Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1 

19 страниц

396.00 ₽

Купить ГОСТ Р 53400-2009 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов Clostridium perfringens. Стандарт применяется при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком, и кормов для животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов.

 Скачать PDF

Содержит требования ISO 7937:2004

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Сущность метода

5 Разведение, питательные среды и реактивы

6 Оборудование и лабораторная посуда

7 Отбор проб

8 Подготовка проб для испытания

9 Проведение определения

10 Обработка результатов

11 Протокол испытания

Приложение А (справочное) Результаты межлабораторного испытания

Приложение В (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок

Библиография

 
Дата введения01.07.2011
Добавлен в базу01.09.2013
Завершение срока действия15.02.2015
Актуализация01.02.2020

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

24.09.2009УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии423-ст
ИзданСтандартинформ2010 г.
РазработанГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН
РазработанОАО ВНИИС

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Horizontal method Colony-count technigue of Clostridium erfringens

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ГОСТР

53400-

2009

(ИСО 7937:2004)


НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ


МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ животных

Метод подсчета колоний Clostridium perfringens

ISO 7937:2004

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique

(MOD)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») и Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф Гамалеи» Российской академии медицинских наук (ГУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» РАМН) на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2009 г. № 423-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 7937:2004 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета Clostridium perfringens. Метод подсчета колоний» (ISO 7937:2004 «Microbiology of food and animal feeding stuffs — Honzontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique»). При этом в него не включены предисловие, отдельные слова и фразы примененного международного стандарта, которые нецелесообразно применять в национальной стандартизации. Дополнительные слова, фразы, абзацы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004 (пункт 3.5).

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, приведены в приложении В

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

и

ГОСТ Р 53400-2009

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки............................................1

3    Термины и определения..........................................2

4    Сущность метода.............................................2

5    Разведение, питательные среды и реактивы..............................2

6    Оборудование и лабораторная посуда..................................6

7    Отбор проб.................................................6

8    Подготовка проб для испытания.....................................6

9    Проведение определения.........................................7

10    Обработка результатов..........................................8

11    Протокол испытания...........................................10

Приложение А (справочное) Результаты межлабораторного испытания................11

Приложение В (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем

стандарте в качестве нормативных ссылок.......................14

Библиография................................................15

III

ГОСТ Р 53400-2009 (ИСО 7937:2004)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ Метод подсчета колоний Clostridium perfringens

Method microbiology of food and animal feeding stuffs. Method of Clostridium perfringens colonies count

Дата введения — 2011—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов Clostndium perfringens.

Настоящий стандарт применяется при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком, и кормов для животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГОСТ Р 51426—99 (ИСО 6887—83) Микробиология. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2—88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федеральною агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 январи текущею года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Издание официальное

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применяют спедующие термины с соответствующими определениями:

3.1    Clostridium perfringens (С. perfringens): Бактерии, которые образуют типичные колонии (черный осадок, вызванный разложением сульфита до сульфида, который окрашивает колонии в черный цвет) в определенных селективных средах, и которые дают положительные реакции подтверждения, если испытания проводят в соответствии с одним из двух методов, указанных в настоящем стандарте.

3.2    подсчет колоний С. perfringens: Определение количества способных к росту и подтвержденных бактерий Clostridium perfringens в см3 или г образца при условии проведения испытания в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

4    Сущность метода

4.1    Посев в чашки Петри определенного количества испытуемой пробы, если исходный продукт жидкий, или установленного количества исходной суспензии.

Следующий посев в чашки Петри проводят в аналогичных условиях с использованием десятикратного разведения испытуемой пробы или исходной суспензии.

Добавляют селективную среду (метод пластинчатого посева) и заливают посев сверху слоем той же среды.

4.2    Анаэробная инкубация чашек при 37 °С в течение (20 ± 2) ч.

4.3    Подсчет типичных колоний.

4.4    Подтверждение ряда типичных колоний и определение количества колоний С. perfringens в г или см3 продукта.

5    Разведение, питательные среды и реактивы

В лабораторной практике используют ГОСТ Р ИСО 7218. ГОСТ Р 51448. ГОСТ Р ИСО 11133-1 и ГОСТ Р ИСО 11133-2 для приготовления, производства, проверки и применения питательных сред.

