МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

АНТИТЕЛА И АНТИГЕНЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЯЩУРА

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ

Издание официальное

ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

АНТИТЕЛА И АНТИГЕНЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЯЩУРА

Технические условия

Antibodies and antigens for laboratory diagnostics of foot-and-mouth disease. Specifications

МКС 11.220 ОКП 93 8880

Дата введения 01.01.93

Настоящий стандарт распространяется на антитела в виде типо- и иггаммоспсимфнческих сывороток, а также на гомологичные им эталонные и диагностические антигены, предназначенные для лабораторной диагностики ящура сельскохозяйственных животных.

Требования и нормы, установленные в стандарте, являются обязательными.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1.    Характеристики

1.1.1.    Типо- и штаммоспсинфнчсскис сыворотки и антигены должны изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим инструкциям, утвержденным в установленном порядке.

1.1.2.    Типо- и штаммоспсцифичсскис сыворотки, независимо от их типовой и вариантной принадлежности, должны соответствовать требованиям, указанным в табл. I.

© Издательство стандартов, 1992 © ИПК Издательство стандартов, 2004

С. 2 ГОСТ 29312-92	Продолжение таб.1. 1
Наименование показателя	Характеристика и норма для сывороток
	нативных сухих
Специфичность	При использовании сыворотки в учетверенном титре, соответствующем 4 сывороточным единицам (4 СЕ), задержка лизиса эритроцитов в РСК с антигенами гетерологичных типов вируса, взятыми в удвоенных (рабочих) титрах (2 АЕ). нс должна превышать 10 %. С антигенами гетерологичных вариантов штаммоспсцифичсскис сыворотки в предельном титре, соответствующем 1 сывороточной единице (1 СЕ), могут дать задержку лизиса до 50 % эритроцитов
Антнкомплсмснтарность, прокомплсмснтарность	В разведениях выше 1:8. независимо от предельного титра специфической активности в РСК нс допускается

1.1.3. Эталонные и контрольные штаммоспецифические антигены ннруса ратных типов должны соответствовать требованиям, указанным в табл. 2.

Таблица 2

Наименование показателя Характеристика и норма Внешний вид Пористая аморфная масса, по высоте равная первоначальному объему высушенной жидкости Цвет От светло-желтого до розового Наличие посторонних примесей Нс допускается Растворимость При добавлении дистиллированной воды или изотонических растворов содержимое ампулы должно растворяться в течение 5 мни Вирулентность Нс допускается Массовая доли влаги, % 2.5Ю.5 Активность При проверке в РСК по ГОСТ 25384 с гомологичной сывороткой, взятой в удвоенном титре (2 СЕ), антиген должен дать положительную реакцию в разведении нс ниже 1:6. В реакции длительного связывания комплемента (РДСК) его активность должна проявиться в разведении нс ниже 1:12 Специфичность При проверке в РСК (РДСК) по ГОСТ 25384 антигены должны быть типо- и штаммоспецифичными, т. с. в удвоенном титре (2 АЕ) они нс должны давать задержку лизиса более 50 % с сыворотками гетерологичных штаммов, взятыми в предельных титрах (1 СЕ), а с сыворотками гетерологичных типов при аналогичных условиях реакция должна быть отрицательной Антикохшлсмснтарность, прокомплсмснтарность В разведениях выше 1:2, нс зависимо от предельного титра специфической активности в РСК. нс допускается

1.2. Упаковка

1.2.1.    Типо- и штаммоспецнфическне сыворотки и эталонные (контрольные) антигены расфасовывают по 0,5—1 см' в стерильные ампулы, высушивают методом лиофилнзации при соответствующем режиме, обеспечивающем минимальные потери специфической активности и максимальную сохраняемость, герметизируют в атмосфере обезвоженного инертного газа.

1.2.2.    Ампулы укладывают в картонные или полистироловые коробки по ГОСТ 12301 и упаковывают в транспортные контейнеры из дерева или картона по ГОСТ 10131 массой брутто не более 10 кг.

