Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

12 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на все виды животных и устанавливает методы лабораторной диагностики заболевания бешенством, вызываемого рабдовирусом

Действие завершено 01.01.2015

Показать даты введения Admin

Страница 1

Ш У S'-Л У

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БЕШЕНСТВА

ГОСТ 26075-84 (СТ СЭВ 3452-81)

Издание официальное

Цена 3 коп.


ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ст,_ Мосин

Страница 2

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

Б. И. Антонов, /I. П. Каменем

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Зам начальника Главного управления ветеринарии П. П. Ра>маинн

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 9 января 1984 г. № 48

Страница 3

УДК 636:176.8.07:006.154    Групп*    С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

ГОСТ

26075-84

Методы лабораторией диагностики бешенства

Agricultural animals.

|CT СЭВ 3452—81]

Methods of laboratory diagnostics of rabies

ОКСГУ 9809

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 9 января 1984 г. № 48 срок действия устаиоалеи

с 01.07.84

до 01.07.89

Несоблюденно стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на все виды животных и устанавливает методы лабораторной диагностики заболевания бешенством, вызываемого рабдовирусом.

Стандарт применяют при диагностике заболевания животных в лабораториях ветеринарных научно-исследовательских учреждений. республиканских и областных ветеринарных лабораториях Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 3452—81.

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОб

1.1. Для проведения исследований на бешенство в лабораторию направляют свежие трупы мелких животных целиком, от крупных животных -- головной мозг.

Для постановки биопробы допускается использовать пробы мозга. консервированные в 30—50% ном растворе глицерина,

;.2. Отобранный для исследования патологический материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и в металлических контейнерах доставляют в лабораторию.

1.3. Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные:

наименование и адрес отправителя; вид животного;

анамнестические и клинико эпизоотологнческие данные.

Издание официальное

2    W

Перепечатка воспрещена

(g) Издательство стандартов, 1984


Страница 4

Стр. 2 ГОСТ 26075—>4

2. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Сущность метода заключается в соединении меченых антител со специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов «антитело-антиген» в полях зрения люминесцентного микроскопа.

2.1.    Аппаратура, материалы, реактивы и растворы

Микроскоп люминесцентный.

Термостат с температурой нагрева 37°С.

Холодильник.

Стекла предметные по ГОСТ 9284-75.

Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336-82.

Чаижи Петри по ГОСТ 25336-82.

Пипетки мерные по ГОСТ 20292-74.

Набор инструментов для вскрытия черепной полости и извлечения головного мозга животных.

Пинцеты по ГОСТ 21241-77.

Горелка газовая или спиртовая.

Ацетон по ГОСТ 2603-79.

Диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антнра-бн чес кий (ДАФИ).

Масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739- -78.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Раствор фосфатный буферный, pH 7,4.

2.2.    Подготовка к исследованию

2.2.1.    Из каждого отдела головного мозга (аммонова рога, мозжечка. коры больших полушарий и продолговатого мозга) готовят по два препарата — мазка-отпечатка.

Не допускаются для исследования пробы, консервированные глицерином, фиксированные этиловым спиртом, формалином и другими средствами, вызывающими денатурацию н разрушение антн-Iенов или создающими дополнительный («свой») фон свечения.

2.2.2.    Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при плюс 4 или минус 12°С в течение 4—12 ч. Затем препараты извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10 15 мин н помещают их во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным диом).

2.2.3.    Диагностический антирабический флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при помощи пипетки (примерно 0,1 см3 на один препарат), закрывают камеру с препаратами, помешают в термостат и выдерживают 30 мин при 3Т°С. Затем предметные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненный фосфатным

Страница 5

ГОСТ 26075—W Стр. 3

буфером pH 7,4, промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

На окрашенные препараты наносят иммерсионное нефлуоресцн-рующее масло.

2.3.    Проведение исследования

2-3.1. Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.

2.4.    Обработка результатов

2.4.1. При положительных результатах исследования и препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от елва заметных в виде песчинок образований до 15—20 мм

Не пораженная вирусом бешенства мозговая нервная ткань светится тусклым серовато-желтым или зеленоватым цветом.

3. МЕТОД ПОДАВЛЕНИЯ И*АМУНОФЛУОРССЦЕНЦИИ

Сущность метода заключается в способности рабического антигена, связанного с нефлуоресцирующими антителами, вторично не входить в соединение с флуоресцирующим специфическим коньюгатом. Это свойство используется для доказательства специфичности свечения комплекса «антиген-антнтело> при исследовании препаратов, предварительно не обрабатываемых нефлуорес-цирующимн антителами.

