МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЗЕРНО
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТОЯНИЯ (СТЕПЕНИ ДЕСТРУКЦИИ) КРАХМАЛА
Ихюние официальное
ИПК ИЗДАТЕЛЬСТВО СТАНДАРТОВ Москва
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЗЕРНО
Методы определения состояния (степени деструкции) крахмала
Grain.
Methods of determining the destruction grade of starch
MKC 67.060 ОКСТУ 9809
Дата введения 01.01.93
Стандарт распространяется на необработанное зерно, а также на зерно, подвергнутое различным способам гидротермической обработки (микронизаиия. экструдирован нс. поджаривание и т.п.), и устанавливает метод определения деструкции крахмала.
I. ОТБОР ПРОБ
Отбор проб — по ГОСТ 13586.3.
2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ДЕСТРУКЦИИ КРАХМАЛА (Основной метол)
Сущность метода заключается в определении степени пиролиза углеводного комплекса зерна с помощью фермента глюкоамилазы и определении глюкозы, получаемой в результате деструкции крахмала.
2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* 2-го класса точности с допускаемой погрешностью взвешивании ±0,01 г.
Мельница лабораторная электрическая.
Термостат биологический.
Плитка электрическая.
Пипетки исполнения 2; 2-го класса точности, вместимостью I см3, 5 см3, 20 см3 по ГОСТ 29227. Пипетки градуированные по ГОСТ 29227 исполнений I. 4. 7.
Колбы мерные исполнений I. 2; вместимостью 100 см3, 1000 см3 2-го класса точности по ГОСТ 1770.
Стаканы химические по ГОСТ 25336.
Цилиндры исполнения I вместимостью 100. 250. 500 см3 по ГОСТ 1770.
Колбы мерные.
Колбы конические вместимостью 150 см3 по ГОСТ 25336.
Сито с отверстиями диаметром I мм.
Бюретки для титрования, исполнения 1 и 3, 2-го класса точности с иеной деления 0.1 см3 по ГОСТ 29251.
Воронки стеклянные для фильтрования по ГОСТ 25336.
Часы ситальныс или песочные на 3 мин.
Фильтры бумажные.
• С I июли 2002 г. ннслси к действие ГОСТ 24104-2001.
Издание официальное Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов, 1992 © И ПК Издательство стандартов, 2004
ГОСТ 29177-91 С. 2
Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч. или чл.а.
Гидроокись натрия по ГОСТ 4328.
Калий-натрии виннокислый по ГОСТ 5845, х.ч.
Гипосульфит натрия, раствор массовой концентрации 0,1 моль/дм3.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 2080.
Натрий углекислый по ГОСТ 83.
Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, раствор массовой концентрации I моль/дм3.
Калий лвухромовокислый по ГОСТ 4220, раствор массовой концентрации 0,1 моль/дм3.
Калий йодистый по ГОСТ 4232, раствор с массовой долей 30 %.
Медь сернокислая по ГОСТ 4165.
Препарат ферментный глюкоамилазы очищенный по ТУ 64—13—18.
Крахмал растворимый по ГОСТ 10163.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
2.2. Подготовка к испытанию
2.2.1. Подготовка пробы
Среднюю пробу испытуемого продукта измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром I мм. Частицы, оставшиеся на сите в количестве до I %, удаляют.
2.2.2. Приготовление раствора сернокислой меди (раствор Фелинга I)
Навеску сернокислой меди массой 4» г переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем дистиллированной водой до метки.
2.2.3. Приготовление щелочного раствора виннокислого калия-натрия (раствор Фелинга 2)
200 г виннокислого калия-натрия и 150 г гидроокиси натрия растворяют примерно в 400 см3
дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3. После охлаждения раствора объем его доводят дистиллированной водой до 1000 см3.
2.2.4. Приготовление раствора крахмала с массовой долей I %
Навеску растворимого крахмала массой I г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 25 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Затем в колбу добавляют еще 25 см3 дистиллированной воды, помешают колбу в кипящую водяную баню и. непрерывно перемешивая, выдерживают до латного растворения крахмала. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры и объем доводят дистиллированной водой до метки, после чего содержимое колбы перемешивают стеклянной палочкой.
Раствор крахмала готовят в день проведения анализа.
