Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

23 страницы

396.00 ₽

Купить ГОСТ 34108-2017 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает прямой твердофазный конкурентный иммуноферментный метод (далее - ИФА) определения содержания микотоксинов: суммы афлатоксинов В1, В2, G1, G2 (по афлатоксину В1), афлатоксина В1, дезоксиниваленола (далее - ДОН), зеараленона, охратоксина А, Т-2 токсина, суммы фумонизинов (по фумонизину В1) в кормах, комбикормах и комбикормовом сырье. Данный метод не распространяется на продукцию минерального происхождения и органического синтеза.

 Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Сущность метода

5 Требования безопасности

6 Условия проведения испытаний

7 Требования к квалификации оператора

8 Отбор проб

9 Подготовка проб

10 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

11 Подготовка к выполнению испытания

12 Проведение испытания

13 Обработка результатов

14 Оформление результатов испытаний

15 Контроль точности результатов определений

16 Протокол испытаний

Приложение А (рекомендуемое) Приготовление градуировочных растворов микотоксинов

Приложение Б (рекомендуемое) Схема расположения лунок в планшете

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерений

 
Дата введения01.01.2019
Добавлен в базу01.01.2018
Актуализация01.01.2019

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

01.06.2017УтвержденМежгосударственный Совет по стандартизации, метрологии и сертификации51
15.09.2017УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии1137-ст
ИзданСтандартинформ2017 г.
РазработанООО ЗИП-И
РазработанАО ВНИИКП

Feeds, mixed feeds and raw material. Determination of mycotoxins content by direct solid-phase competitive immunoenzymatic method

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

(МГС)

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

ГОСТ

34108—

2017

(ISC)

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ

СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным

методом

Издание официальное

Москва Ста нда рти н фор м 2017

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2015 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по международной стандартизации. Правила разработки, принятия. обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (АО «ВНИИКП»), Обществом с ограниченной ответственностью «ЗИП-И» (ООО «ЗИП-И»)

2    ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 июня 2017 г. № 51)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК

(ИСО 3166)004—97

Код страны по МК (ИСО 3166)004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Армения

AM

Минэкономики Республики Армения

Беларусь

BY

Госстандарт Республики Беларусь

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 сентября 2017 г. № 1137-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34108-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2019 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ. 2017

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

Окончание таблицы 2

Наименование

микотоксина

Разбавляющий

раствор

Время инкубации с раствором конъюгата, мин

Время инкубации с раствором субстрата. мин

промывочный

раствор

Длина

ВОЛНЫ.

нм

ДОН

Дистиллированная вода

15

5

Промывочный раствор по 12.4 2

450

Зеараленон

Раствор А (см 12 4.1)

10

10

Дистиллированная вода

450'

Охратоксин А

Раствор А (см 12.4.1)

10

5

Дистиллированная вода

450'

Т-2 токсин

Раствор А (см 124.1)

10

5

Дистиллированная вода

450'

Сумма

фумонизиное

Раствор А (см 12 4.1)

10

5

Дистиллированная вода

450

' Допускается использование дифференциального фильтра на 630 нм

Удаляют содержимое микролунок, промывают лунки промывочным раствором (см. таблицу 2). Процедуру промывки планшета рекомендуется проводить с помощью устройства для отмывки планшетов. задавая следующие параметры программы: количество циклов промывки — от трех до четырех, обьем заливаемого промывочного раствора — 300 мм3. Допускается ручная промывка с использованием многоканального дозатора. При этом в лунки планшета вносят 4 раза по 300 мм3 промывочного раствора с последующим резким переворачиванием и встряхиванием планшета.

Планшет переворачивают лунками вниз на фильтровальную бумагу и окончательно удаляют из лунок остатки промывочного раствора легким постукиванием.

Отмеряют необходимое количество раствора субстрата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм3 на лунку или 1 см3 на стрил) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор, вносят по 100 мм3 раствора субстрата в каждую лунку. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.

Отмеряют необходимое количество останавливающего раствора из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 120 мм3 на лунку или 1 см3 на стрил) и помещают в отдельную емкость. Используя восьмиканальный дозатор, вносят по 100 мм3 останавливающего раствора в каждую лунку. Цвет раствора изменяется с голубого на желтый.

Измеряют оптическую плотность D содержимого лунок при длине волны, указанной в таблице 2. Значения оптической плотности записывают с точностью до второго десятичного знака и заносят в форму для записи (см. приложение В).

