ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

Консервы фруктовые

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ ЭРИТРОЗИНА И ФЛОКСИНА В

Предисловие

Цели и принципы стандартизации Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПАКК Россельхозакадемии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК154 «Пищевые добавки и ароматизаторы»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. № 704-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Консервы фруктовые

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ ЭРИТРОЗИНА И ФЛОКСИНА В

Canned fruits.

Method for determination of synthetic colours Erythrosine and Phloxine В presence

Дата введения — 2012—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые консервы: плодово-ягодные консервированные компоты (далее компоты) и устанавливает хроматографический метод определения наличия и идентификации синтетических красителей эритрозина и флоксина В (далее по тексту — красители). Поданному методу предел обнаружения красителей составляет не менее 0,0012 %.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ8756.0—70 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка ихкиспытанию ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Метод анализа

3.1    Сущность метода

Метод анализа основан на водно-спиртовой экстракции красителей из измельченной твердой части анализируемых компотов и сорбции из экстракта и жидкой части компотов твердыми сорбентами, десорбции аммиаком и отделением последнего выпариванием с последующей идентификацией красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ).

Идентификацию красителей проводят методом сравнения значений/^ (отношение расстояния от центра пятна обнаруженного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) каждого обнаруженного синтетического красителя со значениями R_f (отношение расстояния от центра пятна стандартного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) контрольных образцов красителей (КО).

В качестве КО используют водно-спиртовые растворы синтетических стандартных красителей эритрозина и флоксина В.

3.2    Условия проведения анализа

При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:

температура окружающего воздуха.............(22    ±    3)    °С;

относительная влажность воздуха.............(65    +    25)%;

напряжение в электросети..................(220    +    22)    В;

частота тока в электросети..................(50    +    1) Гц.

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами проводят в вытяжном шкафу.

3.3    Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

3.3.1    Весы лабораторные с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания + 0,1 мги +100 мг.

3.3.2    Воронка лабораторная типа В-36—80 ХС по ГОСТ25336.

3.3.3    Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размером сторон 10 х 10 см.

3.3.4    Камера хроматографическая размером сторон 12 х 12x5 см.

3.3.5    Патрон для твердофазной экстракции с сорбентом оксида алюминия.

3.3.6    Алюминия оксид активированный кислый pH = 4,5 + 0,5, зернением от 0,05 до 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м¹/гдля колоночной хроматографии.

3.3.7    Шприц медицинский инъекционный вместимостью от 10 до 20 см³ по ГОСТ Р ИСО 7886-1.

3.3.8    Микрошприц типа МШ-1 или Газохром-101 вместимостью 1,0 мм³ (1 мкл) с ценой деления не более 0,02 мм³ (0,02 мкл).

3.3.9    Пипетки с одной меткой вместимостью 5 см³ 1-го класса точности по ГОСТ 29169.

3.3.10    Пипетки градуированные вместимостью 1,5,10 см³ 1-го класса точности по ГОСТ 29227.

3.3.11    Стаканы термостойкие вместимостью 50,200 см³ по ГОСТ 25336.

3.3.12    Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 25, 50, 100, 250 см³ 1-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.13    Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.

3.3.14    Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см³ по ГОСТ 25336.

3.3.15    Палочка стеклянная с оплавленным концом.

3.3.16    Термостат или баня водяная.

3.3.17    Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

3.3.18    Линейка металлическая по ГОСТ 427.

ГОСТ Р 54068-2010

3.3.19    Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.

3.3.20    Красители синтетические стандартные эритрозин и флоксин В массовой долей красящих веществ не менее 85 % по 3.4.4.1.

3.3.21    Кислота уксусная поГОСТ 61, х. ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм³ готовят поГОСТ 4517.

3.3.22    Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

3.3.23    Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч. д. а., раствор массовой концентрации 250 г/дм³.

3.3.24    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.3.25    Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д. а.

3.3.26    Метилэтилкетон (2-бутанон) для хроматографии.

