Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

19 страниц

396.00 ₽

Купить ГОСТ Р 52347-2005 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает экспрессный метод определения содержания аминокислот: лизина, метионина, треонина, цистина и триптофана с помощью капиллярного электрофореза.

  Скачать PDF

Действие завершено 01.07.2013

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Диапазоны измерений содержания аминокислот и метрологические характеристики метода

4 Требования техники безопасности

5 Отбор и подготовка проб к выполнению измерений

6 Определение содержания лизина, метионина, треонина и цистина

7 Определение содержания триптофана

8 Контроль качества результатов измерений

Приложение А (обязательное) Требования к обработке посуды и использованию оснастки, необходимой для выполнения измерений

Приложение Б (рекомендуемое) Методика определения оптимальной рабочей длины волны при анализе аминокислот

Библиография

Показать даты введения Admin

ГОСТ Р 52347— 2005

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания аминокислот (лизина, метионина, треонина, цистина и триптофана) методом капиллярного электрофореза

Издание официальное

Москва

Стандартииформ

2005

Предисловие

Задачи, основные принципы и правила проведения работ по национальной стандартизации в Российской Федерации установлены ГОСТ Р 1.0-92 «Государственная система стандартизации Российской Федерации. Основные положения» и ГОСТ Р 1.2-92 «Государственная система стандартизации Российской Федерации. Порядок разработки государственных стандартов»

Сведения о стандарте

1    РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом «Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности» (ОАО «ВНИИКП»), Научно-производственной фирмой аналитического приборостроения «Люмэкс» (НПФ АП «Люмэкс»), Федеральным государственным учреждением «Ленинградской межобластной ветеринарной лабораторией» (ФГУ ЛМВЛ)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2005 г. Ne 136-ст

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст этих изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случаях пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»

© Стандартинформ. 2005

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 52347-2005

Содержание

1    Область применения................................................................1

2    Нормативные ссылки................................................................1

3    Диапазоны измерений содержания аминокислот и метрологические характеристики метода----2

4    Требования техники безопасности.....................................................2

5    Отбор и подготовка проб к выпопнению измерений.......................................3

6    Определение содержания лизина, метионина, треонина и цистина..........................3

7    Определение содержания триптофана.................................................9

8    Контроль качества результатов измерений..............................................12

Приложение А (обязательное) Требования к обработке посуды и использованию оснастки,

необходимой для выполнения измерений...................................13

Приложение Б (рекомендуемое) Методика определения оптимальной рабочей длины волны

при анализе аминокислот................................................14

Библиография.......................................................................14

III

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Определение содержания аминокислот (лизина, метионина, треонина, цистина и триптофана)

методом капиллярного электрофореза

Mixed fodders, raw mixed fodders Determination of amino acids (lysine, methionine, threonine, cystine and triptophane) content by method of capillary electrophoresis

Дата введения — 2006—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает экспрессный метод определения содержания аминокислот: лизина, метионина, треонина, цистина и триптофана с помощью капиллярного электрофореза.

Метод основан на разделении в кварцевом капилляре под действием электрического поля ионных форм аминокислот и на их детектировании по собственному поглощению в ультрафиолетовой (УФ) области.

Идентификацию и количественное определение анализируемых аминокислот проводят с помощью установленного программного обеспечения.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4107-78 Бария гидроокись 8-водная. Технические условия

ГОСТ 4199-76 Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия ГОСТ 10521-78 Кислота бензойная. Технические условия ГОСТ 13496.0-80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13586.3-83 Зерно. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 13979.0-86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия ГОСТ 17083-87 Электротепловентиляторы бытовые. Общие технические условия

Издание официальное

ГОСТ Р 52347-2005

ГОСТ 17681-82 Мука животного происхождения. Методы испытаний ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27262-87 Корма растительного происхождения. Метод отбора проб ГОСТ 27668-88 Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменек*ным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Диапазоны измерений содержания аминокислот и метрологические характеристики метода

