Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

14 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ 26573.1-93 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Настоящий стандарт устанавливает методы определения витамина А в премиксах, предназначенных для обогащения комбикормов, белково-витаминных добавок и кормовых смесей

  Скачать PDF

Заменяет ГОСТ 26573.1-85 ИУС 5-1994

Переиздание

Рекомендуется использовать вместо ГОСТ Р 50259-92 (ИУС 8-1994)

Оглавление

1 Отбор проб

2 Определение витамина А методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии

3 Определение витамина А методом нормальной фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии

4 Колометрический метод определения витамина А

Показать даты введения Admin

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


ПРЕМИКСЫ

Методы определения витамина А

Издание официальное

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ Минск

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Госстандартом России

ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации

2    ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа но стандартизации

Киргизская Республика Республика Молдова Российская Федерация Республика Таджикистан Туркменистан Украина

Киргиэстандарт Молдовас гандарт Госстандарт России Таджн кгосста ндарт

Главная государственная инспекция Туркменистана Госстандарт Украины

3    Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 2 июня 1994 г. № 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 26573.1-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с I января 1995 г.

4    ВЗАМЕН ГОСТ 26573.1-85

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен на территории Российской Федерации в качестве официального издания без разрешения Госстандарт России

38

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРЕМИКСЫ

ГОСТ

26573.1-93

Методы определения витамина Л

Premixes. Methods for determination of vitamin A

ОКСТУ 9209

Дата введения 1995—01—01

Настоящий стандарт устанавливает методы определения витамина А и премиксах, предназначенных для обогащения комбикормов, белково-витаминных добавок и кормовых смесей.

1.    Отбор проб

Отбор проб — но ГОСТ 13496.0.

2.    Определение ви гамина А метолом обращенно-фазной высокоэффективной

жидкостной хроматографии

Сущность метода заключается в экстракции витамина А (ретинола ацетат) из премикса экстрагентом и хроматографическом анализе содержания витамина в испытуемом растворе с использованием жидкостного хроматографа.

Метод применим в диапазоне концентраций витамина А 20—10000 международных единиц (ME) на 1 г премикса. Предельная погрешность метода — 10 %.

2.1. А н п а ра т ура и реактивы

Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром» но ТУ 25—05.2830 или его последующие модификации со спектрофотометрическим детектором и спектральным диапазоном 190— 360 нм.

Колонка хроматографическая одного из указанных размеров: 2 х 64. 2 х 80. 2 х 120 мм с числом теоретических тарелок не менее 4000 (по прилагаемому к колонке паспорту), заполненная одним из следующих сорбентов: Силасорб С|8. Силасорб SFHCie, Сепарон Сщ.

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Баня водяная, обеспечивающая постоянство температуры (75± 1) 'С.

Спектрофотометр со спектральным диапазоном работы 186—1100 нм.

Колбы конические со шлифом вместимостью 25 см3. КН-2—25—18 МХС по ГОСТ 25336.

Пипетка 4—1(2)—1 (исполнения 4, 1-го или 2-го класса, вместимостью I см3).

Пипетка 6—1(2)—10 или 7—1(2)—10.

Пипетка 2(3)—1(2)—50.

Колбы мерные 2—25—1(2) (исполнения 2. вместимостью 25 см3. 1-го или 2-го класса точности) но ГОСТ 1770.

Колбы мерные 2—50—1(2) по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1(2. 3. 4)—100. 1(2, 3. 4)—500 но ГОСТ 1770.

Воронка ВФО-40-ПОР 16 ХС по ГОСТ 25336.

Издание официальное

Электронная версия

Холодильник ХПТ-1-100-18 ХС но ГОСТ 25336.

Насос водоструйный но ГОСТ 25336.

Бюретка 6—2—2 (исполнения 6. 2-го класса точности, вместимостью 2 см3).

Склянки с притертой пробкой.

Спирт этиловый ректификованный технический но ГОСТ 18300.

Спирт этиловый абсолютированный по TV' 84—11—99.

Спирт изопропиловый (иропанол-2), х. ч., по ТУ' 6—09—402.

