Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

65 страниц

563.00 ₽

Купить ГОСТ Р 53244-2008 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на пищевые продукты, а также корма и растительные образцы, отобранные из окружающей среды.

Стандарт устанавливает количественные методы определения генетически модифицированных организмов (ГМО) в пищевых продуктах, а также в кормах и растительных образцах, отобранных из окружающей среды с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), и общие требования к специфической амплификации целевых последовательностей дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) с целью количественного определения содержания ДНК из ГМО, а также для подтверждения идентичности амплифицированной последовательности ДНК.

Основные принципы, минимальные требования и критерии исполнения, изложенные в стандарте, предназначены для обеспечения сравнимости, точности и воспроизводимости результатов, полученных в разных лабораториях.

 Скачать PDF

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Принцип

     4.1 Общие положения

     4.2 Амплификация, обнаружение и подтверждение продуктов ПЦР

     4.3 Количественное определение продуктов ПЦР

5 Реактивы

6 Приборы и оборудование

7 Руководство, касающееся процедуры

     7.1 Общие положения

     7.2 Стабильность целевой последовательности

     7.3 Калибровка анализа

     7.4 Особенности количественного определения

     7.5 Требования к обеспечению качества

8 Интерпретация результатов

9 Выражение результата

10 Протокол испытания

Приложение А (рекомендуемое) Метод, специфический для целевого таксона

Приложение В (рекомендуемое) Методы скрининга.

Приложение С (рекомендуемое) Методы, специфические для конструкций

Приложение D (рекомендуемое) Метод, специфический для трансформационного события

Приложение Е (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок

Библиография

 
Дата введения01.01.2010
Добавлен в базу01.09.2013
Актуализация01.01.2019

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

25.12.2008УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии781-ст
ИзданСтандартинформ2009 г.
РазработанИнститут физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук
РазработанАссоциация Биологическая, экологическая и продовольственная безопасность

Foodstuffs. Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products. Quantitative nucleic acid based methods

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

ГОСТР

53244-

2008

(ИСО 21570:2005)


НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ


Продукты пищевые

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ И ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ НИХ ПРОДУКТОВ

Методы, основанные на количественном определении нуклеиновых кислот

ISO 21570:2005

Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Quantitative nucleic acid based methods

(MOD)

Издание официальное

Москва

Стамдартииформ

2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Институтом физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук при участии Ассоциации «Биологическая, экологическая и продовольственная безопасность» на основе аутентичного перевода международного стандарта, указанного в пункте 4

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 447 «Биологическая безопасность пищевых продуктов, кормов и товаров народного потребления и методы ее контроля»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 декабря 2008 г. № 781-ст

4    Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 21570:2005 «Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на количественном определении нуклеиновых кислот» (ISO 21570:2005 «Foodstuffs — Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products — Quintitative nucleic add basid methods»).

При этом в него не включены приложение С в части СЗ. С6 и С7 и приложение D в части D1 примененного международного стандарта, которые преждевременно применять в национальной стандартизации в связи с тем. что линии кукурузы Event176 и Btl 1 не входят в перечень генно-инженерно-модифицированных организмов, разрешенных для реализации населению и использования в пищевой промышленности в Российской Федерации (2008 г.).

При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, указанные в приложении Е

5    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ. 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 53244-2008

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки............................................1

3    Термины и определения..........................................2

4    Принцип...................................................2

4.1    Общие положения...........................................2

4.2    Амплификация, обнаружение и подтверждение продуктов ПЦР..................2

4.3    Количественное определение продуктов ПЦР............................2

5    Реактивы..................................................2

6    Приборы и оборудование.........................................3

7    Руководство, касающееся процедуры..................................3

7.1    Общие положения...........................................3

7.2    Стабильность целевой последовательности............................3

7.3    Калибровка анализа..........................................3

7.4    Особенности количественного определения............................3

7.5    Требования к обеспечению качества.................................3

8    Интерпретация результатов........................................4

9    Выражение результата...........................................4

10    Протокол испытания...........................................5

Приложение А (рекомендуемое) Метод, специфический для целевого таксона.............6

Приложение В (рекомендуемое)    Методы скрининга...........................11

Приложение С (рекомендуемое)    Методы, специфические для конструкций..............17

Приложение D (рекомендуемое) Метод, специфический для трансформационного события .... 52 Приложение Е (справочное) Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов

национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем

стандарте в качестве нормативных ссылок.......................57

Библиография................................................58

Введение

Поиск ингредиентов полученных генетически модифицированных организмов осуществляется путем следующих последовательных (или одновременных) стадий. После отбора анализируемой пробы из лабораторной пробы экстрагируются нуклеиновые кислоты. Экстрагированные нуклеиновые кислоты могут далее очищаться в процессе экстракции или после него. Затем производят его количественное определение (при необходимости), разбавление (при необходимости), и он подвергается аналитическим процедурам (таким как ПЦР). Эти стадии подробно изложены в настоящем Международном стандарте и в следующих Международных стандартах:

ИСО 21569 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Методы, основанные на качественном определении нуклеиновых кислот (1):

ИСО 21571 Продукты пищевые. Методы анализа, предназначенные для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Экстракция нуклеиновых кислот (2].

