МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ВРЕДИТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИИ И СОРНЯКАМИ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРО -КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ

В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Справочное

издание

Под редакцией

доктора биологических наук М. А. КЛИСЕНКО

МОСКВА «КОЛОС» 1983

Хроматографирование. 2—5 мкл экстракта вводят в хроматограф. Условия хроматографирования приведены в таблице 6.

6. Условия хроматографирования

X роматог [ >афы Показатели ХЛ-8МДП «ЦвСТ-106» «Газохром-1109» «Цвет-10В» «Цвет-5> Скорость газа-носителя. мл/мин: через колонку 75 80 80 30 для поддува детектора — 150 140 120 Скорость протяжки ленты, мм/мин 10 6 10 6 Температура, °С: 180 колонки 200 200 200, 210 испарителя 220 210 225 220, 230 детектора 250 205 250 250 Рабочая шкала электрометра. А — 2- Ю”11 МО"11 2-10"п Саза, 5% SE-30 SE-30; ХЕ-60 SE-30 SE-30, OV-17 Длина колонки,м Абсолютное время удержива- 1.5 2.0 2.0 1.5 1,0 2,0 ния основных пиков, мин: а-ГХЦГ 1,13 — 1.06 1.6 2,5 7-ГХЦГ 1,33 — 1,20 1,9 3,0 гептахлор 2 20 — — — — ддэ 4,53 — 4,34 6.60 9,0 ддд 5,75 — 6,12 8,45 14,5 ддт 7,33 — 7.50 11,20 17,0 тхд — 9,0 6,0 — — — совол 34.0 23,0 хлофен Д-50: IV" 5,5 8,80 V0 (см. рис. 3) 6,6 10,40 VI0 7.8 12,30 Минимально детектируемые количества, иг: ГХЦГ 0,01 — 0,010 0.004 0,006 ДДТ 0.02 — 0.050 0,060 0,040 тхд — 0.2 совол 2,0 0,3 0,2 0,5 хлофен А-50 (XIV0—VI0) 0,4 0,3 0,6 Линейный диапазон детек ти- ровання.нг: ГХЦГ 0,01—0,1 — 0.004—0,120 ддт 0,02—1,70 0,04 —2,5 ТХД 0,2-60 СОВОЛ 2,0-30 хлофен А-50 0,3—20,0

Обработка результатов анализа. Расчет содержания ХОП после отделения на колонке ПХБ [2]. Содержание каждого пестицида в анализируемой пробе (X. мг/кг или мкг/л) находят по высоте пика на хроматограмме фракции № 2 в соответствии с калибровочными кривыми, построенными по результатам анализа серии стандартных растворов, по формуле:

ЛУг

V,P ’

где A — количество пестицида, найденное по калибровочной кривой, нг; V, — объем раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, мл; Vi — объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл; Р — объем пробы воды или навеска образца, соответственно л или г.

Необходимо учитывать так называемую холостую пробу на колонку. Если при анализе холостой пробы получаются пики со временем удерживания, совпадающим со временем удерживания какого-либо пестицида, то при анализе рабочей пробы из высоты полученного пика вычитают высоту пика от холостой пробы.

У каждой партии сорбента проверяют разделительную способность колонки следующим образом: в подготовленную колонку с сорбентом вносят 0,5 мл ПХБ известной концентрации и далее проводят все операции, описанные выше. Все ПХБ должны быть в первой фракции (с учетом холостой пробы на колонку). Аналогичную операцию проводят с другой колонкой (с тем же сорбентом), но вносят в нее 2 мл ХОП известной концентрации. В первой фракции не должно быть ХОП, за исключением ДДЭ, который иногда частично элюируется с ПХБ. Содержание ДДЭ находят по сумме, анализируя пробы до и после разделения на колонке. Таким образом, все ХОП должны находиться во второй фракции.

Расчет содержания ПХБ после щелочного дегидрохлорирования и окисления хромовым ангидридом [2]. Учитывая постоянное изменение фонового напряжения на детекторе, которое приводит к некоторому изменению чувствительности, расчет содержания ПХБ проводятпо высоте или площади пика с учетом калибровочного коэффициента К. Значение К рассчитывают из результатов хроматографирования стандартного раствора из серии 5—6 анализов по формуле:

где Н — высота пика ПХБ, мм; А — количество стандартного ПХБ, введенного в хроматограф, нг; л — число анализов.

Количество ПХБ в пробе (X, мг/кг или мкг/л) рассчитывают по формуле II с введением в знаменатель значения К.

Расчет содержания ХОП и ПХБ после щелочного дегидрохлорирования при использовании колонки длиной 1 м, заполненной фазой SE-30 [3]. Расчет количества ПХБ (X, мкг/л воды, мг/кг почвы, мкг/100 г сырой массы биологического материала) проводят по методу абсолютной калибровки сравнением со стандартом, выбранным в соответствии с хроматограммой экстракта № 2, по формуле:

А2Н_Х

1Н_СтУ_гРК * '

где А — количество стандартного ПХБ, введенного в хроматограф, соответственно нг, мг, мкг; 2//ст — сумма высот трех пиков: IV⁰, V⁰ и VI⁰, мм; £//* — сумма высот пиков с этим же временем удерживания на хроматограмме экстракта № 2 (V², VI², VII²); Р₂— объем аликвоты, введенной в хроматограф, мкл; Vi — объем экстракта, из которого отобрана аликвота, мл; Р — объем пробы воды (л), масса почвы (г), масса биологического материала (г); К — калибровочный коэффициент (см. выше).

