Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 004)

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 3 декабря 2012 г. Ne 54-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны no МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан КZ Госстандарт Республики Казахстан Киргизия KG Кыргызстандарт Молдова MD Молдова-Стандарт Россия RU Росстандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт Узбекистан UZ Узстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. № 304-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32042-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 г.

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2014

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ 32042-2012

СТАНДАРТ

ПРЕМИКСЫ Методы определения витаминов группы В

Premixes

Methods for determination of vitamin В complex

Дата введения — 2014—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на премиксы и устанавливает методы определения содержания витаминов группы В (Bi. В_:. холинхлорида. В;,).

Содержание витаминов В- и В; определяют методом измерения интенсивности флуоресценции, витаминов В-. В; и В$ - методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, холинхлорида и витамина В*_ - колориметрическим методом.

Используемые методы обеспечивают сопоставимость результатов испытаний.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.2.007.0-75 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия ГОСТ 246-76 Гидросульфит натрия технический. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83. ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4109-79 Реактивы. Бром. Технические условия ГОСТ 4139-75 Реактивы. Калий роданистый. Технические условия ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4206-75 Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 4530-76 Реактивы. Кальций углекислый. Технические условия ГОСТ 6016-77 Реактивы. Спирт изобутиловый. Технические условия ГОСТ 6217-74 Уголь активный древесный дробленый. Технические условия ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9337-79 Реактивы.Натрий фосфорно-кислый 12-водный. Техни-ческие условия

ГОСТ 9805-84 Спирт изопропиловый. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 19908-90 Тигли, чаши, стаканы, колбы, воронки, пробирки и наконечники из прозрачного кварцевого стекла. Общие технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25664-83 Метол (4-метиламинофенол сульфат). Технические условия

Издание официальное

ГОСТ 27067-86 Реактивы. Аммоний роданистый. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная.

Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ГОСТ 31218-2003 (ИСО 6498:1998) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье Подготовка испытуемых проб

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3    Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.

4    Подготовка проб для испытания

Подготовка проб - по ГОСТ 31218.

5    Определение содержания витамина В1 (тиамина) методом измерения интенсивности флуоресценции

5.1    Сущность метода заключается в извлечении витамина В, (тиамина) из анализируемой пробы премикса раствором серной кислоты, окислении его раствором железосинеродистого калия в тиохром, экстракции окисленной формы из водной фазы изобутиловым спиртом и измерении интенсивности флуоресценции.

Метод применим в диапазоне измерений содержания витамина В- в премиксе от 50 до 5000 г/т.

Примечание - Данный метод не рекомендуется для определения содержания витамина Bi в премиксах. выработанных на основе минерального наполнителя, который дает завышенную ошибку при измерении флуоресценции

5.2    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0,001 г.

Флуориметр любого типа с комплектом светофильтров и пределом допускаемой погрешности измерения от максимального значения шкалы ± 2 %.

Аппарат для встряхивания жидкости типа АВУ-1.

Колбы мерные 2-50(100)-1 (2) по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные В-36(56)-50(80) ХС по ГОСТ 25336.

Пробирки П-1(2)-25-0,2 по ГОСТ 1770.

Воронки делительные ВД-1(2)-100 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1-100 ТХС по ГОСТ 25336.

Пипетки градуированные 4(5)-1(2)-1(2). 6(7)-1(2)-5(10) по ГОСТ 29227 и ГОСТ 29228.

Цилиндры 1(2, 3, 4)-25(50, 100) по ГОСТ 1770.

Фильтры обеззоленные (красная лента).

Кислота серная по ГОСТ 4204. раствор молярной концентрации С(Уг H;S0₄) = 0,1 моль/дм '.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор в соотношении 1 : 1 по объему и раствор молярной концентрации с(НС1) = 0.01 моль/дм \

Калий хлористый по ГОСТ 4234.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей 10 %.

Спирт изобутиловый по ГОСТ 6016.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166.

Калий железосинеродистый (красная кровяная соль) по ГОСТ 4206. раствор с массовой долей 1 %.

2

ГОСТ 32042-2012

Хининсульфат или хининхлорид.

