Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на сыр и плавленый сыр и устанавливает метод определения массовой доли лимонной кислоты.

Метод определения массовой доли лимонной кислоты в сыре и сыре плавленом основан на обработке экстракта навески продукта цитрат-лиазой для превращения лимонной кислоты в уксусную и щавелевоуксусную кислоты

стандарт принят с правом досрочного введения

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение

4 Аппаратура, материалы и реактивы

5 Метод отбора проб

6 Подготовка к определению

   6.1 Приготовление растворов

   6.2 Подготовка проб

7 Нулевое определение

8 Проведение определения

   8.1 Приготовление фильтрата

   8.2 Проведение измерений оптической плотности

9 Обработка результатов

10 Метрологические характеристики

   10.1 Сходимость

   10.2 Воспроизводимость

Приложение А (справочное) Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51459-99

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СЫР И СЫР ПЛАВЛЕНЫЙ

Метод определения массовой доли лимонной кислоты

Издание официальное

-i    Москва

|ЖН] Стандартинформ 1    2011

Страница 2

ГОСТ Р 51459-99

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 «Молоко и молочные продукты»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 614

3    Настояший стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 2%3—97 «Сыр и сыр плавленый. Определение содержания лимонной кислоты. Ферментативный метод*

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.

© ИПК Издательство стандартов, 1999 © СТЛНДЛРГИНФОРМ, 2011

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

48

11

Страница 3

ГОСТ Р 51459-99

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СЫР И СЫР ПЛАВЛЕНЫЙ Метод определения массовой доли лимонной кислоты

Cheese and processed cheese products.

Method for determination of mass percent of citric acid

Дата введения 2002—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сыр и плавленый сыр и устанавливает метод определения массовой доли лимонной кислоты.

Метод определения массовой доли лимонной кислоты в сыре и сыре плавленом основан на обработке экстракта навески продукта цитрат-лиазой для превращения лимонной кислоты в уксусную и щавелевоуксусную кислоты. Полученный раствор обрабатывают малатдегидрогеназой (МДГ) и лактатдегидрогеназой (ЛДГ) в присутствии никотинамидадениндинуклеотнда (НЛДН) восстановленной формы, для ферментативного катализа восстановления щавелевоуксусной кислоты и продукта ее декарбоксилнрования — пировиноградной кислоты, соответственно с L-яблочной и L-молочной кислот. При этом НАДН превращается в окисленную форму (НАД*). Снижение концентрации НАДН в исследуемом растворе устанавливают измерением оптической плотности при длине волны 340 нм. Массовая доля лимонной кислоты при этом пропорциональна снижению концентрации НАДН.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

Г ОСТ 3652—69 Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСГ 4201—79 Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия I ОСТ 4529—78 Цинк хлористый. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия [‘ОСТ 19881—74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ИСО 707—97** Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб

* С I июля 2002 г. введен в дсПствие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

** Действует до введения в действие ГОСТ Р. разработанного на основе соответствующего ИСО. С II августа 2008 г. действует ИСО 707:2008.

Издание официальное

49

I

Страница 4

ГОСТ Р 51459-99

3    Определение

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая доля лимонной кислоты: Отношение массы лимонной кислоты, определенной в соответствии с настоящим стандартом в навеске продукта, к массе навески продукта, умноженное на 100 и выраженное в процентах.

4    Аппаратура, материалы и реактивы

4.1    Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881.

4.2    Баня водяная с обогревом, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 25 *С, со стойкой для удерживания кюветы спектрофотометра в процессе термос тати рования.

4.3    Спектрофотометр, обеспечивающий проведение измерений на длине волны 340 нм, с шириной полосы пропускания не более 10 нм. оснащенный кюветами длиной оптического пути I см.

4.4    Устройство измельчающее с угловой скоростью вращения от 500 до 3000 мшг1. позволяющее измельчать пробу без ее нагрева, потери или поглощения влаги.

4.5    Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 2-го класса точности.

4.6    Пластиковые мешки для размешивания смеси исследуемого образца с ферментом непосредственно в кювете спектрофотометра.

4.7    Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026 диаметром фильтра 15 см.

4.8    Воронка типа ВФ по ГОСТ 25336 диаметром 75 мм.