3.3.27    Мешалка магнитная с максимальной скоростью вращения магнитного ротора 1400 об/мин.

3.3.28    Фильтры бумажные обеззоленные «Красная лента».

3.3.29    Цилиндр мерный вместимостью 100 см³, с ценой наименьшего деления 1 см³,1-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.30    pH-метр со стеклянным электродом диапазоном измерения от 1 до 14 ед. pH и пределами допускаемой абсолютной погрешности измерений ± 0,05 ед. pH.

3.3.31    Фильтры стеклянные по ГОСТ 25336.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

3.4 Подготовка к анализу

3.4.1    Приготовление элюента

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 50 см³ вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см³ ацетона, 14 см³ метилэтилкетона, 0,1 см³ водного аммиака и 6 см³ дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Элюент готовят за 1 ч до начала анализа. Не допускается повторное использование элюента.

3.4.2    Приготовление экстрагента

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 см³ вносят пипеткой 0,1 см³ водного аммиака и отмеряют цилиндром 50 см³ этилового спирта и 50 см³дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.3    Приготовление водно-спиртового раствора

В мерную колбу вместимостью 250 см³ отмеряют цилиндром 50 см³ этилового спирта и 50 см³ дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.4    Приготовление растворов КО

3.4.4.1 В необходимое число стаканов вместимостью 50 см³ каждый взвешивают по 0,05 г красителей по 3.3.20 на лабораторных весах (с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +0,1 мг), характеристики которых приведены в таблице 1.

Таблица 1 — Стандартные красители и их характеристика

Наименование красителя Номер красителя* Номер пищевой добавки** Значения Rf*** Эритрозин 45430 Е127 0,83; 0,69 Флоксин В 45410 — 0,77; 0,71 * Номер красителя — в соответствии с международной классификацией красителей. ** Номер красителя — в соответствии с Европейской кодификацией пищевых добавок. *** Значения Rf получены при условиях проведения анализа стандартных синтетических красителей по 3.2 с использованием средств измерений, вспомогательного оборудования, реактивов и материалов, указанных в 3.3.

3.4.4.2 В каждый стакан с 0,05 г стандартного красителя, подготовленного по 3.4.4.1, прибавляют 5 см³ раствора, полученного по 3.4.3, и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 70 °С. Затем раствор охлаждают до 20 °С и переносят в мерную колбу вместимостью

25 см³, доводят объем до метки раствором, полученным по 3.4.3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор КО хранят в склянках из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре — не более 6 мес.

3.4.5    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ 8756.0.

3.4.6    Подготовка проб

Подготовку проб проводят по ГОСТ 26671, при этом жидкую и измельченную твердую части не объединяют и анализируют отдельно.

3.4.7    Извлечение красителей из анализируемых проб компотов методом твердофазной экстракции

3.4.7.1    Приготовление экстракта твердой части анализируемой пробы компотов

В стакане вместимостью 50 см³ взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания + 100 мг не менее 5 г измельченной твердой части пробы компота, полученной по 3.4.6. Затем в стакан прибавляют экстрагент, приготовленный по 3.4.2 из расчета не менее 8 см³ на 1 г измельченной твердой части пробы. Содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.

Полученную суспензию фильтруют через стеклянный или бумажный фильтр, твердую часть промывают экстрагентом по 3.4.2 из расчета не менее 10 см³ на 1 г измельченной твердой части компота.

3.4.7.2    Подготовка патрона для твердофазной экстракции красителей

Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см³ раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм³, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции, заполненным оксидом алюминия. Патрон промывают раствором ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм³ со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. Объем пропускаемого через патрон раствора ледяной уксусной кислоты должен быть не менее 25 см³. Затем патрон отсоединяют от шприца.

