Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

15 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 53774-2010 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков: - методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа; - методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы; - методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы.

 Скачать PDF

Заменяет часть&mnsp;ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5, 6

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

4 Отбор проб

5 Методы контроля

     5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

     5.2 Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы

     5.3 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы

     5.4 Метод одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина с использованием тест-набора № 11 (См. Изм. № 1)

     5.5 Метод определения гентамицина с использованием тест-набора № 12 (См. Изм. № 1)

     5.6 Метод определения сульфаметазина с использованием тест-набора № 13 (См. Изм. № 1)

6 Метрологические характеристики

Приложение А (обязательное) Примеры возможных результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах

Библиография

 
Дата введения01.01.2011
Добавлен в базу01.09.2013
Завершение срока действия01.07.2015
Актуализация01.01.2019

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

26.02.2010УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии24-ст
ИзданСтандартинформ2010 г.
РазработанГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии

Milk and milk products. Immunoenzyme methods of the determination antibiotic indication

Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ



НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ


ГОСТР

53774-

2010


МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ


Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков


Издание официальное


2


Москва

Стандартинформ

2010


Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакаде-мии)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. № 24-ст

4    ВЗАМЕН ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5 и 6 (рецепторные методы)

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

ГОСТ P 53774—2010


Содержание

1 Область применения............................................1

2 Нормативные ссылки............................................1


СЛ W со со го

3    Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы................

4    Отбор проб................................................

5    Методы контроля.............................................

5.1    Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа..............

5.2    Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы.............

циклиновой группы..........................................6

6 Метрологические характеристики.....................................7

Приложение А (обязательное) Примеры возможных результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах...................9

Библиография................................................11


5.3    Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетра

ГОСТ Р 53774-2010

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков

Milk and milk products.

Immunoenzyme methods (or determination of antibiotics indication

Дата введения — 2011—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее — молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

-    методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

-    методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы;

-    методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 53430-2009 Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется о части, не затрагивающей эту ссылку.

Издание официальное

3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

3.1    Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °С до 66 ’С с допустимой погрешностью г 0,5 *С.

3.2    Блок термостатированных ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5 г 1.0) °С.

3.3    Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 вС до 12 ”С по ГОСТ 16317.

3.4    Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 г 2) °С.

3.5    Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6    Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

3.7    Пипетки вместимостью 0.5 и 1.0 см3 по ГОСТ 29227.

3.8    Колбы мерные вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770.

3.9    Колбы конические вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.

3.10    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.11    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.12    Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

-    тест-набор № 1 (тест-набор Бета-лактам «Snap*»)’), включающий укупоренные пробирки с

3.3.5.5- триметилбензидином и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа; пипетки мерные вместимостью 0.4 см3; индикаторное устройство с диметилсуль-фоксидом;

-    тест-набор № 2 (тест-набор «Beta Star*®»)1), включающий флаконы, содержащие специфические рецепторы, меченные коллоидным золотом, позволяющие определять антибиотики бета-лактамного типа; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 см3 с одноразовыми наконечниками;

-    тест-набор № 3 (тест-набор «Delvo-X-PRESSeffl--ll»)1), включающий пробирки с реагентом, флакон с индикатором, флакон с сухим контрольным раствором с антибиотиком (буферный раствор, после восстановления содержащий антибиотик с массовой концентрацией 0,003 мкг/г), ампулы с растворителем контрольного раствора (0.01 %-ный водный раствор тимерозала), промывочный раствор (буферный раствор, содержащий глицерин), проявитель (водный раствор ферментного субстрата);

-    тест-набор № 4 (тест-набор Тетрациклин «Snap®»)2>, включающий укупоренные пробирки с

3.3.5.5- триметилбензидином и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики тетрациклиновой группы; пипетки мерные вместимостью 0.4 см3; индикаторное устройство с диметил-сульфоксидом;

-    тест-набор № 5 (тест-набор «TetraStar®»)2*, включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом, позволяющими определять антибиотики тетрациклиновой группы; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 см3 с одноразовыми наконечниками;

11 Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что настоящий стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: Beia-лактам «Snap4» (ООО «ЗИП-И»), «Beta Star*» (0О0«Хр. Хансен»), «Delvo-X-PRESSfpL-ll» (ООО «ДСМ Восточная Европа»).

Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: Тетрациклин «Snap*» (ООО «ЗИП-И»), «TetraStarS» (ООО «Хр.Хансен»).

ГОСТ P 53774—2010

-    тест-набор № 6 (тест-набор «Twinsensor01»)1), включающий пластины микропробирок с буферным солевым раствором и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, индикаторные полоски хроматографической бумаги; шприц-дозатор вместимостью 0.2 см1 с одноразовыми наконечниками; контрольные растворы; пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пенициллина-G 0,004 мкг/r и окси-тетрациклина 0.1 мкг/г. красителя («Positive Standard»); пробирки или флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»);

-    тест-набор № 7 (тест-набор «Betastar* Combo»)1), включающий флаконы со специфическими рецепторами. меченными коллоидным золотом, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 см1 с одноразовыми наконечниками.

Применение конкретного оборудования, средств измерений, посуды, материалов и реактивов осуществляют в соответствии с требованиями разделов 4 и 5.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

4    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ Р 53430 с дополнением. Допускается хранить пробы молока для определения в холодильнике при температуре (5 ± 1) °С не более 24 ч.

5    Методы контроля

5.1    Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

5.1.1    Метод с использованием тест-набора № 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1    Подготовка к определению

Вскрывают упаковку тест-набора № 1. проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

Срок хранения тест-набора № 1 (без упаковки) при температуре (20 г 2) вС — не более 24 ч.

5.1.1.2    Проведение определения

Мерную пипетку вместимостью 0.4 см1 по 3.12 наполняют анализируемым молоком до метки и переносят в пробирку с 3,3,5,5-триметилбензидином и специфическими рецепторами по 3.12. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Пробирку и индикаторное устройство по 3.12 помещают в термостат по 3.1 и выдерживают при температуре (45 г 5) °С в течение 5—6 мин.

Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: «TwinsensorBT» (UNISENSOR SA). «Beta star’ Combo» (ООО «Хр. Хансен»).

Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45 = 5) вС в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения индикаторного устройства из термостата.

5.1.1.3 Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором № 1.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора Ns 2

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1    Подготовка к определению

Необходимое для проведения определения количество комплектов тест-наборов № 2 по 3.12 перед применением выдерживают при комнатной температуре в течение 10—15 мин.

Флаконы с реагентом по 3.12 встряхивают для полного осаждения содержимого на дне.

5.1.2.2    Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0,2 см3 анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек по 3.2 при температуре (47.5 ± 1.0) °С на 3 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и термостатируют еще 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.1.2.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.1.2.2 в соответствии с А.2 (приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

5.1.3    Метод с использованием тест-набора Ns 3

Метод основан на иммуноферментной реакции антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, выделенными из бактерий вида Bacillus stearotermophillus, и перокси-дазой хрена с образованием химически прочного комплекса.

Отсутствие или наличие антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке устанавливают по изменению или отсутствию изменения цвета содержимого пробирки.

5.1.3.1 Подготовка к определению

Из тест-набора № 3 по 3.12 отбирают необходимое количество пробирок, которые перед определением маркируют и выдерживают при комнатной температуре.

Термостат по 3.1 нагревают до температуры (64 = 2) “С и выдерживают при этой температуре не менее 15 мин. 2

ГОСТ P 53774—2010

а)    Подготовка рабочего промывочного раствора

В мерную колбу вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770 пипеткой по ГОСТ 29227 вносят 1 см3 промывочного раствора по 3.12 и доводят объем до метки дистиллированной водой по ГОСТ 6709.

б)    Подготовка контрольного раствора

Флакон с сухим контрольным раствором и ампулу с растворителем по 3.12 вскрывают в соответствии с правилами работы с микробиологическими препаратами [1].