Спирт пропиловый (пропанол-1). х. ч.. по МРТУ 6—09—6628.

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, х. ч.. но ТУ 6—09—06—1092.

Ретинола ацетат в масле. 3.44 %-ный раствор с активностью 90000—110000 МЕ/см3 но фармакопее.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечание. При провслснии испытаний допускается использовать импортные аппаратуру, материалы и реактивы с характеристиками не ниже отечественных аналогов.

2.2. Подготовка к испытанию

2.2.1.    Пригопихиение э. тента dm хроматографии

Трехкомпонентный элюент готовят смешиванием пропилового спирта, дистиллированной воды и ацетонитрила в соотношении 50:8:42 (% об.). Для этого в склянку вместимостью 1000 смвносят цилиндром 500 см3 пропилового спирта. 420 см3 ацетонитрила и 80 см3 дистиллированной воды.

Приготовленную смесь растворителей фильтруют через стеклянный фильтр для удаления возможных механических примесей и пузырьков воздуха и помещают в стеклянный сосуд с притертой пробкой. Полученный раствор можно хранить в течение 1 мес.

2.2.2.    Подготовка хроматографической ко тики

При работе на неиспользованной ранее колонке или колонке, которая не была подключена к прибору «Милихром». из нее следует удалить воздух и тщательно промыть элюентом до получения стабильной нулевой линии. Д|я этого через колонку пропускают элюент в количестве 20—30 свободных объемов колонки, т. е. два полных шприца насоса хроматофафа при расходе элюента сначала 50 мкдм3/мнн, а затем 100 мкдм3/мин. Промывку колонки заканчивают при получении стабильной нулевой линии.

После промывки колонки проводят ее насышение витамином А. Дтя этого выполняют 7—10 анализов наиболее концентрированного фадуировочного раствора витамина А. Насышение колонки прекращают, когда отношение разности между двумя последовательными определениями концентрации витамина А к среднему арифметическому значению этих операций не превышает 3 % отн.

При правильной эксплуатации колонка выдерживает до 500—600 анализов.

2.2.3.    Приготовление растворителя для экстракции витамина А из премикса

Дтя экстракции витамина А из премиксов используют двухкомнонентный экстрагонт состава: изопропиловый спирт и дистиллированная вода в соотношении 97:3 (% об.). Дтя этого в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят пипеткой 30 см3 дистиллированной воды и доводят до метки изопропиловым спиртом. Хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой.

2.2.4.    Приготовление абсолютного этилового спирта

К этиловому ректификованному спирту' прибавляют в соотношении 4:1 свсжепрокаленную при температуре 800—1000 °С в течение 2 ч окись кальции. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2—3 ч. Затем смесь перегоняют, отбрасывая начальную и конечную порции отгона (по 20—30 см3). Перегнанный абсолютный спирт при измерении на спектрофотометре относительно дистиллированной воды в кювете с толщиной слоя 1 см должен иметь значение оптической плотности, не превышающее 0.01 единиц в области 320—350 нм и 0.05 при 280—300 нм.

Если спирт не отвечает вышеуказанным требованиям, процесс обезвоживания повторяют.

Этиловый абсолютный спирт промышленного изготовления перегоняют над твердой гидроокисью натрия или калия (10 г щелочи на 1 дм3 спирта) и проверяют, как указано выше.

2.2.5.    Определение активности витамина А в масляном препарате

0.1 г масляного препарата витамина А растворяют в абсолютном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 50 см3, перемешивают. Отбирают 1 см3 раствора в колбу вместимостью 50 см3.

40

ГОСТ 26573.1-93 С. 3

заполняют ее до метки абсолютным спиртом и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм при длине волны 326 нм. В качестве контрольного раствора используется абсолютный спирт.

Активность витамина А (Л) в международных единицах (ME) в I г препарата вычисляют по формуле

D- Vy ■ V2 1880 Х т V 100    ’

где D — оптическая плотность раствора при длине волны 326 им;

Vx, К, — первое и второе разведения, см3;

1880— коэффициент перевода в ME; т — масса навески масляного препарата, г;

V— объем раствора, используемый для второю разведения, см3;

100— коэффициент.

