4.7.2 Рабочий раствор меченого меламина I, соответствующий массовой концентрации 20 мкг меченого меламина на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 1 см³ исходного раствора меченого меламина (А.4.7.1) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 5 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меченого меламина I при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.4.7.3 Рабочий раствор меченого меламина II, соответствующий массовой концентрации 2 мкг меченого меламина на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора меченого меламина I (А.4.7.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 5 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меченого меламина II при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.4.7.4 Рабочий раствор меченого меламина III, соответствующий массовой концентрации 200 нг меченого меламина на кубический сантиметр.

Пипеткой добавляют 0,5 см³ рабочего раствора меченого меламина I (А.4.7.2) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 50 см³ (А.5.12). Доводят до метки водой (А.4.1) и перемешивают. Хранят рабочий раствор меченого меламина III при комнатной температуре в защищенном от света месте.

А.5 Аппаратура

Стеклянная посуда (например мерные колбы, А.5.12), используемая для приготовления стандартных исходных и рабочих растворов, может загрязниться, особенно меламином, и требует очистки и промывки следующим образом:

a)    стеклянную посуду моют вручную теплой водопроводной водой с лабораторным моющим средством;

b)    стеклянную посуду вручную моют лабораторным ершиком;

c)    тщательно споласкивают все стекло, включая стеклянные пробки теплой водопроводной водой, затем дистиллированной водой три раза;

d)    споласкивают стеклянную посуду этиловым спиртом А и дают просохнуть на воздухе.

Используют обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.

А.5.1 Конические пробирки из полипропилена, вместимостью 50 см³.

А.5.2 Центрифуга, оснащенная ротором, приспособленная под пробирки вместимостью 50 см³, с ускорением 4000 д.

А.5.3 Мерные пипетки вместимостью 0,5, 1 и 4 см³, по ISO 835^], класс А (или AS).

А.5.4 Автоматическая микропипетка по ISO 8655-2^1, точная, прецизионная, калиброванная

^ ) CNLM-8150-1.2 - это торговая марка продукции, поставляемой лабораториями изотопов при Кембридже. Эта информация приведена только для удобства пользователей настоящим стандартом и не свидетельствует о предпочтении в отношении данного продукта. Можно использовать аналогичные продукты, при условии получения равноценных результатов.

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

пользователем.

A.5.5 Нейлоновый шприцевой фильтр, пористость 0,22 мкм.

А.5.6 Система дегазации (если она не является частью оборудования для LC-MS/MS).

А.5.7 Аналитические весы, обеспечивающие считывания с точностью до 0,1 мг.

А.5.8 Устройство для ультразвуковой обработки.

А.5.9 Пробирки.

А.5.10 Оборудование для LC-MS/MS.

HPLC Agilent 1100¹) в сочетании с масс-спектрометром 4000 QTrap¹) с тремя квадрупольными линзами, оснащенный источником ионизации Turbolon Spray® .

А.5.11 Колонка HPLC, TSKgel Amide-80²), диаметр 2,0 мм, длина 250 мм, ВД 5 мкм.

А.5.12 Мерные колбы с одной меткой, вместимостью 5, 10, 50, 100 , 250 и 1000 см² по ISO 1042[6], класс А.

А. 6 Подготовка реактивов

А. 6.1 Водный раствор ацетонитрила [соотношение 70 (ацетонитрил) + 30 (вода)]

С помощью мерных цилиндров переносят 70 см² ацетонитрила (А.4.2) и 30 см² воды (А.4.1) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 100 см² (А.5.12) и перемешивают. Хранят при комнатной температуре в течение не более одной недели.

А .6.2 Калибровочные кривые для меламина и циануровой кислоты

А. 6.2.1 Стандартные растворы меламина и циануровой кислоты (от 0 до 2,00 мг/дм²) с соответствующими IS (внутренними стандартами) (при уровне 1,00 мг/дм²)

Готовят по отдельности пять смешанных стандартных растворов, каждый в мерной колбе с одной меткой вместимостью 5 см² (А.5.12) в диапазоне концентраций от 0 до 2,00 мг/дм² и добавляют соответствующий IS (внутренний стандарт) на уровне 1,00 мг/дм², как показано в таблице А.1.

