Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Некоммерческой организацией «Российский союз производителей соков» (НО «РСПС») при участии Государственного научного учреждения «НИИ питания» Российской академии медицинских наук (ГНУ «НИИ питания» РАМН), ЗАО «Мултон» и Государственного научного учреждения «ВНИИ консервной и овощесушильной промышленности» (ГНУ «ВНИИКОП»)

2    ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3    ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол № 50 от 20 июля 2012 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004—97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации Азербайджан AZ Азстандарт Армения AM Минэкономики Республики Армения Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан Кыргызстан KG Кыргызстандарт Российская Федерация RU Росстандарт Таджикистан TJ Таджикстандарт

4    Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 сентября 2012 г. № 438-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31644-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5    Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53694-2009

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»

©Стандартинформ, 2012

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Если массовая концентрация (массовая доля) 5-гидроксиметилфурфурола превышает 50 мг/дм³ (млн^-1), то определение массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола проводят после разбавления пробы по 6.2.1 — 6.2.3 с доведением массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола в пробе до диапазона от 1 до 50 мг/дм³ (млн^-1).

Окончательный результат определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола представляют в следующем виде:

Х_ср = ±Д,    (8)

гдеХ_ср — среднее значение результатов двух параллельных определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, мг/дм³ (млн^-1);

А — границы абсолютной погрешности определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, мг/дм³ (млн^-1), рассчитанные по формуле

л - ^{5 Х}ср    (9)

100

9 Контрол ь точности результатов определения

9.1    Оперативный контроль повторяемости результатов определения

Оперативный контроль повторяемости результатов определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола проводят при получении каждого результата определения путем сравнения расхождения между результатами двух параллельных определений (в процентах от среднего значения) с пределом повторяемости (сходимости), приведенным в таблице 2.

Повторяемость результатов признают удовлетворительной при условии

|Xi-X₂|< 0,01 г_отнХ_ср.    (10)

При превышении предела повторяемости (сходимости) определение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, их устраняют и определение повторяют.

9.2    Оперативный контроль воспроизводимости результатов определения

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых определений, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект определения, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости, приведенного в таблице 2. При превышении указанного предела воспроизводимости контрольное определение повторяют. При повторном превышении указанного предела воспроизводимости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

9.3    Оперативный контроль погрешности (точности) результатов определения

Оперативный контроль погрешности (точности) результатов определения осуществляют методом добавок с использованием проб соковой продукции, объем или масса которых должны соответствовать удвоенному количеству, необходимому для проведения измерений. Пробу делят на две равные части. В одну из них добавляют стандарт 5-гидроксиметилфурфурола в таких количествах, чтобы добавка составляла 50 % — 150 % исходного содержания компонента в пробе, но не превышала верхней границы диапазона определения массовой концентрации или массовой доли компонента с учетом границ погрешности определения (см. таблицу 2). Обе части пробы подвергают измерениям в точном соответствии с требованиями настоящего стандарта.

Результаты контрольных определений признают удовлетворительными, если погрешность определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в добавке не превышает норматива оперативного контроля погрешности (точности), то есть выполняется условие

1-^доб ^— ^ср ^— ^доб! — ^доб’    (11)

гдеХ_доб — среднее значение двух определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в пробе с добавкой, мг/дм³ (млн^-1);

Х_ср — среднее значение двух определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в пробе без внесения добавки, мг/дм³ (млн^-1);

ГОСТ 31644-2012

Сдоб — значение добавки 5-гидроксиметилфурфурола, мг/дм³ (млн^-1);

Кд_0б — норматив оперативного контроля погрешности, мг/дм³ (млн^-1).

При проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,90) значение/С_доб рассчитывают по формуле

Кдоб ^0,84'-loo ‘а/*доб^^'

При проведении внешнего контроля (Р = 0,95) значение /С_доб рассчитывают по формуле

^Кд°^б= loo доб^^сР ’

где 5— границы относительной погрешности определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, указанные в таблице 2.

