ГОСТ 28417-89

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ ОВЕЦ, АНАЭРОБНОЙ ДИЗЕНТЕРИИ ЯГНЯТ И НЕКРОТИЧЕСКОГО ЭНТЕРИТА ПОРОСЯТ, ВЫЗЫВАЕМЫХ КЛОСТРИДИУМ ПЕРФРИНГЕНС ТИПОВ С, D

ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ И МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ

С. 2 ГОСТ 28417-89

Продолжение Наименование показателя Характеристика и нормы 6. Биологическая активность в реакции нейтрализации типовых токсинов сыворотками крови иммунизированных овец после двукратной прививки, АЕ/см3, не менее 0,48 7. Погрешность розлива + 3 %

2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИИ

2.1.    Отбор проб

2.1.1.    Для проверки качества вакцины из различных мест каждой серии препарата отбирают выборку в объеме 0,4 л/й~ (где п — количество флаконов в серии).

Из выборки отбирают 20 флаконов, из которых 10 используют для проведения испытаний, а 10 хранят в архиве государственного контролера в течение срока годности препарата.

2.1.2.    Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием: наименования биопрепарата;

даты изготовления; номера госконтролера; даты отбора проб;

общего количества упаковочных единиц; объема серии; срока годности;

обозначения настоящего стандарта; должности и подписи лица, отобравшего пробу.

2.2.    Определение внешнего вида

2.2.1.    Определение внешнего вида, наличия посторонних примесей, плесени, изменения консистенции проводят визуально, просматривая каждый флакон в проходящем свете. Флаконы предварительно встряхивают. Одновременно проверяют плотность укупорки, наличие трещин и правильность этикетирования флаконов.

2.3.    Определение концентрации водородных ионов (pH)

Сущность метода заключается в измерении разности потенциалов между двумя электродами pH-метра, погруженными в исследуемую пробу.

2.3.1.    Аппаратура и материалы

pH-метр, позволяющий проводить измерения с погрешностью не более 0,05 единицы. Термометр.

Стаканы химические В-1 ТХС по ГОСТ 25336.

Растворы буферные с pH 6,8—7,2.

2.3.2.    Подготовка к испытанию

pH-метр и электроды подготовляют к работе в соответствии с инструкцией, прилагаемой к прибору.

2.3.3.    Проведение испытаний

Для испытания используют 2 флакона с вакциной. Измеряют температуру пробы и устанавливают терморегулятор прибора на полученное значение температуры. Погружают электроды в пробу и через 30 с отсчитывают значение pH.

2.3.4.    Оценка результатов

Значение pH устанавливают по двум измерениям каждой пробы, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1 единицы.

2.4.    Определение контаминации посторонней микрофлорой — по ГОСТ 28085.

2.5.    Определение безвредности

Сущность метода заключается в определении реакции у лабораторных животных на подкожное введение вакцины в тест-дозе.

2.5.1. Аппаратура и материалы

Флаконы стеклянные вместимостью 100 см³.

Пипетки мерные вместимостью 1, 5, 10 см³ по НТД.

ГОСТ 28417-89 С. 3

Шприцы вместимостью 5 см³.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377¹.

Морские свинки массой 350—400 г.

2.5.2.    Проведение испытания

Для испытания используют смесь вакцины, взятую в равных объемах из 3 отобранных флаконов. Препарат вводят подкожно 5 морским свинкам в дозе 5 см³ в область брюшных мышц в два места (по 2,5 см³).

2.5.3.    Оценка результатов

Вакцина не должна вызывать заболевания и гибель животных в течение 10 сут наблюдения. На месте введения препарата допускается образование ограниченной припухлости, исчезающей через 2—3 сут.

2.6. Определение биологической активности

Сущность метода заключается в определении количества антитоксических антител в сыворотке крови вакцинированных овец.

2.6.1.    Аппаратура и материалы

Термостат с температурой нагрева (37 + 0,5) °С.

Весы лабораторные с погрешностью взвешивания 0,0001 г.

Флаконы стеклянные вместимостью 100 см³ по ТУ 64—2—100.

Пипетки мерные вместимостью 1, 5 и 10 см³ по НТД.

Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.

Шприцы вместимостью 1 и 5 см³ по ГОСТ 22967.

Пробирки лабораторные по ГОСТ 25336.

Токсины сухие Клостридиум перфрингенс типов С и D.