Примечание — Перед фотометрией нужно избавиться от воздушных пузырьков в лунке, поскольку они могут повлиять на результат анализа

12.3 Построение и оценка градуировочной характеристики

На основании полученных значений оптической плотности с помощью специального программного обеспечения рассчитывают массовую концентрацию микотоксина в экстракте пробы.

Примечание — Если в инструкции к тест-системе концентрация градуировочных растворов микотоксинов пересчитана на массу навески с учетом всех разведений, то программа рассчитывает содержание микотоксина в анализируемой пробе В этом случае в приведенных ниже расчетах вместо массовой концентрации микотоксина в градуировочном растворе используют содержание микотоксина

При отсутствии специального программного обеспечения построение градуировочного графика проводят с помощью программы Excel.

Вычисляют логарифм массовой концентрации (содержание) микотоксина LgC^ каждого градуировочного раствора. Полученные значения являются координатами точек градуировочной характеристики по оси X.

ГОСТ 34108-2017

Определяют процент связывания микотоксина для каждого градуировочного раствора относительно нулевой точки по формуле

(1)

где Оф — измеренное значение оптической плотности для ьго градуировочного раствора; D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки;

100 — коэффициент перевода в проценты.


Для каждого градуировочного раствора определяют

где Оф — измеренное значение оптической плотности для ьго градуировочного раствора;

D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки.

Полученные значения являются координатами точек градуировочной характеристики по оси У.

По значениям X, и У( строят градуировочную характеристику, пример которой представлен на рисунке 1.

V

'9СФ


* /к

Полученная градуировочная характеристика описывается уравнением

|9*%J*alflC/ + b.    (3)

где D, — измеренное значение оптической плотности для /-го раствора;

Dq — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки;

С, — массовая концентрация (содержание) микотоксина ьго раствора, мг/дм3 (мг/кг); а. b — коэффициенты линейного уравнения.

9


Для контроля градуировочной характеристики используют Ай градуировочный раствор. По градуировочной характеристике вычисляют массовую концентрацию (содержание) С, MJM микотоксина в Ам градуировочном растворе, мг/дм3 (мг/кг)

где D, — измеренное значение оптической плотности для /-го раствора;

D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки:

С, — массовая концентрация (содержание) микотоксина /-го раствора, мг/дм3 (мг/кг); а. b — коэффициенты линейного уравнения.

[с/. изм ~ с/

С/


100 < glt


(5)


Градуировочную характеристику признают стабильной, если выполняется условие

где С, изм — массовая концентрация (содержание) микотоксина в нм градуировочном растворе, вычисленная по формуле (4). мг/дм3 (мг/кг);

С, — массовая концентрация (содержание) микотоксина в нм градуировочном растворе, мг/дм3 (мг/ кг);

д, — норматив контроля при доверительной вероятности Р = 0,95 (см. таблицу 3).

ТаблицаЗ    В    процентах

Наименование микотоксина

Норматив контроля

0i

02

Афлатоксин В,

10

Сумма афлатоксинов

10

ДОН

12

Зеараленон

10

Охратоксин А

18

97

Т-2 токсин

11

Сумма фумонизиное

10

95

13 Обработка результатов

13.1    Если концентрация градуировочных растворов микотоксинов тест-системы пересчитана на массу навески с учетом всех разведений, то содержание микотоксина X,. мг/кг (млн-1), в пробе вычисляют по формуле

(">•)

х, =    \    (в)

где Dnp — измеренное значение оптической плотности для экстракта пробы:

D0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки; а. Ь — коэффициенты линейного уравнения.

13.2    Вычисляют массовую концентрацию микотоксина в экстракте пробы Спр, мг/дм3. по формуле

Спр=Ю1 \    (7)

где Опр — измеренное значение оптической плотности для экстракта пробы;

О0 — измеренное значение оптической плотности для нулевой точки; а. b — коэффициенты линейного уравнения.

Если массовая концентрация микотоксина в экстракте превышает верхнюю границу диапазона массовых концентраций градуировочных растворов, то допускается дополнительное разбавление экстракта (f2) таким образом, чтобы концентрация микотоксина соответствовала диапазону массовых концентраций градуировочных растворов.

