Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

31 страница

456.00 ₽

Купить ГОСТ Р 57163-2016 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на природные пресные и морские воды, включая воды эстуариев, сточные воды (в том числе очищенные) с минерализацией от 0 до 33 г/дм в степени 3, а также на водные вытяжки объектов исследования: буровые растворы, донные отложения, твердые промышленные отходы, грунты и водные растворы растворимых веществ. Устанавливает определение, перечисленных выше объектов, токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб вида Poecilia reticulata Peters (далее - тест-организмов) после лабораторного биологического тестирования (далее - тестирование) следующими методами: - по выживаемости тест-организмов при тестировании в пресной воде в условиях переменного воздействия света и постоянной температуры (метод А); - по выживаемости тест-организмов при тестировании в морской воде в условиях переменного воздействия света и постоянной температуры (метод Б). Методы позволяют определять токсичность исследуемых объектов и следующие токсикологические показатели (относительно контрольной пробы): - среднюю летальную кратность разбавления (ЛКР с индексом 50) пробы, вызывающую гибель 50 % тест-организмов, а также безвредную кратность разбавления пробы (ЛКР с индексом 10), вызывающую отклонение тест-параметра - выживаемости - за 96 ч тестирования не более 10 % от контрольных значений (методы А и Б); - среднюю летальную концентрацию (ЛК с индексом 50) растворов веществ, вызывающую гибель 50 % тест-организмов, и безвредную концентрацию (ЛК с индексом 10) растворов веществ, вызывающую отклонение тест-параметра - выживаемости за 96 ч тестирования не более 10 % от контрольных значений (методы А и Б); При определении токсичности анализируемых объектов с минерализацией выше 20,0 г/дм в степени 3 тестирование проводят после адаптации тест-организмов согласно Б.4.2 (приложение Б).

 Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Отбор проб

5 Метод А. Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata Peters в пресной воде (Cyprinodontiformes, Pisces)

6 Метод Б. Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata Peters в морской воде (Cyprinodontiformes, Pisces)

Приложение А (рекомендуемое) Примеры определения средней летальной концентрации (разбавления)

Приложение Б (обязательное) Методы культивирования тест-организмов

Приложение В (рекомендуемое) Приготовление культивационной воды для выращивания Poecilia reticulata Peters (методы А и Б)

Приложение Г (рекомендуемое) Примеры приготовления анализируемых растворов веществ и разбавлений сточной воды

Библиография

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

ГОСТР

57163—

2016

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ВОДА

Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata Peters в пресной и морской воде

Издание официальное


Москва

Стамдартинформ

2016


Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии» совместно с ООО «Протектор»

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 343 «Качество воды»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 октября 2016 г. № 1411 -ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. № 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указалюле «Национальные стандарты». а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стандартинформ, 2016

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Примечание — Если тестируют буровые растворы, которые сбрасывают в морскую среду, то тогда водную вытяжку из них готовят на искусственной или природной морской воде (приложение В) соответствующей минерализации.

б)    Подготовка водных вытяжек из проб твердых промышленных отходов

Перед приготовлением водной вытяжки из твердых промышленных отходов отобранную пробу твердых промышленных отходов разрыхляют и тщательно осматривают. В случае обнаружения частиц размером более 10 мм их измельчают с помощью металлического шпателя до размера менее 10 мм. Не допускается измельчать смесь с помощью механизированных устройств.

Измельченную пробу отходов высушивают при температуре (20 г 5) °С до воздушно-сухого состояния в вытяжном шкафу или в хорошо проветриваемом помещении.

Водную вытяжку из высушенной пробы отходов готовят в соотношении 1:10 (твердые промышленные отходы и культивационная вода, соответственно) следующим способом:

В емкость вместимостью 1500 см3 вносят 100 г сухой массы пробы твердых промышленных отходов. добавляют 1000 см3 дистиллированной воды (см. 5.2) и перемешивают в течение 6—7 ч с использованием магнитной мешалки (или орбитального шейкера) с минимальной скоростью перемешивания, при которой проба твердых промышленных отходов поддерживается во взвешенном состоянии.

Примечание — Для приготовления 900 см3 водной вытяжки обычно требуется 100 г сухой массы пробы отходов.

После окончания перемешивания смесь выдерживают при температуре от 0 °С до 4 °С в течение 12—14 ч, затем жидкость над осадком осторожно переливают в другую колбу, после чего используют ее для подготовки анализируемой пробы.

Примечание — Жидкие промышленные отходы и отходы, содержащие менее 1 % взвешенного материала. фильтруют через фильтр «синяя лента», а затем тестируют без разбавления, а также при разбавлениях в 10. 100. 1000 и 10000 раз.

Допускается хранение подготовленных водных вытяжек из твердых промышленных отходов при температуре от 0 °С до 4 °С не более 48 ч.

Примечание — Если тестируют твердые промышленные отходы, которые сбрасывают в морскую среду, то тогда водные вытяжки из них готовят на искусственной или природной морской воде (приложение В) соответствующей минерализации.

в)    Подготовка водных вытяжек из проб донных отложений

Перед приготовлением водной вытяжки из донных отложений отобранную пробу донных отложений высушивают при температуре (20 = 5) °С до воздушно-сухого состояния, удаляют остатки растений. камешки и т. п., затем измельчают в ступке и просеивают через сито с отверстиями диаметром

1    мм.

После просеивания навеску пробы донных отложений вносят в емкость и заливают дистиллированной водой (см. 5.2) в соотношении 1:4 по объему, перемешивают с использованием орбитального шейкера (или качалки-мешалки) в течение 2 ч. После окончания перемешивания смесь выдерживают в течение 1 ч при температуре (20 г 5) °С, а затем в течение 12—14 ч выдерживают при температуре от

2    °С до 4 °С. Затем жидкость над осадком осторожно переливают в другую емкость и фильтруют, после чего используют для подготовки анализируемой пробы.

Объем водной вытяжки пробы для определения токсичности должен быть не менее 30 дм3.

Допускается хранение подготовленных водных вытяжек донных отложений при температуре от 2 °С до 4 °С не более 72 ч.