Витамин В- (тиаминхлорид гидрохлорид) с массовой долей не менее 99,0 %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания

1    Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и метрологическими характеристиками не ниже указанных

2    Все реактивы должны быть квалификации х. ч или ч. д а

5.3 Подготовка к испытанию

5.3.1    Приготовление окислительной смеси

1 см³ свежеприготовленного раствора железосинеродистого калия смешивают с 49 см³ раствора гидроокиси натрия.

Смесь готовят в день проведения испытания.

5.3.2    Приготовление основного стандартного раствора хининсульфата (или хининхлорида)

10 мг хининсульфата (или хининхлорида) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см’ в растворе серной кислоты и доводят этой кислотой объем до метки.

Срок хранения раствора холодильнике при температуре 4 °С - 5 °С в склянке из темного стекла - не более одного года.

5.3.3    Приготовление рабочего стандартного раствора хининсульфата (или хининхлорида)

1 см основного стандартного раствора (см. 5.3.2) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см ’ и доводят объем до метки раствором серной кислоты.

Массовая концентрация рабочего раствора хининсульфата (или хининхлорида) -1 мкг/см³.

Раствор готовят непосредственно перед проведением испытания.

5.3.4    Приготовление основного стандартного раствора витамина В,

10 мг витамина В, растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см

в растворе соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 0.01 моль/дм

и доводят соляной кислотой объем до метки.

Массовая концентрация основного стандартного раствора витамина Bi -100 мкг/см³.

Срок хранения раствора в склянке из темного стекла в прохладном месте - не более 1 мес.

5.3.5    Контроль за содержанием витамина Bi в основном стандартном растворе проводят по 7.3.4

5.3.6    Приготовление рабочего стандартного раствора витамина Bi

1 см³ основного стадартного раствора витамина Bi (см. 5.3.4) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см³ и доводят дистиллированной водой объем до метки.

Массовая концентрация рабочего стандартного раствора витамина Bi - 1 мкг/см'.

Раствор готовят непосредственно перед проведением испытания.

5.4 Проведение испытания

Анализируемую пробу премикса массой от 2 до 5 г. взвешенную с записью результата до третьего десятичного знака, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, добавляют 5 г хлористого калия и приливают 70 см раствора серной кислоты. Затем колбу с реактивами встряхивают на аппарате в течение 10 мин. доводят объем в колбе до метки раствором серной кислоты, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбросив первую порцию фильтрата. Переносят 2 см³ фильтрата в мерную колбу вместимостью 50 см³ и доводят раствором серной кислоты объем до метки.

Примечание - При необходимости допускаются другие разведения

Отбирают 20 см' разбавленного фильтрата и переносят в делительную воронку, приливают 20 см³ изобутилового спирта, тщательно перемешивают в течение 2 мин. После расслоения верхний слой сливают, а нижний - переносят в градуированную пробирку и доводят до объема 20 см³ раствором серной кислоты, затем перемешивают.

Из пробирки берут 8 см³ полученного раствора и переносят в делительную воронку, приливают 6 см окислительной смеси (см. 5.3.1). перемешивают, добавляют 20 см³ изобутилового спирта и встряхивают в течение 2 мин. После расслоения нижний (водный) слой отбрасывают, а верхний (слиртовый) - фильтруют через обеззоленный фильтр (красная лента), пропуская через слой безводного сернокислого натрия (4-5 г) во флуориметрическую пробирку и флуориметрируют.

Берут 8 см³ рабочего стандартного раствора витамина В, (см. 5.3.6) и проводят его окисление, как с анализируемой пробой.

Для гашения флуоресценции в анализируемом и рабочем стандартном растворах к ним добавляют по 1-2 капли раствора соляной кислоты в соотно-шении 1 : 1 по объему, перемешивают и измеряют остаточную флуоресцен-цию.

3

ГОСТ 32042-2012

Если в качестве рабочего стандартного раствора используют раствор хининсульфата (или хининхлорида). то его не окисляют и не гасят, т.к. он имеет одно и то же значение по флуориметру. равное 72.

По рабочему стандартному раствору хининсульфата (или хининхлорида) (см. 5.3.3) или витамина В- (см. 5.3.6) в соответствии с инструкцией настраивают флуориметр на деление шкалы 80.