Содержание микотоксина в пробе Х2. мг/кг (млн'1), вычисляют по формуле

Х2 = ^.    (8)

т

где С,,,, — массовая концентрация микотоксина в экстракте пробы, вычисленная по формуле (6). мг/дм3; 10

ГОСТ 34108-2017

V— объем экстрагента (см. 12.1). см3;

7, — коэффициент разбавления (см. таблицу 1); f2 — коэффициент дополнительного разбавления; т — масса навески, г.

14 Оформление результатов испытаний

За результат определения содержания микотоксина в пробе принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, для которых выполняется условие приемлемости (см. 15.1).

Результат определения содержания микотоксина в пробе, вычисленный по формулам (7) или (8). представляют в виде (X ± U), мг/кг (млн-1), при этом U— показатель точности измерений (расширенная неопределенность с коэффициентом охвата 2). Значение U рассчитывается по формуле

U - 0,01 XI/0,    (9)

где OjOl — коэффициент пересчета;

X — среднеарифметическое значение содержания микотоксина для двух параллельных определений. вычисленных по формуле (6) или (8). %;

Lfi — относительная расширенная неопределенность ск = 2. значение Lfi приведено в таблице 4. %. Допускается представление результатов в микрограммах в килограмме.

Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности в абсолютных единицах, содержащее не более двух значащих цифр.

Показатели точности, повторяемости и прецизионности метода представлены в таблице 4. Таблица4

Наименование

микотоксина

Диапазон измерений. MT.W (млн-1)

Относительная расширенная неопределенность при к = 2. ifi. %

Отноопегкное

стандартное

отклонение

повторяемости

аг%

Относительное стандартное отклонение промежуточной прецизионности (время, оператор)

°КТО)- %

Предел

повторя

емости

Гагн- *

Предел промежуточной прецизионности *КТО)- %

Афлатоксин В,

0.002—0.050

40

5.6

18

15

50

Сумма афлатоксинов (по афлатоксину В,)

0,004—0,040

40

15

18

41

50

ДОН

0,250—5.000

30

10

13

27

36

Зеаралемон

0.025—1,000

35

6

14

16

40

Охратоксин А

0.002—0,040

30

11

30

Т-2

0.020-0,500

40

8

18

23

50

Сумма фумонизинов (по фумонизину В,)

0.250—5.000

30

10

13

27

36

15 Контроль точности результатов определений

15.1 Контроль повторяемости результатов определений

Рекомендуется для каждой пробы проводить два параллельных испытания в условиях повторяемости. Если количество испытуемых проб больше 20, то допускается проведение параллельных испытаний для каждой двадцатой анализируемой пробы.

1*1-*2

(Ю)

Расхождение между результатами двух параллельных испытаний X, и Х2. мг/кг (млн-1), полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14). должно соответствовать условию

100 5

11

ГОСТ 34108-2017

гдеХ — среднеарифметическое значение результатов определения содержания микотоксина, вычисленных по формуле (6) или (8). мг/кг (млн-1);

100 — коэффициент пересчета результата в проценты;

готн — предел повторяемости при доверительной вероятности Р- 0.95 (см. таблицу 4).

Если это условие не соблюдается, то используют методы проверки приемлемости результатов параллельных определений и установления окончательного результата согласно ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5).

15.2 Контроль промежуточной прецизионности

*ХТО) ~ х2(ТО)1

Х(ТО)


(11)


100 5 ^то)-


Расхождение между результатами двух испытаний Х1(Т0) и Х2(Т0). мг/кг (млн-1), полученными в условиях промежуточной прецизионности (варьируемые факторы: время, оператор) на идентичной пробе, должно соответствовать условию

гдеХ — среднеарифметическое значение результатов определения содержания микотоксина (Х1(Т0) и Х^то))- мг/кг (млн-1);

100 — коэффициент пересчета результата в проценты; то» — предел промежуточной прецизионности при доверительной вероятности Р = 0.95 (см таблицу 4).

15.3 Контроль правильности определения

Периодичность контроля показателя правильности измерений определяется планом внутрилабо-раторного контроля.

Контроль проводят с использованием стандартных образцов с известным содержанием микотоксина. Значение аттестованной характеристики должно находиться в диапазоне измерений, предусмотренном настоящим стандартом.