1.2.3.    Внутрь каждого транспортного контейнера вкладывают этикетку с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, его количества в контейнере, номера серин, номера контроля, даты упаковывания, срока годности, номера или фамилии упаковщика.

ГОСТ 29312-92 С. 3

1.3. Маркировка

1.3.1.    На ампулы наклеивают или наносят несмываемой краской этикетки с указанием: наименования;

болезни;

типа и штамма производственного вируса; номера серии; объема препарата, см³; даты изготовления (лиофилизации).

1.3.2.    На коробки с ампулами наклеивают или наносят типографским способом этикетки с указанием:

наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;

наименования препарата;

болезни;

типа и штамма возбудителя; номера серии; номера контроля; количества ампул в коробке; даты изготовления; условий хранения; срока годности;

обозначения настоящего стандарта.

1.3.3.    На каждое грузовое место наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков:

«Хрупкое! Осторожно.*, «Беречь от солнечных лучей* и предупредительную надпись «БИОПРЕПАРАТЫ!*.

Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующие обозначения:

наименование препарата; объем препарата; срок годности; условия хранения.

Совмещение на одной стороне транспортной тары транспортной маркировки и маркировки, характеризующей упакованную продукцию, не допускается.

2. ПРИЕМКА

2.1.    Типо- и штаммоспецифические сыворотки и эталонные (контрольные) антигены принимают сериями. Под серией понимают определенное количество ампул с препаратом, изготовленным за один технологический цикл, одновременно расфасованным и лиофилизованным, оформленное документом о качестве с указанием номера контроля.

2.2.    Каждая серия соответствующего диагностического препарата должна быть проверена ОБК предприятия-изготовителя.

2.3.    Для контроля качества препарата из разных мест серии отбирают I % ампул, но не менее 30 ампул, из которых 20 используют для анализа на соответствие требованиям настоящего стандарта, а остальные 10 — хранят в опечатанном виде в архиве государственного контролер;» в течение срока годности.

2.4.    Ампулы, предназначенные для хранения в архиве, сопровождают документом о качестве с указанием:

наименования препарата; даты изготовления; номера серии; номер;» контроля: даты отбора проб:

общего количества упакованных ампул;

объема изготоааенной серии;

обозначения настоящего стандарта;

должности и подписи бракера, отобравшего пробу.

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ

3.1.    Отбор проб

Из каждой выборки произвольно отбирают 20 ампул, из которых 5 используют для определения остаточной влаги, а остальные — для контроля на соответствие другим требованиям настоящего стандарта.

3.2.    Определение внешнею кила

Внешний вид, цвет, наличие посторонних примесей, правильность этикетки, качество герметизации и упаковки определяют визуально, просматривая каждую ампулу при дневном освещении.

3.3.    Определение растворимости

Сущность метода заключается в определении времени, необходимого для полного растворения сухого диагностикума в исходном объеме растворителя.

3.3.1.    Аппаратура и материалы

Часы любого типа.

Пипетки мерные по ГОСТ 29227.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233. раствор концентрации 0,15 моль/дм³.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.3.2.    Проведение испытания

В 3—5 произвольно взятые ампулы с препаратом добавляют изотонический раствор или дистиллированную воду в объеме, равном объему препарата до высушивания, и встряхивают легкими посту киваниями до полного растворения содержимого, фиксируя время с помощью часов.

3.4.    Определение массовой доли влаю

Массовую долю влаги диагностикумов определяют по ГОСТ 24061.

3.5.    Определение активности

Сущность метода заключается в титровании тнпо- и штаммоспсцифнческих сывороток и эталонных антигенов в РСК с гомологичными контрольными нммунорсагснтами. отвечающими требованиям настоящего стандарта.

3.5.1.    Аппаратура, материалы и реактивы

Бани водяные на 37, 56 и 100 *С.

pH-метр лабораторный.

Пробирки серологические.

Эксикаторы для создания атмосферы с повышенной влажностью.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см ' по ГОСТ 29227.