5.1    Разведения

В общем случае разведения по ГОСТ Р ИСО 7218.

5.2    Сульфит-циклосериновый агар (SC)

5.2.1 Состав в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Состав

Значение показателя

Ферментативный белковый гидролизат, г

15.0

Ферментативный соевый гидролизат, г

5.0

Дрожжевой экстракт, г

5.0

Двунатрий дисульфит безводный (Na^Oi), г

1.0

Железо (III) — аммония цитрат*, г

1.0

Агар, г

От 9.0 до 18.0”

Вода, см3

1000

* Реактив должен содержать не менее 15 % железа (массовая доля). ” В зависимости от телеобразующей способности агара.

5.2.1.1 Приготовление среды

Растворяют компоненты среды в горячей воде и доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,6 г 0,2) при 25 "С.

Разливают среду во флаконы или бутылки соответствующей емкости.

ГОСТ Р 53400-2009

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при 121 °С.

Хранят в холодильнике при температуре (5 = 3) °С не более двух недель после приготовления.

5.2.2 Раствор D-циклосерина

5.2.2.1 Состав в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2

Состав

Значение показателя

D-циклосерин*. г

4.0

Вода, см3

100

* Используется белый кристаллический порошок.

5.2.2    2 Приготовление среды

Растворяют D-циклосерин в воде и стерилизуют.

Среду хранят в холодильнике при температуре (3 ; 2) °С не более четырех недель после приготовления.

5.2.3    Полная среда

Непосредственно перед посевом чашечным методом (см. 9.2) добавляют 1 см3 раствора D-цикло-серина (см. 5.2.2) к каждой порции стерильной расплавленной основы среды объемом 100 см3 (см. 5.3.1). охлажденной до 44 С—47 °С.

5.2.4    Проверка качества среды (SC)

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (таблица В.1).

5.3 Жидкая тиогликолатная среда

5.3.1 Состав в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3

Состав

Значение показателя

Ферментативный перевар казеина, г

10.0

L-Цистин, г

0.5

D-Глюкоза, г

5.5

Дрожжевой экстракт, г

5.0

Хлорид натрия, г

2.5

Натрия тиогликолат (меркаптоацетат). г

0.5

Агар, г

0.5—2.0*

Диазорезорин, г

0.001

Вода, см3

1000

* В зависимости от гелеобразующей способности агара.

5.3.2    Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH. чтобы после стерилизации он соответствовал (7.3 г 0.2) при 25 °С.

Среду разливают по 10 см3 в пробирки 16 х 160 мм и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °С. Перед использованием среда должна быть деаэрирована.

5.3.3    Проверка качества тиогликолатной среды

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (см. таблицу В 4).

5.4 Лакто-сульфитная среда (LS) (необязательно)

5.4.1    Основа среды

5.4.1.1    Состав в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

Состав

Значение показателя

Ферментативный перевар казеина, г

5.0

Дрожжевой экстракт, г

2.5

Хлорид натрия, г

2.5

Лактоза, г

10.0

L-Цистин гидрохлорид, г

0.3

D-Глюкоза, г

5.5

Вода, см3

1000

5.4.1.2    Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7.1 ± 0.2) при 25 °С.

Среду разливают по 8 см3 в пробирки с обратными трубками Дархема и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 *С.

Среду хранят в холодильнике при температуре (3 г 2) °С не более четырех недель после приготовления.

5.4.2    Раствор безводного метабисульфита натрия

5.4.2.1 Состав в соответствии с таблицей 5.

Таблица 5

Состав

Значение показателя

Двунатрий дисульфит (Na2S?05) безводный, г

1.2

Вода, см3

100

5.4.2.2 Приготовление

Растворяют двунатрий дисульфит в воде и стерилизуют. Раствор используют в течение дня.

5.4.3 Раствор цитрата железа (III) — аммония

5.4.3.1 Состав в соответствии с таблицей 6.

Таблица 6

Состав

Значение показателя

Железа (III) — аммония цитрат, г

1.0

Вода.см3

100

5.4.3.2 Приготовление раствора

Растворяют цитрат железа (III) — аммония в воде и стерилизуют раствор фильтрованием. Раствор используют в течение дня.