Результат считают удовлетворительным, если выполняется условие

100$07 ^0 (12)

*атт

гдеХ — среднеарифметическое значение двух параллельных определений содержания микотоксина в стандартном образце, мг/кг (млн-1);

Хвтт — аттестованное значение содержания микотоксина в стандартном образце с известным содержанием микотоксинов (см. 10.21), мг/кг (млн-1);

100 — коэффициент пересчета результата в проценты;

0.7 — поправочный коэффициент, определяемый принятой доверительной вероятностью Р = 0.90; Lfi — относительная расширенная неопределенность ск = 2. значение приведено в таблице 4. %. При превышении норматива испытания повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

15.4 Контроль полноты экстракции

Контроль полноты экстракции проводят при внедрении методики, смене оборудования для экстракции или согласно плану внутрилабораторного контроля.

Контроль проводят с использованием анализируемой пробы с содержанием фумонизина в диапазоне от 1.0 до 5.0 мг/кг (млн-1), охратоксина А от 0.010 до 0,040 мг/кг (млн'1).

При проведении контроля проводится повторная экстракция навески анализируемой пробы с последующим анализом в соответствии с разделом 13.

Результат контроля признается удовлетворительным, если выполняется условие

хъ-сф-хгэ.стр loo ^ 32■    03)

*1 экстр

где Х1жстр — содержание микотоксина в анализируемой пробе, мг/кг (млн-1);

Х2;жстр — содержание микотоксина в анализируемой пробе при повторной экстракции, мг/кг (млн-1); 100 — коэффициент пересчета результата в проценты;

д2— норматив контроля при доверительной вероятности Р = 0,95 (см. таблицу 3).

ГОСТ 34108-2017

16 Протокол испытаний

Результаты испытаний оформляют в виде протокола испытаний, который должен включать следующее:

-    информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

-    использованный метод отбора проб;

-    использованный метод анализа со ссылкой на настоящий стандарт:

-    обстоятельства, которые могли повлиять на результат испытания;

-    полученный результат испытания.

13

ГОСТ 34108-2017

Содержание

1    Область применения....................................................................................................................................1

2    Нормативные ссылки....................................................................................................................................1

3    Термины и определения..............................................................................................................................2

4    Сущность метода..........................................................................................................................................2

5    Требования безопасности............................................................................................................................2

6    Условия проведения испытаний..................................................................................................................3

7    Требования к квалификации оператора.....................................................................................................3

8    Отбор проб....................................................................................................................................................3

9    Подготовка проб............................................................................................................................................3

10    Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы...................................3

11    Подготовка к выполнению испытания.......................................................................................................5

12    Проведение испытания..............................................................................................................................6

13    Обработка результатов............................................................................................................................10

14    Оформление результатов испытаний.....................................................................................................11

15    Контроль точности результатов определений........................................................................................11

16    Протокол испытаний.................................................................................................................................13

Приложение А (рекомендуемое) Приготовление градуировочных растворов микотоксинов.................14

Приложение Б (рекомендуемое) Схема расположения лунок в планшете..............................................18

Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерений ......................................19

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания микотоксинов прямым твердофазным конкурентным иммуноферментным методом

Feeds, mixed feeds and raw material Determination of mycotoxms content by direct solid-phase competitive immunoenzymatic method

Дата введения — 2019—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает прямой твердофазный конкурентный иммуноферментный метод (далее ИФА) определения содержания микотоксинов: суммы афлатоксинов В,. В2. Gv G2 (no афлатоксину В,), афлатоксина В,, дезоксинивапенола (далее ДОН), зеараленона. охратоксина А, Т-2 токсина, суммы фумонизинов (по фумонизину В,) в кормах, комбикормах и комбикормовом сырье.

Данный метод не распространяется на продукцию минерального происхождения и органического синтеза.

Диапазоны измерений приведены в таблице 4.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты.

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79' Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.2.007.0-75 Система стандартов безопасности труда Изделия электротехнические. Общие требования безопасности

ГОСТ 12 4 009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4 021—75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12 1 019—2009 «Система стандартов безопасности труда Электробезопасность Общие требования и номенклатура видов защиты».

Издание официальное

ГОСТ ИСО 5725-1-2003' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.

ГОСТ ИСО 5725-6-2003“ Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ ISO 6498-2014 Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6995-77 Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13496 0—2016 Комбикорма, комбикормовое сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586 3—83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979 0—86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, сновные параметры и размеры

ГОСТ 21669-76"' Комбикорма. Термины и определения

ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 29169-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3    Термины и определения

3.1    В настоящем стандарте применены термины и определения по ГОСТ 21669. ГОСТ ISO 6498, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1.1    тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реактивов и составных частей, предназначенных для определения одного или нескольких конкретных веществ.