Хранят пять полученных стандартных растворов при температуре 4 °С в защищенном от света

месте. Т а б л и ц а А.1 —Стандартные смеси меламина и циануровой кислоты в соотношении 1 : 5

Наименование показателя Стандартный раствор 1 2 3 4 5 Рабочий раствор меламина II (А.4.6.3), мкп 0 25 50 75 100 Рабочий раствор циануровой кислоты II (А.4.4.3), мкл 0 25 50 75 100 Рабочий раствор меченого меламина II (А.4.7.3), мкл 50 50 50 50 50 Рабочий раствор меченой циануровой кислоты II (А.4.5.3), мкл 50 50 50 50 50 Раствор ацетонитрил-вода (А.6.1), мкл 4 900 4 850 4 800 4 750 4 700 Это соответствует: концентрации аналитов в сумме, нг/см^ 0 10 20 30 40 концентрации IS в сумме, нг/см3 20 20 20 20 20 содержанию аналитов (эквивалентно пробе), мг/кг 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 содержанию IS (эквивалентно пробе), мг/кг 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00

1)    HPLC Agilent 1100 это торговое наименование прибора, поставляемого Agilent. Эта информация приведена только для удобства пользователей настоящим стандартом и не свидетельствует о предпочтении в отношении данной продукции. Можно использовать аналогичную продукцию при условии получения равноценных результатов.

A. 6.2.2 Стандартные растворы меламина (от 0 до 0,20 мг/дм³) и циануровой кислоты (от 0 до 0,30 мг/дм³) с соответствующими IS (внутренними стандартами) (на уровне 0,10 мг/дм³)

Готовят по отдельности пять смешанных стандартных растворов, каждый в мерной колбе с одной меткой вместимостью 5 см³ (А.5.12), в диапазоне концентраций меламина от 0 до 0,20 мг/дм³ и в диапазоне массовых концентраций циануровой кислоты от 0 до 0,30 мг/дм³ с соответствующим IS (внутренний стандарт) для обоих аналитов, добавленных при концентрации 0,10 мг/дм³, как показано в таблице А.2.

Хранят полученные стандартные растворы при температуре 4 °С в защищенном от света месте.

Т а б л и ц а А.2—Стандартные смеси меламина и циануровой кислоты в соотношении 6 :10

Наименование показателя Стандартные растворы 6 7 8 9 10 Рабочий раствор меламина III (А.4.6.4), мкл 0 25 50 75 100 Рабочий раствор циануровой кислоты III (А.4.4.4), мкл 0 50 75 100 150 Рабочий раствор меченого меламина III (А.4.7.4), мкл 50 50 50 50 50 Рабочий раствор меченой циануровой кислоты III (А.4.5.4), мкл 50 50 50 50 50 Раствор ацетонитрил-вода (А.6.1), мкл 4 900 4 825 4 775 4 725 4 650 Это соответствует: концентрации меламина, нг/см3 концентрации циануровой кислоты, нг/см3 концентрации IS (меламина или циануровой кислоты), нг/см3 содержанию меламина (эквивалентно пробе), мг/кг содержанию циануровой кислоты (эквивалентно пробе), мг/кг содержанию IS (меламин и циануровая кислота, эквивалентно пробе), мг/кг 0 1 2 3 4 0 2 3 4 6 2 2 2 2 2 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,00 0,10 0,15 0,20 0,30 0,10 0,10 0,10 0,10 0,10

А. 6.3 Растворы для жидкостной хроматографии

А..6.3.1 Подвижная фаза А: водный раствор ацетата аммония, 10 ммоль/см³.

Переносят 0,77 г ацетата аммония (А.4.3) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 1 000 см3 (А.5.12). Растворяют в ~50 см³ воды (А.4.1). Доводят до метки водой и перемешивают. Фильтруют раствор через фильтр пористостью 0,22 мкм.

А.6.3.2 Подвижная фаза В: ацетонитрил.

Используют ацетонитрил специальной марки для хроматографии (HPLC) (А.4.2).

А.7 Отбор проб

Отбор проб не является частью метода, установленного в данном приложении. Рекомендуемый метод отбора проб описан в ISO 707/IDF боИ.

Важно, чтобы в лаборатории была получена репрезентативная проба, которая не претерпела повреждений и изменений в процессе транспортирования и хранения.

Сырое молоко хранят при температуре 4 °С или в замороженном состоянии, если анализ не будет проводиться непосредственно по получении.

А. 8 Подготовка проб для анализа

А. 8.1 Сухая молочная смесь для детей раннего возраста

Готовят гомогенную лабораторную пробу путем переноса ее в емкость для пробы вместимостью, в два раза превышающей объем лабораторной пробы. Немедленно закрывают емкость.

Тщательно перемешивают, многократно встряхивая и переворачивая емкость.

А .8.2 Коровье молоко

Доводят пробу до комнатной температуры. Перед тем, как взять навеску для анализа, убеждаются, что проба гомогенная осторожным перевертыванием емкости несколько раз.

А. 9 Проведение анализа

А. 9.1 Методика экстракции

Взвешивают с точностью до 0,01 г, 1 г коровьего молока (А.8.2) или сухой молочной смеси (А.8.1) в конической пробирке вместимостью 50 см³ (А.5.1).