Примечание — При тестировании проб донных отложений, которые отбирались в морской среде, то тогда водные вытяжки из них готовят на искусственной или природной морской воде (приложение В) соответствующей минерализации (району исследования, откуда отбирались пробы).

г)    Подготовка водных вытяжек из проб грунтов

Перед приготовлением водной вытяжки из пробы грунта отобранную пробу грунта подготавливают в соответствии с требованиями ГОСТ 30416, ГОСТ 27753.2.

Водную вытяжку из пробы грунта готовят следующим способом:

В стеклянную емкость вместимостью 1000 см3 вносят 100 г высушенной подготовленной пробы грунта, заливают дистиллированной водой (см. 5.2) в соотношении 1:4 по объему и перемешивают с использованием орбитального шейкера (или качалки-мешалки) в течение 2 ч.

После окончания перемешивания смесь выдерживают при температуре (20 : 5) °С в течение 30 мин. затем жидкость над осадком осторожно переливают в другую емкость и фильтруют. 1

ГОСТ P 57163—2016

Оставшуюся часть осадка в емкости встряхивают до взмучивания взвешенных частиц пробы и фильтруют через обеззоленные фильтры «белая лента» с применением вакуумного водяного (или электрического) насоса при вакууме не более 2666.5 Па (20 мм рт. ст.). При этом, если первые порции фильтрата будут мутными, то их несколько раз фильтруют через новый фильтр до получения прозрачного раствора.

Полученные фильтраты объединяют, после чего используют для подготовки анализируемой пробы.

Примечание — При наличии повышенной мутности отфильтрованных водных вытяжек их выдерживают при температуре 0 3С—4 “С в течение 24 ч. затем жидкость над осадком осторожно переливают в другую емкость, фильтруют и только после этого используют для приготовления анализируемой пробы.

Объем водной вытяжки пробы для определения токсичности должен быть не менее 30 дм3.

Допускается хранение подготовленных водных вытяжек из грунтов при температуре от 0 *С до 4 °С не более 72 ч.

Примечание — При тестировании проб грунтов, которые отбирались в морской среде, водные вытяжки из них готовят на искусственной или природной морской воде (приложение В) соответствующей минерализации.

5.3.3.4    Подготовка исходных растворов веществ

Исходные растворы веществ готовят в стеклянной мерной емкости путем растворения определенного количества исследуемой пробы вещества в определенном объеме дистиллированной воды.

Исходные растворы веществ готовят непосредственно перед их тестированием, при этом, если известно, что вещества стабильны в растворе, исходные растворы допускается готовить заранее, но не более чем за 2 сут до тестирования.

Примечания

1    Для веществ, трудно растворимых в воде, при приготовлении их исходных растворов могут бы тъ использованы ультразвуковые или другие устройства (шейкеры) для облегчения растворимости или диспергировании веществ.

2    Допускается использовать органические растворители, обладающие малой токсичностью в отношении тест-организмов (например, ацетон), при условии, что обьем растворителя в 1 дм3 анализируемой пробы не превышает 0.1 см3, при этом параллельно сословным тестированием проводят два контрольных тестирования, одно без растворителя и другое — с максимальной концентрацией растворителя.

Для приготовления исходного раствора вещества заданной концентрации невозможно рекомендовать какую-либо единую методику. Например, используют следующую процедуру: в мерную емкость вместимостью 1000 см3 вносят 10 г вещества (или другое его количество, в зависимости от заданной концентрации раствора). Затем осторожно добавляют небольшое количество дистиллированной воды (см. 5.2) и перемешивают до полного растворения вещества. Содержимое емкости доводят до метки дистиллированной водой, снова перемешивают и маркируют. Перед тестированием приготовленный раствор выдерживают при температуре (20 : 5) °С не менее 2 ч.

Измеряют pH в исходном растворе вещества.

Примечание — При тестировании веществ, которые поступают в морские водоемы, исходные растворы данных веществ готовят на искусственной или природной морской воде (приложение В) соответствующей минерализации.

5.3.3.5    Исходные пробы (см. 5.3.3.1—5.3.3.3) и исходные растворы веществ (см. 5.3.3.4) должны иметь следующие характеристики:

а)    Значение pH (7,0—8,3) ед. pH;

При тестировании проб природной и питьевой воды и других природных объектов, а также исходных растворов веществ регулирование значений pH не допускается.

При необходимости допускается регулирование значений pH исходных буровых растворов.

б)    Концентрация растворенного кислорода не менее 4 мг • О^дм3.

Если концентрация растворенного кислорода исходной пробы менее указанного значения, то пробу аэрируют при помощи аквариумного компрессора.

в)    Минерализация не выше 3,0 г/дм3 .

г)    Жесткость от 2.8 до 4.0 мг-экв/л.

5.3.3.6    Подготовка анализируемых проб

Анализируемой пробой природной воды является подготовленная по 5.3.3.1 исходная проба природной воды.

Анализируемые пробы сточной воды для тестирования (см. 5.3.3.2) готовят согласно Г.2 (приложение Г). 2

Анализируемые пробы буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений и грунтов для тестирования готовят из их водных вытяжек (см. 5.3.3.3) путем разбавления водных вытяжек культивационной водой по В.1 или В.2 (приложение В), аналогично анализируемой пробе сточной воды, см. Г.2 (приложение Г)

Анализируемые пробы веществ для тестирования готовят следующим способом: в емкости вместимостью не менее 5 дм3 вносят по 5 дм3 воды для разбавлений (см. таблицу Г. 1) и исходного раствора вещества (см. 5.3.3.4 и таблицу Г.1. приложение Г), для получения заданных концентраций вещества, отвечающих требованиям, установленным в 5.3.3.5.

Примечание — При подготовке анализируемых проб (разбавлений, концентраций), предназначенных для тестирования в морской среде, исходные растворы веществ и водные вытяжки разбавляют искусственной или природной морской водой (приложение В) соответствующей минерализации.

5.3.3.7 Измеряют и регистрируют pH анализируемой пробы.