Диапазоны измерений содержания аминокислот (АК) и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности приведены в табл. 1 (при вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратичное отклонение повторяемости) ап %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичное отклонение воспроизводимости) о*. %

Показатель точности (границы относительной погрешности) 18. %

Лизин, г/дм3: от 0,25 до 1,0 в ключ

20

25

50

се. 1.0 » 2.5 »

15

20

40

» 2,5 » 10 »

10

14

28

Метионин, г/дм3: от 0,3 до 1,0 включ

20

25

50

се. 1.0 » 3.0 »

15

20

40

Треонин, г/дм3: от 0.25 до 1.0 включ

20

25

50

се 1,0 » 3.0 »

15

18

36

Цистин, г/дм3: от 0.2 до 2.0 включ.

20

25

50

Триптофан, г/дм3: от 0.1 до 2.0 включ

11

15

30

4 Требования техники безопасности

4.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

ГОСТ Р 52347-2005

4.2    Помещение, в котором проводится выполнение измерений, должно быть снабжено приточновытяжной вентиляцией. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу.

4.3    При работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать резиновые перчатки.

5    Отбор и подготовка проб к выполнению измерений

5.1    Отбор проб —по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 17681, ГОСТ 27262ГОСТ 27668.

5.2    Подготовка пробы к анализу — по ГОСТ Р 51419 с использованием сита с отверстиями диаметром 1 мм.

6    Определение содержания лизина, метионина, треонина и цистина

6.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Система капиллярного электрофореза с диапазоном изменения рабочего напряжения от 1 до 25 кВ, системой поддержания рабочей температуры капилляра, спектрофотометрическим детектором, предназначенным для регистрации оптического поглощения в области 190—200 нм, снабженная кварцевым капилляром (эффективная длина 65 см, внутренний диаметр 0,05 мм), типа «Капель-105» по (1).

Программно-аппаратный комплекс для сбора и обработки хроматографических данных типа «МультиХром для Windows», версия не ниже 1.5.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ± 0,001 г и ± 0,02 г.

Холодильник бытовой по ГОСТ 16317 любой марки.

pH-метр лабораторный (основная погрешность измерения не более ± 0,05 единиц pH).

Центрифуга лабораторная марки ШХ 2.779.040 со скоростью вращения не менее 6000 об/мин.

Шкаф сушильный лабораторный с терморегулятором, обеспечивающим поддержание температуры (110 ±2) *С.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Вентилятор по ГОСТ 17083.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Баня водяная с регулятором нагрева.

Бутыли из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой вместимостью 10. 20, 100, 500 и 1000 см3.

Колбы конические со шлифом Кн-1-25(1000)-14/23(19/26. 24/29) по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 1(2>-25(50. 100, 1000)-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 1(2, 3, 5)-1(1а, 2, 2а)-2-1(5,10) по ГОСТ 29227.

Пипетки с одной отметкой 1 (2)-2-1(5, 10, 20) по ГОСТ 29169.

Микродозаторы переменного объема 5—50 мм3, 50—200 мм3, 200—1000 мм3 и пределом допускаемой погрешности измерения не более ± 5 % по (2].

Пробирки П2Т-25ТС по ГОСТ 25336.

Пробирки для микропроб однократного применения (типа Эппендорфа) вместимостью 1,5 см3 по [3].

Стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ-14/8(19/9, 24/10, 34/12) по ГОСТ 25336.

Воронки В-25(36)-36(80) ХС по ГОСТ 25336.

Ампулы стеклянные с перетяжкой вместимостью 20 см3 из стекла по ГОСТ 21400.

Виалы стеклянные с герметично завинчивающейся крышкой вместимостью 15 см3 для кислотного гидролиза.

Фильтры целлюлозно-ацетатные, размер пор 0.2 мкм, диаметр 25 мм.

Фильтры обеззоленные «синяя лента» по (4).

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации с (NaOH) = 0,5 моль/дм3.