а) Вплоть до концентрации 2 мг/кг долей меламина и циануровой кислоты с тем и другим внутренними стандартами, добавленными в концентрации 1 мг/кг, вносят в навеску для анализа 50 мкл рабочего раствора меченого меламина I (А.4.7.2) и 50 мкл рабочего раствора меченой циануровой кислоты I (А.4.5.2). Тщательно перемешивают, пока внесенные объемы полностью не абсорбируются матрицей. ³

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

b) Для уровней содержания меламина до 0,2 мг/кг и циануровой кислоты до 0,3 мг/кг с тем и другим внутренними стандартами, добавленными в концентрации 0,1 мг/кг вносят в пробу для анализа 50 мкл рабочего раствора меченого меламина II (А.4.7.3) и 50 мкл рабочего раствора меченой циануровой кислоты II (А.4.5.3). Тщательно перемешивают, пока внесенные объемы полностью не абсорбируются матрицей.

Затем добавляют 5 см³ воды (А.4.1) в коническую пробирку, подготовленную либо как в а), либо как в Ь). Перемешивают, так чтобы в пробе не оставалось сгустков. Добавляют 5 см³ ацетонитрила (А.4.2). Энергично встряхивают в течение не менее 1 мин.

Добавляют 30 см³ ацетонитрила (А.4.2) и 10 см³ воды (А.4.1). Энергично встряхивают в течение не менее 5 мин, так чтобы в пробе не оставалось сгустков. В идеале лучше использовать автоматический шейкер. Центрифугируют полученный раствор при ускорении 4000 д при комнатной температуре в течение 10 мин, чтобы получить прозрачную надосадочную жидкость.

Если надосадочная жидкость не будет прозрачной, переносят аликвотное количество жидкости в другую пробирку и снова центрифугируют при 8500с/ при комнатной температуре в течение не менее 10 мин, используя настольную центрифугу.

Переносят от 0,5 до 1 см³ прозрачной надосадочной жидкости в пробирку для хроматографического анализа. Продолжают анализ LC-MS/MS (А.9.3).

А. 9.2 Холостой опыт

Чтобы компенсировать, при необходимости, загрязнение меламином и циануровой кислотой в процессе подготовки пробы, используют холостую пробу, подготовленную без добавления матрицы. Анализируют холостую пробу наряду с каждой серией обычных проб.

А. 9.3 Анализ LC-MS/MS

раствор ацетата аммония (А.6.3.1); ацетонитрил(А.6.3.2);

5 мкл;

TOSOH TSKgel Amide-80, диаметр 2,0 мм, длина 250 мм, внутренний диаметр 5 мкм; комнатная температура;

0,25 см³/мин; градиент LC как описано в таблице А.З;

поток HPLC направляется на детектор масс-спектрометра в течение от 3,0 до 13,5 мин

ТаблицаА.З — Градиент LC, используемый для анализа меламина и циануровой кислоты

Время, мин А, % В, % 0 10 90 8 10 90 13 65 35 14 90 10 15 90 10 15,5 10 90 25 10 90

В таких условиях время удерживания циануровой кислоты составляет ~ 6,4 мин, а время удерживания меламина -11,5 мин (см. рисунки А.1-А.З).

А. 9.3.2 Параметры MS (масс-спектрометрии)

Параметры MS получают посредством ввода шприцем со скоростью 5 мкл/мин по отдельности рабочий раствор меламина I (А.4.6.2) и рабочий раствор циануровой кислоты I (А.4.4.2), оба в концентрации 20 мкг/см³, в поток HPLC со скоростью 0,25 см³/мин, используя Т-образный соединитель. Поток HPLC составляет 50% подвижной фазы А (А.6.3.1) и 50% подвижной фазы В (А.6.3.2). Таблицы А.4-А.6 дают рабочие условия приборов для анализа меламина и циануровой кислоты.

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Таблица A. 4—Типичные параметры MS для меламина

Параметр Применяемый прибор Biosystems Sciex4000 QTrap Тип ионизации Электрораспыление (ESI) Напряжение электрораспыления 3,5 кВ Полярность Положительные ионы Температура блока источника ионизации 500 С Газ Защитный газ: 69 кПа (10 psl (фунтов на дюйм); газ источника ионов 1: 207 лЗкПа (30 фунтов на дюйм); газ источника ионов 2: 207 кПа (30 фунтов на дюйм) Потенциал декластеризации (DP) 60 В Потенциал на входе (ЕР) 10 В Потенциал столкновений на выходе (СХР) 15 А Давление газа CID (SRM) 0,8 Па (6 мТогг), азот Ширина пика (для каждого перехода) 0,5 Th Разрешение Единица (обе квадрупольные линзы) Время сканирования (для каждого перехода) 100 мс Переключение положительный/отрицательный в тройнике Т 8 мин