4

ГОСТ Р 53400-2009

5.4.4 Полная среда

Перед составлением полной среды ее деаэрируют нагреванием и последующим быстрым охлаждением. В случае хранения среды во флаконах с завинчивающимися крышками крышки ослабляют перед нагреванием и затем завинчивают перед охлаждением.

Затем к каждым 8 см3 основы среды (см. 5.4.1) добавляют 0.5 см3 раствора цитрата железа (III) — аммония (см. 5.4.3) и 0,5 см3 раствора двунатрия дисульфита (см. 5.4.2)

Среда используется в течение дня.

5.5 Подвижная нитратная среда (необязательно)

5.5.1 Состав в соответствии с таблицей 7.

Таблица 7

Состав

Значение показателя

Ферментативный гидролизат казеина, г

5.0

Мясной экстракт, г

3.0

Галактоза, г

5.0

Глицерин.г

5.0

Азотнокислый калий (KNOj), г

1.0

Динатрийфосфат (NajHPO,). г

2.5

Агар.г

1.0—5.0*

Диазорезорин,г

0.001

Вода, см3

1000

* В зависимости от гелеобразующей способности агара.

5.5.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH. чтобы после стерилизации он соответствовал (7.3 г 0.2) при 25 °С.

Среду разливают в пробирки с выросшей разводкой-культурой по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °С. Если среду не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре (5 = 3) °С не более четырех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

5.6    Нитратный реактив обнаружения (необязательно)

5.6.1    Раствор 5-амино-2-нафталинсульфокислоты (5-2-ANSA)

Растворяют 0.1 г 5-2-ANSA в 100 см315 %-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре (5 ± 3) °С.

5.6.2    Раствор сульфаниловой кислоты

Растворяют 0.4 г сульфаниловой кислоты в 100 см315 %-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре (5 ± 3) “С.

5.6.3    Приготовление полного реактива

Смешивают равные количества двух растворов (см. 5.6.1 и 5.6.2) непосредственно перед использованием. Неиспользованный реактив уничтожают.

5.7    Цинковая пыль (необязательно)

5.8    Лактозо-желатиновая среда

5.8.1 Состав в соответствии с таблицей 8.

5

Т а 6 п и ца 8

Состав

Значение показателя

Фермента тинный гидролизат казеина, г

15.0

Дрожжевой экстракт, г

10,0

Галактоза, г

10.0

Желатин, г

120.0

Фенол красный, г

0.05

вода, см3

1000

5.8.2 Приготовление среды

Растворяют компоненты в воде (кроме лактозы и фенола красного). Устанавливают уровень pH. чтобы после стерилизации он соответствовал (7.5 г 0.2) при 25 "С.

Добавляют лактозу и фенол красный. Среду разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °С. Если среду не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре (5 г 3) не более трех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

6    Оборудование и лабораторная посуда

Примечание — При одинаковой спецификации одноразовое оборудование предпочтительнее многоразовою.

Используют обычное лабораторное оборудование, а также следующее:

6.1    Стерилизаторы сухожаровые (печи) или паровые (автоклавы) по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.2    Термостат, поддерживающий температуру (37 = 1) *С.

6.3    Анаэростат, обеспечивающий культивирование анаэробных микроорганизмов.

6.4    pH-метр с разрешением 0,01 единиц pH и точностью г 0.1 pH при 25 °С.

6.5    Бактериологические петли из платино-иридиевого или никель-хромового сплава, около 3 мм в диаметре, и иглы из тех же материалов для пересева в агаровые косяки.

6.6    Приборы для фильтрования, предназначенные для стерилизации растворов.

6.7    Пробирки размером 16 х 160 мм с перевернутыми трубками Дархема, длиной 35 мм и диаметром 7 мм.

6.8    Пипетки с полным сливом, номинальным объемом от 1 до 10 см3.

6.9    Чашки Петри, из стекла или пластмассы, диаметром 90—100 мм.

6.10    Водяная баня, поддерживающая температуру от 44 °С до 47 °С.

6.11    Резиновые колбы, используемые с градуированными пипетками для разбрызгивания компонентов нитратного реактива обнаружения (при необходимости).

7    Отбор проб

8    лабораторию направляют представительный образец Образец не должен быть поврежден или изменен в процессе транспортирования или хранения

Отбор проб не является частью метода, приведенного в настоящем стандарте. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно отбора проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта для данного продукта.