L-лизин моногидрохлорид, L-метионин, L-цистин, L-треонин, L-аргинин квалификации не ниже «ч.». «Флука», Швейцария. (Допускается использовать D-, а также смесь DL-аминокислот).

Кислота соляная по ГОСТ 3118, растворы молярных концентраций с (НС1)= 1 моль/дм3, с (НО) = = 0.1 моль/дм3, с (НО) = 6 моль/дм3.

fj-циклодекстрин, «Флука». Швейцария.

Натрий тетраборнокислый. стандарт-титр (5].

Натрий тетраборнокислый 10-водный по ГОСТ 4199, растворы молярных концентраций с (Na2B407 ЮН20) = 0,05 моль/дм3 и с (Na2B407 ЮН20) = 0,02 моль/дм3.

3

Кислота бензойная по ГОСТ 10521.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Примечания

1    Допускается применение средств измерений и оборудования с такими же или лучшими метрологическими и техническими характеристиками, а также (материалов и реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

2    Все реактивы должны быть квалификации х. ч или ч. д. а.

3    Требования к обработке посуды и использованию оснастки, необходимой для выполнения измерений, в соответствии с приложением А.

6.2    Подготовка к проведению измерений

6.2.1    Приготовление вспомогательных растворов

6.2.1.1    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = 1 моль/дм3

8.3    см3 концентрированной соляной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Возможно использование стандарт-титра соляной кислоты. Срок хранения не ограничен.

6.2.1.2    Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 0.5 моль/дм3

Навеску гидроокиси натрия массой 2,000 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3,

растворяют в 50—60 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой. Раствор хранят в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой не более 2 мес.

Растворы по 6.2.1.1 и 6.2.1.2 предназначены только для промывок капилляра.

6.2.1.3    Приготовление раствора тетраборнокислого натрия молярной концентрации с (Na2B4Or10H2O) = 0,05 моль/дм3.

Раствор готовят из стандарт-титра по прилагаемой к нему инструкции и хранят в полиэтиленовой посуде, закрыв пробкой. Срок хранения раствора — 2 мес.

Примечание — При отсутствии стандарт-титра раствор готовят из 10-водного тетраборнокислого натрия. Для этого навеску препарата массой 19.071 г растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм3 в свежелрокипяченной и охлажденной без доступа воздуха дистиллированной воде pH раствора при 20 *С должен быть 9.22 ± 0,10.

6.2.1.4    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = 6 моль/дм3

100 см3 концентрированной соляной кислоты смешивают с равным объемом дистиллированной

воды. Срок хранения не ограничен. Раствор используют для гидролиза проб.

6.2.1.5    Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = 0,1 моль/дм3

Раствор готовят из стандарт-титра по прилагаемой к нему инструкции. Срок хранения не ограничен.

6.2.2 Приготовление буферных растворов

6.2.2.1    Приготовление рабочего буферного раствора молярной концентрации тетраборнокислого натрия с (Na2B407 ЮН20) = 0,02 моль/дм3

20 см3 раствора тетраборнокислого натрия, приготовленного по 6.2.1.3, помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят объем в колбе до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают и используют:

-    для кондиционирования капилляра;

-    для хранения капилляра в нерабочее время;

-    в качестве ведущего электролита (рабочего буферного раствора) для определения лизина, треонина и цистина;

-    для приготовления ведущего электролита при определении метионина.

6.2.2.2    Приготовление рабочего буферного раствора для определения метионина

Навеску [i-циклодекстрина массой 0,114 г растворяют в пробирке в 10 см3 раствора тетраборнокислого натрия молярной концентрации с (Na2B4(>7 ЮН20) = 0,02 моль/дм3 (6.2.2.1). Полученную смесь закрывают пробкой и слегка нагревают на водяной бане при температуре от 50 *С до 70 *С до полного растворения -ц и кло декстрина. Хранят в сосуде из полиэтилена не более 14 сут при температуре не ниже 18 вС.