При превышении норматива оперативного контроля погрешности проводят повторные контрольные измерения. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Периодичность контроля погрешности (точности) устанавливается самой лабораторией с учетом фактического состояния работ. При замене оборудования, колонок, реактивов, изменении условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

10 Требования безопасности

10.1    Условия безопасного проведения работ

При работе с химическими реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.1.007.

Требования взрывобезопасности — в соответствии с ГОСТ 12.1.010.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила пожаровзрывобезопасности по ГОСТ 12.1.018, по электробезопасности — по ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

10.2    Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженер-химик, техник или лаборант, имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в химической лаборатории и изучившие инструкцию по эксплуатации метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Первое применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в лаборатории следует проводить под руководством специалиста, владеющего теорией метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.

9

ГОСТ 31644-2012

Приложение А (справочное)

Хроматограмма 5-гидроксиметилфурфурола в пробе концентрированного яблочного сока

Значение сигнала, AU

Рисунок А.1 — Хроматограмма 5-гидроксиметилфурфурола (время удерживания ГМФ — 4,298 мин)

10

УДК 664.863.001.4:006.354    МКС    67.080,67.050    Н59

Ключевые слова: соковая продукция, определение, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, стандартный раствор, градуировочные растворы, массовая концентрация 5-гидроксиметилфур-фурола, массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола, предел повторяемости (сходимости), границы относительной погрешности

Редактор Н.В. Таланова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.И. Першина Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Сдано в набор 03.10.2012. Подписано в печать 24.10.2010. Формат 60 х 84^. Бумага офсетная. Гарнитура Ариап. Печать офсетная. Уел. печ. л. 1,86. Уч.-изд. л. 1,35. Тираж150экз. Зак. 938.

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.rn    info@gostinfo.ru

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

Изменение № 1 ГОСТ 31644-2012 Продукция соковая. Определение 5-гид рокси мети л фурфурол а методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28.06.2016 №49-П)

Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС № 12301

За принятие изменения проголосовали национальные органы по стандартизации следующих государств: AM, BY, KG [коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]

Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации*

Содержание. Наименования пункта 3 и приложения А изложить в новой редакции:

«3 Сущность метода

Приложение А (справочное) Примеры хроматограмм».

Раздел 2. Исключить ссылки:

«ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования»;

заменить ссылки:

«ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб» на «ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб»;

«ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов» на «ГОСТ 26671-2014 Продукты переработки фруктов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов»; дополнить ссылками:

«ГОСТ ISO 3696-2013** Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».

ГОСТ4198—75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ ИСО 5725-6-2003*** Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия»; ссылку на ГОСТ ИСО 5725-1-2003 дополнить знаком сноски — *⁴; дополнить сноской:

«*⁴ В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002»;

ссылку на ГОСТ 12.1.019-79 дополнить знаком сноски — *⁵; дополнить сноской:

«*⁵ В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009». ^{1 2}

(Продолжение Изменения № 1 кГОСТ31644—2012)

Раздел 3 изложить в новой редакции:

«3 Сущность метода

Метод основан на количественном определении 5-гидроксиметилфурфурола с помощью обращен-но-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и спектрофотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра при длине волны 284 нм».

Пункты 4.2 и 4.3 изложить в новой редакции:

«4.2 Спектрофотометр со значениями характеристик не ниже следующих:

спектральный рабочий диапазон — 200—800 нм;

пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений по шкале длин волн ± 0,1 нм;

пределы допускаемой воспроизводимости измерений по шкале длин волн ± 0,08 нм;

пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений спектрофотометра ± 0,5 %.

4.3 Колонка хроматографическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная окта-децилсиликагелем, размером частиц 5 мкм³⁾, и обеспечивающая требуемую эффективность разделения»;

дополнить сноской — ³⁾:

«_

³> Например, колонка хроматографическая «BDS Hypersil С18» (250 х 4,6 мм) компании Thermo; материал — силикагель с привитыми группами С18; колонка хроматографическая «AQUASIL С18» (250 х 4,6 мм) компании Thermo; материал — силикагель с привитыми группами С18. Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других хроматографических колонок».