3.1.    Аппаратура, материалы, реактивы и растворы

3.1.1- Аппаратура, материалы, реактивы и растворы, указанные в п. 2.1, и дополнительно:

иммуноглобулин 5%-ный антирабическин нефлуорееннрующий моноспецифический;

раствор физиологический нейтральный.

3.2.    Подготовка к исследованию

3.2.1.    На фиксированные препараты, приготовленные из исследуемых участков головного мозга, наносят пипеткой 5%-ный анги-рабический нефлуоресцирующий моноспецифический иммуноглобулин, выдерживают их в течение 30 мин во влажной камере в термостате г.ри 37 °С. Затем препараты промывают двукратно нейтральным физиологическим раствором и окрашивают антнраби-ческим флуоресцирующим иммуноглобулином (ДАФИ) по п. 2.2.3.

3.3.    Проведение исследования

3.3.1.    Препараты просматривают под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.

3.4.    Обработка результатов

3.4.1.    В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, предварительно обработанных нефлуоресцирующим и затем флуо-

Страница 6

Стр. 4 ГОСТ 16075—>4

ресцирующнм иммуноглобулином, свечения не должно быть, а в препаратах, ранее обработанных только флуоресцирующим' иммуноглобулином наблюдают специфическое свечение.

4. МЕТОД РЕАКЦИИ ПРЕЦИПИТАЦИИ

Сущность метода заключается в свойстве антител-преининш-нов и гомологичных им антигенов диффундировать в агаровом геле и при соединении образовывать видимые визуально линии нре-цнпитатов-комплексов «антитело-антиген*.

Этим методом допускается исследовать несвежий патологический материал, контагминированный бактериальный микрофлорой

4.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Термостат.

Баня водяная.

Осветитель для бактериологических работ.

Пипетки мерные и пастеровские по ГОСТ 20292 —74.

Чашки Петри по ГОСТ 25336 82.

Трубка металлическая тонкостенная диаметром 4—5 мм.

Перо писчее ученическое.

Натрий хлористый по ГОС Г 4233—77.

Метиловый оранжевый, 1%-ный раствоор в 50%-ном этилоном спирте по ГОСТ 5962-67.

Мертиолят.

Диагностический иммуноглобулин антирабическнй.

Антиген отрицательный контрольный.

Антиген положительный контрольный.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Гель агаровый биофабричного изготовления или приготовленный по рецептуре:

агар-агар «Дифко» или аналогичный -- 15 г, натрии хлористый    — 8.5 г,

1%-ный раствор метилового оранжевого в 50%-ном этиловом спирте    —10 см3,

мертиолят    —0.01 г,

вода дистиллированная    — 1000 см3.

Агаровый гель с pH 7,2—7,4 разливают в стерильную посуду, автоклавируют при 0,5 атм в течение 30 мин, хранят в холодильнике при 4°С.

42. Проведение исследования

4.2.1.    Реакцию преципитации (РП) ставят на обезжиренных предметных стеклах, на которые предварительно наносят каплю расплавленного агара, пипеткой равномерно распределяя ее по стеклу, и делают тонкий мазок. На застывший слой агара наливают сверху 2,5 см3 агарового геля толщиной приблизительно 2 мм.

Страница 7

ГОСТ 26075— М Стр. 5

После застывания агара делают в нем лунки металлической тонкостенной трубочкой диаметром 4—5,6 мм согласно трафарету. Лгаровые столбики осторожно извлекают ученическим пером, не допуская отслаивания от стекла тонкого слоя агарового геля.

В РП исследуют от крупных животных (лошадей, крупного рогатого скота, собак, лисиц и др.) следующие части головного мозга—кору полушарий левой и правой сторон, аммоновы рога -левый и правый, мозжечок и продолговатый мозг. У мелких животных РП ставят с какими-либо тремя отделами мозга. От мышей исследуют нссь головной мозг, который растирают в ступке или в самой черепной коробке в массу пастообразной консистенции.

А © .1 © С ©

©Ъ©Ъ©Ъ© © © ©

©

Л Of ржо

©ъ©ъ©ъ© _й> ® ©

0 0 0

О

'1 кора (левое- волушара:-). '“—кора (правое иолуиырио: С И.чмояов рос (леаив); Д-аи«оио» рос (правив); £—моожтм: Ж— ирододгчвйтый siosr. I, 3. з. 4~-луикя с рвэнецеяиеи    raoty. чкпл

соответственно 1:2. 1:4. 1:8. 1:16

Черт- I

Положительная РП со всеми разведениями глобулина Черт. 2


Подготовленные предметные стёкла помещают во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном) и при постановке реакции лунки заполняют патологическим материалом и диагностическим антирабическим иммуноглобулином (черт. 1—4).