2.2.6. Построение градуировочного графика

Для приготовления стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина А (3.44 %-ный раствор), необходимую для получения раствора с активностью 30000 ME в 50 смили 600 МЕ/см3. Навеску помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в изопропиловом спирте, перемешивают и доводят этим спиртом до метки.

Раствор хранят в холодильнике и используют в течение одной недели.

Из этою раствора готовят фалу про ночные (рабочие) растворы. Для премиксов, содержащих витамин А в количестве от 100 МЕ/r и выше, готовят рабочие растворы с содержанием 120. 300. 600. 1200. 3000. 6000. 12000 ME витамина в 25 см3. Для этого берут соответственно. 0.2; 0.5; 1.0; 2.0; 5.0; 10.0; 20.0 см3 исходного раствора, помещают в мерные колбы вместимостью 25 см3 и доводят до метки изопропиловым спиртом.

Для премиксов, содержащих витамин Л в количестве 20—100 МЕ/r, готовят рабочие растворы с содержанием 20. 40. 60. 90. 120 ME в 25 см3. Для этого берут соответственно 0.033; 0.066; 0.1; 0.15; 0.2 см3 исходного раствора, помещают в мерные колбы вместимостью 25 см3 при помощи микробюретки и доводят до метки изопропиловым спиртом.

Срок годности растворов — не более 1 мес при хранении в холодильнике при температуре 4—10 °С. Полученные рабочие растворы анализируют на жидкостном хромато1рафе «Милихром» при следующих условиях:

хроматофафическая колонка 2 х 64 мм (2 х 80 мм). (2 х 120 мм);

сорбент — Силасорб Cis; Силасорб SPHCi#; Сепарон С|«;

трехкомпонентный элюент на основе ацетонитрила;

объем пробы — 6 мкдм3;

длина волны — 328 нм;

постоянная времени — 0,2 с;

скорость подачи элюента — 150 мкдм3/.мин.

Удерживаемый объем пика витамина А составляет 300—360 мкдм3 (может меняться в зависимости от длины колонки).

Каждый раствор хроматофафируют три раза. После выхода пика колонку промывают, прокачивая через нес 100—200 мкдм3 элюента до выхода на нулевую линию.

Значение средних высот хроматографических пиков, выраженное в единицах оптической плотности (е. о. п.). откладывают по оси ординат арадуировочного графика, а по оси абсцисс — значение активности витамина А в 25 см3 раствора. Для концентраций витамина А 120—10000 и 20—120 МЕ/г градуировочные графики строят отдельно.

Градуировочный фафик строят также, откладывая по оси ординат средние высоты хроматографических пиков (Л), выраженные в единицах длины (мм) с учетом чувствительности прибора. В этом случае содержание витамина в пробе определяют, измеряя высоту соответствующего хроматографического пика линейкой.

Пример хроматограммы представлен на черт. I.

Построение градуировочных графиков можно заменить расчетом коэффициентов наклона (АО по формуле

41

Электронная версия

п ’

где К, — коэффициент наклона |радуироночного графика для градуировочного раствора, МЕ/е. о. и. или МЕ/мм;

/; — количество точек, но которым строится фадуировочная кривая.

Значение коэффициента наклона (А",) вычисляют но формуле

где Q, — содержание витамина А в соответствующем /'-м градуировочном растворе. ME;

Л, — высота /-го хроматографического пика. е. о. и. или мм.

2.2.7. Проверка градуировочного графика

Градуировочный фафик контролируют не реже одного раза в неделю. Для этого один-два рабочих раствора хроматографируют, как указано в п. 2.2.6.

Отклонение полученных результатов (высота пика, выраженная в е. о. п. или мм) от измеренных в момент иосфосния градуировочного фафика (а) в процентах вычисляют но формуле

А.-Л, д = -4—1- 100.

"i

где Л, и h2 — высота хроматофафического ника, определенная при построении |радуировочного фафика и в момент проверки соответственно, е. о. п. или мм.

Указанное отклонение не должно превышать 5 %.