Пункт 4.5. Заменить слова: «Весы лабораторные по ГОСТ 24104» на «Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1».

Пункт 4.18 исключить.

Пункты 4.19 и 4.21 изложить в новой редакции:

«4.19 Вода для лабораторного анализа 1-й степени чистоты по ГОСТ ISO 3696.

4.21 Калий фосфорнокислый однозамещенный (дигидрофосфат) (КН₂Р0₄) по ГОСТ4198, ч. д. а».

Раздел 4 дополнить пунктами (после 4.25) 4.26 и 4.27:

«4.26 Кислота ортофосфорная с массовой долей основного вещества не менее 98 % по ГОСТ 6552, ч. д. а.

4.27 Мономер (pH-метр) с погрешностью измерения ± 0,05 ед. pH».

Подраздел 6.1 изложить в новой редакции:

«6.1 Приготовление подвижных фаз (элюентов) для жидкостной хроматографии

6.1.1    Подвижная фаза А

В мерной колбе по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см³ последовательно смешивают 840 см³ воды для лабораторного анализа 1-й степени чистоты по ГОСТ ISO 3696, 150 см³ ацетонитрила (см. 4.20) и 10 см³ уксусной кислоты особой чистоты по ГОСТ 18270. Раствор переносят в емкость для элюента (см. 4.16) с завинчивающейся крышкой и перемешивают. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срокхранения раствора при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ при комнатной температуре без воздействия света—одна неделя.

6.1.2    Подвижная фаза Б

6.1.2.1    Приготовление раствора дигидрофосфата калия (рН=3,0) молярной концентрации 50 ммоль/дм³

6,8 г дигидрофосфата калия взвешивают в стакане вместимостью 100 см³ с точностью до третьего десятичного знака, растворяют в приблизительно 80 см³ воды для лабораторного анализа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³, доводят водой для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696 до метки и перемешивают. Раствор переносят в мерный стакан вместимостью 1000 см³ и доводят pH до значения 3,0 ед. pH фосфорной кислотой, регистрируя показания иономером. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6.1.2.2    Приготовление подвижной фазы (элюента)

В мерный цилиндр вместимостью 1000 см³ приливают 950 см³ раствора дигидрофосфата калия (pH = 3), приготовленного по 6.1.2, 50 см³ ацетонитрила (см. 4.20) и перемешивают. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

(Продолжение Изменения № 1 кГОСТ31644—2012)

Срок хранения раствора при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ, при комнатной температуре без воздействия света — 5 сут.

Примечание — Подвижную фазу Б используют в случае, если подвижная фаза А не обеспечивает необходимую степень разделения пиков ГМФ и патулина на хроматограмме (коэффициент разрешения для хроматографических пиков R_s > 1,0)».

Пункт 6.2.3. Заменить слова: «на лабораторных весах по ГОСТ 24104» на «на весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности + 0,2 мг».

Пункт 7.1. Второй абзац изложить в новой редакции:

«Элюент: подвижная фаза А по 6.1.1 или Б по 6.1.2».

Подраздел 7.4. Первый абзац изложить в новой редакции:

«Измерения проводят не менее двух раз в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14)»;

последний абзац изложить в новой редакции:

«Примеры хроматограмм раствора 5-гцдроксиметипфурфурола приведены в приложении А».