В центральные лунки, обозначенные на трафарете А,В,С,Д.Е,Ж, вносят исследуемый патологический материал, в периферические лунки 1,2,3,4. (см. черт. 1) — диагностический антирабический иммуноглобулин (1-2 капли) в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 (от исходного разведения) на физиологическом растворе.

Одновременно ставят контрольные опыты с положительными и отрицательным антигенами, но каждый на отдельном стекле, используя тс же разведения иммуноглобулина.

После заполнения лунок соответствующими компонентами чашки Петри (влажные камеры) помещают в термостат при 37°С на 6 ч. Затем выдерживают чашки при комнатной температуре еще 42 ч.

Страница 8

Стр. 6 ГОСТ 2607;-*!

Положительная РП с разводе- Положительная РП с рл.тяеде-нимми глобулина 1:4, 1:8, 1:16 инем глобулина 1:16. отсутст-Черт. 3    "Уст РП с разнесениями" 1:2.

1:4, 1:6 Черт. 4

Реакцию преципитации учитывают через 6, 24. 48 ч после ее постановки. Предметные стекла просматривают визуально в затемненной комнате, просвечивая их осветителем снизу вверх поя углом 45°.

4.3. Обработка результатов

4.3.1.    Реакцию считают положительной при появлении одной или двух-трех линий приципитации любой интенсивности между лунками, содержащими антиген и иммуноглобулин.

5. МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ТЕЛЕЦ 6А6ЕША-НЕГРИ

Сущность метода заключается в выявлении в клетках нервной ткани специфических цитоплазматических включений — телец Бабеша-Негрн.

Метод выявления телец Бабеша-Негри является вспомогательным и имеет диагностическое значение только при обнаружении типичных, специфических включений.

5.1.    Аппаратура, материалы и реактивы

Микроскоп биологический по ГОСТ 8284-78.

Стекла предметные по ГОСТ 9284-75.

Пипетки мерные по ГОСТ 20292-74.

Краситель Селлерса.

Буфер фосфатный pH 7,0—7,5.

5.2.    Подготовка к исследованию

5.2.1. Готовят мазки-отпечатки из аммонового рога, коры больших полушарий, мозжечка, продолговатого мозга и окрашивают по методу Селлерса.

На свежие не высохшие препараты наносят на 10—30 с краситель Селлерса (одну часть !%-ного раствора основного фуксина смешивают с двумя частями 1%-ного раствора метиленового синего.) После окраски препараты промывают фосфатным буферным

Страница 9

ГОСТ 26073—*4 Стр. 7

раствором и высушивают в вертикальном положении при комнатной температуре.

5.3.    Проведение исследования

5-3.1. Препараты просматривают под биологическим микросхо-пом с иммерсионной системой.

5.4.    Обработка результатов

5.4.1. Положительным результатом исследования считают наличие специфических телец. Бабеша-Негри, которые представляют собой четко очерченные овальные или продолговатые гранулированные образования диаметром 2—10 мм, розово-красного ueeia, расположенные в нейтронах, а также вне их.

От типичных гранулированных включений, обнаруживаемых при бешенстве, следует отличать включения негранулированные, обнаруживаемые при некоторых других инфекциях, поражающих центральную нервную систему.

6. МЕТОД БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ

Сущность метода заключается в выделении вируса от больных убитых или павших животных путем инокулнрования патологического материала белым мышам и последующей его идентификации.

Бионробу проводят, если выявление рабнческого антиюна методом нммунофлуоресценцин (или РП и определение телец Бабе-ша-Негрн) в первичном материале окажется отрицательным.

6.1.    Аппаратура, материалы и растворы

Центрифуга с частотой вращения 2000 об/мин.

Пробирки центрифужные.

Ступки.

Шприцы с нгламн.

Посуда для содержания мышей.

Антибиотики (стрептомицин, пенициллин).

Раствор нейтральный физиологический.

6.2.    Подготовка к исследованию

62.1. Материал для .шражения мышей готовят из равных частей нервной ткани аммонова рога, мозжечка, коры полушарий, продолговатого мозга.

Ткань измельчают ножницами и растирают в ступке (или гомогенизаторе), постепенно прибавляя нейтральный физиологический раствор до получения 10%-ной суспензии.