При отклонении более 5 % сфоят новый фадуировочный график свежеприготовленных растворов масляного препарата витамина А в изопропиловом спирте.

2.3. Экстракция витамина А из премиксов

На лабораторных аналитических весах взвешивают пробу премикса с погрешностью не более 0.0005 г. Навески премиксов и объемы растворов для экстракции приведены в таблице. Навеску премикса помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 25 см\ куда приливают раствор для экстракции в соответствии с требованиями таблицы.

Содержание витамина А в пре миксе. МЕ/г

Навеска нрсмикса. г

Объем раствора утя экстракт!и. см1

20-100

10

15

100-2000

5

10

2000-10000

2

10

Колбы соединяют с обратным холодильником и на1ревают на водяной бане при температуре (75±1) *С в течение 10 мин. Колбу с экстрактом премикса отсоединяют от обратного холодильника, закрывают притертой пробкой, охлаждают иод струей воды до комнатной температуры и фильфуют через фильтр ПОР-16 размером пор 10—16 мкм с использованием водосфуйного вакуумного насоса. Фильфат собирают в мерную колбу вместимостью 25 см3. Коническую колбу, в которой содержался эксфакт нрсмикса, дна-фи раза ополаскивают порциями изопропилового спирта на 2—3 см3 для количественного перенесения премикса на фильф. При этом промывается и осадок на фильтре. Раствор в мерной колбе доводят до метки изопропиловым спиртом, тщательно перемешивают и хроматофафируют.

2.4. Хроматогра ф и р о в а н и е

Полученные экстракты хроматографируют, как описано в и. 2.2.6. Примеры хроматофамм экстрактов витамина А из премиксов представлены на черт. 2.

При возникновении сомнений в правильности выбора пика (по объему или времени удержания). соответствующего витамину А. необходимо в анализируемый экстракт внести небольшое количество одного из градуировочных растворов витамина А (соотношение экстракт : раствор витамина А = 10:2). Увеличение высоты соответствующего пика по сравнению с высотой этого пика

42

ГОСТ 26573.1-93 С. 5

на хроматограмме, полученной до введения градуировочного раствора в анализируемый экстракт, свидетельствует, что этот ник соответствует витамину А.

2.5. Обработка результатов

Для определения содержания витамина А в премиксе проводят две экстракции и каждый экстракт хроматографируют три раза. Находят среднее арифметическое значение высоты пиков, выраженное либо в е. о. и., либо в миллиметрах, и по градуировочному 1рафику определяют содержание витамина А в международных единицах.

Содержание витамина А в премиксах (A'i). МЕ/r. вычисляют по формуле

где Q — содержание витамина А. найденное по градуировочному графику. ME; т — масса навески премикса, г.

Содержание витамина А в премиксах (A'i) при использовании коэффициента К вычисляют но формуле

Полученное числовое значение содержания витамина А округляют до целых чисел.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 10 % относительно среднего арифметического значения, а между результатами, полученными в разных условиях. — 15 %.

3. Определение витамина А методом нормальной фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии

Сущность метода заключается в омылении образца премикса спиртовым раствором гидроокиси калия, экстракции витамина А гексаном с последующим определением витамина методом нормальной высокоэффективной жидкостной хроматографии (НФВЭЖХ). Диапазон измерений 10—10000 МЕ/г. Предельная погрешность метода — 10 %.

3.1. Аппаратура, реактивы и материалы

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.

Хроматограф жидкостный с фотометрическим детектором и систематической погрешностью измерений не выше 10 % отн.: Хром 900 (ЧССР). Цвет 304 или 3006. Ликвохром (Венгрия).

Колонка хроматофафическая стеклянная или металлическая высотой 150 мм и диаметром

3 мм.

Линейка измерительная метахшческая по ГОСТ 427.

Скальпель.

Секундомер механический.

Испаритель ротационный ИР-1М вместимостью 2 дм3 или его аналоги.

Баня водяная, обеспечивающая нагрев до 80—100 *С.

Холодильники стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336.

Сорбент «Сепарон-SGX» зернением 7 мкм (ЧССР).