Расчет а- и уГХЦГ проводят по формуле (I), так как в состав ПХБ часто не входят изомеры, мешающие определению ГХЦГ.

Расчет содержания п, л'-ДДТ,    л, л'-ДДД + о, л'-ДДТ и

л, л'-ДДЭ (X, мкг/л воды, мг/кг почвы, мкг/г сырой массы биологического материала) проводят по формуле (III):

где для ДДД и ДДТ Л#* представляют собой разность высоты соответствующих пиков на хроматограммах до щелочного дегидрохлорирования (экстракт № 1) и после (экстракт №2) (см. рис. 3); ДН_х для п, л'-ДДЭ — это разность высоты пика со временем удерживания п, л'-ДДЭ и высоты пика с этим же временем удерживания, которую находят следующим образом, используя стандарт ПХБ подходящей концентрации и подходящего типа: на хроматограмме стандартного раствора ПХБ (см. рис. 3) определяют соотношение пиков V⁰ и 111° (делят высоту первого на высоту второго). Затем, используя это соотношение и высоту пика VII¹ на хроматограмме экстракта № 1, находят вклад пика V¹ (III⁰) ПХБ в пик п, л'-ДДЭ; //_Ci—-высота пика пестицида на хроматограмме стандарта, мм.

Отбор проб растительного материала на корню

Максимальная величина поля или партия дли отбора проб	Маге риал	Способ отбора проб*	Величпа средней npoSM или исходного обрами	Подготовка среднего обратив	Величина среднего об рези*, кт
100 га	Злаковые на корню	Зерновы Методы ОШ, 0,5 кг в	3 кг	Зерно отделить, измель-	0,25—0,50
100 га	Кукуруза	точке Семена кормовых культ Методом СС, не менее	пур на корню Початки из 18 рас-	чить, тщательно перемешать и выделить средний образец Зерно отделить, измель-	0,25-0,50
50 га	Боб кормовой	18 растений Методом ПД	тений 1000 бобов	чить и отвесить средний образец То же	0,5—1,0
50 га/30 т	Рапс, сурепица, горчица	Промышленные Метод СС. 0.5 кг в	культуры 3 кг	Семена вышелушить,	0,25
50 га/30 т	Мах масличный	точке Метод СС, 0,5 кг в	3 кг	измельчить, перемешать и отвесить средний образец То же	0,25
50 га/ЭО т	Подсолнечник	точке Метод СС, по 5 корей-	20—30 корзинок	> »	0,25
20 га/30 т	Лен	иок в точке Метод СС	1 кг коробочек	а »	0,25
20 га/30 т	Хмель	Метод ПД, взять нес-	0,30 кг шишек	Шишки измельчить, пе-	0,25
100 га		кольхо шишек		ре мешать и выделить средний образах

3 С- Максимальная М-ЛЯГЯИИ* ПОЛЯ иля партии дли отЛорв проб Материал Способ отбора проб среднее пробм ИДИ ПС ЙОДНОГО OCfMMla Подготовка среднего обрами Вслижая среднего оврага* ■ КГ 50 га/100 т Кормовая свекла, Метод ПД, не менее 15 Нс мсмсс 15 корней. измельчить, перемешать и выделить средний образец Корни вымыть, обсу- 0,5 50 га/100 т брюква Картофель целых растений Метод ПД, с 15 точек нс менее 3 кг Нс менее 3 кг шить, почетвертовать. От каждого взять Ч, часть, четвертинки измельчить, перемешать и отвесить средний образец Клубни вымыть, обсу- 0.5 взять окаю 50 гнезд выборочно шить, с каждого взять патовину или четверть, измельчить и отвесить средний образец Овощные культуры 2—5 га 0,5-0,25 Капустные овощные килтуры 20 га 1 Капуста белая, красная, 1 | Метод ПД, не менее 10 I 4 кг | С каждого кочана взять 1 0.5 савойская растений, не мсисс Ч, часть. Перед из 1 1 4 КГ 1 мельчением четвертинок! Овощные корнеплоды (морковь, петрушка, сельдерей. с толовая свекла, редис, редька и ДР.)

Крупные — 3 кг. мелкие — I кг, ранние —0,25—0,5 кг Метод ПД. корни, а для овощей, используемых в ранний период развития (петрушка, столовая свекла). целые растения

Отбросить несъедобные части растений, остатки материл.'л вымыть, обсушить, крупные овощи почетвертовать и отбросить */,. Пробу измельчить, перемешать и выделить средний образец

---

Me ком***»**» «.«■wi пол* ua imi.tvm дли	Материал	Способ отбор* гроб
отборе Проб
6-10 га	Капуста цветная	Метол Г1Д, нс пенсе 10
		растений, не менее 2 кг
6 га	Капуста кольраби	Метод ПД, не менее 10
		растений, не менее 0,5 кг
Б га	Капуста брюссельская	Метод ПД. учитывая
5 г а		головки, растущие на рваной высоте и равных частях растения, не менее 10 растений
	Лиственные овощи (са-	Метод ПД, не менее
	лат, шпинат, щавель)	10 растений
5 га	Укроп	Метод ПД, только
		листья

Величина средней пробы или исходного обрита*	ПОДГОТОИК* Среднего образца	Иглнчам среднего обрами. кг
	срезать и отбросить поверхность предыдущего среза, отбросить несъедобные листья, измельчить и выделять средний об-
2 КГ	Отбросить иесгедобныс части, остальное измельчить, перемешать и выделить средний образец	0,25
0.75 кг	Отбросить несъедобные части, остальное измельчить, перемешать и выделить средний образец Измельчить, перемешать, выделить с ре..-кнй образец	0.5
Не менее 1 кг		0,25
Салаг —0.5 кг Щавель —0.25 кг	Отбросить несъедобные части, растение вымыть, обчистить, измельчить и выделить средний образец	0.25
0.25 кг	Отбросить непригодные части, измельчить, перемешать и отвесить средний образец	0.25