Раздел 8. Первый абзац. Исключить слова: «Вычисления массовой концентрации или массовой доли проводят до третьего десятичного знака»;

шестой абзац. Исключить слова: «округленное до второго десятичного знака»;

дополнить абзацем после шестого:

«Расхождение между двумя результатами измерений, полученными в двух лабораториях при соблюдении условий воспроизводимости [ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.18)] относительно их среднеарифметического значения не должно превышать предела воспроизводимости R_0TH (см. таблицу 2). При превышении предела воспроизводимости выполняют процедуры в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (пункты 5.3.3,5.3.4)»;

таблицу 2 изложить в новой редакции:

«Т а б л и ц а 2 — Основные метрологические характеристики

Наименование показателя Значение показателя при диапазонах измерений массовой концентрации (массовой доли), мг/дм3 (млн-1) От 1,0 до 10 включ. Св. 10 до 50 включ. Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных измерений) готн, %, при п = 2 13 2 Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами, полученными в условиях воспроизводимости) R0TH, %, при m = 2 20 6 Показатель точности (границы относительной погрешности при Р = 0,95) ±8, % 15 5 Предел обнаружения метода, мг/дм3 (млн-1) 0,1

формулу (8) изложить в новой редакции:

«Х_ср ± А, при Р - 0,95,    (8)»;

дополнить абзацем:

«Числовое значение окончательного результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности, содержащее не более двух значащих цифр».

Приложение А изложить в новой редакции:

«Приложение А (справочное)

Примеры хроматограмм

А.1 Примеры хроматограмм приведены на рисунках А.1 —А.4. ³

ГОСТ 31644-2012

Содержание

1    Область применения...................................................1

2    Нормативные ссылки..................................................1

3    Сущность метода определения............................................2

4    Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы, реактивы.........2

5    Отбор и подготовка проб................................................3

6    Подготовка к проведению определения.......................................3

7    Выполнение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии...........6

8    Обработка и оформление результатов определения..............................7

9    Контроль точности результатов определения...................................8

10 Требования безопасности...............................................9

Приложение А (справочное) Хроматограмма 5-гидроксиметилфурфурола в пробе концентрированного яблочного сока..........................................10

Библиография........................................................11

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКЦИЯ СОКОВАЯ

Определение 5-гидроксиметилфурфурола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Juice products.

Determination of 5-Hydroxymethylfurfural (HMF) by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method

Дата введения — 2013—07—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки и нектары, концентрированные соки, пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки, соковую продукцию из фруктов и овощей обогащенную и для детского питания (далее — соковая продукция) и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола (5-ГМФ).

Нижний предел измерений массовой концентрации (массовойдоли) 5-гидроксиметилфурфурола составляет 1 мг/дм³ (млн^-1). Верхний предел измерений массовой концентрации (массовой доли) 50 мг/дм³ (млн^-1).

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты:

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 1770-74 (ИС01042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 18270-72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 22967-90 (СТ СЭВ 2486—80, СТ СЭВ 3399—81) Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

Издание официальное

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29169-91 (ИС0648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, а также по соответствующим, ежемесячно издаваемым, информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода определения

Метод основан на применении обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Массовую концентрацию или массовую долю 5-гидроксиметилфурфурола в соковой продукции определяют спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области спектра при длине волны 284 нм.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы, реактивы

4.1    Хроматограф жидкостный высокоэффективный со спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) и программно-аппаратным комплексом сбора и обработки результатов типа «Millenium 2000».

4.2    Спектрофотометр со значениями характеристик не ниже следующих: спектральный рабочий диапазон — 200—800 нм;

пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений по шкале длин волн + 0,2 нм; пределы допускаемой воспроизводимости измерений по шкале длин волн + 0,08 нм (1= 656 нм); пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений по фотометрической шкале+0,002 е.о.п.⁴) при оптической плотности 0,3 е.о.п. и ±0,003 е.о.п. при оптической плотности 1 е.о.п.;

пределы допускаемой воспроизводимости измерений по фотометрической шкале ± 0,0008 е.о.п. при оптической плотности 1 е.о.п.;

предел допускаемого СКО⁵) случайной составляющей погрешности измерений по фотометрической шкале ± 0,0001 е.о.п. при оптической плотности 0 е.о.п., 1= 500 нм и ± 0,0006 е.о.п. при оптической плотности 1 е.о.п., 1= 500 нм;

уровень мешающего излучения 1,0 % (1= 200 нм) и 0,05 % (Х= 220 и 340 нм).