2.2.5. Приготовление раствора гипосульфита натрия массовой концентрации 0,1 моль/дм3
Для приготовления раствора гипосульфита натрия массовой концентрации 0,1 моль/дм3 и
установления его титра 25 г соли растворяют в I дм3 дистиллированной волы, к полученному раствору прибавляют 0,1 г углекислого натрия, оставляют стоять в течение суток и устанавливают титр по 0.1 моль/дм3 раствор;! двухромовокнелого калия (4.9036 г двухромового кислого калия растворяют в I дм3 воды).
Для установления титра раствора гипосульфита в колбу с притертой пробкой приливают точно 20 см' 0.1 моль/дм3 раствора двухромовокислого калия, долив;!ют водой до 100 см3, прибавляют при помешивании 4 см3 концентрированной серной кислоты и 4 см' раствора йодистого калия с массовой далей 30 %. Колбу закрывают пробкой и оставляют в темном месте на 2—3 мин, затем титруют раствором гипосульфита натрия, все время интенсивно перемешивая жидкость, пока коричневый цвет раствора не перейдет в светло-желтый, прибавляют 1 см' 1%-ного раствора крахмала и продолжают титрование до исчезновения синей окраски и перехода ее в зеленоватую.
Поправочный коэффициент (А) к точно 0.1 моль/дм3 раствора гипосульфита определяют по формуле
где V — объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование, см3.
2.2.6. Приготовление раствора серной кислоты с плотностью 1,14 г/см3 В колбу вместимостью 1000 см' наливают 500 см3 дистиллированной воды, туда же осторожно добавляют 228,9 г концентрированной серной кислоты плотностью 1,84 г/см3. Пекле охлаждения до
комнатной температуры раствор доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Плотность полученного раствора должна составлять 1,14 г/см\
2.2.7. Приготовление ацетатного буфера с pH = 4,7—5.0
Для приготовления ацетатного буфера берут раствор ледяной уксусной кислоты массовой концентрации I моль/дм3 (60,12 г уксусной кислоты на I дм3 воды) и уксуснокислого натрия (136,09 г уксуснокислого натрия на I дм3).
Ацетатную буферную смесь готовят смешиванием указанных растворов в соотношении от 1:1 до 1:2 соответственно значениям pH 4.7—5.0.
2.2.8. Приготовление раствора ферментного препарата глюкоамилазы
Навеску ферментного препарата очищенной глюкоамилазы массой I г при глюкоамилазной активности препарата (ГлА) 1000 Ед на I г или 0,5 г при активности препарата 2000 ГлА на I г помешают в стеклянный стаканчик вместимостью 25 — 30 см3. Туда же добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно растирают стеклянной папочкой до получения однородной массы. Полученную массу количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают и. при необходимости, фильтруют через стеклянную воронку с бумажным фильтром. I см3 раствора ферментного препарата имеет глюкоамилазную активность 10 Ед. При необходимости активность препарата глюкоамилазы проверяю! по ГОСТ 20264.4.
Раствор ферментного препарата хранят нс более суток при температуре от плюс 2 до минус
4 *С.
2.3. Проведение испыгания
Навеску испытуемой пробы массой I г помешают в коническую колбу вместимостью 100 см3. Затем приливают 25 см3 дистиллированной воды температурой 37 *С, 3 см3 ацетатного буфера и 2 см3 раствора ферментного препарата. Колбы выдерживают в биологическом термостате I ч при 37 *С. периодически, примерно через 15 мин. перемешивая их содержимое. После этого отбирают 10 см1 недосадочной жидкости и переносят в коническую колбу, куда предварительно наливают 10 см3 раствора Фединга I и 10 см3 раствора Фелннга 2. Полученную смесь нагревают до кипения на электроплитке или газовой горелке и кипятят 3 мин, при этом выпадает осадок закиси меди красно-бурого цвета. После охлаждения до комнатной температуры в колбу с осадком вносят 20 см3 раствор;! серной кислоты, приготовленной по п. 2.2.6, и 2 г йодистого калия.
Выделившийся свободный йод быстро отгнтровывают раствором гипосульфита натрия, приго-товпенного по п. 2.2.5, до кофейной окраски, после чего вносят I см3 раствора растворимого крахмала и снова титруют до молочно-белой окраски.
Параллельно опыту ставят контрольный опыт, в котором вместо недосадочной жидкости берут 10 см1 дистиллированной воды, остальные операции проводят в той же последовательности, что и для опытной пробы.