4.9    Пипетки градуированные по ГОСТ 29227, 2-го класса точности вместимостью 10 см3.

4.10    Пипетки по ГОСТ 29169 2-го класса точности вместимостью 25, 10, 5, 2, I, 0,1 и 0,02 см3.

4.11    Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 см* с притертыми стеклянными пробками.

4.12    Колбы мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 100 и 1000 см3.

4.13    Стаканы химические стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.

4.14    Цилиндр мерный по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3.

4.15    Кислота трихлоруксусная (СС1дСООН) по [!|.

4.16    Натрия гидроокись (NaOH) по ГОСТ 4328. ч.д.а.

4.17    Цинк хлористый <ZnCI2) по ГОСТ 4529. ч.д.а.

4.18    Диглицин (HjNCHjCONHCHjCOjH) по |2J.

4.19    Натрий углекислый кислый (NaHC03) по ГОСТ 4201. х.ч.

4.20    Соль динатриевая никотинамидадениндинуклеотида (C21H2?NTOl4P,Na2) по |3|, х.ч.

4.21    Аммоний сернокислый (NH4),S04 по ГОСТ 3769, чл.а*.

4.22    Малатдегндрогеназа из сердца* поросенка К.Ф. 1.1.1.37 по |4|.

4.23    Лактатдегидрогеназа из мышц кролика К.Ф. 1.1.1.27 по |4|.

4.24    Цитрат-лиаза (Лиофилизат из Aerolonter aerogenes) К.Ф.4.1.3.6 по |4|.

4.25    Моногидрат лимонной кислоты (С6НхО, • Н20) по ГОСТ 3652.

4.26    Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода деминерализованная, вода бндистилли-рованная.

Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.

5    Метод отбора проб

Отбор проб — по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций — по ИСО 707.

6    Подготовка к определению

6.1    Приготовление растворов

6.1.1    Раствор трихлоруксусной кислоты

В мерную колбу вместимостью 10(H) см3 вносят 200.0 г трихлоруксусной кислоты (СС1,СООН) по 4.15, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.2    Раствор А гидроокиси натрия концентрации 5.0 моль/дм5

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 200,0 г гидроокиси натрия (NaOH) по 4.16. растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

50

2

Страница 5

ГОСТ Р 51459-99

6.1.3    Раствор Б гидроокиси натрия концентрации 1.0 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 40,0 г гидроокиси натрия (NaOH) по 4.16. растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.4    Раствор В гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм1

В мерную колбу вместимостью 1000 см' вносят 4,0 г гидроокиси натрия (NaOH) по 4.16. растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.5    Раствор хлористого цинка

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 0,80 г хлористого цинка (ZnCl,) по 4.17, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.6    Буферный растворе pH 7,8

В мерную колбу вместимостью 1000 см} вносят 71.3 г диглицина (H,NCH,CONHCH,CO,H) по 4.18. растворяют в 700 см3 воды, доводят pH до 7,8 раствором А гидроокиси натрия (6.1.2). Приливают 100 см3 раствора хлористого цинка (6.1.5), доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Буферный раствор хранят при температуре от 0 до 8 "С не более четырех недель.

6.1.7    Раствор натрия углекислого кислого

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 4.0 г углекислого кислого натрия по 4.19. растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.8    Раствор восстановленного никотинамидадениндинуклеотида

В колбу вместимостью 50 см3 вносят 50 мг восстановленной дннатриевой соли никотинамидадениндинуклеотида (C21H27N70|4P,Na2), 100 мг натрия углекислого кислого (6.1.7) и растворяют в 10 см5 воды.Раствор хранят при температуре от 0 до 8 'С не более четырех недель.

6.1.9    Раствор сернокислого аммония молярной концентрации 3.2 моль/дм3

В мерную колбу вместимостью 1000 см5 вносят 422.4 г сернокислого аммония по 4.21, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

6.1.10    Суспензия малатдегидрогеназа/лактатдегидрогеназа

В колбу вместимостью 100 см3 вносят малатдегидрогеназу из сердца поросенка по 4.22. растворяют в растворе сульфата аммония (6.1.9) с pH 6,0 и добавляют лактатдегидрогеназу из мышц кролика по 4.23 с pH 7.0 до получения суспензии. Затем суспензию разбавляют раствором сернокислого аммония (6.1.9) так, чтобы получить раствор, содержащий 600 единиц активности МДГ и 1400 единиц активности ЛДГ в 1 см3 раствора. Раствор хранят при температуре ог 0 до 8‘С не более одного года.