Колбы конические со шлифом вместимостью 250 см3 но ГОСТ 25336.

Воронки делительные вместимостью 100. 500 см3 но ГОСТ 25336.

Пипетки 1(2. 4. S)—1(2)—1; 2(4. 5)-1(2)-2: 6(7)-1(2)-5; 6(7)-1(2)-10.

Микрошприцы МШ-50М по ТУ 2.833.104.

Колбы мерные 2-25-1(2); 2-100-1(2); 2-500-1(2) по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1(2)—10; 1(2. 3.4)-50; 1(2. 3.4)-100; 1(2. 3. 4)-250; 1(2. 3.4)-1000 по ГОСТ 1770. Пробирки с притертой пробкой 2—10—0.1 по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные диаметром 4—6 см по ГОСТ 25336.

Колонки стеклянные диаметром 2—4 см и высотой 80 см для очистки растворителей.

43

Электронная версия

Катя гидроокись по ГОСТ 24363.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Гексан по ТУ 6—09—3375. ч.

Спирт изопропиловый но ТУ 6—09—402.

Пирогаллол А по ТУ 6—09—5319.

Нагрнй сернокислый безводный по ГОСТ 4166.

Алюминия окись, нейтральная по ТУ 6—09—3916.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Ретинола ацетат в маете. 3.44 %-ный раствор с активностью 90000—110000 МЕ/см3 но фармакопее.

Бумага универсальная индикаторная но ТУ 6—09—1182.

Фильтры бумажные обезболенные (красная лента) по ТУ 6—09—1678.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Примечание. При проведении испытании допускается использовать импортные аппаратуру, материалы и реактивы с характеристиками нс ниже отечественных аналогов.

3.2. Подготовка к испытанию

3.2.1.    Определение активности витамина А в масляном препарате — по п. 2.2.5.

3.2.2.    Приготоахение стандартного раствора витамина А

Для приготовления стандартного раствора взвешивают навеску масляного препарата витамина А (3.44 %-иый раствор), необходимую для получения 25 см3 раствора с активностью 10000 ME. Навеску помешают в мерную колбу вместимостью 25 см3, растворяют в изопропиловом спирте, перемешивают и доводят этим спиртом до метки.

Хранят в холодильнике и используют в течение недели.

3.2.3.    Подготовка растворителей

Очистку растворителей, применяемых в хроматографии, проводят посредством перегонки, отбрасывая первую и последнюю фракции в количестве >/ю от первоначального объема, или пропусканием через колонку, заполненную активированной окисью алюминия. Окись алюминия активируют при на1ренании в течение 1 ч при температуре 400—450 *С. Колонку высотой 60—80 см и диаметром 2—4 см заполняют 80 г активированной окиси алюминия и пропускают через нее 700 см3 растворителя. Дш проверки чистоты в колонку жидкостного хроматографа загружают 50 мкл растворителя. В случае его загрязнения на хроматограмме появляются пики, соответствующие времени удерживания витамина А.

3.2.4.    Приготовление спиртового раствора гидроокиси каш я с массовой дахей Ю %

Растворяют 20 г гидроокиси калия в 180 см3 этилового спирта. Раствор готовят непосредственно перед испытанием.

3.2.5.    Подготовка жидкостного хроматографа к работе

Подготовка хроматографа и колонки к работе проводится согласно описанию, данному в инструкции к прибору. Элюент представляет собой смесь гексана с этанолом в объемном соотношении 99.5:0.5. Применяют стеклянную колонку высотой 150 мм и диаметром 3 мм. заполненную сорбентом «Сепарон-SGX» с зернением 7 мкм. Скорость элюирования 1.4—1.6 см3/мин при комнатной температуре. Фотометрический детектор с длиной волны пропускаемого света 254 нм. Перед началом измерений хроматограф прогревают 15 мин и параллельно колонку промывают элюентом до установления постоянства нулевой линии и времени удерживания витамина А. проверяемого по стандартному раствору.

При использовании хроматографов других марок подбирают оптимальные условия для хроматографирования (объем пробы, скорость элюирования).