3.1.2    основной раствор: Раствор реактива, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других растворов.

4    Сущность метода

Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности микотоксинов взаимодействовать со специфичными антителами (далее АТ), нанесенными на поверхность ячеек планшета (иммобилизованными). В лунки планшета с иммобилизованными АТ дозируют смешанные с конъюгатом экстракты проб и градуировочные растворы, после инкубации и отмывки носителя от несвязавших-ся компонентов вносят субстрат, в результате образуются окрашенные комплексы. После добавления останавливающего реактива регистрируют значение оптической плотности, которое находится в обратной зависимости от массовой концентрации микотоксина в экстракте.

5    Требования безопасности

5.1 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе 1 2

ГОСТ 34108-2017

с электроприборами по ГОСТ 12.1.019 и ГОСТ 12.2.007.0. требования, изложенные в технической документации на используемые приборы.

5.2    Работа с химическими реактивами должна проводиться в вытяжном шкафу.

5.3    Помещение должно быть оснащено вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021, соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4    Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005

5.5    При работе с метанолом необходимо применять средства индивидуальной защиты (перчатки и очки) от попадания препарата на кожные покровы и слизистые оболочки, а также соблюдать правила личной гигиены. При попадании метанола на кожу или слизистые оболочки необходимо немедленно их промыть большим количеством воды.

Работы с метанолом проводят в вытяжном шкафу при непрерывно действующей приточно-вытяжной вентиляции. Все работы с метанолом следует проводить вдали от огня.

5.6    Останавливающий раствор тест-системы содержит серную кислоту, при работе с ним необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки и очки) (см. 12.2). При попадании на кожу или слизистые оболочки останавливающего раствора необходимо немедленно их промыть большим количеством воды.

6    Условия проведения испытаний

При подготовке и проведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающей среды...............................................................от 18 °С до 25 °С:

- относительная влажность воздуха.............................................................не более 80 % при 25 °С;

-    напряжение в сети.......................................................................................(220 ± 10) В.

7    Требования к квалификации оператора

К проведению работ по данной методике допускаются лица, имеющие высшее специальное или среднее специальное образование, прошедшие обучение приемам работы на оборудовании, освоившие выполнение всех операций, предусмотренных методикой, владеющие техникой выполнения ИФА и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении испытаний.

8    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ 13496.0. ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0 или другим нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт.

9    Подготовка проб

Подготовка проб — по ГОСТ ISO 6498 со следующим дополнением.

Анализируемую пробу измельчают таким образом, чтобы 75 % размола проходило через сито с размером стороны ячейки 0,85 мм, после чего тщательно перемешивают.

10    Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

10.1    Применяемые при определении массовой доли микотоксинов средства измерений, программное обеспечение, вспомогательные устройства должны иметь свидетельства о поверке, свидетельства об аттестации, сертификаты градуировки, оформленные в соответствии с требованиями нормативных правовых актов в области обеспечения единства измерений, действующих на территории государства, принявшего стандарт.

10.2    Фотометры лабораторные медицинские или фотометры для микропланшетов автоматические, позволяющие проводить измерение оптической плотности растворов, находящихся в луночных планшетах, лунках стрипа или стандартных круглых кюветах 12 мм. в диапазоне длин волн 400—650 нм.

3

10.3    Тест-система для прямого твердофазного конкурентного ИФА. в состав которой входят:

-    планшет разборный микролуночный полистероловый без АТ для смешивания реагентов (12 или 6 стрилов голубого или зеленого цвета по 8 лунок);

-    планшет разборный с микролунками с иммобилизованными АТ (12 или 6 безцветных стрилов по 8 лунок), упакованный в фольгированный пакет с замком;

-    флакон с раствором конъюгата;

-    флакон с останавливающим раствором;

-    флакон с раствором субстрата;

-    флакон с буферным раствором;

-    флакон с промывочным раствором;

-    градуировочные растворы, содержащие микотоксины разной концентрации для градуировки тест-системы.

Примечание — Допускается вместо градуировочных растворов, входящих в состав тест-системы, использовать градуировочные растворы микотоксинов, приготовленные в соответствии с приложением А из стандартных образцов и образца сравнения

-состава раствора афлатоксина В, (бензол-ацетонитрил) массовой концентрации 10 мкг/см3.

