Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

10 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на крупный рогатый скот, овец, свиней и других животных (пушных зверей, собак и кошек), неакцинированных живыми вакцинами, и устанавливает методы лабораторной диагностики болезни Ауески

Показать даты введения Admin

Страница 1

$/гт~№ -А

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ

ГОСТ 25753-83 (СТ СЭВ 3454-81)

Издание официальное

Цена 3 коп.


ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ Москва

Страница 2

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

А. В. Селиванов. Э. М. Прохорове, X. И. Мелехова ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Чпем Коллегии А. Д. Третьяков

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 22 апреля 1983 г. N2 2016

Страница 3

УДК 636:374.1.07:006.354    Групп*    С7*

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЖИВОТНЫЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ

Методы лабораторной диагностики болезни Ауасии

Agricultural animals. Methods of laboratory diagnostics for Morbus Aujeski

ОКСТУ 9809

ГОСТ

25753-83

|СТ СЭВ 3454—81)


Постановлением Государственно) о комитета СССР по стандартам от 22 апреля 1983 г. № 2016 срок действия установлен

с 01.07.84 до 01 -07.8»

Несоблюдение стандарта преследуется по закону

Настоящий стандарт распространяется на крупный рогатый скот, овен, свиней и других животных (пушных зверей, собак и кошек), невакцинированных живыми вакцинами, и устанавливает методы лабораторной диагностики болезни Аусски.

Стандарт применяют при диагностировании заболевания животных в лабораториях ветеринарных научно-исследовательских учреждений.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 3454 81.

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

1.1.    Для проведения биологической пробы и выделения вируса патологический материал берут от животных в период максимального проявления клинических признаков болезни (температурная реакция, угнетение, нервная клиника, зуд, расчесы). От вынужденно убитых и павших животных патологический материал должен быть взят и исследован в летнее время в течение б ч. а при условии хранения его в охлажденном состоянии в течение 10—12 ч.

1.2.    В лабораторию доставляют больных животных, трупы животных или кусочки тканей и органов (головного и спинного мозга, легких, печени, селезенки, лимфатических узлов, миндалин), от абортировавших животных —плоды и плаценту.

1.3.    Дли серологического исследования пробы кровл от исследуемых животных берут в стерильные пробирки и количестве не менее 5 см3.

Перепечатка воспрещена

Издание официальное

© Издательство стандартов, 1982

Страница 4

Op. 2 ГОСТ 257J3—®J

Сыворотку получают методом отстоя к хранят ее до 10 сут при температуре плюс 4°С. Допускается более длительное хранение сыворотки при температуре минус 20 °С. Сыворотка должна быть прозрачной без признаков гемолиза.

1.4. Патологический материал доставляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают наименование хозяйства, вид и возраст животного, эпизоотические данные, клиническую и патолого-анатомическую картину, сведения о проведении иммунизации животных и применяемой вакцине.

2. МЕТОД вИОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОВЫ

Сущность метода заключается в воспроизведении заболевания у здоровых кроликов путем инокуляции патологического материала.

2.1.    Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют:

центрифугу с частотой вращения не менее 3000 об/мин;

термостат с температурой нагреаа 37 СС;

пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;

пипетки мерные по ГОСТ 20292-74;

шприцы вместимостью 1 или 2 см3;

чашки Петри по ГОСТ 25330-82;

раствор физиологический стерильный, pH = 7,2;

раствор солевой буферный стерильный, pH-*7,2;

антибиотики широкого спектра действия.

2.2.    Подготовка к исследованию

Из стерильно отобранных кусочков органов и тканей готозят 10%-ную суспензию на физиологическом или солевом буферном растворе. Суспензию центрифугируют с частотой вращения 2000—3000 об/мин в течение 20—30 мин. Надосадочяую жидкость пипеткой переносят в стерильные пробирки, добавляют антибиотики по 100 Ед/см5 н выдерживают в течение 1 ч в термостате при температуре 37 °С или 2- 3 ч при хомнагной температуре, а затем используют для проведения биологической пробы или выделения вируса з культуре клеток.

2.3.    Проведение исследования

Для проведения биологической пробы используют кроликов массой 2—2,5 кг. Надосадочную жидкость, приготовленную по п. 2.2, вводят двум кроликам внутримышечно в дозе 1—2 см3.

2.4.    Обработка результатов

Бнопробу считают положительной, если животные погибают с клиническими признаками болезни Ауески (нервная клиника, зуд, расчесы) через 2—10 сут после инокулнровання суспензии патологического материала. Если животные погибают без призна-

Страница 5

ГОСТ 2575J—»3 Стр. 3

ков болезни Ауески, биопробу повторяют, используя патологический материал первого пассажа.