Та б л и ц а А. 5 —Типичные параметры MS для циануровой кислоты

Параметр Применяемый прибор Biosystems Sciex4000 QTrap Тип ионизации Электрораспыление (ESI) Напряжение электрораспыления 3,5 кВ Полярность Отрицательные ионы Температура блока источника ионизации 500 °С Газ Защитный газ: 69 кПа (10 фунтов на дюйм); газ источника ионов 1:207 кПа (30 фунтов на дюйм); газ источника ионов 2:207 кПа (30 фунтов на дюйм) Потенциал декластеризации (DP) 40 В Потенциал на входе (ЕР) 10 В Потенциал столкновений на выходе (СХР) 15 В Давление газа CID (SRM) 0,8 Па (6 мТорр, азот) Ширина пика (для каждого перехода) 0,7 Th Разрешение Единица (обе квадрупольные линзы) Время сканирования (для каждого перехода) 100 мс Переключение положительный/отрицательный в тройнике Т 8 мин

ТаблицаА.6 — Реакции перехода, наблюдаемые для анализа меламина и циануровой кислоты и их соответствующих внутренних стандартов (IS) и соотношения площадей пиков с допустимым пределом приемки по [1]___

Аналит а Реакции перехода (mlz) для: Отношение площадей пиков ± предел(%) количественного определения подтверждения аналита Меламин 127,0 -> 85,1 (26) 127,0 -> 68,0 (45) 0,28 + 25 Меченый меламин [13C3N3(15NH2)3] (IS) 133,0 -> 89,1 (26) 133,0->71,1 (45) 0,19 + 25 Циануровая кислота 128,0 -> 42,1 (30) 128,0 -» 85,2 (14) 0,55 ± 20 Меченая циануровая кислота (13СзНз15|ЧзОз)(13) 134,0 -> 44,1 (30) 134,0 -» 88,9 (14) 0,52 ± 20

Энергия столкновений (в электрон-вольтах) приведена в скобках.

10

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Примечание - В зависимости от используемого детектора MS, соотношения площадей пиков по диагностическим реакциям перехода могут отличаться от приведенных в таблице А.6.

А .9.3.3 Тест-контроль прибора

Необходимо убедиться, что аппаратура LC-MS/MS работает в таких условиях, в которых метод остается соответствующим назначению. Это включает ввод калибранта низкой концентрации (например, стандартного раствора 7, таблица А.2) для проверки адекватности чувствительности прибора.

А 9.4 Калибровка и анализ проб

Количественно меламин и циануровая кислота определяют с помощью внешней калибровки. Вводят стандартные растворы (А.6.2.1 или А.6.2.2) в каждой серии обычных проб.

А 9.5 Подтверждение

Меламин и циануровая кислота считаются идентифицированными в пробе, если выполняются все критерии подтверждения а) - с) строго в соответствии с определениями по [1]

a)    Сигнал обнаруживается при двух диагностических реакциях перехода, выбранных для каждого аналита и при двух диагностических реакциях перехода, выбранных для их соответствующих внутренних стандартов (IS). Отношение сигнал-шум для каждого диагностического иона должно быть > 3:1;

b)    Отношение хроматографического времени удерживания аналита к времени удерживания соответствующего внутреннего стандарта, т.е. относительное время удерживания аналита, соответствует отношению усредненного времени удерживания градуировочных растворов в пределах + 2,5 % допуска;

c)    Соотношение площадей пиков от различных реакций перехода, записанных для каждого аналита находится в пределах допусков, установленных критериями по [1], приведенными в таблице А.6.

А.10 Расчеты и обработка результатов

А.10.1 Расчеты

Соответствующее программное обеспечение облегчает построение шаблона на заказ, который затем служит для проверки линейности градуировочных кривых, чтобы рассчитать отношения площадей пиков, полученных по различным реакциям перехода (как определено в Таблице А.6), чтобы подтвердить присутствие или отсутствие аналитов, и дать окончательные результаты, выраженные в миллиграммах на килограмм.

Примечание - Г радуировочная кривая будет такого типа:

а = bw + а

где а - отношение площадей;

Ь- наклон;

w- массовая доля;

а - отсекаемый отрезок.

Рассчитывают содержание аналита w_g, мг/кг (где аналитом является меламин, w = w ; где аналитом является циануровая кислота, w_a = wj, используя следующее уравнение:

т_а х 1 ООО

где А_а - площадь пика аналита в пробе;

A_|S - площадь пика внутреннего стандарта (IS) в пробе;

а - отсекаемый отрезок линии регрессии для реакции перехода, используемой для количественного определения;

b - наклон линии регрессии для реакции перехода, используемой для количественного определения;

т - масса, в нанограммах, внутреннего стандарта (IS), добавленного в пробу для анализа (А.9.1);

т_а - масса, в граммах, пробы для анализа (А.9.1).

А. 10.2 Обработка результатов Результаты выражают для аналита(ов) с точностью до второго знака после запятой.