-    состава раствора ДОН (ацетонитрил) массовой концентрации 20 мкг/см3.

-    состава раствора зеараленона (бензол) массовой концентрации 20 мкг/см3

-    состава раствора охратоксина (бензол-уксусная кислота) массовой концентрации 50 мкг/см3.

-    состава раствора Т-2 токсина (бензол) массовой концентрации 100 мкг/см3.

-    фумонизин В, с содержанием основного вещества не менее 98 %

Срок и условия хранения всех реактивов, входящих в комплект тест-системы, устанавливает ее изготовитель. Не допускается замораживание реагентов.

Неиспользованные стрипы (лунки) хранят упакованными в плотно закрытом оригинальном фоль-гированном пакете вместе с имеющимся в нем осушителем в холодильнике при температуре от 2 'С до 8 °С.

10.4    Мельница лабораторная со скоростью вращения не менее 3000 об/мин. измельчающая продукт до размера частиц не более 0,85 мм.

10.5    Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности ± 0,001 г и весы с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.02 мг.

10.6    Шкаф сушильный электрический вентилируемый, обеспечивающий поддержание температуры (130 ±5) °С.

10.7    Холодильник бытовой по ГОСТ 16317. позволяющий поддерживать температуру от 2 °С до 8 °С в холодильной камере.

10.8    Компьютер с программным обеспечением для обработки результатов или калькулятор, или другое вычислительное устройство с логарифмической функцией.

10.9 Дозаторы пипеточные одноканальные переменного объема 10—100 мм3. 100—1000 мм3. 1—5 см3 и восьмиканальные переменного обьема 30—300 мм3 с метрологическими характеристиками по ГОСТ 28311 в комплекте с одноразовыми наконечниками.

10.10    Устройство для смешивания, отвечающее следующим требованиям, траектория встряхивания — орбитальная; диаметр орбиты — не менее 4.0 мм; диапазон частоты вращения 800 об/мин.

10.11    pH-метр или иономер с диапазоном измерений активности водородных ионов от 0 до 14 ед . pH и пределом допускаемой абсолютной погрешности измерения не более 0.05 ед. pH.

10.12    Секундомер с пределом допускаемой основной абсолютной погрешности измерения в режиме секундомера не менее Д = ±(9.6 10"6 Тх + 0,01) с дискретностью времени не менее 0,01 и с диапазоном измерений интервалов времени от 0 до 9 ч 59 мин 59,99 с.

10.13    Колбы мерные 2-25(50. 100. 500. 1000)-2 по ГОСТ 1770.

10.14    Пипетки 1(2)-1(1а. 2, 2а)-2-1(2. 5. 10. 25) по ГОСТ 29227 или пипетки 1-2-1. 1-2-5. 1-2-10 по ГОСТ 29169

10.15    Цилиндры мерные 1(2)-25(50. 100. 250.1000) по ГОСТ 1770.

10.16    Колбы конические Кн-2-100(250. 500. 1000)-29/32(34/35) ТХС по ГОСТ 25336.

10.17    Воронки В-56(75)-80(110) ХС по ГОСТ 25336.

10.18    Стаканы Н-1-100(150) по ГОСТ 25336.

10.19    Бумага фильтровальная лабораторная марки ФС по ГОСТ 12026 или фильтры бумажные «красная лента».

10.20    Метанол-яд по ГОСТ 6995, х. ч.

ГОСТ 34108-2017

10    21 Стандартные образцы кормов, комбикормов или комбикормового сырья с аттестованным содержанием микотоксинов для контроля правильности результатов.

10.22    Пластиковые емкости для хранения растворов.

10.23    Впалы вместимостью 5—10 см3 для разбавления экстрактов.

10.24    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

10.25    Сито с размером ячеек не более 0,85 мм.

Примечания

1    Рекомендуется для увеличения производительности и повышения точности измерений использование следующего оборудования

-    инкубатор для планшетов, обеспечивающий поддержание температуры от 20 °С до 25 "С с точностью не более ± 1 вС;

-    устройство отмывки планшетов автоматическое с диапазоном объемов моющего раствора, заливаемого в каждую лунку от 100 до 350 мм3

2    Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками не хуже указанных

3    Допускается использование реактивов аналогичной или более высокой квалификации по качеству

11    Подготовка к выполнению испытания

11.1    Подготовка лабораторной посуды

Лабораторную стеклянную посуду моют специальными моющими средствами, например раствором гипохлорита, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу.