Международная организация по стандартизации (ИСО) обращает внимание на тот факт, что заявлено, что соблюдение настоящего документа может включать использование патента, касающегося технологии ПЦР.

ИСО было проинформировано, что Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. и Hoffman-La Roche являются держателями патентных прав, касающихся технологии ПЦР. Компании гарантировали ИСО, что они намерены вести переговоры о лицензиях на приемлемых и не дискриминационных условиях с заявителями по всему миру. В этой связи заявления держателей этих патентных прав зарегистрированы ИСО. Информация может быть получена от:

Licensing Department Applied Biosystems 850 Lincoln Centre Drive Foster City, CA 94404, USA и

Roche Molecular Systems, Inc.

Licensing Department 1145 Atlantic Avenue Alameda. CA 94501, USA.

Обращается внимание на возможность того, что некоторые элементы настоящего документа могут быть предметом патентных прав иных, чем определенные выше. ИСО не может нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех патентных прав.

IV

ГОСТ Р 53244-2008 (ИСО 21570:2005)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Продукты пищевые

МЕТОДЫ АНАЛИЗА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ

И ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ НИХ ПРОДУКТОВ

Методы, основанные на количественном определении нуклеиновых кислот

Foodstuffs. Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms and derived products.

Quantitative nudeic add based methods

Дата введения — 2010—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, а также корма и растительные образцы. отобранные из окружающей среды.

Настоящий стандарт устанавливает количественные методы определения генетически модифицированных организмов (далее — ГМО) в пищевых продуктах, а также в кормах и растительных образцах, отобранных из окружающей среды с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), и общие требования к специфической амплификации целевых последовательностей дезоксирибунокле-иновой кислоты (ДНК) с целью количественного определения содержания ДНК из ГМО. а также для подтверждения идентичности амплифицированной последовательности ДНК.

Основные принципы, минимальные требования и критерии исполнения, изложенные в настоящем стандарте, предназначены для обеспечения сравнимости, точности и воспроизводимости результатов, получаемых в разных лабораториях.

Методы количественного определения содержания ДНК из ГМО и подтверждения идентичности амплифицированной последовательности ДНК приведены в приложениях А—D.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий

ГОСТ Р 50779.11-2000 (ИСО 3534-2—93) Статистические методы. Статистическое управление качеством. Термины и определения

ГОСТ Р 52173-2003 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения

ГОСТ Р 52174-2003 Биологическая безопасность. Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа

ГОСТ Р 53214-2008 (ИСО 24276:2006) Продукты пищевые. Методы анализа для обнаружения генетически модифицированных организмов и полученных из них продуктов. Общие требования и определения

Издание официальное

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным о текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 50779.11 и ГОСТ Р 53214.

4    Принцип

4.1    Общие положения

Каждый количественный метод, приведенный в приложениях A—D. определяет конкретную целевую последоеательность(и) ДНК*.

Результат количественного определения должен явно выражать (в процентах) содержание целевой последовательности относительно количества специфического стандарта, соответствующих калибровок и контролей и быть внутри динамического диапазона применяемого аналитического метода и анализируемой пробы.

Количественное определение** состоит:

-    из амплификации одной или большего числа специфических целевых последовательностей;

-    обнаружения и подтверждения специфичности продукта(ов) ПЦР и

-    определения содержания амплифицированных фрагментов (продуктов ПЦР) относительно калибровок.

Отбор проб — по ГОСТ Р 52173, ГОСТ Р 52174.

4.2    Амплификация, обнаружение и подтверждение продуктов ПЦР

Принципы амплификации, обнаружения и подтверждения последовательностей ДНК — в соответствии с ИСО 21569 [1].

4.3    Количественное определение продуктов ПЦР

Принцип количественного определения состоит в определении соотношения (выраженного в процентах) двух целевых последовательностей ДНК, т. е. последовательности, представляющей интересующий генетически модифицированный организм и последовательности (эндогенной), специфической для целевого таксона.