6.2.2.3    Подготовка буферных растворов для проведения измерений

Непосредственно перед началом измерений рабочие буферные растворы необходимо:

-    профильтровать через ацетатно-целлюлозный фильтр, отбросив первые порции фильтрата (1—2 см3);

-    дегазировать центрифугированием. Для этого в пробирки Эппендорфа помещают 0.5 см3 соответствующего раствора (6.2.2.1 или 6 2.2.2), плотно закрывают пробками и центрифугируют в течение 2 мин при скорости вращения 6000 об/мин.

4

ГОСТ Р 52347-2005

6.2.3 Приготовление градуировочных растворов аминокислот (АК)

6.2.3.1 Приготовление запасных растворов АК с массовыми концентрациями, г/дм3:

-    лизина — 2,50:

-    метионина и треонина — 1,00;

-    цистина — 0,50;

-    аргинина —1,00.

Для приготовления растворов лизина, метионина, треонина и аргинина необходимую навеску каждой АК (см. таблицу 2) помещают в отдельную мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.

Таблица 2

Аминокислота

нэвесха. г

Концентрация, г/дм3

L-лизин моногидрохлорид*

0,3124

2,50

L-метионин

0,1000

1,00

L-треонин

0,1000

1,00

L-цистин

0,0500

0,50

L-аргинин

0,1000

1,00

* В случае L-лизина дигидрохлорида величина навески 0,3747 г, L-лизина моногидрата величина навески 0,2808 г.

Для приготовления раствора цистина навеску массой 0,050 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в 10 см3 раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = = 0,1 моль/дм3 (6.2.1.5), доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Срок хранения запасных растворов АК в герметично закрытой посуде — 6 мес при температуре от

4 вС до 6 вС.

6.2.3.2    Приготовление запасного раствора бензойной кислоты массовой концентрации 1,00 г/дм3

Навеску бензойной кислоты массой 0,100 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в 20 см3 раствора тетраборнокислого натрия молярной концентрации 0,05 моль/дм3 (6.2.1.3), доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения — 6 мес.

6.2.3.3    Приготовление рабочего раствора бензойной кислоты массовой концентрации 5 мг/дм3

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 0,5 см3 запасного раствора бензойной кислоты массовой концентрации 1,00 г/дм3 (6.2.3.2), доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения — 1 мес.

6.2.3.4    Приготовление смешанного раствора аргинина и бензойной кислоты

В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают 5 см3 раствора аргинина (6.2.3.1) и 0,625 см3 запасного раствора бензойной кислоты (6.2.3.2), доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают. Массовые концентрации компонентов составляют: аргинина — 200 мг/дм3, бензойной кислоты — 25 мг/дм3.

Срок хранения — 3 мес.

6.2.3.5    Приготовление исходной градуировочной смеси № 1

В полиэтиленовом сосуде вместимостью 20 см3 смешивают по 2 см3 запасных растворов лизина, метионина, треонина и цистина (6.2.3.1) и раствора аргинина с бензойной кислотой (6.2.3.4). Массовые концентрации компонентов в растворе, мг/дм3:

-    лизина — 500;

-    метионина — 200;

-    треонина — 200;

-    цистина —100;

-    аргинина — 40;

-    бензойной кислоты — 5.

Срок хранения смеси в герметично закрытой посуде — 1 мес в холодильнике.

6.2.3.6    Приготовление рабочей градуировочной смеси Ns 2

В полиэтиленовом сосуде вместимостью 10 см3 смешивают 1 см3 смеси № 1 (6.2.35). 0.8 см3 смешанного раствора (6.2.3.4) и 3,2 см3 дистиллированной воды. Массовые концентрации компонентов в смеси, мг/дм3:

5

-    лизина —100;

-    метионина — 40;

-    треонина — 40;

-    цистина —20;

-    аргинина — 40;

-    бензойной кислоты — 5.