2.4. Обработка результатов
Количество глюкозы (А) в миллиграммах в 1 г сухого вещества анализируемой пробы вычисляют по формуле
<NK-NJ 30 3.3 А'
Л 10(1-В')
где iVK — объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование контрольной пробы, см3;
N0 — объем гипосульфита натрия, израсходованный на титрование опытной пробы, см3;
30 — объем исходной суспензии в колбе, см3;
3,3 — коэффициент пересчета 0,1 моль/дм3 раствора гипосульфита натрия на глюкозу, установленный экспериментальным путем;
К — поправочный коэффициент к титру гипосульфита натрия;
10 — количество гидролизата, израсходованное на анализ;
W — массовая доля влаги в анализируемой пробе, г.
Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением до целого числа.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 10 % от среднеарифметического результата.
ГОСТ 29177-91 С. 4
3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ДЕСТРУКЦИИ КРАХМАЛА МЕТОДОМ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ КРАХМАЛА НА ПРИБОРЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСЛА ПАДЕНИЯ (Экспрессный метол)
Сущность метода заключается в быстрой клейстеризацни водяной суспензии размолотого зерна на кипящей водяной бане и последующем определении степени разжижения амилазами крахмала, содержащегося в пробе, по числу падения, выражающемуся периодом времени с момента погружения вискозиметрической пробирки в кипящую воду, необходимым для падения мешалки вискозиметра с определенной высоты через водную суспензию, полученную из размолотого зерна и находящуюся в вискозиметрической пробирке в состоянии разжижения.
3.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Прибор для определения числа падения.
Пробирки вискозиметрические с внутренним диаметром (21,0010.02) мм, наружным диаметром (23,80±0,3) мм.
Пробки резиновые № 22 для вискозиметрических пробирок.
Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с допускаемой погрешностью взвешивания ±0,01 г.
Мельница лабораторная электрическая.
Пипетки исполнения 2. 2-го класса точности вместимостью I и 25 см3 по НТД.
Цилиндр исполнения I вместимостью 100 см3 по ГОСТ 1770.
Колбы конические вместимостью 150 см3 по ГОСТ 25336.
Сито с отверстиями диаметром I мм.
Плитка электрическая или горелка газовая.
Ножницы.
Палочки стеклянные длиной 13—20 см3.
Бумага индикаторная лакмусовая или универсальная.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Ферментные препараты: амилосубтилин (а-амилаза) по ГОСТ 23635 и глюкоамилаза очищенная но ТУ 64.13.18.
Примечай и с. Допускается использовать импортную аппаратуру, мерную посуду или другие средства измерений, имеющие такие же или более высокие метрологические характеристики.
3.2. Подготовка к испытанию
3.2.1. Подготовка пробы
Среднюю пробу испытуемого продукта измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром I мм.
Частицы, оставшиеся на сите в количестве до I %, удаляют.
3.2.2. Приготовление раствора ферментных препаратов
Для приготовления растворов амилазы (Ас) и глюкоамилазы (ГлА) используют ферментные препараты из расчета содержания в I см3 раствора 0.8 Ед Ас и 10 Ед ГлА.
Расчет для взятия навесок ферментов проводят следующим образом.
Например, согласно качественным удостоверениям активность препарата а-амилазы составляет 600 Ед Ас на I г препарата, а активность глюкоамилазы — 1000 Ед ГлА на I г препарата.
Исходя из этого для приготовления рабочего раствора ферментных препаратов 133 мг препарата а-амилазы и I г препарата глюкоамилазы растворяют поочередно, начиная с глюкоамилазы, в 100 см3 дистиллированной воды при температуре 55 °С и pH 4,7—5.0 и охлаждают до комнатной температуры.
3.3. Проведение испытания
Навеску размолотого зерна помещают в вискозиметрическую пробирку прибора для определения числа падения. Массу навески устанавливают по таблице, учитывая значения влажности продукта (см. приложение).
Затем в пробирку наливают пипеткой I см3 рабочего раствора ферментных препаратов, приготовленного по п. 3.2.2, и дистиллированную воду в количестве, указанном в таблице. Пробирку закрывают резиновой пробкой н энергично встряхивают не менее 20 раз до получения однородной суспензии.
В случае затруднения в получении однородной суспензии пробку вынимают и перемешивают
содержимое пробирки стеклянной палочкой. Затем колесиком шток-мешалки перемещают прилипшие частицы продукта со стенок в общую массу суспензии. Все операции по подготовке суспензии проводят в течение 60—90 с.