Материалы, применяющиеся для калибровки, которые используют для количественного определения. должны быть пригодными для контроля с сертифицированными эталонными материалами (СЭМ), если таковые имеются. Если такие материалы отсутствуют, следует использовать другие подходящие эталонные материалы***.

5    Реактивы

Все реактивы и материалы, используемые для анализа, должны быть идентичны или эквивалентны определенным в методе. В противном случае все реактивы и материалы должны иметь квалификацию «для молекулярно-биологических работ» (molecular biology grade). Эти реактивы следует хранить и использовать, как рекомендовано производителем или в соответствии с техническими требованиями обеспечения качества лабораторных работ в соответствии с ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025.

* Количественное определение допускается проводить с использованием конкурентной ПЦР (3).(4) или ПЦР в реальном времени (51,(6).

** В случае использования ПЦР в реальном времени амплификация, обнаружение и подтверждение происходят одновременно.

*** Приморноо руководство приводом е (7). Информация об исследованиях подтверждения достоверности и погрешности измерений собраны в международных исследованиях [8]. (9). [ТО]. [11].

2

ГОСТ Р 53244-2008

6    Приборы и оборудование

См. приложения А—D и ГОСТР 53214.

7    Руководство, касающееся процедуры

7.1    Общие положения

Общие требования, имеющие отношение к ПЦР-амплификации для обнаружения ГМО, описаны в ИСО 21569(1).

В приложениях А—D описаны методы ПЦР-детектирования наряду с деталями их возможностей и применения. Для каждого метода подробно описаны демонстрируемые рабочие характеристики.

Концентрация анализируемой последовательности ДНК должна находиться внутри динамического диапазона метода.

Примечай и е —Для определения достаточно ли качество кодирующей нити ДНК (по длине и структурной целостности), а также достаточны ли ее чистота и количество для обеспечения обнаружения и количественного определения ГМО. принадлежащего к целевому таксону, может быть проведен контроль, специфический для целевого таксона. Он может быть тем более обоснован, когда ДНК экстрагирована из композитного или подвергнувшегося глубокой обработке материала.

ДНК. экстрагированная из каждой анализируемой пробы, должна быть проанализирована не менее чем в двух повторностях.

Должны быть использованы соответствующие контроли [см. ГОСТ Р 53214 (таблица 1)).

7.2    Стабильность целевой последовательности

Для сортов различного географического и филогенетического происхождения следует учитывать стабильность целевой последовательности как аллельную, так и по числу копий.

7.3    Калибровка анализа

Следует применять соответствующее число калибровочных точек и повторностей, охватывающих диапазон количественного определения (например, четыре калибровочных точки в двух повторностях (всего четырех два значения) или шесть калибровочных точек с одним измерением в каждой точке (всего шесть значений)). Качество калибровки влияет на погрешность измерения [11].

В качестве альтернативы геномной ДНК в качестве эталонного материала для калибровки допускается использовать, например, серию разбавлений плазмиды или синтетической двухцепочечной ДНК. содержащих целевую последовательность, при условии, что она демонстрирует при калибровке поведение, аналогичное эталонному материалу геномной ДНК и геномной ДНК, экстрагированной из анализируемой пробы.

7.4    Особенности количественного определения

Методы ПЦР должны быть соответствующим образом разработаны с целью минимизации вариабельности.

Примечание — В зависимости от применяемого метода и/или анализируемого материала присутствие конструкций, включающих несколько целевых генов, может привести к преувеличению фактического содержания ГМО.

Предел количественного определения (LOQ) — в соответствии с ГОСТ Р 53214.

На расчет содержания ГМО. основанный на числе копий целевых последовательностей в гаплоидном геноме, влияет гомо- и гетерозиготность изучаемых проб (см. приложения А—D).

Применение метода Д\С{ (порогового цикла) обосновано только в том случае, если эффективности амплификации пробы, специфической для целевого таксона, и пробы, специфической для ГМО. очень близки.

7.5    Требования к обеспечению качества

Для установления достоверности изменений необходимо знание относительного стандартного отклонения воспроизводимости метода в соответствии с ГОСТ Р 5725-1 и ГОСТ Р 5725-6. Если наличие происходящей из ГМО ДНК (в процентах) запротоколировано, необходимы:

а) согласованность результатов для каждой лабораторной пробы, достигающаяся:

- через отбраковку измерений меньших, чем предел количественного определения, и

3

-    через максимальное отклонение, наблюдаемое между разбавлениями и индивидуальными измерениями, равное значению, ожидаемому, исходя из соответствующего фактора разбавления, ± 33 %:

Ь) согласованность между тестируемыми частями лабораторной пробы:

-    определенные относительные концентрации происходящей из ГМО ДНК, полученные с учетом перечисленного в пункте а), для каждой анализируемой пробы не должны различаться на значение более чем от минус 50 % до плюс 100 % значения обнаруженного количества (равного ДС| 1 при ПЦР в реальном времени) (т. е. для двух анализируемых проб приемлемы результаты измерений 1.0 % и 2.0 %. в то время как 0.9 % и 2.1 % — неприемлемы).