A. 11 Показатели точности метода

А .11.1 Линейность

Тестируемые диапазоны линейности представлены в перечислениях а) и Ь):

a)    меламин: от 0 до 0,20 мг/кг и от 0 до 2,00 мг/кг (эквивалентно содержанию в пробах) соответственно;

b)    циануровая кислота: от 0 до 0,30 мг/кг и от 0 до 2,00 мг/кг (эквивалентно содержанию в пробах) соответственно.

Калибровка следует линейной модели, остатки равномерно распределены, а коэффициенты отклика стабильны в рассматриваемых диапазонах массовых долей.

А .11.2 Пределы обнаружения

LoD (отношение сигнал-шум, равное 3) составляют 0,03 мг/кг для меламина и 0,05 мг/кг для циануровой кислоты соответственно, как в коровьем молоке, так и в сухой молочной смеси.

А. 11.3 Предел квантификации

LoQ составляют 0,05 мг/кг для меламина и 0,10 мг/кг для циануровой кислоты, соответственно, как в коровьем молоке, так и в сухой молочной смеси.

А. 11.4 Пределы принятия решения и возможности выявления в сухой молочной смеси

(PIF)

Предполагая, что максимальный предел (ML) составляет 1 мг/кг в PIF, пределы принятия решения, wqq , и возможности выявления, wqq представлены в перечислениях а) и Ь):

^va    Р’

a)    для меламина: wqq =1,03 мг/кг, wqq =1,05 мг/кг;

a    Р

b)    для циануровой кислоты:    wqc    =    1,04 мг/кг, wqq =1,09 мг/кг.

a    Р

А .11.5 Эффективность

Как для меламина, так и для циануровой кислоты, эффективность, скорректированная по внутренним стандартам, была в диапазоне от 99 % до 116 %.

А. 11.6 Прецизионность

Значения для предела относительной повторяемости и предела относительной внутрилабораторной воспроизводимости были получены в ходе небольшого межлабораторного исследования на базе ISO 5725-1 и ISO 5725-2 1⁷1, но не соответствовали всем требованиям.

А .11.6.1 Предел относительной повторяемости

Типичные значения относительной повторяемости, полученные методом, описанным в настоящем стандарте, приведены в таблице А.7.

ТаблицаА.7 —Типичные значения относительной повторяемости

Аналит Матрица Относительное значение повторяемости, % Диапазон содержания, мг/кг Меламин СМ 6 От 0,05 до 0,15 PIF 12 От 0,05 до 0,15 PIF 4 От 0,5 до 1,5 Циануровая кислота СМ 8 От 0,1 до 0,2 PIF 11 От 0,1 до 0,2 PIF 5 От 0,5 до 1,5

А.11.6.2 Предел относительной внутрилабораторной воспроизводимости Типичные значения относительной внутрилабораторной воспроизводимости, полученные методом, описанном в настоящем стандарте, приведены в таблице А.8. Т а блица А . 8 — Типичные значения относительной внутрилабораторной воспроизводимости

Аналит Матрица Относительная внутрилабораторная воспроизводимость, % Диапазон содержания, мг/кг Меламин СМ 13 От 0,05 до 0,15 PIF 15 От 0,05 до 0,15 PIF 6 От 0,5 до 1,5 Циануровая кислота СМ 10 От 0,1 до 0,2 PIF 31 От 0,1 до 0,2 PIF 13 От 0,5 до 1,5

12

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Примечание - m/z - массовые числа ионов.

Рисунок А.1 — Пример хроматограмм LC-MS/MS меламина (MEL) и циануровой кислоты (СА) из экстракта коровьего молока, меченого изотопами, при концентрации меток: MEL = 0,05 мг/кг (IS =

0,1 мг/кг); СА = 0,10 мг/кг (IS = 0,1 мг/кг)

13

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Рисунок А.З — Пример хроматограмм LC-MS/MS меламина (MEL) и циануровой кислоты (СА) из экстракта меченой сухой молочной смеси для детей раннего возраста при концентрации меток: MEL

0,50 мг/кг (IS 1,0 мг/кг); СА 0,50 мг/кг (IS 1,0 мг/кг)

А.13 Протокол испытания

Протокол испытания методом А должен включать по крайней мере следующую информацию:

a)    все сведения, необходимые для полной идентификации пробы;

b)    использованный метод отбора проб, если он известен;

c)    использованный метод испытания со ссылкой на данное приложение (ISO/TS 15495/IDF/RM 230:2010, приложение А);

d)    подробное описание процедур, не установленных в данном приложении или рассматриваемых, как дополнительные, напряду с описанием всех случайностей, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;

e)    полученный результат(ы) испытания;

f)    если проверялась повторяемость (сходимость), то конечный результат.

15

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

Введение

Международная организация по стандартизации ИСО (ISO) является всемирной федерацией национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO тесно сотрудничает с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.

Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, приведенными в Директивах ISO/IEC, часть 2.

Основная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.