Для определения числа падения пробирку с суспензией помешают в отверстие в крышке кипящей водяной бани прибора, закрепив се держателем таким образом, чтобы фотоэлемент прибора находился против шток-мешалкн. В то же время автоматически включается счетчик времени. Через 5 с после погружения пробирки в водяную баню автоматически начинает работать шток-мешалка, которая перемешивает суспензию в пробирке. Через 60 с шток-мешалка автоматически останавливается в верхнем положении, затем начинается ее свободное падение. После полного опускания шток-мешалки счетчик автоматически останавливается.
По счетчику определяют число падения (*) — время в секундах с момента погружения пробирки с суспензией в водяную баню до момента полного опускания шток-мешалки.
3.4. Обработка результатов
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.
Вычисление проводят до первого десятичного знака с последующим округлением результата до целого числа.
Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений (d) и между результатами. полученными в разных условиях (D), в секундах, при двусторонней доверительной вероятности Р = 0,95 не должны превышать следующих значений
</= —1,6 + 0.138*;
D - —1,9 + 0,2*,
где *— среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, с;
* — среднеарифметическое значение результатов двух испытаний, выполненных в разных условиях. с.
Пример. Результаты испытания по первой навеске — 68 с. по второй — 73 с. Среднеарифметическое значение — 70.5 с. Допускаемое расхождение от этого среднего арифметического значения составляет 8.1 с.
Фактическое расхождение между результатами испытания двух навесок состааляет 5 с. что нс превышает допускаемого расхождения между ними.
ГОСТ 29177-9! С. 6
ПРИЛОЖЕНИЕ
Справочное
Табличные данные для определения массы навески н воды в 1ависичосin от влажности продукта
Влажность пробы. % |
Масса навески, г |
Обшее количество воды с ферментным раствором на пробу, см3 |
2.0—2.3 |
6.89 |
|
2.4—2.6 |
6.92 |
|
2.7—2.9 |
6.94 |
26.8 |
3.0—3.2 |
6.96 |
|
3.3—3.5 |
6.98 |
|
3.6—3.8 |
7.00 |
|
3.9-4.1 |
7.03 |
|
4.2—4.4 |
7.05 |
26.7 |
4.5—4.7 |
7.07 |
|
4.8—5.0 |
7.09 |
|
5.1—5.3 |
7.12 |
|
5.4—5.6 |
7,14 |
26.6 |
5.7—5.9 |
7.16 |
6.0—6.2 |
7,19 |
|
6.3—6.5 |
7,21 |
|
6.6—6.8 |
7,24 |
26.5 |
6.9-7.1 |
7.26 |
7,2—7,4 |
7.28 |
|
7.5—7.7 |
7,30 |
|
7.8—8.0 |
7.33 |
26.4 |
8.1-8.3 |
7,35 |
8.4—8.6 |
7.37 |
|
8.7—8.9 |
7.40 |
|
9.0-9.2 |
7.42 |
26.3 |
9.3—9.5 |
7.45 |
9.6—9.8 |
7.47 |
|
9.9-10.1 |
7.50 |
|
10.2-10,4 |
7,52 |
26.2 |
10.5-10.7 |
7.55 |
10,8-11,0 |
7,57 |
|
11.1-11.3 |
7.60 |
|
11,4-11,6 |
7.62 |
26.1 |
11.7-11.9 |
7,65 |
12.0-12,2 |
7.68 |
|
12.3-12.5 |
7,70 |
|
12.6-12.8 |
7.73 |
|
12,9-13,1 |
7,76 |
26.0 |
13.2-13.4 |
7.78 |
13,5-13.7 |
7.81 |
|
13.8-14.0 |
7,81 |
|
С. 7 ГОСТ 29177-91
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом комбикормовой промышленности
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метро-логеи СССР от 19.12.91 № 2008
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
|
5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2004 г. |
Редактор А/.//. Макси*о«а Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор В. С. Черная Компьютерная нерстка Н.Л. Пашкиной
Ии. лиц. 02354 от 14.07.2000. Сдано в набор 17.06.2004. Подписано в печать 03.08.2004. Уел. печл. 0.93. Уч.-иил. 0.75.
Тираж 67 ж». С 3075. Зак. 279.
ИПК Издательство стандартов. 107076 Москва. Колодезный пер., 14. http://wwx*f.standarxK.nj e-mail: inlo^standards m Набрано и отпечатано в ИПК Издательство стандартов