Штативы лабораторные.

Антигены эталонные и сыворотки диагностические против 7 типов вируса ящура и других везикулярных болезней.

Сыворотка гемолитическая к эритроцитам брана (гемолизин).

Комплемент морской свинки.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233. раствор концентрации 0,15 моль/дм³.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.5.2.    Определение активности тнпо- и штаммоспсцифнческих сывороток

3.5.2.1.    Подготовка к испытанию

Сухие сыворотки в количестве 5 ампул предварительно ре гидратируют в исходном объеме водой. Для испытания типоспецифических сывороток готовят ряд разведений на 0,15 моль/дм³ растворе хлористого натрия с интервалом 0,5 log₂ с 1:8 до предельного титра, указанного на этикетке.

Штаммоспецифические сыворотки разводят на два порядка дальше предельного титра. Контрольный (эталонный) антиген, гомологичный контролируемой сыворотке, и остальные компоненты РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.5.2.2.    Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют с 2 АЕ гомологичного антигена по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности.

3.5.2.3.    Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально.

Предельным титром сыворотки (I СЕ) считают се максимальное разведение, обусловившее задержку лизиса более 90 % эритроцитов в присутствии 2 АЕ гомологичного антигена.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов всех титрований, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 0,5 log₂.

ГОСТ 29312-92 С. 5

3.5.3. Определение активности штаммоспецифических антигенов

3.5.3.1.    Подготовка к испытанию

Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно ре гидратируют в исходном объеме воды, а затем готовят ряд разведений с интервалом в I log₂ с 1:2 до предельного титра, указанного на этикетке. Штаммоспецифические сыворотки, гомологичные контролируемому антигену, и остальные компоненты РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.5.3.2.    Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют с 2 СЕ гомологичной сыворотки по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности.

3.5.3.3.    Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально.

Предельным титром антигена (1 ЛЕ) считают максимальное разведение, обусловившее задержку лизиса более 90 % эритроцитов в присутствии 2 СЕ гомологичной сыворотки.

За окончательный результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов всех титрований, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 1.0 log₂.

3.6.    Определение специфичности

Сущность метода заключается в титровании типо- и штаммоспецифических сывороток и эталонных антигенов в РСК с наборами гетерологичных иммунореагентов.

3.6.1.    Аппаратура, материалы и реактивы — по п. 3.5.1.

3.6.2.    Определение специфичности типо- и штаммоспецифических сывороток

3.6.2.1.    Подготовка к испытанию

Сухие штаммоспеннфическне сыворотки в количестве 5 ампул регидратнруют и разводят, как указано в 3.5.2.1. Помимо гомологичного антигена готовят рабочие разведения всех гетерологичных антигенов и остальных компонентов РСК по ГОСТ 25384.

3.6.2.2.    Проведение испытания

Реакцию связывания комплемента выполняют по ГОСТ 25384 с 2 АЕ гомологичного и гетерологичных антигенов, в перечень которых при контроле типоспецифических сывороток включают антигены всех 7 типов вируса ящура и возбудителей других везикулярных болезней, а при контроле штаммоспенифических сывороток используют антигены актуальных вариантов вируса ящура.

3.6.2.3.    Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с антигенами возбудителей других везикулярных заболеваний реакция должна быть отрицательной, а с антигенами гетерологичных типов и вариантов — не превышать норм, установленных в табл. 1.

В контроле всех разведений сыворотки без комплемента должна быть НК) %-ная задержка лизиса эритроцитов, а в контроле без антигенов — их полный лизис.

3.6.3.    Определение специфичности штаммоспецифических антигенов

3.6.3.1.    Подготовка к испытанию

Контролируемые антигены разводят в количестве 5 ампул, как указано в п. 3.5.3.1. Рабочие разведения гетерологичных сывороток и остальных компонентов РСК готовят по ГОСТ 25384.

