ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ

Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2012

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 августа 2011 г. № 219-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуются в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2012

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 54374-2011

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ

Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек

(колиформных бактерий)

Poultry meat, edible offal and ready to cook products. Methods for detection and quantity determination

of coliform bacteria

Дата введения — 2012—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы (далее — продукт) и устанавливает методы наиболее вероятного числа, посева в/на агаризованные селективно-диагностические среды для выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia) (далее — колиформные бактерии).

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГОСТ Р 50396.0-92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ Р 52816-2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов ГОСТ 29184-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae

ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины, определения и сокращения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52816, а также следующие сокращения.

НВЧ — наиболее вероятное число;

КОЕ — колониеобразующие единицы;

БГКП — бактерии группы кишечных палочек.

4    Сущность методов

Метод выявления колиформных бактерий основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведения в жидкую среду с лактозой, термостатировании при температуре (37 + 1) °С в течение (48 + 2) ч, подтверждении принадлежности, при необходимости, выросших микроорганизмов по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам к колиформным бактериям.

Метод определения количества колиформных бактерий методом НВЧ основан на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в жидкую селективную среду с лактозой; термостатировании, учете положительных пробирок, подтверждении принадлежности, при необходимости, по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям. Метод определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см³ жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.

Методы определения количества колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в/на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, термостатировании, подсчете типичных и атипичных колоний, подтверждении принадлежности по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 ил и в 1 см³ жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.

Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см³ жидкого продукта более 150 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.

5    Общие положения

5.1    Общие требования к проведению микробиологических исследований — по ГОСТ Р ИСО 7218.

5.2    Требования безопасности

Требования безопасности при работе с микроорганизмами — по ГОСТ Р ИСО 7218, с химическими реактивами — по ГОСТ 12.1.007, с электрооборудованием — по ГОСТ 12.1.019.

Требования пожарной безопасности — по ГОСТ 12.1.004.

5.3    Требования к персоналу — по ГОСТ Р ИСО 7218.

6    Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы

6.1    Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы — по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 53597, ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ Р 52816.

6.2    Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, по качеству не ниже указанных в 6.1. ¹

ГОСТ Р 54374-2011

7    Подготовка к проведению испытаний

7.1    Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб — по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 53597, ГОСТ Р ИСО 7218.

7.2    Приготовление разведений из пробы для анализа — по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26669.

7.3    Подготовка средств измерений, аппаратуры, оборудования, посуды и материалов — по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р ИСО 7218.

7.4    Подготовка и приготовление культуральных сред, растворов реактивов

Общие указания по приготовлению культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133-1.

7.4.1    Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ Р 52816.

7.4.2    Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.

7.4.3    Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки) по ГОСТ Р 52816.

7.4.4    Среда Кесслера с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.

7.4.5    Среда Хейфица по ГОСТ Р 50396.0.

7.4.6    Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-arap) по ГОСТ Р 52816.

7.4.7    Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ Р 52816.

7.4.8    Среда Эндо по ГОСТ Р 50396.0.

7.4.9    Среда Гисса с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 10444.1.

7.4.10    ГРМ-агар (сухой питательный агар на основе гидролизата рыбной муки для культивирования бактерий) по ГОСТ Р 52816.

7.4.11    Мясо-пептонный агар по ГОСТ Р 50396.0.

7.4.12    Реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.

7.4.13    Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.

7.4.14    Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ Р 52816.

7.4.15    Допускается использование других культуральных селективно-диагностических сред, в том числе хромогенных, разрешенных и предназначенных для выявления и определения колиформных

бактерий.

7.4.16    Приготовление и правила использования культуральных сред промышленного производства проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-2.

7.4.17    Методы контроля культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133-1.

7.4.18    Сроки и условия хранения культуральных сред — по ГОСТ Р ИСО 11133-1.

8    Проведение испытаний

8.1    Метод выявления колиформных бактерий — по ГОСТ Р 52816 (подраздел 9.1).

8.1.1    Оценка и выражение результатов

Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

Пробирки с посевами, в которых отмечен рост микроорганизмов (помутнение среды), образование газа (наличие пузырьков газа в поплавках) и кислоты (изменение цвета среды), считают положительными, и обнаруженные микроорганизмы относятся к колиформным бактериям.

При выявлении колиформных бактерий отмечают присутствие или отсутствие их в Хг или в Xсм² продукта.

Результаты исследований записывают как «БГКП обнаружены или не обнаружены в Хг (см²) продукта».