5.5 Обработка результатов

Массовую долю витамина В, в премиксе, X, г/т, вычисляют по формуле

_v (А -Л,) У К •///. 10^

X - 2-!- (!)

{F-F_y) m V_y V_%-10 ⁶

где А. А, - показания флуориметра для анализируемого раствора до и после гашения соответственно. уел. ед.;

V- первоначальный объем анализируемого раствора, см³;

V₇- объем фильтрата, взятый для разведения, см³;

т, - масса витамина В, или хининсульфата (хининхлорида) в 8 см рабочего стандартного раствора, мкг;

F, F, - показания флуориметра для рабочего стандартного раствора витамина В- до и после гашения соответственно, yen. ед.;

т- масса анализируемой пробы премикса, г;

Vi - объем разбавленного фильтрата, см³;

V?- объем анализируемого раствора, взятый на испытание, 8 см³;

10® - коэффициенты пересчета микрограммов в граммы и граммов втонну.

Примечание - При использовании в качестве рабочего стандартного раствора хининсульфата (хининхлорида) в расчетную формулу вместо выражения (F-Fi) подставляют цифру 72

Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого числа.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений. выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости 11.1 настоящего стандарта.

6 Определение содержания витамина В2 (рибофлавина) методом измерения интенсивности флуоресценции

6.1    Сущность метода заключается в извлечении витамина В_: (рибофлавина) из анализируемой пробы премикса путем кислотного гидролиза и измерении интенсивности флуоресценции.

Метод применим в диапазоне измерений содержания витамина В; в премиксе от 50 до 5000 г/т.

6.2    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0.001 г.

Флуориметр любого типа с комплектом светофильтров и пределом допус-каемой погрешности измерения от максимального значения шкалы ± 2 %.

pH-метр любого типа с пределом допускаемой погрешности ±0.1 ед pH.

Баня водяная.

Центрифуга лабораторная с числом оборотов не менее 8000 в мин.

Фильтры обеззоленные (синяя лента).

Колбы мерные 2-50(100. 1000)-1(2) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 4(5)-1(2)-1.6(7)-1(2)-25 по ГОСТ 29227 и ГОСТ 29228.

Цилиндры 1(2. 3. 4)-100 по ГОСТ 1770.

Кислота уксусная по ГОСТ 61.

Витамин В: (рибофлавин) с массовой долей не менее 99.0 %.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор с массовой долей 5 % и раствор молярной концентрации с(НС1) = 0.1 моль/дм³.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор с массовой долей 15 %.

Натрий двууглекислый по ГОСТ 4201.

Натрия гидросульфит по ГОСТ 246

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Склянки из темного стекла.

4

ГОСТ 32042-2012

Примечания

1    Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и метрологическими характеристиками не ниже указанных

2    Все реактивы должны быть квалификации х. ч или ч д а

6.3 Подготовка к испытанию

6.3.1    Приготовление основного стандартного раствора витамина В₂

40 мг витамина В: помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, добавляют до /г обьема дистиллированной воды, подкисленной 10 см³ ледяной уксусной кислоты. Колбу нагревают на водяной бане при температуре до 50 °С до полного растворения витамина. Объем доводят дистиллированной водой до метки.

Массовая концентрация основного стандартного раствора витамина В_: - 40 мкг/см³.

Срок хранения раствора в склянке из темного стекла в прохладном, темном месте - не более 2 мес.

6.3.2    Контроль за содержанием витамина В_: в основном стандартном растворе проводят по 7.3.4.

6.3.3    Приготовление рабочего стандартного раствора витамина В?

1 см основного стандартного раствора витамина В; (см. 6.3.1) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят объем до метки дистиллированной водой, подкисленной раствором соляной кислоты с массовой долей 5 % до 5.5-6.0 ед. pH.

Массовая концентрация рабочего стандартного раствора витамина В; - 0.4 мкг/см³.

Раствор готовят непосредственно перед проведением испытания.

6.4    Проведение испытания

Анализируемую пробу премикса массой от 2 до 5 г, взвешенную с записью результата до третьего десятичного знака, помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, приливают 75 см^ раствора соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 0,1 моль/дм³, смывая частицы премикса со стенок колбы. Колбу помещают в кипящую водяную баню на 20 мин. Содержимое колбы периодически перемешивают.