5.3.4    Подготовку тест-организмов к тестированию проводят в соответствии с требованиями Б.2 (приложение Б) с учетом требований 5.3.2.

5.4    Проведение тестирования

Тестирование проводят в два этапа: предварительное и окончательное.

Примечание — Тестирование проб природной воды проводят без предварительного тестирования.

5.4.1    Предварительное тестирование

Предварительное тестирование проводят для установления диапазона разбавлений (концентраций) проб, в пределах которого необходимо провести окончательное тестирование для определения значения 96 ч ЛКР50 или 96 ч ЛКэд. в зависимости от анализируемых проб.

При предварительном тестировании исследуют широкую область разбавлений (не менее пяти) сточных вод. водных вытяжек и концентраций растворов вещества, выбираемых в геометрической прогрессии, при этом используют коэффициент 10 между разбавлениями (концентрациями).

При предварительном тестировании применяют не менее двух емкостей на каждую заданную кратность разбавления (концентрацию) анализируемой и контрольной пробы, при этом используют не менее 20 экземпляров тест-организмов.

Процедура тестирования — по 5.4.3.

Пример проведения предварительного тестирования и установления диапазона концентраций вещества, в пределах которого необходимо проводить окончательное тестирование, приведен в приложении А (А.3.1).

5.4.2    Окончательное тестирование

По результатам предварительного тестирования (см. 5.4.1) по установлению диапазона разбавлений (концентраций) подготавливают анализируемые пробы для окончательного тестирования аналогично подготовке анализируемых проб по 5.3.3.6 для тестирования, но с использованием коэффициента между разбавлениями (концентрациями), как правило, 2.0 или 2.5.

Для окончательного тестирования используют не менее пяти разбавлений (концентраций) анализируемых проб, при этом кратность разбавления (концентрации) проб необходимо, по возможности, подбирать, основываясь на результатах предварительного тестирования, таким образом, чтобы обеспечить два уровня снижения выживаемости тест-организмов, ниже и выше предполагаемого значения ЛКэд (ЛКР50).

Для окончательного тестирования применяют не менее трех емкостей на каждую заданную кратность разбавления (концентрацию) анализируемой и контрольной пробы, при этом используют не менее 30 экземпляров тест-организмов.

Процедура тестирования — по 5.4.3.

Пример проведения окончательного тестирования и установления значения средней летальной концентрации 96 ч ЛК50 для вещества приведен в приложение А (А.3.2).

Примечание — Исходя из статистических данных, схема тестирования может быть изменена, например уменьшено количество емкостей с анализируемыми пробами для каждого разбавления (концентрации) за счет увеличения количества тестируемых разбавлений (концентраций) пробы и сокращения коэффициента между разбавлениями (концентрациями) анализируемой пробы.

5.4.3    Процедура тестирования

5.4.3.1 В каждую емкость вместимостью не менее 5 дм3, вносят по 5 дм3 анализируемой пробы (разбавлений, концентраций), затем в каждую емкость помещают по 10 шт. суточных тест-организмов.

Ю

ГОСТ P 57163—2016

5.4.3.2    Для каждой анализируемой пробы (разбавлений, концентраций) подготавливают контрольную пробу следующим способом: в емкости вместимостью не менее 5 дм3 вносят по 5 дм3 культивационной воды по В 1 (приложение В) и помещают по 10 шт. суточных тест-организмов.

При тестировании используют по три емкости для каждой концентрации вещества (разбавления водной вытяжки) и контрольной пробы.

Примечание — Плотность посадки тест-организмов — 1 шт. на 0.5 дм3.

5.4.3.3    Тестирование проводят в течение 96 ч (см. 5.1) в аквариальной (помещении) при температуре (25 г 2) °С и попеременном воздействии света и темноты:

-    16 ч — при равномерном белом освещении в диапазоне от 500 до 1000 лк.

-8ч — при отсутствии освещения.

5.4.3.4    Через каждые 24 ч тестирования подсчитывают количество выживших тест-организмов в каждой емкости (включая контрольную).

5.4.3.5    После окончания тестирования:

-    измеряют pH в каждой емкости с анализируемой и контрольной пробой;

-    измеряют количество растворенного кислорода в каждой емкости с анализируемой и контрольной пробой;

-    визуально осматривают в каждой емкости состояние тест-организмов.

Любые обнаруженные отклонения регистрируют.

5.4.4 Результаты тестирования считают достоверными, если соблюдаются следующие условия:

а)    гибель тест-организмов в контрольной пробе в конце тестирования не должна превышать

10%;

б)    ЛК50 за 24 ч модельного токсиканта двухромовокислого калия находится в пределах, указанных в 5.3.2.4.

Если условия а)—б) не соблюдаются, то находят причины несоответствия, устраняют их и тестирование повторяют с новой культурой тест-организмов.

5.5    Обработка результатов

5.5.1    По результатам подсчета выживших тест-организмов для каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы по трем емкостям, в том числе и трем контрольным, рассчитывают среднеарифметическое значение выживших тест-организмов.

5.5.2    Определение токсичности анализируемых проб

5.5.2.1    Токсичность анализируемых проб (А. %) определяют по гибели тест-организмов для каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы, относительно контрольной пробы, после 96 ч тестирования и рассчитывают по формуле

А = х« :**"100,    (1)

где хк — среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов в контрольной пробе. шт. (по 5.5.1);

— среднеарифметическое значение количества выживших тест-организмов для каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы, шт. (по 5.5.1).

5.5.3    Определение значения средней эффективной кратности разбавления (концентрации)

5.5.3.1    Для каждого заданного разбавления (концентрации) анализируемой пробы рассчитывают процент снижения выживаемости тест-организмов после 96 ч тестирования по отношению к выживаемости тест-организмов в контрольной пробе, используя полученные по 5.5.1 среднеарифметические значения и формулу (1).

По полученным значениям процентов снижения выживаемости тест-организмов определяют конкретное значение средней летальной кратности разбавления (концентрации) пробы, вызывающее 50 %-ное снижение выживаемости тест-организмов 96 ч ЛКР^ (96 ч ЛК^). Пример определения ЛКР^ приведен в А.З (приложение А).