При других обстоятельствах, особенно при наличии настоятельных требований рынка, технический комитет может решить опубликовать другие типы нормативных документов:

общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS), представляющие собой соглашение между техническими экспертами рабочей группы ISO и публикуемые при условии получения одобрения более чем 50 % голосов членов головного технического комитета, принимавших участие в голосовании;

- технические условия ISO (150Я5), представляющие собой соглашение между членами технического комитета и публикуемые при условии утверждения 2/3 голосов членов комитета, принимавших участие в голосовании.

Документы ISO/PAS или ISO/TS пересматриваются через три года с целью принятия решения либо о продлении их действия на следующие три года, либо о пересмотре и публикации в качестве международного стандарта, либо прекращении действия. Если принимается решение о продлении действия ISO/PAS и ISO/TS, они должны быть пересмотрены через следующие три года, когда они должны быть либо преобразованы в международный стандарт, либо отменены.

Следует учитывать возможность того, что некоторые элементы международного стандарта могут быть предметом патентного права. ISO не несет ответственности за идентификацию любого из таких патентных прав.

Международный документ ISO/TS 154951IDF/RM 230 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34 «Пищевые продукты» подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» и Международной федерацией по молочному животноводству (IDF). Международный документ публикуется совместно с ISO и IDF.

IDF (Международной федерацией по молочному животноводству ММФ (IDF) является некоммерческой организацией, представляющей всемирное молочное производство. Членами IDF являются Национальные комитеты каждой страны-члена, а также региональные ассоциации по молочному животноводству, которые имеют подписанное официальное соглашение о совместной деятельности с IDF. Каждый член IDF имеет право быть представленным в постоянных комитетах IDF, осуществляющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO по вопросам разработки стандартных методов анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.

Основная задача постоянных комитетов состоит в подготовке международных стандартов. Проекты международных стандартов, принятые Постоянными комитетами, рассылаются Национальным комитетам для утверждения до опубликования в качестве международных стандартов. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения не менее 50 % национальных комитетов IDF, принимающих участие в голосовании.

Следует иметь в виду, что некоторые элементы международных стандартов могут быть объектом патентных прав. IDF не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав.

ISO/TS 15495/IDF/RM 230 был подготовлен Международной молочной федерации IDF (ММФ) и Техническим комитетом ISO/TC 34 «Пищевые продукты» подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты». Опубликован совместно IDF и ISO.

V

Вся работа по разработке международного документа была выполнена совместной рабочей группой по Определению меламина постоянного комитета по Методам анализа добавок и примесей под руководством лидеров проекта, д-ра С.Е.Холройда (S.E.Holroyd) (Новая Зеландия) и д-ра Т.Делатуа (Т. Delatour) (Швейцария).

VI

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МОЛОКО. МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ И ПИТАНИЕ ДЛЯ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

Руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии -тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS)

Milk, milk products and infant formulae.

Guidelines for the quantitative determination of melamine and cyanuric acid by LC-MS/MS

Дата введения - 2014—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает руководящие указания для количественного определения меламина и циануровой кислоты в молоке, сухих молочных продуктах и питании для детей раннего возраста методом жидкостной хроматографии с ионизацией электрораспылением - тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS).

Примечание - Примеры методов LC-MS/MS приведены в приложениях А и В.

2    Нормативные ссылки

Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).

ISO 3534 (all parts) Statistics - Vocabulary and symbols (Статистика. Словарь и обозначения)

ISO 5725-1 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерения. Часть 1. Общие принципы и определения)

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ISO 3534, ISO 5725-1, а также следующие термины с сооответствующими определениями.

3.1    содержание меламина (melamine content): Массовая доля вещества, определенная с помощью методов, установленных в настоящем стандарте.

Примечание - Содержание меламина выражают в миллиграммах на килограмм продукта.

3.2    содержание циануровой кислоты (cyanuric acid content): Массовая доля вещества, определенная с помощью методов, установленных в настоящем стандарте

Примечание - Содержание циануровой кислоты выражают в миллиграммах на килограмм продукта.

3.3    максимальный предел (maximum limit, ML): Максимальное содержание меламина или циануровой кислоты, допускаемое или приемлемое в молоке, продукции из сухого молока или молочных смесей для детей раннего возраста.

Примечание - ML может быть пределом, установленным на национальном, международном уровнях или на определенном уровне решения таких проблем.

4    Сущность метода

Пробу приводят в гомогенное состояние или разбавляют в случае порошкообразных проб. К пробе для анализа добавляют подходящий растворитель, чтобы осадить белки из матрицы и экстрагировать меламин и циануровую кислоту. После центрифугирования аликвотное количество надосадочной жидкости анализируют методом LC-MS/MS.