После охлаждения колбы pH раствора доводят до значения 5.5-6.0 ед. pH раствором гидроокиси натрия. Затем объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки, хорошо перемешивают и центрифугируют в течение 15 мин при 8000 об/мин.

Из полученного фильтрата готовят раствор с нужным разведением (например. 1 см³ фильтрата разводят дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 50 см³) и определяют интенсивность флуоресценции, помещая в одну флуориметрическую пробирку от 12 до 15 см³ анализируемого раствора, в другую - такое же количество рабочего стандартного раствора витамина В: (см. 6.3.3). Затем в эти пробирки добавляют 2-3 раза ло 0.1 г двууглекислого натрия и по 0.1 г гидросульфита натрия или 4-6 капель раствора гидроокиси натрия. Содержимое пробирок осторожно перемешивают, фильтруют, если раствор мутный, и снова измеряют интенсивность флуоресценции.

6.5    Обработка результатов

Массовую долю витамина В_: в премиксе. X, г/т, вычисляют по формуле

_т

m 10 *

где А. А_: - показания флуориметра для анализируемого раствора до и послегашения флуоресценции соответственно, уел. ед.;

С - массовая концентрация витамина В: в рабочем стандартном растворе, мкг/см³;

V- первоначальный объем анализируемого раствора, см³;

16 - окончательный объем разведения анализируемого раствора, см³;

F, F^ - показания флуориметра для рабочего стандартного раствора витамина В_: до и после гашения флуоресценции соответственно, уел. ед.;

т- масса анализиремой пробы премикса, г;

V1 - объем анализируемого раствора, взятый для разведения, см³;

10¹ — коэффициенты пересчета микрограммов в граммы и граммов втонну.

Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого числа.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости 11.1 настоящего стандарта.

5

ГОСТ 32042-2012

7 Определение содержания витаминов В1 (тиамина) и В2 (рибофлавина) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

7.1    Сущность метода заключается в экстракции витаминов Bi (тиамина) и В_: (рибофлавина) из анализируемой пробы премикса раствором соляной кислоты и определении их содержания на жидкостном хроматографе со спектрофотометрическим детектором с использованием обращенно-фазного режима элюирования

Метод применим при содержании витамина Bi в премиксе в диапазоне измерений от 50 до 500 г/т. витамина В_г - в диапазоне измерений от 100 до 2000 г/т.

7.2    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Хроматограф жидкостный, укомплектованный спектрофото-метрическим детектором, пригодным для измерения оптической плотности при длине волны 254 нм, самописцем или интегратором, позволяющим измерять высоту и площадь пиков, и компьютером с установленным программным обеспечением для обработки результатов измерений.

Колонка хроматографическая стальная или стеклянная высотой 150 мм и диаметром 4 мм с числом теоретических тарелок не менее 2000. заполненная сорбентом «Силасорб С-18» или «Сепа-рон С-18».

Спектрофотометр со спектральным диапазоном от 186 до 1100 нм.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0,001 г.

pH-метр любого типа с пределом допускаемой погрешности    ±    0.1    ед. pH.

Мешалка магнитная типа ММ-5.

Центрифуга лабораторная с числом оборотов не менее 6000 в мин.

Мономер со стеклянным электродом с пределом допускаемой погрешности ± 0.05 ед. pH.

Баня водяная.

Микрошприц или микропипетка.

Колбы конические со шлифом Кн-2-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-25(50.100. 200)-1(2) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 6(7)-1(2)-10 по ГОСТ 29227 и ГОСТ 29228.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Воронка для фильтрования ВФ-1-56(75) ХС со стеклянным фильтром ФКП-56(75) ПОР 100 ХС или ВФ-2-75(110) ХС со стеклянным фильтром ФКП-75(110) ПОР 100 ХС по ГОСТ 25336.

Ацетонитрил с массовой долей не менее 99,98 %.

Натрия октилсульфонат. хроматографически чистый.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552.

Кислота соляная по ГОСТ 3118. концентрированная и раствор молярной концентрации с(НС1) = 0.01 моль/дм³.

Витамин В, (тиаминхлорид гидрохлорид) с массовой долей не менее 99.0 %.