8.1.2    Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям

8.1.2.1 Выделение чистой культуры на дифференциально-диагностических агаризованных средах и идентификация

При необходимости для дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бактерий, выросших на жидких средах с образованием газа, к колиформным бактериям проводят пересевы для получения изолированных колоний по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 26670 штрихом на поверхность одной из селективно-диагностических сред: VRDL-arap (см. 7.4.6), агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (см. 7.4.7), среда Эндо (см. 7.4.8). Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч и отмечают рост типичных и атипичных колоний.

Типичные колонии колиформных бактерий:

-    на VRBL-arape — пурпурно-красные колонии диаметром не менее 0,5 мм, иногда окружены красноватой зоной преципитата (осадка) желчи;

-    агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным — зеленоватые колонии, окруженные яркой желто-зеленой зоной;

-    среде Эндо — красные, розовые, бледно-розовые колонии, часто с металлическим блеском.

Атипичные колонии отличаются от типичных по цвету и размеру колоний.

8.1.2.2    Для дополнительного подтверждения отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний из чашек Петри с посевами (см. 8.1.2.1).

Атипичные колонии отбирают только те, в которых подтверждено наличие колиформных бактерий посевом в жидкую подтверждающую среду.

Каждую отобранную колонию пересевают на поверхность скошенного питательного агара (см. 7.4.10, 7.4.11). Посевы инкубируют при температуре (37 + 1) °С в течение (24 + 2) ч.

Принадлежность выросших бактерий к колиформным бактериям определяют по отношению к окраске по Граму, по отсутствию оксидазы и по ферментации лактозы.

8.1.2.3    Окраска по Граму

Из подготовленных культур (см. 8.1.2.2) готовят мазки и окрашивают по Граму по ГОСТ 30425.

Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена по ГОСТ Р 52816.

8.1.2.4    Определение отсутствия оксидазы

Определение отсутствия оксидазы проводят по ГОСТ 29184.

Допускается использование дисков промышленного производства для определения оксидазы (см. 7.4.13).

8.1.2.5    Определение ферментации лактозы

Определение ферментации лактозы проводят по ГОСТ Р 52816.

8.1.2.6    Оценка результатов дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям

По результатам дополнительного подтверждения к колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, способные ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа.

8.2 Определение количества колиформных бактерий

8.2.1    Определение количества колиформных бактерий методом НВЧ — по ГОСТ Р 52816.

Результаты выражают как «НВЧ колиформных бактерий в 1 г (см³) продукта».

8.2.2    Определение количества колиформных бактерий методом посева в/на агаризован-ные селективно-диагностические среды

8.2.2.1    Подготовка к проведению исследований — по разделу 7.

8.2.2.2    Отбор и подготовка проб — по 7.1.

8.2.2.3    Приготовление разведений — по 7.2.

8.2.2.4    Посев —по ГОСТ Р 52816.

8.2.2.5    Термостатирование — по ГОСТ Р 52816.

8.2.2.6    Подсчет количества колоний по ГОСТ Р 52816.

8.2.2.7    Подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям

Для подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний. Каждую отобранную колонию пересевают в пробирку с одной из жидких питательных сред (см. 7.4.2—7.4.5). Проведение подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям — по 8.1.1.

Оценка и выражение результатов по проведенному подтверждению — по 8.1.2.

8.2.2.8    Подсчет и выражение результатов

Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

В случае, когда не менее чем в четырех из пяти типичных и атипичных колоний подтвержден рост колиформных бактерий (не менее 80 %) считают, что все колонии принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество колиформных бактерий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству колоний, взятых для подтверждения.

Расчет количества колиформных бактерий, определенного посевом в/на агаризованные селективно-диагностические среды, на 1 г (см³) продукта проводят по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26670.

Результаты определения количества колиформных бактерий в пробе продукта выражают и записывают по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26670. ³

УДК 663/664:543:006.354    ОКС    67.120.20    Н19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, колиформные бактерии, разведение продукта, культуральные среды, отбор проб, посев, термостатирование, типичные и атипичные колонии, наиболее вероятное число (НВЧ) ⁴

Редактор Л.В. Коретникова Технический редактор Н.С. Гоишанова Корректор В.И. Варенцова Компьютерная верстка В.И. Гоищенко

Сдано в набор 27.02.2012. Подписано в печать 06.03.2012. Формат бОхв^/в. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 0,93.

Уч.-изд. л. 0,65. Тираж 206 экз. Зак. 213.

1

2

3

4

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.