Максимальна* агляхаа пол* или партии для отбора пров Материал Способ отбора проб Величина средне* пробы или исходного обраацг Оодгогопха среднего образца Пелизина с|*Аиаго образца. кг 5 га Молодой укроп, укроп для посодхи огурцов Метод ПД, целые растения 0,5 КГ Измельчить целые растения, перемешать и отвесить средний об-раэсц 0,25

Луковичные растения

10 га	Лук. чеснок. лух-порсЛ	Метод ПД, в полной зрелости	Лук, лук-порей — 1 кг, чеснок — 0.5 кг	Отбросить несъедобные части, растения измельчить, перемешать и отвесить средний образец. Для лука и лука порея с каждой штуки взять половину
5 г*	Лук-резанец, лук-батуи, лук-порей в ранней стадии развития	Метод ПД. целые растения	Лук, лук-порей — 0.5—I кг, .тук-резанец, лук-батуи— 0,25 кг	То же
5 га	Бобовые овощи (фасоль, горох, боб)	То же	0,5—1 кг бобов	Семена выделить, измельчить и выделить средний образец
50 га	Фасоль «зеленый боб»	> »	0.5 кг	Целые бобы измельчить, перемешать и выделить средний образец
20 г*/30 т	Помнзоры, перси	» 1	Мелкие овощи — 0,5—2 кг, крупные овощи — 2 кг	Овощи вымыть, измельчить и выделить средний образец

ic 3

Максимы) ьи* а велкам* пола ■да партии для отбора проб Материал Способ отбора проб Велктмма средней пробы НАМ исходного Обрами Подготовка среднего обрами Велвчииа среднего обрети» 20 га/500 т Огурец и бахчевые То же 10 овощей, из крупных бахчевых взять вырезки — масса пробы 0,5 — 3 кг Овощи вымыть, измельчить II выделить средний образец. Из крупных бахчевых взять вырезки 0.5 5 га Спаржа > > 0.5 кг Растения вымыть, измельчить и выделить средний образец После удаления листовых пластинок растения вымыть, высушить н выделить средний образец 0.25-0.5 5 га Ревень .Метод ПД. выборочно листья ГриЛы 2 кг (без листовых пластинок) 0.5 Шампиньоны и другие грибы Метод К. руководствуясь правилами сбора грибов Фрукты Не менее 0,5 кг Грибы измельчить, перемешать н отвесить средний образец 0.5 200 га/500 т Семечковые фрукты Ло 30 деревьев — выборочно, свыше 30 деревьев —метод ПД, в зависимости от площади, с 20—30 деревьев. Фрукты следует снимать с разных сторон дерева, с разной высоты и глубины кроны До 30 деревьев — 5 кг. до 1 га — 7 кг, 1—10 га — 10 кг. 10—30 га-12 кг. свыше 30 га — 15 кг Фрукты почетвертовать, от каждого плода взять >/« часть, четвертинки измельчить, перемешать и отвесить средний образец 0.5

П иймяпми

Максимальна* делании* полп или па|гтии ДЛЯ отбора проб Матерям Способ отборе про;, Волями** среди»* пробы или ягодного образца Подготовка среднего образца Ислянйиа среднего образца. кг ДО 200 га/200 т Косточковые фрукты (персики, абрикос ы. сливы) До 30 деревьев — выборочно, свыше 30 деревьев—метод ПД с 15—20 деревьев До 30 деревьев 4 кг. до 1 га —6 кг, свыше 1 га —8 кг Плоды поделить пополам, от каждого взять половину без косточки, измельчить, перемешать и выделить средний образец 0.5 До 200 га/100 т Вишни, черешни, сливы То же До 30 деревьев — 1.5    кг, до 1 га — 2 кг, свыше 1 га— 2.5    кг Косточки удалить, плоды измельчить, перемешать и отвесить средний образец 0.5 Орехи (грецкие, лещина) > » До30 растений 1 кг. свыше 30— 1,5 кг Из орехов вынуть ядра, измельчить их, пере-мешать и отвесить средний образец 0.25-0.5 10 га Ягоды (смородина, крыжоекнх*) До 30 кустов пробу взять с каждого куста с разной его стороны и глубины. свыше 30 кустов-метод СС с 25— 35 кустов До 30 кустов — не менее 1 кг*, свыше 30 кустов — не менее 1,5 кг Из тщательно перемешанного исходного образца взять половину, измельчить се. перемешать и отвесить средний образец 0.5 До 200 га Виноград Метод СС. боковые части кистей 1,5 кг Взять отделенные от основания боковые части кистей, тщательно перемешать исходный образец и взять половину. измельчить ее. перемешать и отвесить средний образец 0.5 До 1 га Мягкие фрукты (клубника. земляника, малина) Метод ПД До 500 м1—1,5 кг, 500 м*—0,25 га-2,5 кг, свыше 0,25 га—2,5 кг Тщательно перемешать исходный Образец, взять патовину, измельчить се, перемешать и отвесить средний образец 0,5

• Дл« ыж' инкхо С крупным! плодами проб* должна Cut», не менее 1,5 кг.