3.3. Проведение испытания

В коническую колбу вместимостью 250 см3, снабженную обратным холодильником, помешают 5—10 г прем икса (в зависимости от рецепта премикса), добавляют 50 см3 10 %-ного спиртового раствора гидроокиси калия, на конце скальпеля-пирогаллол, помещают на водяную баню и омыл я ют при температуре 80—85 *С в течение 30 мин. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды, добавляют 50 см3 дистиллированной воды и 50 см3 гексана, дают отстояться и осторожно сливают верхний гексановый слой в делительную воронку. Экстракцию раствора в колбе повторяют дважды порциями по 40 см3 гексана, последнюю фракцию фильтруют через воронку с марлевым слоем. Объединенные гексановые вытяжки промывают в

44

ГОСТ 26573.1-93 С. 7

делительной воронке дистиллированной волы ло нейтральной срелы (но универсальному индикатору). Промытый экстракт переносят в перегонную колбу через беззольный фильтр (красная лента), заполненный безводным сульфатом натрия (40—50 г). Делительную воронку и сульфат натрия на фильтре промывают два раза порциями по 20 см3 гексана. Гексан из колбы отгоняют на ротационном испарителе при температуре 70 *С. Сухой остаток растворяют в 10 см3 гексана, который добавляют порциями по 2—3 см3, и переносят в предварительно откалиброванную пробирку вместимостью 10 см3 с притертой пробкой.

Стандартный раствор витамина А обрабатывают параллельно. Отбирают I см3 стандартного раствора, выполняют омыление и экстрагируют, как при обработке образцов. Полученный экстракт витамина А в 10 см3 гексана используют для хроматографического анализа в качестве внешнего стандарта. Измерение проводят в нормально-фазном режиме.

Растворы экстрактов анализируемого образца и стандартного раствора хроматографируют в одинаковых условиях. С помощью микрошприца в колонку вводят испытуемые растворы (экстракт стандарта или анализируемого образца). При низком содержании витамина А в премиксе загрузку растворов в колонку увеличивают. Получают хроматограммы, аналогичные приведенным на черт. 3. Измеряют высоты пиков, соответствующих времени удержания витамина А. как расстояния от вершины пиков до линии, проведенной в основании ника. Эти значения используют в дальнейшем для расчета содержания витамина А в испытуемом образце. Наиболее благоприятные условия для определения создаются, когда высоты ников стандарта и определяемого вещества на хроматограмме соизмеримы. Эти условия могут быть созданы изменением концентрации стандартного раствора или объемов загрузки в хроматшраф экстрактов стандарта и премикса.

3.4. Обработка результатов

Содержание витамина Л(Х2). МЕ/г, вычисляют по высотам пиков хроматограмм экстрактов стандартного раствора и испытуемых образцов по формуле

у = <ъ_к ± Ys. к ■ К '"'Г,'    ’

где 0Л — количество витамина А. используемое для приготовления стандартного раствора. ME;

Ул — аликвота стандартного раствора, используемая на омыление, см3;

VK — объем мерной колбы со стандартным раствором витамина А. см3;

т — масса навески премикса, используемая на омыление, г;

Vcv Vx — объемы загрузки в хроматограф пробы стандарта и премикса, мкдм3;

Л„. Лст — высоты ников премикса и стандарта на хроматограмме, мм.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений. Результаты вычисляют до четвертой значащей цифры и округляют до третьей значащей цифры.

Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений при доверительной вероятности Р= 0.95 не должны превышать 10 % относительно среднего арифметического течения, а между результатами, полученными в разных условиях, — 15 %.

4. Колориметрический метол определения витамина А

Сущность метода заключается в омылении пробы премикса спиртовым раствором щелочи, экстракции неомыленной фракции этиловым эфиром и колориметрическом измерении оптической плотности испытуемого раствора с треххлористой сурьмой.

Метод применяют дш определения витамина А в премиксах, не содержащих кормовой концентрат лизина.

4.1. Аппаратура, реактивы и материалы

Фотоэлектроколориметр марки КФК-2 или других аналогичных марок со спектральным диапазоном работы 315—980 нм.