4.3    Колонка аналитическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октаде-цилсиликагелем, размер частиц 5 мкм.

4.4    Микрошприцы для ВЭЖХ вместимостью 25,100 и 250 мкл.

4.5    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,1 мг.

4.6    Мини-насос лабораторный (кустановке для дегазации элюента).

4.7    Центрифуга лабораторная с величиной фактора разделения (д-фактор) 800—1000.

4.8    Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и

проб.

4.9    Пипетки 1-2-1,1-2-5,1-2-10 2-го класса точности по ГОСТ 29169.

4.10    Пипетки градуированные 1-2-25 по ГОСТ 29227 вместимостью 25 см³ или дозаторы пипеточ-ные с аналогичным или изменяемым объемом доз с относительной погрешностью дозирования ±1 %.

ГОСТ 31644-2012

4.11    Колбы мерные с одной отметкой вместимостью 25, 50,100, 500,1000 см³ по ГОСТ 1770.

4.12    Цилиндр мерный вместимостью 1000 см³ по ГОСТ 1770.

4.13    Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336: колбы круглодонные вместимостью 1000 см³; воронка лабораторная;

стаканы вместимостью 50,100,250,500,1000 см³.

4.14    Емкости для проб (виалы) вместимостью 2—6 см³.

4.15    Кюветы кварцевые для спектрофотометрии с длиной оптического пути 10 мм.

4.16    Установка для дегазации элюента.

4.17    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

4.18    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.19    Вода для лабораторного анализа первой степени чистоты по [1 ].

4.20    Ацетонитрил для ВЭЖХ.

4.21    Кислота уксусная особой чистоты по ГОСТ 18270.

4.22    5-гидроксиметилфурфурол особой чистоты с массовой долей основного вещества не менее 97 % или 5-гидроксиметилфурфурол с массовой долей основного вещества не менее 99 %.

4.23    Шприц медицинский 5 см³ по ГОСТ 22967.

4.24    Стаканчики для взвешивания СВ-24/10 (30 х 50).

4.25    Фильтры обеззоленные.

Допускается применениедругихсредств измерений, вспомогательного оборудования, неуступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор и подготовка проб

Отбор проб — по ГОСТ 26313, подготовка проб — по ГОСТ 26671.

6 Подготовка к проведению определения

6.1    Приготовление подвижной фазы для жидкостной хроматографии

В мерный цилиндр по ГОСТ 1770 вместимостью 1000 см³ последовательно приливают 840 см³ дистиллированной воды по ГОСТ 6709,150 см³ ацетонитрила по 4.20 и 10 см³ уксусной кислоты особой чистоты по ГОСТ 18270, раствор переносят в емкость для элюента по 4.16 с завинчивающейся крышкой и перемешивают. Полученный раствор дегазируютна установке для дегазации элюента по4.16 под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ — 5 сут. Перед каждым определением раствор элюента предварительно дегазируют под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через фильтр с диаметром пор 0,20 мкм.

6.2    Подготовка проб для определения

6.2.1    Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в осветленных соках и сокосодержащих напитках, не содержащих нерастворимые в воде вещества, проводят без предварительного разбавления пробы дистиллированной водой.

Определение 5-гидроксиметилфурфурола в соковой продукции (при его вероятно высокой массовой концентрации) проводят после предварительного разбавления пробы дистиллированной водой в соотношении: с осветленными соками или сокосодержащими напитками 1:3 — 1:10, с концентрированными соками 1:25 — 1:50.

Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в осветленных соках и сокосодержащих напитках, содержащих нерастворимые в дистиллированной воде вещества, проводят после фильтрования пробы через обеззоленный фильтр «белая лента» или ее центрифугирования по 4.7 с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Затем 1—2 см³ пробы отбирают в медицинский шприц по 4.23 через иглу, после этого заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу по 4.14.