Приложение 2

Отбор проб мяса и внутренних органов убойных животных и проб рыбы

Материал Способ отбора Величии средней пробы или исходного образца Проба Величина среднего обрами, кг Рогатый скот и свиньи Выборочно от 3 животных при партии 100 голов, от 5 животных при партии 100—200 голов, от 7 животных при партии 200—500 голов, от 10 животных при партии боке 500 голов. Берут пробы жира, мышц, внутренних органов От каждой туши по 0,2—0.5 кг Каждый исходный образец составляет исходную пробу 0.2—0.5 Овцы То же От каждой туши по 0.1—0,2 кг То же 0.2—0,5 Домашние птицы > » От каждой тушкн по 50 г » » 0 .1-0,3 Дичь > 1 С оленей 200 г, с кабанов и косуль 100 г. с зайцев 20 г. с ьерна-тых 5 г > » 0.1 -0,3

ПРЕДИСЛОВИЕ

Повышение благосостояния народа всегда находится в центре внимания КПСС. Об этом свидетельствует разработанная в соответствии с решением XXVI съезда партии и одобренная майским (1982 г.) Пленумом ЦК КПСС Продовольственная программа СССР на период до 1990 года. Одной из важнейших задач этой программы является развитие материально-технической базы агропромышленного комплекса, что предусматривает, в частности, расширение производства высокоэффективных средств защиты растений и увеличение их поставки сельскому хозяйству. Более широкое применение химических средств защиты растений позволит получать большую урожайность сельскохозяйственных культур, улучшит качество выращиваемой продукции и условия ее хранения.

Однако если неумело использовать химические средства защиты растений, то остатки пестицидов могут попасть в продукты питания, корма и объекты окружающей среды. Поэтому правильному применению пестицидов в нашей стране, как и вообще охране окружающей среды, уделяется особенно большое внимание. Научно обоснованной программой охраны природы в СССР явились постановления ЦК КПСС и Совета Министров СССР «Об усилении охраны природы и улучшении использования природных ресурсов» (1972 г.) и «О дополнительных мерах по усилению охраны природы и улучшению использования природных ресурсов» (1978 г.), которые директивно обязывают вести контроль за остатками пестицидов в продуктах питания, воде, почве и воздухе. Для предотвращения загрязнения окружающей среды пестицидами введено строгое регламентирование их применения, совершенствуются технология получения и применения пестицидов и препаративные формы их. Одно из обязательных требований, которое позволяет включать пестициды в список препаратов, разрешенных к применению, является разработка методов определения их остатков в продуктах питания, воде, почве и воздухе.

В предлагаемой книге представлены методические указания по определению остаточных количеств пестицидов в различных средах, разработанные спе-циалистами-аналитиками различных министерств и ведомств. В разработке данных указаний принимали участие: Т. Г. Аббасов, В. Д. Агарков, С. Л. Акоронко, Т. В. Алдошина, И. А. Антонова, Ж. А. Арутюнян, Г. У. Аслалян, Э. И. Бабкина, Ю. С. Баранов, Г. А. Бегунов, А. Б. Белова, С. Г. Билуши, Н. П. Бирюков, Ц. И. Бобовникова, 3. Н. Богомолова, М. Ф. Болоховец, К. А. Большакова, Г. С. Борисов, А. М. Ботвиньева, Л. И. Бублик, Г. Т. Брюшнина, Н. В. Букина, А. Л. Бурштейн, А. С. Василенко, Л. В. Васильковская, Р. Д. Васягина, Л. В. Воронин, И. В. Воинова, К. А. Гар, С. Г. Геворкян, В. М. Гезиков, Г. Н. Георгиева, Д. Б. Гиренко, И. Н. Гладенко, Н. И. Глембицкий, В. Е. Горбунова, Р. С. Горенштейн, В. А. Давтян, Э. Б. Данилова, Е. Г. Даурова, В. Ф. Демченко, А. В. Дибцева, Т. А. Евстегнеева, В. В. Егоров, В. В. Ермаков, А. В. Жарков, В. Н. Жуленко, А. Ф. Заболотный, И. Ш. Заманская, А. И. Затула, И. 3. Зисерман. 3. Златьев, А. И. Зорсва, Т. И. Зубко, Л.Н. Ка-вецкая, И. Н. Карпова, У. С. Кашимов, В. И. Кириченко, Н. И. Киселева, М. А. Клисенко, Е. С. Ковалева, А. Ф. Конюхов, В. В. Королев, Ф. И. Копытова, Е. И. Косачева, И. А. Кочеровская, В. И. Кофанов, И. Ш. Кофман, А. Н. Крылова, О. С. Кухтина, В. В. Лещев, Л. И. Лещинская, С. А. Ликунова, А. М. Макеева, О. А. Малинин, И. Н. Матвиенко, И. Л. Меерзон, Ф. Р. Мель-цер, Л. Д. Микадзе, Г. В. Миронюк, Н. А. Мовсетян, В. В. Молочников,

Материл	Способ отбора	Величина средней пробы иди исходного обрами	Проба		Велнчипа среднего обрезай, кг
Яйца	В хозяйстве в ареале отбора проб берется по 10 и 20 яиц с определенных пунктов скупа. На птицефабриках — по 5 яиц из каждой пар-ТИМ	20 ЯИЦ	Каждый исходный образец составляет средний образец		20 яиц
Молоко	Со сливного пункта 500 ил. От коров а определенном хозяйстве по 100 мл молока	500 мл	То же		0.5
Рыба	При массе рыбы менее 0.1 кг берут пробу от нескольких рыб массой 0.5 кг. перемешивают и отбирают среднюю пробу. При массе рыбой	0.5 кг	Среднюю пробу п мают за средни раэец	рини-Й об-	0.5
	0,1—1 кг отбирают целые зкземп-ляры. При массе 1—2 кг берут одну продольную часть лолормны рыбы. При массе свыше 2 кг вырезают образец со средней части рыбы 100-200 г
Икра	От одной партии берут три образца по 100 г с каждой бочки (ящика)	0.1 кг	То же		0.1