Запрещается:

-    многократное использование одноразовой лабораторной посуды;

-    использование бытовых моющих средств для мойки лабораторной посуды.

11.2    Подготовка прибора к работе

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническим описанием.

11.3    Общие требования по работе с тест-системами

Перед использованием все составляющие тест-системы выдерживают при температуре от 18 °С до 25 °С не менее 30 мин.

Не допускается попадание прямых солнечных лучей на планшет и растворы, входящие в комплект тест-системы.

Рекомендуется помещать под планшет теплоизоляционный материал, например сложенное в несколько слоев бумажное полотенце, с целью устранения воздействия холодной поверхности стола.

Следует избегать воздействия на планшет сильных естественных или искусственных потоков воздуха. вызванных, например, принудительной вентиляцией.

Во время проведения испытаний при работе с субстратом следует избегать воздействия на него прямых солнечных лучей, т.к. он разлагается на свету.

Перед использованием жидкие реактивы перемешивают путем осторожного вращения или переворачивания флаконов. Не допускается переливать обратно в оригинальные флаконы остатки реагентов. используемых при проведении измерений.

Не допускается использование реактивов после истечения срока хранения. При выполнении измерений необходимо придерживаться определенного (указанного в методике) времени инкубации. Изменение времени инкубации может привести к неправильным результатам.

Рекомендуется использовать восьмиканальный пипеточный дозатор. В этом случае допускается проведение анализа не более 48 экстрактов и градуировочных растворов в сумме (6 стрипов микролунок). При использовании одноканального дозатора допускается анализировать не более 16 экстрактов и градуировочных растворов в сумме (2 стрила микролунок) в одной постановке.

Для каждого раствора предназначена отдельная лунка. Размечают координаты в планшете для внесения растворов и разбавленных экстрактов. Схема расположения лунок в планшете приведена в приложении Б.

5

11.4 Приготовление растворов

11.4.1    Приготовление водного раствора метанола объемной долей 70 % (раствора А)

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 70 см3 метанола, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Срок хранения раствора в плотно закрытой емкости при комнатной температуре — не более 3 мес.

11.4.2    Приготовление промывочного раствора для определения содержания ДОН

В мерную колбу вместимостью 500 см3 помещают около 200 см3 дистиллированной воды и количественно переносят весь объем концентрированного промывочного раствора из комплекта реактивов к тест-системе. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Приготовленный промывочный раствор переносят в пластиковую емкость.

Раствор хранят при температуре от 2 °С до 8 вС в течение всего времени использования тест-системы.

11.4.3    Приготовление градуировочных растворов микотоксинов

Для построения градуировочной характеристики каждого микотоксина используют входящие в соответствующий набор тест-системы пять градуировочных растворов различной концентрации: один раствор, не содержащий микотоксин (далее нулевая точка) и четыре градуировочных раствора различной концентрации микотоксина. Содержание микотоксинов в градуировочных растворах приведено в таблице А.1 (см. приложение А).

Значения содержания микотоксинов, приписанные градуировочным растворам тест-системы, учитывают коэффициенты, включающие отношение навески к объему экстрагента, разбавления фильтрата и выражены в миллиграммах в килограмме.

Допускается готовить градуировочные растворы из стандартных образцов микотоксинов в соответствии с А.2—А.7 (см. приложение А).

Срок хранения градуировочных растворов микотоксинов при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес.

12 Проведение испытания

12.1 Приготовление экстрактов микотоксинов

Взвешивают анализируемую пробу массой около 20 г, с записью результата до второго десятичного знака, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, добавляют 100 см3 экстрагента (см. таблицу 1). Закрывают пробкой и перемешивают в течение 30 мин на устройстве для смешивания. Полученный раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр.