При необходимости определяют:

-    минимальную кратность разбавления (концентрацию) пробы, соответствующую 100 %-ной гибели тест-организмов за 96 ч тестирования;

-    максимальную кратность разбавления (концентрацию) пробы, соответствующую 0 %-ной гибели тест-организмов за 96 ч тестирования.

11

5.5.3.2 Если по результатам, полученным по 5.5.3.1. не удалось определить конкретное значение средней эффективной кратности разбавления (концентрации) пробы, вызывающее 50 %-ную гибель тест-организмов за 96 ч. то для определения этого значения используют пробит-анализ.

Пример использования пробит-анализа приведен в приложении А.

5.5.4 Определение степени токсичности анализируемых проб

5.5.4.1    Если значение токсичности анализируемых проб, рассчитанное по формуле (1). составляет менее 10 %, то среднюю летальную кратность разбавления (среднюю летальную концентрацию) анализируемой пробы, при которой выживаемость тест-организмов снизилась относительно контрольной пробы не более 10 % за 96 ч тестирования, относят к безвредной кратности разбавления (безвредной концентрации).

5.5.4.2    Степень токсичности исследуемых объектов оценивают:

-    природной воды — по таблице 1;

-    донных отложений — по таблице 2;

-    буровых растворов — по таблице 3;

-    водных растворов веществ — по таблице 4 (в том числе химической продукции, смесевой химической продукции — по ГОСТ 32424. ГОСТ 32425);

-    сточной воды, твердых промышленных отходов, почв и грунтов — по стандартам и другим нормативным документам, утвержденным в установленном порядке.

Примечание — Под нормативным документом следует понимать документы, устанавливающие критерии отнесения исследуемых объектов к классу опасности для окружающей природной среды, разработанные в целях реализации федеральных законов (технических регламентов) в данной области.

Таблица 1— Степень токсичности проб природной воды

Степень токсичности проб природной поды

Значение то*сирости для проб природоой воды без разбавления

А. %

общая

детализированная

Токсичность отсутствует

Нетоксичная

До 10 в ключ.

Не обладает острой токсичностью

Слаботоксичная

Св. 10 до 25 включ.

Малотоксичная

Св. 25 до 35 включ.

Среднетоксичная

Св. 35 до 50 включ.

Обладает острой токсичностью

Высокотоксичная

Св. 50 до 100 включ.

Таблица 2 — Степень токсичности проб донных отложений

Степень токсичности проб водных вытяжек донных отложений

Значение токсичности для проб донных отложений А. %

общая

детализированная

Токсичность отсутствует

Нетоксичная

До 10 включ.

Не обладает острой токсичностью

Слаботоксичная

Св. 10 до 35 включ.

Среднетоксичная

Св. 35 до 50 включ.

Обладает острой токсичностью

Высокотоксичная

Св. 50 до 100 включ.

Примечание — При необходимости более детальной оценки токсичности загрязненных проб донных отложений степень токсичности определяют по значению средней летальной кратности разбавления (см. 5.5.3) 96 ч. ЛКРад. приведенному в таблице 3._

Таблица 3 — Степень токсичности проб отработанных буровых растворов, загрязненных проб донных отложений

Степень токсичности водных вытяжек проб буровых растворов (донных отложений)

Значение средней летальной кратности разбавления водных вытяжек проб буровых растворов (донных отложений)

96 ч ЛКРЮ. разы

Нетоксичная

1.0

Слаботоксичная

Менее 100

Окончание таблицы 3

Степень токсичности водных вытяжек проб буровых растворов (донных отложений)

Значение средней летальной кратности разбавления водных вытяжек проб буровых растворов (донных отложений)

96 ч ЛКРэд. разы

Среднетоксичная

От 100 до 1000

Высокотоксичная

От 1000 до 10000

Гипертоксичная

Более 10000

Таблица 4 — Степень токсичности водных растворов веществ

Степень токсичности проб водных растворов веществ

Значение средней летальной концентрации проб вещества 96 ч ЛК*). мг/дм3

Нетоксичные

Се. 1000

Практически нетоксичные

От 1000 до 100 включ.

Слаботоксичные

Менее 100 до 10 включ.

Среднетоксичные

Менее 10 до 1.0 включ.

Высокотоксичные

Менее 1.0 до 0,01 включ.

Гипертоксичные

Менее 0.01

Примечание — При необходимости устанавливают класс опасности химических веществ по значению средней летальной концентрации 96 ч ЛК^, приведенному в таблице 4. и по ГОСТ 32424.

5.6 Оформление результатов тестирования

5.6.1    Результаты тестирования регистрируют в протоколе испытаний в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО/МЭК 17025, при этом указывают следующую информацию:

а)    ссылку на настоящий стандарт с указанием метода определения:

б)    данные, необходимые для идентификации пробы или анализируемого вещества, прошедшего испытания;

в)    тест-организмы: род. вид. метод культивирования, возраст;

г)    подробное описание тестирования:

-    дату начала тестирования и продолжительность:

-    для природной воды, сточных вод. водных вытяжек буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений и грунтов — кратность разбавления, способ и продолжительность хранения проб. При необходимости, условия, в которых проводились отстаивание, фильтрование, а также размораживание пробы;

-    для веществ — анализируемые концентрации, способ их приготовления;

-    наименование и способ культивирования тест-организмов;

-    значение pH анализируемых проб перед тестированием и после тестирования; сведения о регулировании pH проб (при необходимости);

д)    токсичность исследуемого объекта с указанием степени токсичности и результатов определения токсичности, средней летальной кратности разбавления 96 ч ЛКРэд, средней летальной концентрации 96 ч ЛКзд. в зависимости от анализируемой пробы, метод расчета (при необходимости);

е)    обнаруженные негативные эффекты (например, вялость, плавание по поверхности, ненормальное вращение), а также другие обстоятельства и условия, не предусмотренные настоящим стандартом. способные повлиять на результат тестирования.