Л. П. Моргунова, Г. К. Морина, Ю. Ф. Моряков, В. И. Мочалов, В. И. Мурзой А. А. Непоклонов, И. П. Нестерова, К. Ф. Новикова, Л. В. Новикова, Н. И. Пав лова, Ф. И. Патрашку, К. Н. Пашкевич, С. Д. Павлов, Т. М. Петрова Н. В. Перетолчин, Р. Д. Петухов, М. С. Петросян, А. Л. Перцовский, И. И. Пи лснкова, М. В. Письменная, Т. В. Пластинина, Л. Р. Полищук, В. Н. Полякова Н. Г. Попова, Н. Я. Пестовский, Л. С. Прииутина, IO. А. Присмотров Н. В. Птицина, У. Ф. Пулатов, Г. Г1. Пушкина, Б. А. Рехтер, Л. Д. Рузанкова И. И. Ряженов, П. А. Самгин, Э. О. Сахкалян, В. А. Силаев, М. А. Стемпков ская, Л. С. Самосват, Л. А. Смирнова, А. А. Сиверина, Л. К. Слепова Ж. С. Степанян, Н. Г. Стеланченко, В. В. Стеценко, Г. А. Таланов, С. М. Ти хомиров, Г. А. Трондина, Г. П. Угрюмова, А. Д. Фатьянова, Ь. Ф. Филимонов М. М. Филимонова, Л. А. Хилик, Л. И. Хлюпнна, В. Д. Чмиль, Д. И. Чканни ков, Л. Д. Чудакова, Э. П. Чурпий, Н. И. Шадрин, А. М. Шмигидина А. И. Шумкова, 3. Ф. Юркова.

Методические указания апробированы группой экспертов при Госкомнссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Министерства сельского хозяйства СССР, одобрены лабораторным советом при Министерстве здравоохранения СССР и утверждены заместителем Главного государственного санитарного врача СССР в качестве официальных.

Методические указания предназначены для контроля за содержанием остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктах, кормах, объектах окружающей среды агрохимическими, ветеринарными, контрольно-токсикологическими лабораториями Министерства сельского хозяйства СССР, санитарно-эпидемиологическими станциями и научно-исследовательскими институтами Министерства здравоохранения СССР, лабораториями Госкомгидромета СССР, а также лабораториями научно-исследовательских институтов других министерств и ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Утверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР

А. И. Зайченко 18.11.1977 Хя 1792

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ХЛОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ И ПОЛИХЛОРИРОВАННЫХ БИФЕНИЛОВ ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ОБЪЕКТАХ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ И БИОМАТЕРИАЛЕ ¹

Настоящие методические указания распространяются на определение содержания хлороргаиическнх пестицидов (ХОП) и полихлорированных бифенилов (ПХБ) при их совместном присутствии в объектах внешней среды (воде, почве) и биоматериале (рыбе).

Краткая характеристика препарата. Полихлорированные бифенилы (ПХБ), полихлорированные нафталины (ПХН) и полихлорированные

4. Содержание хлора в полихлорированных бифенилах

Пестицид Среднее содержание хлора, % Арохлоры Хлофсны Канехлоры Фенохлоры 32 1232 А-30 КС-200 42 1242 А-40 КС-300 ПХБ 48 1248 Д-50 КС-400 ДР-4 54 1254 КС-500 G0 1260 А-60 КС-600 ДР-6 и т. д ПХТ 544? 5460 ПХН Г аловяксы 1014 1099

терфенилы (ПХТ) не представляют собой индивидуальных веществ, а используются в промышленности для разных целей в виде смесей отдельных изомеров, характеризуемых различным содержанием хлора, имеющих определенные названия (табл. 4). Это маслообразные жидкости, вязкость которых увеличивается со степенью хлорирования.

В СССР известны смеси ПХБ с ПХН (совол) и ПХБ с трнхлорбензолами (совтол).

В таблице 5 приведены физико-химические свойства разных марок арохло-ров (ПХБ) и пара-изомера ДДТ. В связи с тем, что каждая марка (тип) ПХБ —это смесь отдельных веществ, на хроматограмме ПХБ регистрируются в виде набора пиков. В зависимости от разделительной способности колонки, ее длины и условий хроматографирования число этих пиков может достигать нескольких десятков.

5. Физико-химические свойства и состав ПХБ и ДДТ

Марка арохлора Характеристика свойств 1224 124S 1254 1260 п, л'-ДДТ Содержание компонетов хлорированных бифенилов, %: монохлор- 3 — — — дихлор- 13 2 — — трихлор- 28 18 — — тетрахлор- 30 40 11 — пентахлор- 22 36 49 12 гексахлор — 4 34 38 гептахлор- — — 6 41 октахлор- — — — 8 нанохлор- — — — 1 Среднее количество хло- ра в молекуле 3,1 3,9 4,9 6,3 5,0 Средняя молекулярная 262 352 масса 288 324 370 Растворимость в воде при 20°С, мкг/л 200 100 50 25 о о Давление пара, мм рт. ст.: при 2СГС МО"4 3 -Ю"5 з.б-ю-в — 1,5.10-’ при 38°С 1 • 10“" 3,7-10“4 6-10“* 2,7-10“7 2*10“5

Методика определения хл орорг аничес к их пестицидов и полихлорбифеннлов при совместном присутствии в объектах внешней среды. Основные положения. Принцип метода. В основу метода положено использование различной устойчивости ПХБ и ХОП к действию щелочи в спиртовой среде, а также различного отношения ХОП и ПХБ к сорбенту — двуокиси кремния для люминофоров. При действии спиртовой щелочи при нагревании п, n'-ДДТ превращается в п, п'-ДДЭ; п, п'-ДДД — в соответствующий олефин; о, п'-ДДТ — в о, п'-ДДЭ и т. д., в то время как ПХБ остаются неизменными.