Примечания:

1    При экстракции необходимо соблюдать соотношение массы анализируемой пробы к объему растворителя 1 : 5

2    Допускается использование ультразвуковой обработки (мощность генератора 35 Вт, рабочая частота 22 кГц) в ультразвуковой бане в течение 30 мин или проведение экстракции в блендере в течение 3 мин с высокой скоростью

3    Экстракт должен иметь значение pH в интервале 6—8 единиц pH Излишняя щелочность или кислотность экстракта может повлиять на результаты анализа, поэтому ее необходимо корректировать Увеличить значение pH раствора можно добавлением в него 1 М раствора гидроокиси калия (КОН), уменьшить значение pH можно добавлением 1 М растворов азотной кислоты (HN03), серной кислоты (H2S04) или ортофосфорной кислоты (Н3Р04)

Таблица 1

Наименование ми сото «си на

Экстрагент

Коэффициент разбавления Г,

Афлатоксин В,

Раствор А (см 114 1)

2

Сумма афлатоксинов

Раствор А (см 11.4.1)

1

ДОН

Дистиллированная вода

4

Зеараленон

Раствор А (см 11.4.1)

5

Охратоксин А

Раствор А (см 114 1)

1

Т-2 токсин

Раствор А (см 11.4.1)

1

Сумма фумонизимое

Раствор А (см 11.4.1)

20

6

ГОСТ 34108-2017

Фильтрат для определения содержания суммы афлатоксинов. охратоксина А. Т-2 токсина используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Фильтрат для определения содержания афлатоксина В, разбавляют буферным раствором в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2. Разбавление экстракта для определения содержания афлатоксина В. проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 1 см3 буферного раствора, вносят 1 см3 фильтрата, перемешивают.

Фильтрат для определения содержания ДОН, зеараленона, суммы фумонизинов разбавляют экстрагентом в соответствии с таблицей 1 и далее используют для дальнейшего проведения испытания по 12.2.

Разбавление экстракта для определения содержания ДОН проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 3 см3 дистиллированной воды, вносят 1 см3 фильтрата, перемешивают.

Разбавление экстракта для определения содержания зеараленона проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 4 см3 раствора А. вносят 1 см3 фильтрата, перемешивают.

Разбавление экстракта для определения содержания суммы фумонизинов проводят следующим образом: в виалу дозатором помещают 1.9 см3 дистиллированной воды, вносят 0.1 см3 фильтрата, перемешивают.

12.2 Проведение градуировки и анализа экстрактов проб

Анализ градуировочных растворов и экстрактов проб проводят одновременно. В рамку первого планшета помещают необходимое количество Стрипов зеленого (голубого) цвета для смешивания реактивов. В рамку второго планшета помещают такое же количество бесцветных стрипов с иммобилизованными АТ.

Примечание — Допускается помещать стрилы для смешивания реактивов и стрипы с иммобилизованными АТ в один планшет, при этом после смешивания реактивов и переноса растворов стрипы для смешивания удаляют из планшета

Отмеряют необходимое количество раствора конъюгата из комплекта реактивов к тест-системе (примерно 240 мм3 на лунку или 2 см3 на стрип) и помещают в отдельную емкость (или в специальную кювету при использовании восьмиканального лилеточного дозатора). Используя восьмиканальный дозатор, осторожно, не касаясь лунок, вносят по 200 мм3 раствора конъюгата в каждую лунку стрипов зеленого (голубого) цвета первого планшета. В остальные лунки первого планшета одноканальным дозатором вносят по 100 мм3 каждого градуировочного раствора или экстракта пробы, используя для каждого раствора новый наконечник.

Примечани е — Допускается уменьшать объем растворов, но при этом отношение объема конъюгата к объему экстракта (градуировочного раствора) должно быть 2 :1 Объем жидкости, переносимый из лунок для смешивания в лунки с антителами, должен быть одинаковым (100 мм3).

Восьмиканальным дозатором с новыми наконечниками трихщы смешивают содержимое лунок пипетированием (набирают и выпускают раствор) и быстро переносят по 100 мм3 содержимого каждой лунки стрипа зеленого (голубого) цвета в соответствующую ей лунку бесцветного Стрипа второго планшета. Инкубируют в течение времени, указанного в таблице 2.

Примечание — Необходимо избегать встряхивания планшета с антителами, поскольку это может привести к разрушению сцепки между антигеном и антителом или к смешиванию содержимого разных лунок

Таблица 2

Наименование

микотоксина

Разбавляющий

раствор

Время инкубации с раствором конъюгата, мин

Время инкубации с раствором субстрата. мин

Промывочный

раствор

Длина

волны,

нм

Афлатоксин В,

Раствор А (см 12.4.1)

10

10

Дистиллированная вода

450*

Сумма афлатоксинов

Раствор А (см 12.4.1)

15

5

Дистиллированная вода

450

1

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1 Основные положения и определения».

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений Часть 6 Использование значений точности на практике»

*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 51848-2001 «Продукция комбикормовая Термины и определения»

2

3