5.6.2    Значения 96 ч ЛКР^ (96 ч ЛК^) и диапазон разбавлений (концентраций) пробы, соответствующий 0 %-ной и 100 %-ной смертности, выражают:

-    в процентах (%) или в кратности разбавления (разы) — для природной воды, сточных вод и водных вытяжек;

-    в миллиграммах на кубический дециметр (мг/дм3) — для растворов веществ.

13

ГОСТ P 57163—2016

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки............................................2

3    Термины и определения..........................................3

4    Отбор проб.................................................3

5    Метод А. Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata

Peters в пресной воде (Cyprinodontiformes, Pisces)...........................4

6    Метод Б. Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata

Peters в морской воде (Cyprinodontiformes, Pisces)...........................14

Приложение А (рекомендуемое) Примеры определения средней летальной концентрации

(разбавления)........................................16

Приложение Б (обязательное) Методы культивирования тест-организмов..............20

Приложение В (рекомендуемое) Приготовление культивационной воды для выращивания

Poecilia reticulata Peters (методы А и Б)..........................23

Приложение Г (рекомендуемое) Примеры приготовления анализируемых растворов веществ

и разбавлений сточной воды................................25

Библиография................................................27

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВОДА

Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata Peters в пресной и морской воде

Water. Determination of toxicity by survival rate of one-day young fish Poecilia reticulata Peters in fresh and marine

water

Дата вводония — 2018—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на природные пресные и морские воды, включая воды эстуариев, сточные воды (в том числе очищенные) с минерализацией от 0 до 33 г/дм3, а также на водные вытяжки объектов исследования: буровые растворы, донные отложения, твердые промышленные отходы, грунты и водные растворы растворимых веществ.

Устанавливает определение, перечисленных выше объектов, токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб вида Poecilia reticulata Peters (далее — тест-организмов) после лабораторного биологического тестирования (далее — тестирование) следующими методами:

-    по выживаемости тест-организмов при тестировании в пресной воде в условиях переменного воздействия света и постоянной температуры (метод А);

-    по выживаемости тест-организмов при тестировании в морской воде в условиях переменного воздействия света и постоянной температуры (метод Б).

Методы позволяют определять токсичность исследуемых объектов и следующие токсикологические показатели (относительно контрольной пробы):

-    среднюю летальную кратность разбавления (ЛКР50) пробы, вызывающую гибель 50 % тест-организмов, а также безвредную кратность разбавления пробы (ЛКР10), вызывающую отклонение тест-параметра — выживаемости — за 96 ч тестирования не более 10 % от контрольных значений (методы А и Б);

-    среднюю летальную концентрацию (ЛК^) растворов веществ, вызывающую гибель 50 % тест-организмов, и безвредную концентрацию (ЛК10) растворов веществ, вызывающую отклонение тест-параметра — выживаемости за 96 ч тестирования не более 10 % от контрольных значений (методы А и Б):

При определении токсичности анализируемых объектов с минерализацией выше 20,0 г/дм3 тестирование проводят после адаптации тест-организмов согласно Б.4.2 (приложение Б).

Примечания

1    Тестирование должен выполнять квалифицированный персонал.

2    Лица, выполняющие тестирование, должны иметь опыт лабораторной работы не менее 3-х лет.

3    Пользователь стандарта несет ответственность за обеспечение соответствующих требований стандарта при проведении тестирования.

В помещении лаборатории, где проводят тестирование:

-    окружающая среда не должна содержать веществ, которые могут оказывать токсическое действие на тест-организмы;

-    температура окружающего воздуха должна быть (20 ± 2) °С;

-    относительная влажность воздуха должна быть не более 80 %;

-    атмосферное давление должно быть 84—106 кЛа (630—800 мм рт. ст.);

Издание официальное

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 17.1.5.01-80 Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору проб донных отложений водных объектов для анализа на загрязненность


ГОСТ 112-78 Термометры метеорологические стеклянные. Технические условия ГОСТ 450-77 Кальций хлористый технический. Технические условия ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4786—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4209-77 Реактивы. Магний хлористый 6-водный. Технические условия ГОСТ 4220-75 Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия ГОСТ 4234-77 Реактивы. Калий хлористый. Технические условия ГОСТ 4461-77 Реактивы. Кислота азотная. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 12071-2000 Грунты. Отбор, упаковка, транспортирование и хранение образцов ГОСТ ИСО/МЭК 17025—2009 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ 19126-2007 Инструменты медицинские металлические. Общие технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные парамет

ры и размеры

ГОСТ 27065-86 Качество вод. Термины и определения ГОСТ 27753.2-88 Грунты тепличные. Метод приготовления водной вытяжки ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—1981) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть I. Общие требования

ГОСТ 30416-2012 Грунты. Лабораторные испытания. Общие положения ГОСТ 31861-2012 Вода. Общие требования к отбору проб

ГОСТ 32294-2013 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Определение острой токсичности для рыб на ранних стадиях развития

ГОСТ 32424-2013 Классификация опасности химической продукции по воздействию на окружающую среду

ГОСТ 32425-2013 Классификация опасности смесевой химической продукции по воздействию

на окружающую среду

ГОСТ Р 51232-98 Вода питьевая. Общие требования к организации и методам контроля

качества

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ Р 56237-2014 Вода питьевая. Отбор проб на станциях водоподготовки и в трубопроводных распределительных системах

Примечание — При пользовании настоящим стандарюм целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение. в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

ГОСТ P 57163—2016

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 27065. а также спедующие термины с соответствующими опредепениями:

3.1    токсичность: Способность вещества, или суммарное количество веществ содержащихся в природной, сточной воде, водной вытяжке, вызывать нарушения физиологических функций организма, в результате чего возникают симптомы интоксикаций (заболевания), а при тяжелых поражениях — его гибель.

3.2    острая токсичность: Токсичность (в частности, природной, сточной воды, водной вытяжки, раствора вещества), проявляющаяся при кратковременном воздействии исследуемых проб, например для рыб — 96 ч.

3.3    хроническая токсичность: Токсичность (в частности, природной, сточной воды, водной вытяжки, раствора вещества), проявляющаяся при длительном воздействии исследуемых проб, например для рыб — 30 сут.