Спектрофотометр со спектральным диапазоном работы 186—1100 нм.

Весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г но ГОСТ 24104.

Шкаф сушильный с терморегулятором, обеспечивающий постоянство температуры (110±2) *С.

Испаритель ротационный по ГОСТ 15150 или аналогичный.

Баня водяная.

45

Электронная версия

Скальпель.

Воронки делительные вместимостью 250. 500 см* но ГОСТ 25336.

Колбы конические со шлифом вместимостью 250 и 100 см' по ГОСТ 25336.

Холодильник обратный по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1(2)—50—1(2) и 1(2)-100-1(2) по ГОСТ 1770.

Пипетки 1(2. 4. 5)—1(2)—1; 2(4. 5)-1(2)-2; 2(6. 7)-1(2)-5; 2(6. 7)-1(2)-10.

Цилиндры 1(2. 3. 4)—25; 1(2. 3. 4)-50; 1(2. 3. 4)-100; 1(2. 3. 4)-500 по ГОСТ 1770.

Склянки с притертой пробкой.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Воронки стеклянные по ГОСТ 25336.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Ретинола ацетат в масле. 3.44 %-ный раствор с активностью 90000—110000 МЕ/см' по фармакопее.

Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815.

Эфир этиловый по фармакопее.

Хлороформ по ГОСТ 20015 или ГФХ.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363 или натрия гидроокись по ГОСТ 4328. растворы с массовой долей 50 %.

Калий йодистый но ГОСТ 4232. раствор с массовой долей 10 %.

Калии марганцевокислый по ГОСТ 20490. раствор с массовой далей 4 %.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Натрий сернокислый безводный по ГОСГ 4166.

Пирогаллол А по ТУ 6—09—5319.

Сурьма треххлористая.

Спирт этиловый абсолютированный по ТУ 84—11—99.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300 или но ГОСТ 5962.

Уголь активный по ГОСТ 6217.

Кальция окись но ГОСТ 8677.

Фенолфталеин.

Крахмал.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Фильтры бумажные.

П римечан нс. При проведении испытаний допускается использовать импортные аппаратуру, материалы и реактивы с характеристиками нс ниже отечественных аналогов.

4.2. Подготовка к испытанию

4.2.1.    Приготовление безводного сернокислого натрия

Реактив высушивают в сушильном шкафу при температуре 105—110 °С в течение 3 ч.

4.2.2.    Проверка этилового эфира на содержание перекисей

20 см' этилового эфира взбалтывают с 2 см' бесцветного раствора йодистого калия с массовой долей 10 % в цилиндре с притертой пробкой вместимостью 25 см' и оставляют на 1 ч в темном месте. Не должно быть пожелтения ни эфирного, ни водного слоев. Водный слой сравнивают с исходным раствором йодистого калии. Пожелтение раствора указывает на присутствие перекисей, от которых его очищают следующим образом.

В склянку с притертой пробкой помещают 500 см' эфира. 50 см' раствора марганцевокислого калия с массовой долей 4 %. 4 см' раствора гидроокиси натрия или гидроокиси калия с массовой долей 50 %, взбалтывают и оставляют в темноте на 1 сут. Затем смесь переносят в делительную воронку и эфир промывают пять-шесть раз водой в соотношении 2:1. высушивают путем фильтрования через прокаленный безводный сернокислый натрий и перегоняют. Очищенный от перекисей эфир хранят в холодильнике.

4.2.3.    Проверка мороформа на присутствие свободного хюра и его очистка

10 см* хлороформа взбалтывают в делительной воронке с 40 см' воды, затем водный слой отделяют. К 10 см' водною слоя добавляют 0.5 см' раствор;! йодистого калия с массовой долей 10 % и 0.5 см' раствора крахмала с массовой долей 1 %. В присутствии свободного хлора водный стой окрашивается в синий цвет. В этом случае хлороформ промывают водой (на две части хлороформа берут одну часть воды). Взбалтывают, дают жидкости расслоиться и нижний слой — хлороформ сливают в склянку, а верхний — воду отбрасывают. Промывают хлороформ пять-шесть раз. затем

46