Для того чтобы гарантировать точность измерений для количества происходящей из ГМО ДНК следует выбирать и анализировать стандартный материал (СМ), предпочтительно сертифицированный (ССМ), с соответствующим уровнем метрологической надежности и с надлежащим сходством вещества продукта. В отсутствие ССМ может быть приготовлен СМ собственного производства с помощью процедуры. обеспечивающей стабильность, однородность и единство измерений и гарантирующей отсутствие систематической погрешности. Оцененная количественно погрешность должна удовлетворять требуемой для калибровки (см. ИСО Руководство 32) [12].

8 Интерпретация результатов

Результаты ПЦР могут быть либо

a)    пригодными для количественной оценки целевой последовательности при условии, что

-    результат положительный в соответствии с ИСО 21569 (подраздел 8.1) [1] и таблицей 2 ГОСТ Р 53214;

-    наблюдаемое ингибирование реакции незначительно:

-    аналитические процедуры дают недвусмысленные значения измерений:

-    количество целевой последовательности находится внутри динамического диапазона метода и

-    проведена калибровка аналитической процедуры в соответствии с 7.3,

либо

b)    не пригодными для количественной оценки целевой последовательности, если любое из перечисленных выше условий не было соблюдено.

Для того чтобы лаборатория могла дать обоснованное заключение, погрешность измерения должна быть достаточно мала.

В приложениях A—D приведены измерения количества целевой ДНК. Эти количества могут быть использованы для расчета количества ГМО. Эти расчеты обычно принимают во внимание такие биологические факторы, как гомо- и гетерозиготность целевых последовательностей.

Если количество целевой ГМ-лоследовательности или последовательности, специфической для целевого таксона, установленное в ходе испытания, ниже предела количественного определения (LOQ), результат следует выражать только качественно (в анализируемой пробе ДНК из ГМО присутствует).

Примечание — Утверждение, что количество происходящей из ГМО ДНК ниже предела количественного определения, сопровождающееся спецификацией этого предела количественного определения, рассматривают как качественное выражение результата.

9 Выражение результата

Результаты должны ясно констатировать количество целевой ГМ-лоследовательности относительно последовательности, специфической для целевого таксона. Результаты должны также содержать значения погрешности измерения, такие как стандартное отклонение или относительное стандартное отклонение. Кроме того, следует приводить значения предела детектирования и предела количественного определения метода и фактические пределы детектирования и количественного определения.

Целевая последовательность может быть, а может и не быть обнаружена, или количество, по крайней мере, одной из них может быть ниже предела количественного определения В таблице 1 описаны четыре альтернативных случая и соответствующее им выражение результата, которые должны быть включены в протокол испытания.

4

Таблица 1 — Выражение результатов

Результат

Выражение результата

Последовательность, специфическая для целевого таксона, не обнаружена

См. ИСО 21569 (7).

«Для вида х*» ДНК не обнаружена*

Последовательность, специфическая для целевого таксона, обнаружена, но не обнаружена целевая последовательность, происходящая из ГМО

В соответствии с ИСО 21569 [1].

«Для вида х» ДНК. происходящая из ГМО. не обнаружена».

В надлежащих случаях, кроме того, добавляется «Фактический предел детектирования составляет X %» (указывают используемые единицы измерения)

Обнаружены как последовательность, специфическая для цехтевого таксона, так и целевая последовательность. происходящая из ГМО. однако, количество, по крайней мере, одной из целевых последовательностей ниже предела количественного определения

Для каждого ГМО констатируется;

«ДНК. происходящая из ГМО (специфицируется ГМО). обнаружена с помощью (специфицируется целевая последовательность), получетвюй из (специфицируется вид)».

В надлежащих случаях, кроме того, добавляется «Фактический предел количественного определения составляет X %» (указывают используемые единицы из-

МРПЙииа1

Обнаружены как последовательность, специфическая для целевого таксона, так и целевая последовательность, происходящая из ГМО. и количество обеих целевых последовательностей выше предела количественного определения

Для каждого ГМО констатируется;

«Содержание ДНК. происходящей из ГМО (специфицируется ГМО). обнаруженное с помощью (специфицируется целевая последовательгюсть) полученной из (специфицируется вид), составляет X i погрешность. %» (указывают используемые единицы измерения)

* Указывают таксономическую принадпежность анализируемого растения. Например, к ДНК сои не обнаружена».