Таким образом, при сравнении хроматограмм экстрактов до обработки спиртовой щелочью и после обработки ее по разности высот соответствующих пиков определяют количество ПХБ и ХОП, а по оставшимся независимым от превращенных ХОП пикам (рис. 2, 3) определяют количество ПХБ.

После последующей обработки хромовым ангидридом в ледяной уксусной кислоте ХОП удаляют полностью (соответствующие олефины также), в то время как ПХБ остаются неизменными. Данный прием часто является един-

идентификации и количественного определения ПХБ, если речь идет о малохлорнроваи-ных ПХБ, например ТХД или хлофене А-30 (арохлор 1232).

Метрологическая характеристика метода. Пределы обнаружения ХОП и ПХБ при совместном присутствии равны соответственно: в воде— 0.01—0,06 и 0,30 мкг/л, в почве —0,2— 6,0 и 30 мкг/кг, в рыбе — по 0,6 мкг/г рыбьего жира.

Среднее значение степени определения стандартных количеств препаратов из шести параллельных определений, %: в воде—90±5, в почве—80± 10, в рыбе 75± 10.

Реактивы и растворы. Для разделения на хроматографической колонке: гексан х. ч., ацетон х. ч., метилен хлористый, эфир петролейный (т. кии. 35— 55°С), эфир диэтиловый. Все указанные растворители должны быть хро.матогра-

Рис. 3.

Л — хроматограммы экстракта Nt 1 (а), экстракта Л» 2 (б); Б — хроматограмма стандартного раствора ПХБ (хлорофен Л-50,    I мкг/мл.

объем пробы 2 мкл); В — хроматограммы стандартного    раствора

ХОГ1 до дегилрохлориропания (а) н после дегидрохлорирования (б). Л. п. — сложный» пик хроматографической системы.

фически чистыми. Для проверки чистоты 100 мл растворителя упаривают до 1— 2 мл и 4—6 мкл полученного концентрата вводят в хроматограф. На хроматограмме не должно быть посторонних пиков.

Кремний (IV)—окись для люминофоров. Реактив просеивают через сито с отверстиями размером 0,2 мм (70—90 меш). 100 г сорбента помещают в фарфоровую чашку и в течение 7 ч выдерживают в сушильном шкафу при 130°С. Сорбент охлаждают в эксикаторе над Р₂С>5, после чего пересыпают в круглодонную колбу на 500 мл с притертой пробкой (колба № 1), которую хранят в эксикаторе без осушающего агента. В другую колбу (jYs 2) быстро отвешивают 48 г охлажденного сорбента (из колбы jY® 1), затем с помощью пипетки очень аккуратно по стенкам колбы 2 приливают 0,2 мл дистиллированной воды. Колбу закрывают притертой пробкой и тщательно встряхивают в течение 10—15 мин (до исчезновения комков). Колбу № 2 также хранят в эксикаторе без осушающего агента. Увлажненный сорбент используют не более 4— 5 дней.

Натрий бикарбонат х. ч. Натрий сернокислый безводный, х. ч. Натрий хлористый х. ч. Кали едкое х. ч. Дистиллированная вода, проэкстрагированная гексаном. Кислота серная концентрированная, х. ч. Кислота уксусная ледяная, х. ч. Хромовый ангидрид х. ч. Спирт этиловый ректификат.

Окисляющий реагент: 9 г хромового ангидрида растворяют в 6 мл дистиллированной воды, смешивают с 300 мл ледяной уксусной кислоты.

Экстракты всех реактивов также должны быть проверены на хроматографическую чистоту. Для этого 50 г реактива экстрагируют 70—100 мл гексана, гексановый экстракт упаривают до 1—2 мл, 2—10 мкл полученного раствора вводят в хроматограф

Стандартные растворы в гексане: ХОП — основные растворы, содержащие а-, у-ГХЦГ и гептахлора по 1 мг/мл и 10 мкг/мл, ДДТ, ДДД и ДДЭ по 2 мг/мл и 20 мкг/мл; рабочий раствор, содержащий а-, у-ГХЦГ и гептахлора по 0,10—0,05 мкг/мл, ДДТ, ДДД и ДДЭ по 0,20 мкг/мл; ПХБ — основной раствор, содержащий: ТХД и совол — 1 мг/мл, хлофен Л-50— 100 мкг/мл; рабочий раствор, содержащий ТХД и хлофен А-50 по 2 мкг/мл, совол 10 мкг/мл. Основные растворы хранят в холодильнике в колбочках с хорошо притертыми пробками в течение года и более. Рабочие растворы готовят по мере надобности — раз в 2—3 месяца. Вне рабочего времени рабочие растворы также хранят в холодильнике, чтобы не испарялся гексан и не изменялась концентрация рабочего раствора.

Наполнитель газохроматографнческой колонки — инертный носитель хрома-тон-N-AW DMCS с частицами размером 0,125—0,160, 0,16—0,20 мм или хрома-toh-N-AW HMDS с частицами размером 0,16—0,20 мм. Жидкая фаза — SE-30 (5%). ХЕ-60 (или OV-17) (5%).