Примечания

1    Аргинин введен в состав смеси из-за частичного наложения пиков лизина и аргинина, чтобы нивелировать влияние несимметричности пиков Бензойная кислота может служить внутренним стандартом и одновременно реперным пиком, облегчающим разметку электрофореграмм

2    Допускается применение рабочих градуировочных смесей с другими концентрациями АК, при этом массовая концентрация бензойной кислоты должна быть 5 мг/дм3.

6.2.4    Подготовка капилляра к работе

6.2.4.1    Подготовка нового капилляра к работе

Подготовку нового капилляра к работе проводят в соответствии с руководством по эксплуатации системы капиллярного электрофореза.

Примечание — Необходимо следить за уровнем жидкости в пробирке для слива Не допускается перетекание жидкости из пробирки в прибор!

6.2.4.2    Ежедневная подготовка капилляра к работе

Если капилляр оставляли на ночь заполненным дистиллированной водой, то перед работой его необходимо промыть раствором соляной кислоты 10 мин (6.2.1.1), дистиллированной водой 3 мин, раствором гидроокиси натрия не менее 10 мин (6.2.1.2), снова дистиллированной водой 3 мин и затем рабочим буферным раствором (6.2.2.1) в течение 10 мин в условиях, предусмотренных таблицей 3 для режима «Анализ». Затем следует проконтролировать состояние капилляра, проанализировав рабочую градуировочную смесь № 2 (6.2.3.6) с использованием существующей градуировки по 6.2.5.

При этом, в первую очередь, обращают внимание на воспроизводимость по времени выхода. Если время выхода определяемых компонентов отличается более чем на 5 %, капилляр промывают рабочим буферным раствором повторно и снова проверяют стабильность градуировочной характеристики. Если время выхода совпадает, то проверяют найденные концентрации компонентов по 6.2.5.

В том случае, если накануне в капилляре был оставлен раствор ведущего электролита, его не промывают соляной кислотой и гидроокисью натрия. Растворы ведущего электролита в рабочих и промывочных пробирках заменяют свежими порциями и промывают капилляр только раствором ведущего электролита, после чего контролируют стабильность градуировочной характеристики.

6.2.4.3    Хранение капилляра

Порядок хранения капилляра при перерывах в работе зависит от интенсивности использования прибора.

При ежедневной работе рекомендуется после окончания последнего анализа промыть капилляр раствором тетраборнокислого натрия молярной концентрации с (Na2B407 ЮН20) = 0,02 моль/дм(6.2.2.1) в течение 10—15 мин и оставить на ночь заполненным этим же раствором.

При перерывах в работе на 2—7 сут капилляр следует промыть дистиллированной водой и оставить заполненным ею же.

При перерывах на срок более недели капилляр необходимо после тщательной промывки дистиллированной водой высушить и оставить в сухом состоянии. В этом случае для восстановления работоспособности капилляра его нужно подготовить к работе как новый капилляр.

6.2.5    Градуировка системы

Г радуй ровку системы капиллярного электрофореза проводят способом одного эталона для каждого из двух условий проведения анализа в соответствии с процедурой, описанной в 6.3.2.

С этой целью не менее трех раз анализируют рабочую градуировочную смесь № 2 в условиях, рекомендованных при определении метионина, аналогичную процедуру осуществляют в условиях, рекомендованных при определении остальных трех аминокислот. Полученные электрофоре граммы обрабатываются в соответствии с процедурой градуировки, описанной в руководстве пользователя программы обработки данных («МультиХром» или аналогичной) и рассчитывают средние величины градуировочных коэффициентов и их среднеквадратичные отклонения (СКО). Градуировку следует считать успешной, если величины СКО не превышают 5 %. Выбраковку неудовлетворительных градуировочных точек проводят в том случае, если отклонение площади пика и одновременно времени выхода пика данного компонента превышает 5 % от среднеарифметических значений.