Во флакон с сухим контрольным раствором вносят содержимое ампулы, закрывают пробкой, перемешивают до растворения сухого вещества без образования пены и выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин.

Срок хранения контрольного раствора в холодильнике при температуре от 2 вС до 8 вС — не более

2    мес.

5.1.3.2    Проведение определения

В пробирки с реагентом по 3.12 пипеткой последовательно вносят 0.2 см3 анализируемого молока и 0.2 см3 индикатора. Параллельно в пробирку с реагентом без анализируемого молока пипеткой вносят 0.2 см3 контрольного раствора с антибиотиком по 5.1.3.1 б) и 0.2 см3 индикатора.

Все пробирки устанавливают в термостат и выдерживают при температуре (64 ± 2) °С в течение

3    мин при непрерывном встряхивании.

Пробирки извлекают из термостата и выливают содержимое в слив. Каждую пробирку трижды промывают рабочим промывочным раствором по 5.1.3.1 а), полностью наполняя пробирку раствором и полностью сливая его. После каждого слива пробирки устанавливают на фильтровальную бумагу по ГОСТ 12026 вверх дном.

Затем в каждую пробирку пипеткой добавляют по 1.0 см3 проявителя по 3.12 и выдерживают при комнатной температуре 8 течение 3 мин.

5.1.3.3    Обработка результатов

Определяют цвет содержимого пробирок.

Синий цвет содержимого пробирок с анализируемым молоком свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в нем.

Отсутствие изменения цвета содержимого пробирок с анализируемым молоком свидетельствует о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в нем.

Отсутствие изменения цвета содержимого пробирки с контрольным раствором с антибиотиком свидетельствует о достоверности полученных результатов.

5.2 Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы

5.2.1    Метод с использованием тест-набора № 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.2.1.1    Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 4 по 3.12 проводят по 5.1.1.1.

5.2.1.2    Проведение определения — по 5.1.1.2.

5.2.1.3    Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором № 4.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики тетрациклиновой группы в анализируемом молоке отсутствуют.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о присутствии в нем антибиотиков тетрациклиновой группы.

5.2.2 Метод с использованием тест-набора № 5

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визу-

5

альном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.2.2.1    Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 5 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.2.2.2    Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0.2 см3 анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ. затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек при температуре (47.5 = 1.0) °С на 2 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полосху хроматографической бумаги и термостатируют еще 3 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.2.2.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.2.2.2 в соответствии с А.З (приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

5.3    Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы

5.3.1    Метод с использованием тест-набора № 6

Метод основан на реакции комллексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1.1    Подготовка к определению

Из тест-набора № 6 по 3.12 отбирают необходимое количество пеналов и перед их открытием выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.

Из тест-набора № 6 отбирают и маркируют необходимое количество микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов.

Термост нагревают до температуры (40 : 3) 'С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard»

В пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 см3 дистиллированной воды (0.4 см3 для контрольных растворов во флаконах) и тщательно перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 °С — не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.3.1.2    Проведение определения

Микропробирки по 3.12 помещают в термостат. В каждую микропробирку шприцем-дозатором с наконечником вносят 0.2 см3 анализируемого молока, быстро перемешивают его с реагентом, наполняя и

ГОСТ P 53774—2010

сливая смесь шприцем-дозатором пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают его в течение 3 мин.

В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и термостатиру-ют в течение 3 мин при температуре (40 ± 3) вС. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку вносят 0.2 см3 раствора «Positive Standard», в другую — 0.2 см3 раствора «Negative Standard».

5.3.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А 4 (приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют по 5.3.1.2.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят, как указано выше.

5.3.2 Метод с использованием тест-набора № 7

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.2.1    Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 7 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.3.2.2    Проведение определения — по 5.2.2.2.

5.3.2.3    Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5 (приложение А).

Зона центральной части полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения по 5.2.2.2 не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новой тест-полоской.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы — под контрольной зоной.

Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков испытуемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зон определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

6 Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах приведены в таблице 1.

7

1

2