3.4.7.3    Сорбция красителей из экстракта

Измеряют при 20 °С на pH-метре со стеклянным электродом значение pH экстракта, полученного по 3.4.7.1. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (pH от 2,5 до 3,5 ед. pH) корректируют pH экстракта добавлением ледяной уксусной кислоты.

Медицинским шприцем набирают по20 см³ экстракта и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемый экстракт через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемый экстракт через второй патрон. Объем пропускаемого через патрон экстракта должен быть не менее 40 см³. При необходимости используют от 1 до 3 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каждый патрон с сорбированным красителем 25 см³ раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.

3.4.7.4    Десорбция красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают 10 см³ водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим краситель, сорбированный из экстракта по 3.4.7.3. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака с красителем, извлеченным из патрона) собирают в выпарную чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °С до 90 °С. Сразу после испарения раствора аммиака чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают.

Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см³ раствора, приготовленного по 3.4.3.

3.4.7.5    Сорбция красителей из жидкой части анализируемой пробы компота

Измеряют при 20 °С на pH-метре со стеклянным электродом значение pH жидкой части анализируемой пробы компота, полученной по 3.4.6. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (pH от2,5до 3,5 ед. pH) доводят pH жидкой части анализируемой пробы компота добавлением ледяной уксусной кислоты.

Медицинским шприцем набирают от 5 до 10 см³ жидкой части анализируемой пробы компота и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемую жидкую часть компота через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемую жидкую часть через второй патрон. При необходимости используют от 1 до 2 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каж- ²

ГОСТ Р 54068-2010

дый патрон с сорбированным красителем 25 см³ раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.

3.4.7.6 Десорбция красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают 10 см³ водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим сорбированный изжидкой части анализируемой пробы компота краситель по 3.4.7.5. Десорбцию красителей из патронов проводят водным аммиаком — по 3.4.7.4.

Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см³ раствора, приготовленного по 3.4.3.

3.4.8    Подготовка хроматографической камеры

В хроматографическую камеру вносят элюент по 3.4.1 в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.

3.4.9    Подготовка пластин для ТСХ анализа

На хроматографическую пластину карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта (параллельно рискам на обратной стороне пластины). На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.

3.5 Обнаружение и идентификация красителей

На хроматографическую пластину шириной 10 см, подготовленную по 3.4.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм³ растворов КО, приготовленных по 3.4.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм³ анализируемых растворов красителей по

3.4.7.4 и 3.4.7.6. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента — 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.

Линейкой измеряют расстояние от центра каждого пятна красителя и линии границы элюента до линии старта.

4 Обработка результатов

4.1    Значение /^стандартного синтетического красителя вычисляют по формуле

R_f = k    (1)

4

где /_к — расстояние до линии старта от центра пятна стандартного синтетического красителя, см;

/_э — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

4.2    Значение/^ обнаруженного красителя вычисляют по формуле

Щ = ¹\    (2)

^f 4

где/_к — расстояние до линии старта от центра пятна обнаруженного синтетического красителя, см;

/_э — расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

4.3    Сравнивают значения R[, рассчитанные по формуле 2, со значениями R_f КО, рассчитанными по формуле 1, и при совпадении/^ ицвета пятен обнаруженных красителей с R_f и цветом пятен КО делают заключение о наличии или отсутствии эритрозина и флоксина В в анализируемом компоте. ³

УДК 663/664:667.28    ОКС    67.080.10    Н09    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: пищевые продукты, консервированные компоты, синтетические красители, флок-син В, эритрозин, идентификация синтетических красителей, метод тонкослойной хроматографии

Редактор М.Е. Никулина Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор Е.Д. Дульнева Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано в набор 24.08.2011. Подписано в печать 06.09.2011. Формат 60 х 84%. Гарнитура Ариап. Уел. печ. л. 0,93. Уч.-изд. л. 0,79. Тираж 211 экз. Зак. 827.

1

2

3

ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru    info@gostinfo.ru

Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник», 117418 Москва, Нахимовский проспект, 31, к. 2.