6

ГОСТ Р 52347-2005

6.2.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Каждый раз перед началом измерений необходимо после подготовки капилляра проанализировать рабочую градуировочную смесь № 2. При этом в рабочем журнале фиксируют время выхода определяемых компонентов и их массовые концентрации, рассчитанные по существующей градуировочной характеристике. Градуировка признается стабильной, если отклонение найденных массовых концентраций от заданных значений не превышает 5 % для метионина и цистина и 10 % — для лизина и треонина. В противном случае анализируют рабочую градуировочную смесь N® 2 еще два раза. При повторных отклонениях, превышающих указанные нормативы, градуировку системы проводят заново, начиная с приготовления нового раствора рабочей градуировочной смеси Nfi 2.

6.3 Проведение измерений

6.3.1    Проведение гидролиза и получение испытуемого раствора

Навеску исследуемого продукта массой 0.1000 г помещают в стеклянную виалу или ампулу с перетяжкой, добавляют 10 см3 раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCI) = 6 моль/дм(6.2.1.4). При гидролизе в стеклянной ампуле ее запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки. Виалу с плотно завинченной крышкой или запаянную ампулу помещают в эксикатор, который ставят в сушильный шкаф на 14—16 ч при температуре 110 *С (оставляют на ночь).

По окончании гидролиза виалу или ампулу вынимают из эксикатора и охлаждают до комнатной температуры. Содержимое слегка перемешивают и фильтруют в коническую колбу со шлифом вместимостью 25 см3, отбирают в стеклянную бюксу 1 см3 фильтрата и выпаривают досуха в потоке теплого воздуха вентилятора. Бюксу охлаждают при комнатной температуре, сухой остаток растворяют в 1 смдистиллированной воды (испытуемый раствор).

В зависимости от объекта исследования и предполагаемого содержания АК проводят разбавление испытуемого раствора дистиллированной водой. Рекомендуемые разбавления: для зерновых культур в два раза (соотношение объемов испытуемого раствора и воды 1:1), для продуктов растительного (жмых, шрот) и животного происхождения, а также комбикормов в пять раз (соотношение объемов испытуемого раствора и воды 1:4). Отбор испытуемого раствора и воды производят с помощью микродозаторов или градуированных пипеток.

Критерием оптимальности разбавления является то, что концентрация АК в разбавленном испытуемом растворе не должна превышать их значений в рабочей градуировочной смеси № 2.

0,5 см3 полученного раствора помещают в пробирку Эппендорфз, центрифугируют для дегазации при 6000 об/мин в течение 5 мин (рабочий испытуемый раствор) и используют для электрофоретического анализа.

Примечание — При возникновении затруднений в разметке пиков АК на элоктрофореграммо сухой остаток растворяют в 1 см3 раствора бензойной кислоты массовой концентрации 5 мг/дм3 Разбавление испытуемого раствора проводят раствором бензойной кислоты массовой концентрации 5 мг/дм3 (6 2.3.3).

6.3.2    Анализ рабочего испытуемого раствора

Анализ рабочего испытуемого раствора проводят дважды: для определения лизина, треонина и цистина — в среде буферного раствора тетра борнокислого натрия (6.2.2.1) при температуре 20 °С, а для определения метионина — в среде буферного раствора тетраборнокислого натрия с добавкой Р-циклодекстрина (6.2.2.2) при температуре 40 *С. При анализе серии проб рационально проанализировать их сначала при одном составе буфера, а затем, поменяв буфер и температуру, проанализировать те же растворы повторно. Рекомендуемые условия анализа приведены в таблице 3.

Таблица 3 — Условия проведения анализа методом капиллярного электрофореза

Параметр

Определение лизина, троомима и цистина

Определение метионина

Длина волны, нм

190—200 нм (конкретное значение устанавливается для каждого прибора по методике, приведенной в приложении Б)

Ввод пробы

Пневматический (давление 30 мбар, время 15 с)

Режим анализа

Напряжение плюс 20 кВ, время 17 мин (при определении метионина время анализа можно сократить до 10 мин)

Рабочий буферный раствор

По 6.2.2.1

По 6 2.2.2

Температура, *С

20

40