6.2.2.    Суспензию центрифугируют с частотой нращения >000 об/мни о течение 5—10 мин. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку и хранят в холодильнике при температуре 0—4 °С до ее использования. При подозрении на бактериальную нестерильность в суспензию добавляют 500 ME пениниллп.

Страница 10

Стр. 8 ГОСТ 26075-34

на к 500 ME стрептомицина на I см3 суспензии и затея выдержи* вают ее при комнатной температуре 30 мин.

6.3.    Проведение исследования

6.3.1.    Для биопробы берут белых лабораторных мышей массой 16—20 г или сосунков в возрасте 20—25 сут массой 6—8 г.

Мышей заражают подготовленной суспензией ннтрацеребрачь-но в дозе 0,015—0,03 см* в зависимости от массы мышей или подкожно в верхнюю губу в дозе 0,1—0,2 см*.

На одну биопробу заражают 6—10 мышей.

Зараженных мышей помещают в клетки или банки, на кото-рые наклеивают этикетку с указанием даты заражения, количества мышей, способа заражения и номера экспертизы. Горловину банки накрывают сеткой, препятствующей проникновению насекомых.

Зараженных мышей осматривают ежедневно в течение 30 сут. Количество здороных, больных и погибших мышеи регистрируют в журнале.

6.4.    Обработка результатов

6.4.1.    При оценке результатов учитывают проявление клинических признаков у зараженных мышеи:

вгьерошенность шерсти;

тремор;

нарушение координации движения;

параличи;

прострация;

Гибель зараженных мышей в срок до 43 ч не учитывают в оценке результатов. От мышей, павших после указанного срока, головной мозг исследуют, как указано в разд. 2—5.

6.4.2.    Биологическую пробу на бешенство считают положительной, если в препаратах из мозга зараженных мышей обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют антиген методами им-мунофлуоресценцин или в реакции преципитации.

6.4.3.    Отрицательный диагноз на бешенство может быть дал только по истечении 30-суточной постановки биопробы при отсутствии специфической гибели мышей.

7. МЕТОД СПЕЦИФИЧЕСКОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ

Сущность метода заключается в том, что мыши, зараженные мозговой тканью больных бешенством животных, заболевают бешенством, а зараженные тканью, предварительно обработанной антнрабической сывороткой (иммуноглобулином), не заболевают.

7.1.    Аппаратура, материалы, реактивы и растворы

7.1.1.    Аппаратура, материалы и реактивы, указанные и п. 6.1, и дополнительно:

Страница 11

ГОСТ 2607S—84 Стр. 9

баня водяная;

сыворотка гипериммунная антнрабическая (или иммуноглобулин);

сыворотка нормальная или физиологический раствор. pH 7.2—7,4.

7.2. Подютовка к исследованию

7.2.1.    Для проведения специфической биопробы отбирают 12 белых мышей (п. 6.3.1). Материал для заражения мышей готовят по п. 6.2.

7.2.2.    Подготовленную для заражения суспензию разливают в две пробирки по 3 см3. Затем в одну из них вносят 3 см1 а.чти-рабичегкой гипернммунной сыворотки или иммуноглобулин, в другую — 3 см* нормальной сыворотки или физиологический раствор pH 7.2—7,4. Обе пробирки выдерживают в водяной бане в течение 10 мин при 37°С.

7 3. Проведение исследования

Каждой смесью заражают по шесть белых мышей интрацереб-рально в дозе 0,015—0,03 см® или в губу н дозе 0,1—0,2 см*.

7.4. Обработка результатов

7.4.1.    Положительным на бешенство результатом специфической биопробы считают гибель мышей, зараженных материалом, обработанным нормальной сывороткой или физиологическим раствором в течение 30 сут. При этом мыши, инфицированные материалом после обработки антирабической иммунной сывороткой или иммуноглобулином, должны остаться живыми.

7.4.2.    Отрицательный диагноз на бешенство может быть дан только по истечении 30 сут постановки бнопробы, если нет специфической гибели мышей.

Страница 12

Редактор Р С, Федорова Технический редактор В. Н. Малькола Корректор Н. Б. Жуховцева

Слано » ной. I7.OI.S4 Подп. . сеч. 16.03.84 0.75 уел. а. л ft75 уел. кр.-отт. И62 уч.чгм. л.

Тараж I60W Цена 3 коп.

Ордена «Заах Почета» И>д*т<льсгао стандартов. 12355". Москм, Нооопрмксискав п*р„3. Калуж<мя тнящ-рафвя стандартов. ул. Мосхоаскаа. 2J«. Зак. С»0