Триэтиламин с массовой долей не менее 99,5 %.

Витамин В: (рибофлавин) с массовой долей не менее 99.0 %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания

1    Допускается использование других средств измерений и оборудования с техническими и метрологическими характеристиками не ниже указанных

2    Все реактивы должны быть квалификации х ч или ч д а.

7.3    Подготовка к испытанию

7.3.1    Приготовление элюента

В мерной колбе вместимостью 1000 см³ смешивают 700-800 см³ дистиллированной воды и 120 см ацетонитрила, добавляют 2.5 см триэтиламина. 0.5 г октилсульфоната натрия и приливают ор-тофосфорную кислоту до pH равного 7.6 ед. pH. Объем доводят дистиллированной водой до метки. Полученную смесь фильтруют через стеклянный фильтр для удаления механических примесей.

Срок хранения элюента - не более 1 мес.

7.3.2    Приготовление раствора-экстрагента

В мерной колбе вместимостью 1000 см смешивают небольшое количество дистиллированной воды с 0.8 см концентрированной (37 %-ной) соляной кислоты. Объем доводят дистиллированной водой до метки. pH раствора (2.0 ± 0.2) ед. pH.

6

ГОСТ 32042-2012

7.3.3    Приготовление основных стандартных растворов витаминов В, и Вг

Для приготовления основных стандартных растворов витаминов В, и В берут 0.1 г витамина В-и 0,01 г витамина В:. Витамины растворяют в дистиллированной воде при нагревании на водяной бане до температуры 70 °С - 80 °С в мерных колбах вместимостью 100 см³ и 200 см³ для витаминов В- и В: соответственно Объемы в колбах доводят дистиллированной водой до метки.

Массовые концентрации основных стандартных растворов:

-    витамина В, - 1 мг/см³,

-    витамина В_: - 0.05 мг/см ³.

Срок хранения основных стандартных растворов витаминов В, и В; в холодильнике при температуре 4 °С - 5 °С - не более 2 недель.

7.3.4    Контроль за содержанием витаминов Bi и В; в основных стандартных растворах

Контроль за содержанием витаминов в основных стандартных растворах осуществляют слек-

трофотометрически по значениям молярных коэффициентов светопоглощения.

Для этого основные стандартные растворы (см. 7.3.3) разбавляют дистиллированной водой в объемном соотношении 1 : 49 и измеряют оптическую плотность растворов на спектрофотометре в кювете толщиной поглощающего сеет слоя 10 мм.

Массовую концентрацию витамина Bi или В:. С, мг/см³, в основных стандартных растворах вычисляют по формуле

где Сет - массовая концентрация витамина В- или В_: в рабочем стандартном растворе, мг/см³; У?-объем разведенного стандартного раствора В, или В:, см³;

D - оптическая плотность витамина В- или В_:. е.о.п.;

V, - объем рабочего стандартного раствора витамина В- или В_:. взятый для разведения, см³;

Е - молярный коэффициент светопоглощения при рабочей длине волны268 нм для витамина В-и 445 нм для витамина В:, значение которого соответственно 205 и 324 е.о.п./см;

/-толщина слоя раствора в кювете, см.

7.3.5 Приготовление рабочего стандартного раствора витаминов В, и В₂

В мерную колбу вместимостью 50 см помещают 1 см и 25 см' основных стандартных растворов витамина В* и витамина В: (см. 7.3.3), объем доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Массовые концентрации витаминов в рабочем стандартном растворе составляют 20 мкг/см - для витамина В- и 25 мкг/см³ - для витамина В?.

Рабочий стандартный раствор готовят в день проведения испытаний.

7.4 Проведение испытания

7.4.1    Экстракция витаминов В, и В₂

Для определения содержания витамина В, и В? в премиксе проводят два параллельных испытания. начиная со взвешивания анализируемой пробы.

(1,000 ± 0,002) г анализируемой пробы премикса помещают в коничес-кую колбу со шлифом вместимостью 100 см и приливают 10 см раствора соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 0,01 моль/дм³.