Издание официальное

Применительно к настоящему стандарту LC-MS/MS обозначает любой метод, соединяющий высокоэффективную жидкостную хроматографию (HPLC) или сверхпроизводительную жидкостную хроматографию (UPLC), либо с обнаружением на спектрометре с тремя квадрупольными линзами, либо с обнаружением на масс-спектрометре с ионной ловушкой. Хроматографическое разделение основано на жидкостной хроматографии с гидрофильном взаимодействием (HILIC), чтобы обеспечить хорошее разделение меламина и циануровой кислоты. Ионизация вещества сопровождается ионизацией электрораспылением (ESI), а детекторы функционируют в выбранном режиме мониторинга реакции (SRM).

Примечание - Можно использовать другие достаточно эффективные методы ионизации. Также можно использовать другие анализаторы массы, постольку поскольку они согласуются с критериями эффективности (идентификационные точки) по [1].

Количественное определение меламина и циануровой кислоты основано на разбавлении с использованием внутренних стандартов стабильного изотопа для обоих определяемых веществ (аналитов).

5    Отбор проб

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в ISO 707/IDF 50 [2]. Важно, чтобы лаборатория получила действительно репрезентативную пробу, без повреждений и изменений в результате транспортирования или хранения.

6    Подготовка пробы для анализа

Масса пробы для анализа или дополнительного разбавления должна быть представительной для исследуемого продукта и позволять эффективную экстракцию определяемых веществ (аналитов).

Стандарты с мечеными изотопами следует вводить непосредственно в сухую или влажную пробу на первом этапе анализа.

Концентрация добавленных внутренних стандартов должна быть величиной такого же порядка, как концентрация меламина и циануровой кислоты. Экстракцию можно выполнить в объеме растворителя не менее 5 см⁴ на грамм материала пробы, чтобы получить конечную массовую долю органического растворителя в экстракционной смеси не менее 70 %. Экстракцию следует вести в течение не менее 5 мин либо при энергичном встряхивании, либо с помощью ультразвука в сочетании с перемешиванием. Затем пробу центрифугируют в определенных условиях и фильтруют через шприцевой фильтр.

Можно применять другие способы при условии соответствия критериям эффективности и соответствия валидации требованиям, установленным в настоящем стандарте.

7    Проведение анализа

7.1    Анализ LC-MS/MS. Хроматография

Выполняют разделение с помощью жидкостной хроматографии, используя колонку, предназначенную для этой цели.

Минимальное приемлемое время удерживания для меламина и циануровой кислоты должно вдвое превосходить время удерживания, соответствующее свободному объему колонки. Время удерживания в экстракте пробы должно соответствовать времени удерживания калибровочного стандарта в пределах установленного интервала времени удерживания.

Отношение времени удерживания определяемого вещества (аналита) к времени удерживания внутреннего стандарта должно соответствовать отношению времени удерживания калибровочных стандартов к времени удерживания внутреннего стандарта в пределах +2,5 %.

7.2    Анализ LC-MS/MS. Масс-спектрометрия

Масс-спектрометрическое определение меламина и циануровой кислоты должно осуществляться предпочтительно посредством применения прибора LC-MS/MS с тремя квадрупольными линзами.

Количественное определение и идентификация должны достигаться в режиме SRM. При использовании прибора с тремя квадрупольными линзами для каждого соединения, должно использоваться не менее двух MRM-переходов массы для определения аналита, тогда как не менее одного перехода должно использоваться для внутреннего стандарта. Также рекомендуется, чтобы 2

ГОСТ ISO/TS 15495/IDF/RM 230—2012

для внутреннего стандарта наблюдалось два MRM-перехода.

Наиболее подходящий переход (наиболее интенсивный) должен использоваться для количественного определения (квантификатор), а второй для подтверждения (квалификатор). Необходимо проверить отношение интенсивности квалификатора к интенсивности квантификатора (Rq/Q) и применить критерии допусков в зависимости от значения Rq/Q (таблица 1).

Таблица1 — Коэффициент допустимого отклонения для отношения интенсивности квалификатора к интенсивности квантификатора (Rq/Q)_

Rq/Q Допуск (% квантификатора) (отн. в %) >50 + 20 >20 до 50 + 25 >10 до 20 ±30 <10 ±50

8    Критерии рабочих характеристик

8.1    Общие положения

Каждой лаборатории следует подтвердить вводимый метод, чтобы продемонстрировать соответствие поставленным целям. Для валидации рекомендуется процедура, установленная по [1]. Максимальные и минимальный пределы рабочих характеристик, взятых из этой процедуры, определены в 8.2 и 8.5.

8.2    Требуемая минимальная чувствительность

Требуемый предел квантификации (LoQ) должен быть не менее чем в 10 раз ниже максимального предела (ML), чтобы обеспечить надежный диапазон при ML.

8.3    Достоверность и воспроизведение

Следуя данному руководству, достоверность и воспроизведение обычно попадают в интервал между 95 % и 105 %. Для приемки аналитических методов правильность и выход должны быть в интервале между 80 % и 110 %.