Приборы и посуда. Газовые хроматографы типа «Цвет», «Газохром», ХЛ-8МДП, снабженные ДПР или ДЭЗ. Мнкроизмельчитель тканей. Ротационный испаритель ИР-1 или другой прибор для концентрирования в вакууме. Насос водоструйный. Шкаф сушильный. Баня водяная. Аппарат для встряхивания АВУ-1. Центрифуга ЦЛС-3. Колонка стеклянная газохроматографическая 1; 2 или 1,5 мХЗ мм. Колонка для хроматографии стеклянная, рабочая длина 30см, внутренний диаметр 10 мм. Колонка снабжена капельницей и фильтром. Мик-рошпрнцы. Колбы конические емкостью 300, 250, 100, 50 и 10—15 мл на шлифах. Холодильники Либиха на шлифах. Чашки фарфоровые. Воронки делитель-вые на 2 л, 250, 100 и 50 мл. Воронки химические диаметром 4 и 8 см. Пипетки на 2 мл, микропипетки на 0,2 мл. Колбы мерные с притертыми пробками на 100 и 50 мл. Термометр химический до 100°С. Пробирки градуированные на шлифах емкостью 10, 20 мл. Цилиндры мерные на 100 и 50 мл. Эксикатор Стакан-бюкс с притертой пробкой. Химические стаканы на 400, 100 и 50 мл. Фильтры бумажные с красной лентой, промытые гексаном. Вата обезжиренная (промытая днэтиловым эфиром). Исключается пользование пластмассовой посудой и хранение в ней реактивов.

Ход анализа. Э к с т р а к ц и я [3] воды. Анализируемый образец воды (2 л) помещают в 2-лнтровую делительную воронку и добавляют туда же 10—15 г хлористого натрия. Стеклянные бутыли из-под пробы воды встряхивают с 15 мл ацетона, затем с 75 мл гексана в течение 10 мин, чтобы десор-

бировать ХОП и ПХБ со стенок стеклянного сосуда. Вместо гексана для экстракции можно использовать петролейный эфир с т. кип. 38—55°С.

Эти порции ацетона (15 мл) и гексана (75 мл) переносят в делительную воронку с образцом воды и содержимое встряхивают в течение 10—15 мин. В случае сильного встряхивания возможно образование стойкой эмульсин, препятствующей разделению слоев гексана и воды. После разделения слоев гексановый слой переносят в колбу для сбора экстракта, фильтруя его через безводный сернокислый натрий. Образец воды снова переносят в делительную воронку и экстрагируют еще 2 раза по 10 мин гексаном (или петролейным эфиром) порциями по 50 мл, фильтруя каждый раз через сернокислый натрий. Слои сернокислого натрия промывают 10 мл гексана или петроленного эфира и отжимают стеклянной пробкой. Объединенные гексановые экстракты помещают в аппарат для отгонки гексана в вакууме и отгоняют гексан (или петролейный эфир) до объема 3—5 мл.

Экстракция почвы. Воздушно-сухую почву (10 г), отобранную методом квартования, помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 20 мл дистиллированной воды и оставляют закрытую колбу на сутки. Затем к увлажненной почве приливают 10 мл ацетона и 40 мл гексана или петроленного эфира (т. кип. 38—55°С). Смесь энергично встряхивают на аппарате для встряхивания или вручную в течение часа. Далее содержимое колбочек переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют в течение 15 мин (2000 об/мин) и декантируют жидкую часть в делительную воронку на 500 мл.

Почву из центрифужной пробирки обмывают 10 мл гексана (петролейного эфира), полученный раствор соединяют с экстрактом. К содержимому делительной воронки добавляют 30 мл дистиллированной воды, встряхивают I— 2 мин, водно-ацетоновый слой сливают в стакан, гексановый фильтруют через сернокислый натрий, как описано выше, в колбу для сбора экстракта. Водноацетоновый слой переносят в делительную воронку и экстрагируют гексаном (петролейным эфиром) порциями 10 и б—5 мл. Объединенные экстракты концентрируют, как описано выше.

Экстракция рыбы. Навеску рыбы (10 г) гомогенизируют в мнкроиз-мельчнтеле тканей в течение 5 мин в смеси 20 мл ацетона и 10 мл гексана. После этого сосуд с гомогенатом помещают в центрифугу, центрифугируют в течение 15 мин (3000 об/мин) и жидкую часть сливают в делительную воронку на 250 мл. Если есть необходимость, жидкую часть фильтруют через вискозный или пористый стеклянный фильтр под давлением азота, фильтр промывают смесью 5 мл гексана и 1 мл этилового эфира. К остатку биологического материала в сосуде добавляют 20 мл гексана и 2 мл днэтилового эфира, гомогенизируют в течение 5 мин, центрифугируют, жидкую часть присоединяют к первой порции, остаток в сосуде промывают смесью 10 мл гексана и 1 мл этилового эфира.

К объединенным экстрактам в делительную воронку добавляют 60 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия и содержимое встряхивают в течение 2—5 мин. Отделяют гексановый слой, водно-ацетоновый экстрагируют еще двумя порциями по 10 мл гексана. Гексановый слой сушат, фильтруя через сернокислый натрий, концентрируют до полного испарения гексана и постоянной массы жира (липидов, восков и т. д.), к жиру добавляют 3—5 мл гексана.