Гибель кроликов после введения суспензии патологического материала от свиней без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов вируса болезни Ауески.

Гибель кроликов после введения суспензии патологического материала от пушных зверей без признаков зуда и расчесов может свидетельствовать о выделении вакцинных штаммов вируса болезни Ауески, шатогенных для пушных зверей.

Для идентификации вируса проводят выделение вируса в культуре клеток с последующей постановкой реакции нейтрализации.

3. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ВИРУСА В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК

Сущность метода заключается в выявлении цнтопатического действия (ЦПД) вируса в культуре клеток и его последующей идентификации.

3.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения исследования применяют: термостат с температурой нагрева 37 °С; центрифугу с частотой вращения не менее 3000 об/мин; весы лабораторные с погрешностью взвешивания не более 0.01 г;

шкаф сушильный; микроскоп любой марки; холодильники; баню водяную;

аппарат для трипсиннзацин тканей; пипетки мерные по ГОСТ 20292-74; пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82; чашки Петри по ГОСТ 25336-82; фильтры стерилизующие разных размеров; раствор солевой буферный стерильный, pH-7,2; среды ростовую питательную и похчерживаюшую; раствор трипсина;

соду двууглекислую по ГОСТ 4201-79;

сыворотку крупного рогатого скота для культуры клеток; антибиотики и препараты микостатнческие; феноловый красный по ГОСТ 4599-73; раствор трипана голубого;

культуру клеток первично-трнпсиннзированных почек и щитовидной железы свиньи, семенников телят, эмбрионов кур, клеточные. линии РКи. ВМК21 (любую из перечисленных);

Страница 6

Стр. 4 ГОСТ 35753-43

вирус болезни Ауески с титром не ниже Ю1 ТЦД»лч>;

сьгворогку животных, не содержащую антител к вирусу болезни Ауески (отрицательную);

сыворотку специфическую гнпернммунную против болезни Ауески (положительную).

3.2.    Подготовка к и с сл ед о в а н и ю — по п. 2.2.

3.3.    Проведение исследования

В пробирки с культурой клеток вносят по 0,2 см3 каждого испытуемого материала. Для каждой пробы используют 4—6 пробирок. Пробирки с зараженной культурой клеток выдерживают в термостате при 37 °С в течение 30 мин. Затем из пробирок с культурой клеток удаляют надосадочную жидкость и добавляют 1,8 см3 поддерживающей питательной среды, содержащей антибиотики.

В контроле используют 4- 6 пробирок с незараженной культурой клеток, в которой проводят смену питательной среды. Пробирки с зараженной культурой клеток и контрольные инкубируют при температуре 37 аС в течение 2—5 сут и ежедневно мнхроскопируют для учета цитопатическнх изменений. При появлении цитопатнческнх изменений культуральную жидкость из каждой пробирки объединяют и производят идентификацию выделенного вируса. Если испытуемый материал токсичен для клеток или невозможно определить специфичность ЦПД, проводят дополнительный пассаж.

3.4.    Обработка результатов

Результат исследования испытуемого материала считают положительным. если в культуре клеток обнаруживается цнтопатоген-ное действие вируса, которое проявляется в округлении клеток, появлении гигантских клеток и клеточном лизисе с отпадением пораженных клеток от стекла.

В контрольных культурах (незараженных) не должно быть цнтопатнческах изменении.

По результатам вирусологического исследования болезнь Ауески диагностируют, если видовая принадлежность выделенного вируса в культуре клеток подтверждена в реакции нейтрализации (метод идентификации вируса).

1

МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА

Сущность метола заключается в обнаружении подавления пигопатнческого действия вируса в культуре клеток с помощью положительной сыворотки.

4.!. Аппаратур а, материалы и реактивы —по п. 3.1.

Страница 7

ГОСТ 2J753—83 Crp. 5

4.2.    Проведение исследования

Перед постановкой реакции нейтрализации положительную и отрицательную сыворотки разбавляют в соотношении 1:10 питательной средой для культуры клеток, содержащей антибиотики, и прогревают в водяной бане при температуре 56 °С в течение 30 кин. Б два ряда пробирок (по 7 шт.) вносят по 2 см8 сыворотки в каждую пробирку: в первый ряд — положительную, во второй — отрицательную.

Готовят десятикратные разведения испытуемого вируса от 10—1 до I0-1 на питательной среде для культуры клеток в объемах, достаточных для постановки реакции, и вносят в два ряда пробирок с сыворотками, начиная с разведения I0-7, в объеме по 2 см3 на пробирку. Пробирки со смесью разведений вируса и сыворотки встряхнваюг и выдерживают в термостате при температуре 37 СС в течение 1 ч. Затем каждую смесь сыворотки с разведениями вируса вносят по 1 см3 в 4 пробирки с культурой клеток. Пробирки инкубируют в термостате при температуре 37 °С.