8.4    Повторяемость

Коэффициент вариаций повторяемости обычно составляет от 3 % до 6 %, с пределом <15 %.

8.5    Внутрилабораторная воспроизводимость

Коэффициент вариаций внутрилабораторной воспроизводимости обычно составляет от 5 % до 10 %, с пределом <15 %.

9    Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать, как минимум, следующую информацию:

a)    все сведения, необходимые для полной идентификации пробы;

b)    использованный метод отбора проб, если он известен;

c)    использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

d)    все детали процедур, не установленных в настоящем стандарте или считающихся необязательными, наряду с описанием всех событий, которые могли повлиять на результат(ы) испытания;

e)    полученный(е) результат(ы) испытания;

f)    если проверялась повторяемость (сходимость), то полученный конечный результат. ⁴

Приложение A (справочное)

Пример А — Коровье молоко и сухие молочные смеси для детей раннего возраста. Одновременное количественное определение меламина и циануровой кислоты методом жидкостной хроматографии с ионизацией электрораспылением и тандемной масс-спектрометрии

А.1 Область применения

В данном приложении установлен подтвержденный внутри лаборатории метод количественного определения меламина и циануровой кислоты в коровьем молоке и сухих молочных смесей для детей раннего возраста методом жидкостной хроматографии с ионизацией электрораспылением и тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS) с использованием режима мониторинга выбранных реакций.

Положительная идентификация меламина и циануровой кислоты в пробе проводится согласно критериям подтверждения по [1].

Количественное определение осуществляют с помощью изотопного разбавления, используя меченый (^С₃,^Ы₃)-меламин и меченую (^С₃,^Ы₃)-циануровую кислоту в качестве внутренних стандартов (IS). Дополнительные технические подробности можно найти в данных валидации и результатах квалификационных испытаний, см. ссылку [3].

Метод позволяет осуществить точное количественное определение при следующих сообщаемых пределах, и более:

a)    содержание меламина и циануровой кислоты в коровьем молоке при массовой концентрации от 0,05 до 0,10 мг/кг соответственно;

содержание меламина и циануровой кислоты в молочных смесях для детей раннего возраста при массовой концентрации от 0,05 мг/кг до 0,10 мг/кг, соответственно;

b)    содержание меламина и циануровой кислоты в молочных смесях для детей раннего возраста при массовой концентрации 1,00 мг/кг.

А. 2 Термины и определения

См. раздел 3.

А. 3 Сущность метода

Методика анализа включает разбавление пробы в водном растворе ацетонитрила, что приводит к осаждению. После центрифугирования надосадочную жидкость анализируют методом LC-MS/MS в режиме SRM, работая как в режиме ионизации с получением положительных ионов, так и в режиме ионизации с получением отрицательных ионов. Переключение полярности выполняется в рамках одного опыта.

А. 4 Реактивы

Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет иных указаний, и дистиллированную или деминерализованную воду или воду равноценной чистоты.

Примечание -    Номера    по    CAS приведены для каждого реактива.

Перед использованием химических веществ см. соответствующие справочники или перечни безопасности, утвержденные в установленном порядке.

А.4.1 Вода для хроматографического анализа (CAS No. 7732-18-5).

А.4.2 Ацетонитрил (CH3CN), градиентной чистоты для хроматографического анализа (CAS No. 75-05-8).

А.4.3 Ацетат аммония (CH₃COONH₄), GR для анализа (CAS No. 631-61-8).

А.4.4 Циануровая кислота (CNOH)₃, массовая доля >98 % (CAS No. 108-80-5).

А.4.4.1 Исходный стандартный раствор циануровой кислоты, массовой концентрацией 0,25 мг циануровой кислоты на кубический сантиметр.

Берут навеску с точностью до 0,1 мг, 63,8 мг циануровой кислоты (А.4.4) в мерную колбу с одной меткой вместимостью 250 см³ (А.5.12), сделав соответствующую поправку на примеси согласно результатам анализа, приведенным в сертификате. Растворяют и доводят до метки водой (А.4.1). Примерно в течение 15 мин воздействуют ультразвуком до полного растворения.

Хранят исходный стандартный раствор циануровой кислоты при комнатной температуре в защищенном от света месте. Свежий исходный стандартный раствор готовят еженедельно.

4

1

)    4000 QTrap и Turbulon Spray это торговые наименования приборов, поставляемых Applied Biosystems. Эта информация приведена только для удобства пользователей настоящим стандартом и не свидетельствует о предпочтении со стороны ISO или IDF в отношении данной продукции. Можно использовать аналогичную продукцию при условии получения равноценных результатов.

2

TSKgel Amide-80 это торговое наименование прибора, поставляемого Tosoh Bioscience. Эта информация приведена только для удобства пользователей настоящим стандартом и не свидетельствует о предпочтении в отношении данной продукции. Можно использовать аналогичную продукцию при условии получения равноценных результатов.

3

4