3.6.3.2.    Проведение испытания

РСК выполняют по ГОСТ 25384 в трехкратной повторности с 2 АЕ гомологичных и гетерологичных сывороток, в перечень которых включают сыворотки против всех 7 типов вируса ящура, а также возбудителей других везикулярных болезней.

3.6.3.3.    Обработка результатов

Результаты реакции учитывают визуально. Во всех повторностях с сыворотками других везикулярных болезней реакция должна быть отрицательной, а с сыворотками гетерологичных типов и вариантов — не превышать норм, установленных в табл. 2.

В контроле всех разведений антигена без комплемента должна быть 100 %-ная задержка лизиса эритроцитов, а в контроле без сыворотки — их полный лизис.

3.7.    Определение вирулентности штачмоспсцифических антигенов

Сущность метода заключается в выявлении биологической активности остаточного вируса при инокуляции исследуемого антигена 4—6 сут мышатам или в монослойные культуры клеток первнч-но-трипсини знрованных почек свиней 2—4-месячного возраста (СП).

3.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Термостат на 37 °С.

Шприцы «Рекорд» вместимостью I см\

Иглы инъекционные № 0625 или 0420 по ГОСТ 25377¹.

Пробирки серологические.

Пипетки мерные вместимостью I, 2 и 5 ем' по ГОСТ 29227.

Мышата белые нелинейные 4—6-суточного возраста.

Белые мыши-самки лактируюшис (кормилицы).

Культуры клеток СП. вырашенные в пробирках, флаконах вместимостью 50—100 см³ или в пенициллиновых флаконах и отмытые от ростовой среды.

Раствор солевой Эрла с 0.5 % гидролизата лактальбумина (pH 7,6) и антибиотиками по стандартной прописи (поддерживающая среда).

Натрий хлористый по ГОСТ 4233. раствор концентрации 0.15 моль/дм³ (pH 7.0—7.2).

Хлороформ свежеднстиллированный или отмытый от водорастворимых фракций.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.7.2.    Подготовка к испытанию

Сухие антигены в количестве 5 ампул предварительно ре гидратируют в исходном объеме водой или раствором хлористого натрия концентрации 0.15 моль/дм³ и готовят два разведения 1:10 и 1:100 на солевом растворе Эрла с гидролизатом лактальбумина и антибиотиками. Флаконы (пробирки) с монослойной культурой клеток СП освобождают от поддерживающей среды.

3.7.3.    Проведение испытания

3.7.3.1.    Выявление вируса с использованием культуры клеток

Каждое разведение испытуемого антигена вносят в 3—5 флаконов вместимостью 50—100 см³ или 5—10 пробирок (пенициллиновых флаконов) с монослойной культурой клеток СП в объеме 1.0;

0.2 и 0.1 см³ соответственно на I ч при 37 ¹С. Затем растворы антигена удаляют, моиослойные культуры ополаскивают поддерживающей средой, подогретой до 37 ¹С, вносят свежие поринн поддерживающей среды в объеме 10; 2 и I см' соответственно и инкубируют при 37 ¹С в течение 5 сут. В случае выявления признаков дегенерации монослоя клеточные культуры промораживают, оттаивают, осветляют центрифугированием и используют для пассажа на культуре клеток СП.

При пояатенин признаков дегенерации монослоя клеток и во втором пассаже полученную культуральную жидкость после термолиза эмульгируют в течение 3—5 мин с хлороформом (IQ-15 %) для очистки от балластных веществ и исследуют в РСК по ГОСТ 25384 на наличие специфических антигенов размножающегося вируса ящура.

3.7.3.2.    Выявление вируса с использованием белых мышат

Разведения испытуемого антигена вводят в дозе 0,1 см³ подкожно 10 белым мышатам, которых вместе с двумя самками-кормилицами помещают в клетки для лабораторных животных. За иноку-лированными животными наблюдают 7 сут. Павших в течение этого периода мышат используют для дальнейшего пассирования. С этой целью готовят 10 %-ную суспензию скелетной мускулатуры павшего мышонка на поддерживающей среде и очищают ее 10—15 %-ным раствором хлороформа. В случае гибели мышат во втором пассаже готовят 33—50 %-ную суспензию их скелетной мускулатуры. обрабатывают ее 10—15 %-ным раствором хлороформа и исследуют в РСК по ГОСТ 25384.