6.2.2    Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в соках и сокосодержащих напитках с объемной долей мякоти до 10,0 % включительно (соки и нектары из цитрусовых, ананаса,

персика, абрикоса идр.) или содержащих нерастворимые в воде вещества, проводят после тщательного перемешивания пробы стеклянной палочкой, а затем центрифугирования с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Соки и сокосодержащие напитки с объемной долей мякоти свыше 10,0 % (из манго, томата, банана идр.) предварительно разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:5 для осветления раствора. Для этого в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см³ мерным цилиндром по ГОСТ 1770 отбирают 10 см³ пробы и доводят дистиллированной водой до метки. После этого пробу гомогенизируют перемешиванием стеклянной палочкой и центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин. В случае неполного осаждения нерастворимых в дистиллированной воде частице плотностью менее единицы пробу вновь фильтруют через обеззоленный фильтр «белая лента» или центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Затем 1—2 см³ пробы с осветленным раствором отбирают в медицинский шприц через иглу, заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу.

6.2.3    Определение массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в концентрированных соках проводят после предварительного разбавления пробы дистиллированной водой весовым методом в соотношении 1:5. Для этого на лабораторных весах по ГОСТ 24104 в стакане вместимостью 50 см³ по 4.24 взвешивают 5—7 г концентрированного сока с записью результата до третьего знака после запятой, прибавляют дистиллированную воду до получения общей массы пробы 25—35 г с записью результата до третьего знака после запятой. Делением общей массы пробы на массу концентрированного сока до разбавления водой вычисляют величину разбавления (разведения), которую учитывают при обработке результатов. В случае, если концентрированный сок представляет собой пюре, при разбавлении которого образуются нерастворимые в дистиллированной воде вещества, пробу дополнительно центрифугируют в соответствии с аналогичными требованиями 6.2.2.

Затем 1—2 см³ пробы с осветленным раствором отбирают в медицинский шприц через иглу, заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу.

6.2.4    Для определения массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола подготовку проб проводят по 6.2.1,6.2.2, для определения массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола подготовку проб проводят по 6.2.3.

6.3 Приготовление стандартных растворов 5-гидроксиметилфурфурола

6.3.1    Приготовление основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1000 мг/дм³

В стакане вместимостью 50 см³ взвешивают 0,025 г 5-гидроксиметилфурфурола по 4.22 с точностью до третьего знака после запятой, растворяют ориентировочно в 15 см³ ацетонитрила по 4.20, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 см³, доводят ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре 4 °С — 1 мес, при комнатной температуре — 1 нед.

6.3.2    Приготовление рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1—7 мг/дм³

Из основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола готовят рабочий стандартный раствор 5-гидроксиметилфурфурола для определения точной массовой концентрации основного стандартного раствора Для этого в мерную колбу вместимостью 50 см³ приливают ориентировочно 20 см³ ацетонитрила, вносят пипеточным дозатором 50 — 350 мкл основного стандартного раствора 5-гидро-ксиметилфурфурола, подготовленного по 6.3.1, доводят ацетонитрилом до метки и тщательно перемешивают.

Для определения точной массовой концентрации основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола регистрируют спектр поглощения рабочего раствора 5-гидроксиметилфурфурола относительно воды для лабораторного анализа по 4.19 в диапазоне длин волн 210—350 нм. Определяют значение абсорбции максимума (около 284 нм) и рассчитывают точную массовую концентрацию рабочего стандартного раствора по уравнению

С_раб ⁼ 1000 • А ■ М/г L = А- 7,487,    (1)

где С_раб — массовая концентрация или массовая доля рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола, мг/дм³;

А — оптическая плотность раствора 5-гидроксиметилфурфурола в максимуме поглощения;

М— молекулярная масса 5-гидроксиметилфурфурола, равная 126 г/моль;

4

ГОСТ 31644-2012

б—молярный коэффициент поглощения 5-гидроксиметилфурфурола, равный 16830 [моль х х см/дм³]^-1;

L — толщина слоя раствора в кювете, см.