Раствор физиологический с pH 7,2—7,4.

Овцы взрослые массой не менее 30 кг.

Белые мыши массой 16—18 г.

2.6.2.    Подготовка к испытанию

Для испытания биологической активности используют общую пробу вакцины, взятую в равных объемах из 10 флаконов.

2.6.3.    Проведение испытания

2.6.3.1.    Получение объединенной пробы сывороток крови вакцинированных овец

5 овцам массой не менее 30 кг, в сыворотке крови которых не содержится специфических антител к Клостридиум перфрингенс или их уровень не превышает 0,04 АЕ/см³, вводят вакцину дважды подкожно в бесшерстную область за локтевым суставом в дозе 4 см³ с интервалом 18—20 сут. Через 18—20 сут после второй вакцинации от каждого животного берут кровь.

Готовят объединенную пробу полученных сывороток, смешанных в равных объемах.

2.6.3.2.    Определение минимальной летальной дозы типовых токсинов

Для определения минимальной летальной дозы (ДЛМ) типовых токсинов делают навески каждого токсина по 100 мг, которые растворяют в 100 см³ физиологического раствора с pH 7,2—7,4.

Основное разведение содержит 1 мг токсина в 1 см³ раствора. Из него готовят последовательные разведения: 1:10, 1:15, 1:20 и т. д. до предполагаемого титра, пользуясь при этом разными пипетками. Каждое разведение токсинов вводят внутривенно по 0,5 см³ 2 белым мышам массой 16—18 г. Результаты учитывают через 48 ч. За титр токсина принимают то его разведение, при введении которого еще наблюдается гибель мышей.

Например. Мыши пали от разведения 1:20, а после разведения 1:25 остались живы. Следовательно, 1 мг сухого токсина содержит 40 ДЛМ для мышей массой 16—18 г.

2.6.3.3.    Постановка реакции нейтрализации типовых токсинов объединенной пробой сыворотки крови вакцинированных овец

Готовят разведения типовых токсинов, содержащие 12 ДЛМ/см³. Испытуемую сыворотку овец разводят 1:4, 1 см³ которой смешивают с 1 см³ разведенного токсина, и смесь выдерживают 30 мин при температуре 37 °С—38 °С. Затем смесь сыворотки и токсина по 0,5 см³ вводят внутривенно 4 белым мышам. Одновременно ставят контроли токсинов. Для этого готовят разведения, содержащие 0,5; 1,0 и 2,0 ДЛМ в объеме 0,5 см³. Каждое разведение вводят внутривенно 2 белым мышам в объеме 0,5 см³. Наблюдение за животными ведут в течение 48 ч.

С. 4 ГОСТ 28417-89

2.6.4. Оценка результатов

Гибель контрольных мышей, которым токсин был введен в количестве 1 и 2 ДЛМ, и отсутствие гибели в группе мышей, которым токсин был введен в количестве 0,5 ДЛМ, и в группе мышей, которым токсин введен в смеси с сывороткой, означает, что сыворотка крови вакцинированных овец содержит 0,48 АЕ/см³ (при гибели отдельных животных) или более 0,48 АЕ/см³ (при выживании всех животных опытной группы).

ГОСТ 28417-89 С. 5

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1.    РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Главком ветеринарии при Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам

2.    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 28.12.89 № 4203

3.    СТАНДАРТ ПОЛНОСТЬЮ СООТВЕТСТВУЕТ СТ СЭВ 6536-88

4.    ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка	Номер пункта
ГОСТ 22967-90	2.6.1
ГОСТ 25336-82	2.3.1; 2.6.1
ГОСТ 25377-93	2.5.1; 2.6.1
ГОСТ 28085-89	2.4
ТУ 64-2-100-78	2.6.1

5.    Ограничение срока действия снято по протоколу № 4—93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4—94)

6.    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2005 г.

Редактор М.И. Максимова Технический редактор Н. С. Гришанова Корректор М.В. Бучная Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 25.08.2005. Подписано в печать 15.09.2005. Формат 60 х 84*/8- Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ.л. 0,93. Уч.-изд.л. 0,50. Тираж 40 экз. Зак. 155. С 1877.

ФГУП «Стандартинформ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

Набрано и отпечатано во ФГУП «Стандартинформ»

1

На территории Российской Федерации действует ГОСТ 25377-82.