4.3.    Обра ботка результатов

Результаты реакции учитывают по цнтопатнческому действию вируса через 2—5 сут. Для этого определяют титр исследуемого вируса в присутствии положительной и отрицательной сывороток и зыражают его в логарифмах ТЦД$:,,;«*. Титр вычисляют по методу Рида и Менча. Видовую принадлежность вируса устанавливают при наличии разности в титрах вируса с отрицательной и положительной сыворотками не менее чем на два логарифма.

1

Готовят двукратные разведения испытуемых сывороток от 1 • 2 до 1 : 16 на питательной среде для культуры клеток с анти-

Страница 8

Cip. 6 ГОСТ 2J7SJ—83

биотикамн. Затем готовят необходимый объем вируса, содержащего 1000 ТЦДдаси и добавляют равный объем его в каждую пробирку с последовательными разведениями сывороток. Смесь сывороток и вируса встряхивают, выдерживают при температуре 37 °С в течение I ч, после чего в -1 пробирки с культурой клеток вносят по 0,2 см3 смеси сыворотки и вируса и выдерживают при температуре 37°С в течение 30 мин. По истечении указанного срока в пробирки с культурой клеток вносят по 1,8 см* поддерживающей питательной среды. Одновременно ставят следующие контроли:

контроль незараженных культур клеток в 3—4 пробирках, в которых проводят смену питательной среды;

контроль дозы вируса. Для контроля точности дозы вируса, взятой в реакцию, из рабочего разведения вируса (1000 ТЦД$о,о.1сы>) готовят разведения до 10~4. Для каждого разведения вируса используют 3—4 пробирки с культурой клеток. В пробирки с культурой клеток вносят рабочее разведение вируса и последовательные его разведения в объеме по 0,1 см*. После контакта при температуре 37°С в течение 30 мин в пробирки с культурой клеток добавляют 1,9 см3 поддерживающей питательной среды;

контроль токсичности сыворотки. Для определения токсичности сыворотки в пробирочные культуры вносят по 0,1 см3 разведения сыворотки и по 1,9 см3 поддерживающей питательной среды (по 3—А пробирки с культурой клеток на каждое разведение сыворотки);

контроль специфичности вируса. Пробирки с культурой клеток инфицируют смесью вируса в рабочей дозе с двукратным разведением специфической сыворотки до ее титра (по 3—4 пробирки с культурой клеток для смеси каждого разведения специфической сыворотки + вирус).

Все пробирки с культурами клеток, используемые в- реакции, инкубируют при температуре 37 СС.

Проводят ежедневный микроскопический контроль клеточных культур. Учет реакции проводят при появлении цитопзти-ческого действия вируса в контроле дозы вируса, взятой для реакции нейтрализации.

3.4. Обработка результатов

Результат серологического исследования испытуемых сывороток считают положительным при отсутствии цитопатического действия о раз ведениях сыворотки 1 :2 и выше при наличии следующих результатов в коитролях:

в контроле культуры клеток не должно быть изменений моно-c. юя клеток;

Страница 9

ГОСТ 25751-83 Стр. 7

в контроле дозы вируса цитопатнческое действие должно быть в рабочем разведении вируса и и разведениях 10-', 10"?. 10-3 и 10-4 (в последнем разведении не менее двух пробирок);

в контроле ‘токсичности сывороток в случае положительно)! сыворотки (переболевшее животное) отсутствует цитопатическнй эффект, начиная с разведения сыворотки 1 :2; при отрицательной сыворотке (отсутствуют специфические антитела) должен быть цитопатическнй эффект, как и в культурах с контролем дозы вируса (рабочее разведение);

в контроле специфичности вируса отсутствует цитопатическнй эффект в культурах, инокулированных смесью специфической сыворотки и вируса.

Наличие специфических антител в испытуемых сыворотках крови свидетельствует об инфицировании данной особи, группы животных возбудителем болезни Ауескн или возможной вакцинации животных против болезни Ауески.

Положительный результат серологического метода исследования сывороток крови невакцшшрованных животных свидетельствует о подозрении на заболевание, которое подтверждают постановкой биологической пробы.

Страница 10

Редактор Н Е. Шестакова Технический редактор И. П. Замолодчикова.

Корректор Е. И. Еетеева

Сд**0 ь иаб 05С6.83 Подп в п«ч. 07.05*3 0.W5 п. я. 0.48 уч.-над я Тир 6<Х» Цена 3 доп.

Ордена «Зиак Почет*» Издательство стандартов. 11И5Т. Москва. Новооресиенскмй вер.. 3 Тми. «Мс<ковсг.нА зечаткмк». Москва. Лплид пер.. в. Зак. 527