По точной массовой концентрации рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола рассчитывают точную массовую концентрацию основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола по уравнению

^осн ^раб' ^г>

где С_осн — точная массовая концентрация рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола;

г— величина разбавления (разведения) основного стандартного раствора при приготовлении рабочего раствора.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 сут, при температуре 2 °С— 4°С — 3 мес, при температуре минус 20 °С — 6 мес.

6.4 Приготовление градуировочных растворов 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1,0—32,0 мг/дм³

Из основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола по 6.3.1 массовой концентрацией 1000 мг/дм³ готовят градуировочные растворы № 1—4.

Градуировочный раствор № 1 готовят из основного стандартного раствора в соответствии с таблицей 1. Для приготовления градуировочных растворов № 2—4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора № 1, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.

Стандартные градуировочные растворы 5-гидроксиметилфурфурола готовят для построения градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации или массовой доли к большей, в соответствии с таблицей 1.

Стандартные градуировочные растворы 5-гидроксиметилфурфурола готовят непосредственно перед проведением измерений.

Таблица 1 — Приготовление стандартных градуировочных растворов 5-гидроксиметилфурфурола

№ п/п № стандартного раствора Компонент Вместимость мерной колбы, см3 Способ приготовления Массовая концентрация (массовая доля), мг/дм3 (млн-1) 1 1 5-ГМФ 50 Отбирают 1,6 см3 основного стандартного раствора 5-ГМФ массовой концентрацией* 1000 мг/дм3 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают 32,0 2 2 5-ГМФ 25 Отбирают 0,78** см3 раствора № 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают 1,0 3 3 5-ГМФ 25 Отбирают 3,13 см3 раствора № 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают 4,0 4 4 5-ГМФ 25 Отбирают 12,5 см3 раствора № 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают 16,0 * В данном случае значения массовой концентрации и массовой доли совпадают, поскольку плотность приготавливаемых растворов близка к единице. ** Объемы 5-ГМФ менее 1 см3 вносят с помощью микрошприцов вместимостью 100 или 250 мклпо4.4, предварительно градуированных по дистиллированной воде.

7 Выполнение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографи и

7.1    Условия хроматографического анализа

Колонка аналитическая: длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецил-силикагелем, с размером частиц 5 мкм по 4.3.

Элюент: ацетонитрил/вода/уксусная кислота (15 %/ 84 %/1 %, по объему).

Температура колонки: комнатная.

Детектирование: УФ, 284 нм.

Скорость подачи элюента: 1,0 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 10—20 мкл.

7.2    Условия проведения измерений

Измерения проводят в следующих лабораторных условиях:

7.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов. Регистрируют площади пиков 5-гидроксиметилфурфурола и строят градуировочный график — зависимость площади пика от массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением. Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

у = кх.    (3)

Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достоверности аппроксимации (R²):

R²> 0,9997.

Из уравнения (3) следует, что площадь пиков стандартных растворов 5-гидроксиметилфурфурола S (mAU с или AU • с) и их массовая концентрация с (мг/дм³) или массовая доля с (млн^-1) находятся в соответствующей функциональной зависимости

где к— градуировочный коэффициент, [мг/дм³/тА11 • с]^-1

_Z(S,-c,)

2>,²

где Sj — площадь пика 5-гидроксиметилфурфурола при анализе /'-го стандартного раствора, mAU • с или AU- с;

с,- — массовая концентрация или массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола при анализе /'-го стандартного раствора, мг/дм³ (млн^-1).

Градуировочную зависимость строят при замене оборудования, колонок, изменении условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

7.4 Анализ проб

Проводят хроматографический анализ проб, подготовленных по 6.2. Каждую пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 и ГОСТ ИСО 5725-2.

1

Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2017—01—01.

2

3

4

'О е.о.п. — единица оптической плотности.

²) СКО — среднеквадратическое отклонение.

5