Допускается также указывать содержание ДНК. происходящей из ГМО. с учетом погрешности измерения как в том случае, когда оно превышает конкретное значение, так и когда не достигает его.

10 Протокол испытания

Протокол испытания — в соответствии с ГОСТ Р 53214 и ИСО 21569 [1J и должен содержать следующую дополнительную информацию:

a)    предел количественного определения (LOQ) метода и материал, с помощью которого он был установлен:

b)    фактический предел количественного определения;

c)    ссылку на метод, который был использован для экстракции ДНК;

d)    ссылку на использованные материалы;

e)    результаты, выраженные в соответствии с разделом 9.

5

ГОСТ Р 53244-2008

Приложение А (рекомендуемое)

Метод, специфический для целевого таксона

А.1 Метод определения абсолютного количественного содержания ДНК гена adhl из кукурузы (специфический для цолового таксона) с использованием мотода ПЦР в реальном вромсни

А.1.1 Введение

В этом приложении описан метод специфической амплификации и количественного определения (вспомогательного) гена adhl (кодирующею алкогольдегидрогеназу 1) из кукурузы (Zoa mays) для определения содержания ДНК кукурузы или для обнаружения присутствия/отсутствия в растворах ДНК. экстрагированной из продуктов, содержащих кукурузную ДНК. например, из пищевых продуктов, детектируемых количеств ингибиторов ПЦР.

Ограничения см. в А. 1.8.

А.1.2 Статус подтверждения достоверности и характеристики рабочих параметров

А.1.2.1 Общие положения

Метод был оптимизирован для ДНК. экстрагированной из чистых размолотых кукурузных зерен, листьев кукурузы и сертифицированных стандартных материалов (серий IRMM-411, IRMM-412. IRMM-413 (13). (14)).

Воспроизводимость описанного метода была проверена с помощью совместных испытаний лабораторий с использованием неизвестных образцов (от U1 до U6). состоящих из ДНК кукурузы дикого типа с различным числом копий соответствующей целевой последовательности (см. А. 1.2.2). а также в других совместных испытаниях лабораторий в комбинации с методами, специфическими для трансформационных событий ГМ-кукурузы.

Число копий целевой последовательности на гаплоидный геном должно быть равно единице [14].

Должна быть установлена аллельная стабильность целевой последовательности [14].

А.1.2.2 Совмостныо испытания лабораторий1

Для построения калибровочной кривой для определения абсолюшого количества гаплоидных геномов кукурузы в неизвестных образцах были использованы шесть образцов (S1—S6) ДНК кукурузы дикого типа (экстрагированной из материала листьев (16). содержащей известное абсолютное число копий (183486. 61162. 20387. 6796. 2265 и 755) гаплоидных геномов кукурузы. Абсолютное число копий в известных образцах было определено путем деления массы ДНК (определенной методом флуориметрического количественного определения двухцепочечной ДНК производства фирмы PicoGreen. Molecular Probes. Cal. Number P-7589) на опубликованное среднее значение 1C для геномов кукурузы (2,725 пг) [17].

Шесть образцов (U1—1)6) ДНК кукурузы дикого типа (экстрагированной из материала листьев [16]) были использованы в качестве неизвестных образцов. Ожидаемое число копий в неизвестных образцах было определено тем же методом, что и в известных образцах.

Результаты подтверждения достоверности метода, полученные в ходе совместных испытаний лабораторий, суммированы в таблице А.1.

Валидация метода была также проведена в комбинации с методами, специфическими для трансформационных событий для нескольких образцов ГМ-кукурузы. например, для сладкой кукурузы ВП1. Подробности комбинированных испытаний (относительного количественного определения) см. в (18) и (19).

Таблица А.1 — Данные валидации

Ноииемованио показатопя

Образец

U1

U2

из

U4

U5

U6

Число участвовавших лабораторий

12

12

12

12

12

12

Число лабораторий, имевших возвратные результаты

10

10

10

10

10

10

Число неработоспособных (invalid) лабораторий

1

1

1

1

1

1

1

Подтверждение достоверности (валидация) метода было проведено в ходе совместных испытаний лабораторий. организованных Объединенным исследовательским центром Еврокомиссии (EC-JRC) и Институтом защиты здоровья и потребителей (IHCP) в соответствии с Международным протоколом гармонизации (15).