3.4    диапазон реагирования тест-организмов: Экспериментально определяемый интервал концентраций (разбавлений), в котором указывается ряд концентраций (разбавлений) от недействующей до летальной концентрации (разбавления) раствора вещества или водной вытяжки исследуемой пробы (например, для рыб ЛК50 за 24 ч для двухромовокислого калия находится от 50 мг/дм3 до

200.0    мг/дм3).

3.5    токсический эффект: Результат воздействия токсичного вещества (веществ) на тест-организм. проявляющийся в изменении показателей его жизнедеятельности (например выживаемость: снижение численности клеток и т. д.).

3.6    контрольный раствор: Культивационная вода, используемая для выращивания тест-организмов.

4    Отбор проб

4.1    Отбор проб природной и сточной воды проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 31861ГОСТ Р 56237. [1) и [21. при этом объем пробы воды должен быть не менее 30 дм3.

Условия и сроки хранения отобранных проб — по ГОСТ 31861 и ГОСТ Р 56237.

Пробы, предназначенные для тестирования должны быть, по возможности, после отбора обработаны без задержки с тем, чтобы исключить изменения первоначального состава в результате физических и химических реакций или биологических процессов. Максимальная длительность хранения не должна превышать 12 ч при температуре окружающего воздуха не выше 25 °С.

Обычно рекомендуется охлаждение или заморозка образцов в том случае, когда нет возможности проводить испытания сразу после отбора проб.

Примечание — Если отобранную пробу воды перед тестированием требуется отстаивать или фильтровать. то отстаивание и фильтрование должны предшествовать ее замораживанию.

Допускается хранение отобранных проб до проведения их тестирования не более 48 ч при температуре от 0 °С до 4 “С.

4.2    Отбор проб донных отложений проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.1.5.01 массой не менее 5 кг.

Срок хранения проб донных отложений — не более 12 ч после их отбора до проведения тестирования при температуре окружающего воздуха не выше 25 °С.

Допускается хранение отобранных проб до проведения их тестирования:

-    не более 48 ч при температуре от 0 °С до 4 °С;

-    не более двух месяцев при температуре минус 18 °С.

4.3    Отбор проб буровых растворов проводят в соответствии с требованиями технической документации предприятия, на котором образуются отработанные буровые растворы, массой не менее

5.0    кг, при этом под крышкой емкости, в которую отобрана проба, должен оставаться слой воздуха высотой 2 см.

Отобранные пробы буровых растворов хранят в емкостях — холодильниках при температуре от 0 °С до 4 °С не более 3 мес.

После вскрытия емкостей — холодильников для подготовки проб отработанных буровых растворов к тестированию срок хранения не должен превышать 14 сут.

4.4    Отбор проб твердых промышленных отходов проводят в соответствии с требованиями технической документации предприятия, на котором образуется отход, массой не менее 5 кг.

Срок хранения отобранных проб твердых промышленных отходов в емкостях с притертой или плотно закрытой крышкой при температуре от 0 вС до 4 °С — не более 7 сут.

4.5    Отбор проб водных растворов вешеств, условия и сроки их хранения должны соответствовать требованиям стандартов и другой документации на конкретную продукцию (группу однородной продукции).

4.6    Отбор проб грунтов проводят по ГОСТ 12071, ГОСТ 27753, при этом масса отобранной пробы должна быть не менее 2 кг.

Срок хранения отобранных проб грунтов в емкостях с притертой или плотно закрытой крышкой при температуре от 0 °С до 4 °С — не более 7 сут.

4.7    Для отбора проб природной воды, отработанных буровых растворов, донных отложений используют емкости из полиэтилена, полиэтилентерефталата или политетрафторэтилена, а при наличии в воде нефтепродуктов, поверхностно-активных веществ и пестицидов — емкости из темного стекла.

Для отбора проб сточных вод. твердых промышленных отходов и грунтов используют емкости из темного стекла или нержавеющей стали, при этом не допускается использовать емкости с хромовым покрытием.

Для отбора проб веществ используют емкости из полиэтилена, полиэтилентерефталата, политетрафторэтилена или темного стекла.

4.8    Сроки и условия хранения отобранной пробы указывают в протоколе испытаний.

4.9    Консервацию отобранных проб не проводят.

5 Метод А. Определение токсичности по выживаемости односуточной молоди рыб Poecilia reticulata Peters в пресной воде (Cyprinodontiformes, Pisces)

5.1    Сущность метода

Сущность метода заключается в регистрации выживаемости односуточной молоди рыб (тест-организмов) вида Poecilia reticulata Peters в анализируемой пробе исследуемого объекта относительно контрольной пробы, определении ее токсичности и токсикологических показателей при тестировании в пресной воде в течение 96 ч.

5.2    Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы

Аквариальная (помещение) с регулируемой температурой, которое обеспечивает поддержание температуры (20 : 2) °С и используют рассеянный свет, естественный световой период.

Примечание — Терморегулируемое помещение, поддерживающее температуру (25 i 1) °С. является предпочтительным, так как оно позволяет быстрее уравновешивать тестируемые растворы и минимизировать изменения температуры во время приготовления растворов и переносе тест-организмов в растворы.

Термостатированные аквариумы из химически инертного материала и достаточной вместимостью (например, стеклянные аквариумы или из органического стекла) вместимостью 1.3.5.10.50 и 200 дм3, обеспечивающие поддержание температуры (25 = 1) °С.

Микрокомпрессор аквариумный АЭН.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ Р 53228 высокого класса точности с пределом абсолютной допустимой погрешности =0.1 мг. максимальной нагрузкой не более 210 г.

pH-метр любого типа, обеспечивающий измерения pH в диапазоне от 3 до 10 ед. pH с пределом абсолютной допускаемой погрешности =0.05 ед. pH.

Кондуктометр любого типа, обеспечивающий измерения удельной электрической проводимости дистиллированной (деионизированной) воды в диапазоне от 0.1 до 99.9 мкСм/см с пределом абсолютной допускаемой погрешности =2,0 мкСм/см при 20 вС.