3.7.4.    Обработка результатов

Антиген считают вирулентным, если выявляемая в любом пассаже дегенерация монослойной культуры клеток СП или гибель мышат обусловлены репродукцией вируса с накоплением специфического комплемснсвязываюшсго антигена.

3.8. Определение стандартности расфасовки сухих сывороток и am и к-нов

Сущность метода заключается в определении колебаний массы препарата, высушенного в ампулах.

3.8.1.    Аппаратура и реактивы

Шкаф сушильный с регулируемой температурой в диапазоне 60—105 ¹С.

Весы аналитические.

Вода деионизированная или дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.8.2.    Подготовка к испытанию

5 ампул сухого препарата освобождают от этикеток, тщательно моют и высушивают на воздухе или в термостате при 37 ¹С в течение 30 мин.

3.8.3.    Проведение испытания

Высушенные ампулы порознь взвешивают, освобождают от содержимого, моют в воде, высушивают при 100 ¹С в течение 60 мин и повторно взвешивают.

ГОСТ 29312-92 С. 7

3.8.4. Обработка результатов

По разности масс ампул до и после удаления содержимого находят массу препарата в каждой из них и высчитывают среднюю массу. Показатель варьирования массы препарата в процентах (Л) вычисляют по формуле

100

где    т_п    —    масса    препарата    в    отдельной    ампуле,    г;

/и_ср — средняя масса препарата в 5 ампулах, г;

X (т_ср — т_п) — сумма отклонений массы препарата в каждой отдельной ампуле от среднего значения, г.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1.    Типо- и иламмоспецнфические сыворотки и эталонные антигены транспортируют всеми вилами транспорта в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.

4.2.    Диагностнкумы хранят в темном сухом месте при температуре не выше 8 *С.

4.3.    Гарантийный срок хранения нативных сывороток и сухих антигенов — 18 мес, а сухих сывороток — 24 мес со дня изготовления. По истечении указанных сроков препараты проверяют на активность и в случае ее сохранения в пределах, предусмотренных настоящим стандартом, они могут быть увеличены на 9 и 12 мес соответственно.

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюшым научно-исследовательским ящурным институтом

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 28.02.92 № 187

3.    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД. на который дана ссылка Номер пункта ГОСТ 4233-77 3.5.1; 3.7.1 ГОСТ 6709-72 3.3.1; 3.5.1; 3.7.1; 3.8.1 ГОСТ 10131-93 1.2.2 ГОСТ 12301-81 1.2.2 ГОСТ 14192-% 1.3.3 ГОСТ 24061-89 3.4 ГОСТ 25377-93 3.7.1 ГОСТ 25384-82 1.1.2; 1.1.3; 3.5.2.1; 3.5.2.2; 3.5.3.1; 3.5.3.2; 3.6.2.1; 3.6.2.2; 3.6.3.1; 3.6.3.2; 3.7.3.I; 3.7.3.2 ГОСТ 29227-91 3.3.1; 3.5.1; 3.7.1

5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2004 г.

Редактор Т.П. Шашина Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор HJ1. Рыбацко Компьютерная верстка И.Л. Намйкиной

Ии. лиц. JSfe 02354 от 14.07.2000. Сдано в набор 29.04.2004. Подписано в печать 03.06.2004. Уел. псч. л. 1.40. Уч.-издл. 0.90.

Тираж 56 жз. С 2478. Так. 206.

И ПК Издательство стандартов, 107076 Москва. Колодезный пер.. 14 http://www.standards.ru    e-mail: info4?*tandards.ru

Набрано и отпечатано в И ПК Издательство стандартов

1

На территории Российской Федерации действует ГОСТ 25377-82.