Колбу ставят на магнитную мешалку с включением нагрева. Перемешивание и нагрев осуществляют в течение 10 мин. Полученную суспензию переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 5000-6000 об/мин в течение 3 мин. Центрифугат сливают в мерную колбу вместимостью 25 см³. Коническую колбу с остатком раствора ополаскивают небольшим количеством (4-5 см³) раствора соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 0,01 моль/дм³, сливают раствор в центрифужную пробирку и снова центрифугируют. Центрифугат соединяют с первым в той же мерной колбе. Промывание центрифугированием повторяют 2-3 раза, камздый раз сливая промывные воды в ту же колбу. После этого раствор в мерной колбе доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Полученный раствор фильтруют или дополнительно центрифугируют для очищения от механических примесей и взвешенных частиц. Приготовленный раствор используют для хроматографирования.

7.4.2    Хроматографирование

Хроматографирование осуществляют при следующих условиях:

- колонка размером 4 * 150 мм. заполненная сорбентом:

7

ГОСТ 32042-2012

-    подвижная фаза - элюент (см. 7.3.1);

-    рабочая длина волны спектрофотометрического детектора хроматографа - 254 нм;

-    скорость элюирования - 1.2 см³/мин;

-    время удерживания для витамина В- составляет 6 мин. для    витамина    В_:    -    8    мин;

• объем загрузки анализируемого раствора - 10 мм³.

Для насыщения колонки в начале работы проводят от трех до пяти загрузок рабочего стандартного раствора и отмечают высоты пиков. При достижении постоянной высоты можно приступить к испытаниям. Анализируемый раствор и рабочий стандартный раствор витаминов В- и В: хроматографируют каждый по три раза в одинаковых условиях и находят среднее арифметическое значение высот пиков (приложение А. рисунки А.1, А.2).

7.5 Обработка результатов

Массовую долю витамина Bi или В_: в премиксе. X. г/т. вычисляют по формуле

(4)

где h„ hen - высоты пиков витамина на хроматограммах экстракта изпремикса и рабочего стандартного раствора соответственно, е.о.п. или мм;

Сет - массовая концентрация витамина в рабочем стандартномрастворе (см. 7.3.5). мкг/см³;

V-объем экстракта витамина из премикса (см. 7.4.1), см , т — масса анализируемой пробы премикса, г;

10' - коэффициенты пересчета микрограммов в граммы и граммов втонну.

Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого числа За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений. выполненных в условиях повторяемости и удовлетворяющих условию приемлемости 11.1 настоящего стандарта.

8 Определение содержания холинхлорида колориметрическим методом

8.1    Сущность метода заключается в экстракции холинхлорида дистиллированной водой, образовании в присутствии трехзамещенного фосфата натрия комплекса рейнеката холинхлорида и колориметрическом измерении интенсивности окраски его ацетоновых растворов.

Метод применим в диапазоне измерений содержания холинхлорида в премиксе от 1000 до 100000 г/т.

8.2    Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0.001 г.

Фотоэлектроколориметр со спектральным диапазоном от 200 до 2000 нм или спектрофотометр со спектральным диапазоном от 186 до 1100 нм.

Насос вакуумный по ГОСТ 25336.

Колбы конические Кн-2-50(100)-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Эксикатор вакуумный по ГОСТ 25336.

Стаканы химические В(Н)-1(2)-200(250) ХС по ГОСТ 25336.

Баня водяная.

Воронка ВФО-40-ПОР-16 (Шотта № 2) по ГОСТ 25336.

Аппарат для встряхивания жидкости.

Колбы конические с притертой пробкой Кн-2-100(250)-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-25(100)-1(2) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 4(5)-1(2)-2. 6(7>-1(2)-5(10.25) по ГОСТ 29227 и ГОСТ 29228 Цилиндр 1(2,3.4)-100 по ГОСТ 1770.

Фильтры обеззоленные (синяя лента).

Холинхлорид кристаллический с массовой долей не менее 98.0 %.

Спирт этиловый ректификованный технический объемной долей 96 % по ГОСТ 18300.

Натрий фосфорнокислый 12-водный по ГОСТ 9337, раствор с массовой долей 0.1 %.

Ацетон по ГОСТ 2603.

Спирт изопропиловый по ГОСТ 9805

Рейнекат аммония с массовой долей не менее 93 %.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.