Оксиметр любого типа, обеспечивающий измерения в диапазоне от 0 до 19.9 мг • О^дм3 (при температуре от 5 °С до 30 °С), с допускаемой погрешностью измерения содержания кислорода не более 0,5 мг • О^дм3.

Термометр лабораторный по ГОСТ 112-78 с диапазоном измерения температуры от 0 °С до 50 °С с ценой деления шкалы 0.5 °С.

ГОСТ P 57163—2016

Прибор для измерения минерализации (солености) любого типа, обеспечивающий измерения в диапазоне от 0 до 100 г/дм3, (например, карманный рефрактометр-солемер с автотермокомленсацией) с допускаемой погрешностью измерения общей минерализации (солености) г 1.0 г/дм3.

Аквариумные водонагреватели с датчиками.

Колбы мерные 2-100-2, 2-500-2. 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 1-2-1-1,1-2-1-2. 1-2-1-5, 1-2-1-25 по ГОСТ 29227.

Емкости для транспортировки и хранения проб воды вместимостью 5 дм3.

Сачок для отлова рыбы.

Стеклянная палочка.

Сифоны.

Мешалка магнитная.

Устройство для встряхивания любого типа (например, орбитальный шейкер, качалка — мешалка).

Шпатели металлические по ГОСТ 19126.

Сушильный электрический шкаф общелабораторного назначения.

Климатостат, обеспечивающий поддержание температуры (25 ± 1) вС.

Холодильник бытовой, обеспечивающий поддержание температуры от минус 18 °С до минус 20 вС и от 2 °С до 4 вС.

Ступки и пестики фарфоровые по ГОСТ 9147.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Фильтры обеззоленные «белая лента».

Фильтровальная установка любого типа.

Фильтры мембранные с диаметром пор 0.45 и 3.5 мкм.

Цилиндры 2-25-1. 2-50-1,2-100-1. 2-1000-1 по ГОСТ 1770.

Стаканы Н-2-50 ТХС, Н-2-100 ТХС. Н-2-500 ТХС, Н-2-1000 ТХС по ГОСТ 25336.

Сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Стеклянная палочка.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 (или деионизированная) с удельной электрической проводимостью не более 10 мкСм/см при 20 °С (далее — дистиллированная вода).

Вода питьевая по ГОСТ Р 51232.

Модельный токсикант: калий двухромовокислый по ГОСТ 4220, ч. д. а.

Примечание — Срок годности калия двухромовокислого марки ч. д. а. 1 год.

Культивационная — вода для разбавлений.

Макроводоросли (например, риччия. сальвиния или роголистник темно-зеленый), используемые для приготовления культивационной воды и культивирования тест-организмов.

Тест-организмы: рыбы вида Poecilia reticulata Peters. Культивирование и подготовка к тестированию тест-организмов — приложение Б.

Кислота азотная по ГОСТ 4461, х. ч.

Кислота соляная по ГОСТ 3118. х. ч.

Допускаются к использованию оборудование, материалы, реактивы с аналогичными характеристиками. разрешенные к применению для этих целей в установленном порядке.

5.3 Подготовка к тестированию

5.3.1    Подготовка посуды

5.3.1.1    Емкости, используемые для отбора проб и тестирования, должны быть химически чистыми.

Посуда для отбора проб промывается смесью бихромата калия и серной кислоты (хромовой

смесью). Стенки посуды осторожно смачиваются хромовой смесью, после чего на 2 ч посуда оставляется. затем она тщательно промывается водопроводной водой, нейтрализуется раствором пищевой соды и промывается 3—4 раза дистиллированной водой.

Для проведения тестирования используют аквариумы из стекла или из органического пластика (применяемого для пищевых продуктов).

Примечание — Емкости (аквариумы) для культивирования и тестировании тест-ор1анизмов моют, применяя моющие средства, не содержащие вредных химических веществ.

5.3.1.2    Стеклянную посуду для тестирования осторожно промывают 10 %-ным раствором азотной кислоты и выдерживают 2—3 ч при комнатной температуре, затем тщательно промывают водопроводной водой, обрабатывают 10 %-ным раствором натрия углекислого кислого, промывают водопроводной водой, после чего не менее трех раз ополаскивают дистиллированной водой. 4

ГОСТ P 57163—2016

При сильном загрязнении посуды, а также новую посуду промывают водопроводной водой, заполняют 10 %-ным раствором азотной кислоты и выдерживают в течение суток, после чего обрабатывают 10 %-ным раствором натрия углекислого кислого, затем тщательно промывают водопроводной водой и не менее трех-четырех раз ополаскивают дистиллированной водой.

5.3.1.3    Емкости и посуду для тестирования сушат на воздухе при комнатной температуре, затем стеклянную посуду, за исключением мерной, помещают в сушильный шкаф и выдерживают в течение одного часа при температуре 150 °С.

Чистую посуду (емкости) закрывают стеклянными притертыми пробками или крышками и хранят в защищенных от пыли ящиках лабораторного стола или на закрытых полках, стеллажах и т. д.

5.3.1.4    Мембранные фильтры перед применением должны быть промыты дистиллированной водой и стерилизованы кипячением в дистиллированной воде не менее 10 мин.

5.3.2 Проверка физиологической чувствительности тест-организмов для метода А

Периодически (не реже одного раза в месяц), синхронизированную молодь суточных тест-орга-низмов проверяют на физиологическую чувствительность. Для этого определяют среднюю летальную концентрацию (24 ч ЛК^,) модельного токсиканта (двухромовокислого калия) в следующей последовательности:

5.3.2.1    Готовят исходный раствор модельного токсиканта массовой концентрацией 10 г/дмследующим способом: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 10 г двухромовокислого калия и растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды (см. 5.2), затем доводят содержимое емкости до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и маркируют. Приготовленный исходный раствор выдерживают в течение 2 ч.

Срок хранения исходного раствора модельного токсиканта — не более 7 сут.

5.3.2.2    Готовят анализируемые растворы модельного токсиканта (двухромовокислого калия) заданной концентрации в следующей последовательности:

-    приготавливают шесть различных растворов модельного токсиканта двухромовокислого калия с массовой концентрацией от 50,0 до 200,0 мг/дм3 в соответствии с таблицей Г.1 приложения Г.