Очистка экстрактов кислотой [3]. Концентрированный экстракт (3—5 мл) помещают в делительную воронку, добавляют 5—7 мл концентрированной серной кислоты и содержимое осторожно встряхивают 5—10 раз. После разделения слоев нижний слой отработанной серной кислоты сливают. Очистку повторяют до получения бесцветного слоя серной кислоты. Очищенный экстракт промывают двумя порциями по 5 мл 1%-ного раствора бикарбоната натрия, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод. Отмытый экстракт сушат, фильтруя через сернокислый натрий (10—15 г), слой осушителя тщательно промывают 3—7 мл гексана н отжимают стеклянной пробкой. Высушенный экстракт испаряют на воздухе или под слабым током воздуха до объема 2—4 мл при комнатной температуре.

Отделение ПХБ от ХОП на хроматографической колонке [1]. Очищенный и упаренный до 2 мл экстракт количественно переносят в хроматографическую колонку, подготовленную следующим образом: на пори-

стый фильтр колонки с помощью пинцета и стеклянной палочки помещают небольшой тампон из обезжиренной ваты. В небольшой химический стакан помещают 5 г подготовленного сорбента, сразу же добавляют гексан в таком количестве, чтобы он полностью покрыл сорбент. Полученную массу быстро перемешивают и переносят в колонку с открытым краном. Образовавшиеся пузырьки воздуха удаляют стеклянной палочкой. Избыток растворителя сливают до уровня, на 3 мм превышающего поверхность сорбента.

Кран закрывают, в колонку вносят подготовленный экстракт. Дают возможность пробе полностью впитаться в сорбент. После того как растворитель достигнет уровня, на 3 мм превышающего слой сорбента, начинают добавлять из капельницы над колонкой небольшими порциями петроленный эфир. Для элюирования ПХБ достаточно 35 мл петролейного эфира (фракция Хя 1). После того как уровень петролейного эфира на 3 мм превысит уровень сорбента, кран закрывают и меняют приемную колбу. Затем вновь открывают кран и при помощи капельницы небольшими порциями добавляют 40 мл смеси (4:1) хлористого метилена и гексана (фракция Хя 2). Элюирование проводят до полного осушения колонки.

Фракции № 1 и Хя 2 сушат сернокислым натрием, переносят в круглодонные колбы и растворители испаряют в вакууме ротационного испарителя, как описано выше. Остаток 1—2 мл от каждой фракции переносят в отдельные пробирки с притертыми пробками и 4—6 мкл каждого вводят в хроматограф, определяя в первой фракции ПХБ, во второй фракции ХОП, как описано далее.

Щелочное дегидрохлорирование [3]. Очищенный серной кислотой гексановый экстракт доводят до объема 4 мл. Из этих 4 мл 2 мл (экстракт № 1) оставляют для хроматографирования, другие 2 мл, т. е. экстракт № 2, подвергают щелочному дегидрохлорированию. Для этого 2 мл экстракта Хя 2 помещают в коническую колбочку объемом 20—30 мл, добавляют 0,4-—0,5 г плавленого едкого кали (четыре «лепешки»), 2 мл этилового спирта, присоединяют обратный водяной холодильник и смесь нагревают при перемешивании на магнитной мешалке при 50—55°С в течение 30 мин (с момента растворения щелочи). Необходимо обеспечить хороший ток воды в холодильнике, чтобы избежать испарения гексана.

После охлаждения смеси холодильник снимают, шлиф н внутреннюю часть холодильника промывают 2—4 мл гексана в колбочку. Содержимое колбы переносят в делительную воронку, а колбочку споласкивают 2 мл гексана, присоединяя его к порции в делительной воронке. К смеси в делительной воронке добавляют 4—6 мл воды для разрушения однофазности системы, осторожно перемешивают, гексановый слой отделяют, а водно-спиртовой слой экстрагируют 2—4 мл гексана.

Объединенные гексановые экстракты промывают дважды по 2 мл 1%-ной серной кислотой, а затем дистиллированной водой до нейтральной реакции про-мызных вод, сушат сернокислым натрием, как описано выше, концентрируют до 1—0,5 мл. Затем аликвоты экстрактов N* 1 и К? 2 последовательно вводят в хроматограф и после сравнения полученных хроматограмм друг с другом и с хроматограммами стандартов рассчитывают количества ХОП и ПХБ.

Окисление хромовым ангидридом [2]. Когда используют окисление, остатки растворителя экстракта Хя 2 отдувают струей воздуха. К сухому остатку добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты и 20 мл окисляющего реагента. Сосуд, в котором проходило концентрирование, с добавленными реактивами присоединяют к обратному холодильнику и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 45 мин.

После охлаждения холодильник смывают дважды гексаном порциями по 3 мл и переносят содержимое концентратора в делительную воронку, содержащую 100 мл 2%-ного раствора едкого кали. Концентратор смывают двумя порциями гексана, присоединяя раствор к первым порциям. Содержимое воронки перемешивают 2—3 мин, водный слой затем дополнительно экстрагируют еше дважды гексаном по 30 мл. Объединенные гексановые экстракты подвергают сернокислотной очистке и промывают дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод. Экстракт концентрируют, как описано выше, до 1—2 мл.

1

Методические указания разработаны:

1)    Ф. Р. Мельцер, К. Ф. Новиковой (ВНИИХСЗР);

2)    В. Ф. Д е м ч е н к о, М. А. К л и с е н к о, В. И. К о ф а и о в ы м (ВНИИГИНТОКС, ИКХХВ АН УССР);

3)    Э. И. Бабкиной, Г. В. Мнронюк, А. В. Дибцевой (ИЭМ).