8 Подготовка проб для испытания

Подготовку проб проводят в соответствии со специальным стандартом для данного продукта. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно подготовки проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта на подготовку проб данного продукта.

ГОСТ Р 53400-2009

9 Проведение определения

9.1    Метод приготовления исходной суспензии и последующие разведения

Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно соответствующей части ГОСТ 26669.

9.2    Посев и инкубирование (чашечный метод)

С помощью стерильной пипетки (см. 6.8) переносят в двух повторностях 1 см3 исходной суспензии или испытуемой пробы (если продукт жидкий) в центр пустых чашек Петри (см. 6.9).

Наливают в обе чашки от 10 до 15 ca^SC агара (см. 5.2.3), подогретого в водяной бане (см. 6.10) при температуре от 44 °С до 47 °С. и хорошо перемешивают с испытуемой пробой, осторожно вращая чашки. После затвердевания среды добавляют сверху 10 см3 дополнительно SC агара.

Оставляют чашки для затвердевания агара. Застывшие чашки агара с исходной пробой помещают в анаэростат или другие приборы, обеспечивающие культивирование анаэробных микроорганизмов, и инкубируют в анаэробных условиях в течение (20 г 2) ч при температуре 37 °С.

Более продолжительное инкубирование может привести к излишнему почернению среды.

Повторяют процедуру с последующими десятикратными разведениями (см. 9.1).

9.3    Подсчет и выделение колоний

После установленного периода инкубации (см. 9.2) выделяют все чашки Петри, содержащие менее 150 колоний. Из них выделяют чашки с двумя последовательными разведениями. Подсчитывают на каждой чашке характерные колонии, предположительно относящиеся к С. perfringens.

Выделяют из каждой чашки пять типичных колоний и подтверждают их. используя одну из методик, описанных в 9.4.2 или 9.4.3.

9.4    Биохимическое подтверждение

9.4.1    Общие положения

Для целей подтверждения может быть использован набор сред для биохимических испытаний в соответствии с ГОСТ Р ИСО 7218.

9.4.2    Методика подтверждения с использованием среды LS

Примечание — Реакции, протекающая в лактозо-сульфитной среде (см. 5.4) при 46 *С. очень специфична для С. perfringens и С. absonum. Поэтому необязательно добиваться дополни тельной очистки черных колоний. выделенных с агаровой среды, перед их посевом на тиогликолатную и затем на лактозо-сульфитную среду.

9.4.2.1    Пересев и инкубирование

Каждую изолированную колонию (см. 9.3) пересевают на жидкую тиогликолатную среду (см. 5.3). Инкубируют в анаэробных условиях в течение 18—24 ч при температуре 37 вС.

9.4.2.2    Обработка результатов

Исследуют пробирку с LS средой, учитывая образование газа и наличие черного окрашивания (осадок сульфита железа). Трубки Дархема, заполненные более чем на одну четвертую часть газом, и пробирки, содержащие черный осадок, оценивают как положительные.

В сомнительных случаях, когда трубка Дархема в пробирке с почерневшей средой заполнена газом менее чем на четверть, без промедления, с помощью стерильной пипетки переносят пять капель культуры с LS средой (см. 9.4.2.1) в другую пробирку с той же средой. Инкубируют на водяной бане (см. 6.10) при температуре от 46 °С в течение 18—24 ч. Оценивают эти пробирки, как описано выше.

Бактерии, которые образуют типичные колонии на LS среде и дают положительную реакцию подтверждения на LS среде, относят к С. perfnngens. Во всех прочих случаях пробирки с посевами рассматривают как отрицательные.

9.4.3 Методика подтверждения с использованием подвижной нитратной среды и лактозо-желатиновой среды

9.4.3.1 Общие положения

Для данной методики подтверждения требуются хорошо изолированные типичные колонии. Если их нет (т. е. они чрезмерно разрослись на поверхности чашек, и нет возможности выбрать хорошо изолированные типичные колонии), засевают пять типичных колоний на предварительно деаэрированные жидкие тиогликолатные среды (см. 5.3).

Инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37 °С в течение 18—24 ч. Штрихуют колонии на чашках с основным агаром SC (5.2.1.2) и добавляют сверху 10 см3 основного агара SC.

7