Каждой концентрации соответствует три емкости (повторности). При этом в каждой емкости массовая концентрация приготовленного раствора модельного токсиканта (двухромовокислого калия) составляет соответственно 50.0: 100.0; 125.0; 150.0; 175.0 и 200.0 мг/дм3.

-    Затем помещают в каждую емкость по 10 экз. суточных тест-организмов.

Примечание — Общее количество емкостей вместимостью более 5 дм3 необходимых для выполнения проверки физиологической чувствительности тест-организмов составляет 21. включая контроль (три емкости). Общее количество односуточных мальков — 210 экз.

5.3.2.3    Проверку физиологической чувствительности тест-организмов проводят аналогично тестированию анализируемых проб объектов исследования по 5.5.3. Продолжительность тестирования 24 ч.

Для приготовления контрольной пробы используют культивационную воду по В. 1 (приложение В), при этом используют не менее трех емкостей.

Анализируемые растворы двухромовокислого калия каждой концентрации готовят непосредственно перед определением физиологической чувствительности тест-организмов.

5.3.2.4    Подсчитывают число выживших тест-организмов аналогично подсчету тест-организмов по оценке токсичности анализируемых проб по 5.5.2 и определяют значение 24 ч ЛК50 модельного токсиканта (двухромовокислого калия), при этом:

-    если значение 24 ч ЛК^ данного модельного токсиканта находится в диапазоне от 106.0 до 175,0 мг/дм3, то считают, что подготовленные тест-организмы пригодны для тестирования;

-    если значение 24 ч ЛК50 данного модельного токсиканта не входит в указанный диапазон, то считают, что подготовленные тест-организмы не пригодны для тестирования. Проверяют соблюдение правильности процедуры тестирования, условия подготовки тест-организмов к тестированию и. при необходимости, повторяют тестирование с использованием обновленной культуры рыб РоесШа reticulata Peters.

Пример определения значения 24 ч ЛК50 модельного токсиканта приведен в приложении А (пункт А.1).

Примечание — Значение 24 ч ЛК^ раствора модельного токсиканта указывают в протоколе испытаний с датой определения данной токсикометрической характеристики, чтобы подтвердить соответствие физиологической чувствительности тест-организмов, использованных для получения представленных в протоколе результатов, требованиям настоящего стандарта. 5

ГОСТ P 57163—2016

5.3.2.5 Если по результатам тестирования не удалось получить конкретное значение 24 ч ЛК^. то для определения 24 ч ЛК^ модельного токсиканта используют пробит-анализ. Аналогичный пример приведен в А.З приложении А.

5.3.3 Подготовка проб

Перед тестированием предварительно охлажденные или замороженные пробы доводят до температуры (20 г 5) °С.

5.3.3.1    Подготовка исходных проб природной воды

Отобранные пробы пресной природной воды непосредственно перед тестированием фильтруют через мембранные фильтры с порами диаметром 3.5 мкм или через обеззоленные фильтры «белая лента», после чего измеряют pH и содержание кислорода отфильтрованной пробы.

Примечание — При подготооке исходных природных морских вод. а также вод эстуариев подготовку проб осуществляют согласно 5.3.3.1.

Объем пробы воды для определения токсичности должен быть не менее 30 дм3.

Не допускается для фильтрования использовать фильтр «синяя лента».

Примечание — Фильтр «синяя лента» задерживает коллоидные вещества, что занижает результаты тестирования.

5.3.3.2    Подготовка исходных проб сточной воды

Отобранные пробы сточной воды непосредственно перед тестированием фильтруют через мембранный фильтр с порами диаметром 3.5 мкм или через обеззоленный фильтр «белая лента», после чего измеряют pH и концентрацию растворенного кислорода отфильтрованной пробы.

Объем пробы сточной воды для определения токсичности должен быть не менее 30 дм3.

Примечание — При подготовке исходных проб сточных соленых вод. поступающих в морские водоемы, подготовку проб осуществляют согласно 5.3.3.2.

5.3.3.3    Подготовка исходных проб буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений, грунтов

Из отобранных проб буровых растворов, твердых промышленных отходов, донных отложений и грунтов, готовят водные вытяжки, затем измеряют pH и концентрацию растворенного кислорода подготовленных водных вытяжек.

Примечание — Допускается при необходимости тестирование почв, при этом подготовка исходных проб аналогично вышеизложенной см. 5.3.3.3.

Объем пробы водной вытяжки для определения токсичности должен быть не менее 30 дм3.

Примечание — При подготооке исходных проб буровых растворов, твердых промышленных отходов, поступающих в морские водоемы; донных отложений и грунтов, отобранных в морских водоемах подготовку проб осуществляют согласно 5.3.3.3.

а) Подготовка водных вытяжек из проб буровых растворов

Перед приготовлением водной вытяжки из пробы буровых растворов отобранную пробу тщательно перемешивают в смесителе со скоростью вращения 1000 об/мин в течение 5 мин и определяют pH бурового раствора. Пробу бурового раствора считают не пригодной для тестирования, если:

-    pH пробы бурового раствора выше 9.0 или ниже 6.0;

-    на стенках сосуда с пробой бурового раствора появились черные пятна;

-    проба бурового раствора имеет неприятный запах.

После перемешивания, пробу бурового раствора смешивают с дистиллированной водой (см. 5.2) в соотношении 1:9 по объему и снова перемешивают с применением смесителя со скоростью вращения 1000 об/мин в течение 5 мин.

После окончания перемешивания смесь выдерживают при температуре (20 = 5) °С в течение 1 ч. затем жидкость над осадком (водную вытяжку бурового раствора) осторожно переливают за один прием в другую емкость и перемешивают в течение 5 мин. после чего используют ее для подготовки анализируемой пробы.

Если отстоявшаяся смесь не имеет четкого раздела фаз. то весь объем подготовленной пробы используют для приготовления анализируемой пробы.

Не допускается консервация и хранение подготовленных водных вытяжек проб буровых раство-

ров.

1

2

3

4

5