6.1.11    Раствор нитрат-лиазы

Растворяют нитрат-лиазу по 4.24 в ледяной воде так, чтобы получить раствор с активностью 40 ед.фермента в I см3. Раствор хранят при температуре от 0 до 8 *С не более одной недели.Раствор хранят при температуре хранения минус 20 ‘С не более четырех недель.

6.1.12    Стандартный раствор лимонной кислоты

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 1.600 г моногидрата лимонной кислоты (С6Н,0, Н,0) по 4.25, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. При использовании суспензии с другой активностью ферментов объем суспензии в схеме отбора пипеткой (8.2. Г) следует пропорционально увеличивать или уменьшать.

6.1.13    Проверка качества растворов и настройки спектрофотометра

Проверку проводят при хранении растворов (6.1.1—6.1.12) более двух недель.Пипеткой отмеряют в каждую из двух мерных колб вместимостью 100 см1 соответственно 5.0 и 10.0 см3 стандартного раствора лимонной кислоты (6.1.12), добавляют по 10 см3 раствора трихлоруксусной кислоты (6.1.1), доводят объем водой до метки и перемешивают.Массовую долю лимонной кислоты в обоих растворах определяют в соответствии с 8.1.3, 8.2.3.

Массовую долю моногидрата лимонной кислоты в стандартном растворе, Хг вычисляют по формуле (3), используя следующие величины:

М = 210,1 г/моль (молекулярная масса моногидрата лимонной кислоты);

Vs = 1000 см3 (6.1.12);

Уь = 5 см3 и 10 см3 по 6.1.13;

V; = 100 см3 по 6.1.13.

Значение Х{ для обоих растворов должно быть (100±5) %.

Если результат измерения не находится в данных пределах, следует проверить реактивы, пипетки, спектрофотометр и принять меры для получения необходимого результата.

6.2 Подготовка проб

6.2.1 Сыр и плавленый сыр

От пробы сыра отделяют корковый (при наличии поверхностный заплесневелый) слой так. чтобы получить порцию сыра массой не менее 50 г.Отобранную пробу сыра измельчают на из мель-

51

3

Страница 6

ГОСТ Р 51459-99

чающем устройстве, перемешивают до пастообразного состояния.При необходимости измельчают вторично, перемешивают.

6.2.2    Плавленый сыр. содержащий наполнители других пищевых продуктов (ветчину, фрукты, орехи, травы и т.д.)

При определении массовой доли лимонной кислоты во всем продукте подготовку пробы проводят по 6.2.1.При определении массовой доли лимонной кислоты в расчете только на сырную массу из пробы удаляют наполнители, затем подготовку пробы проводят по 6.2.1.

6.2.3    Пробу готовят непосредственно перед определением.

7    Нулевое определение

Нулевое определение проводят дважды.Фильтрат готовят в соответствии с 8.1, используя все реактивы, кроме навески продукта и использования измельчающего устройства. Измерение оптической плотности проводят в соответствии с 8.2.

8    Проведение определения

8.1    Приготовление фильтрата

8.1.1    В стакан измельчающего устройства помешают навеску продукта массой 1.0 г. добавляют 50 см' воды при температуре (45i5) *С и измельчают до получения однородной суспензии.Суспензию из стакана переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, ополаскивая стакан водой несколько раз до полного ее удаления.

8.1.2    К полученной суспензии приливают 10 см; раствора трнхлоруксусной кислоты (6.1.1), доводят объем водой до метки, перемешивают и дают смеси выстояться 30 мин. Перед фильтрованием содержимое мерной колбы не перемешивают.

8.1.3    Смесь фильтруют через фильтровальную бумагу, отбрасывая первые 2 см3 фильтрата.

8.1.4    Пипеткой отбирают 25 см’ фильтрата в химический стакан вместимостью 50 см5, доводят активную кислотностьдо pH = 4. приливая раствор Б гидроокиси натрия (6.1.3), затем приливают раствор В гидроокиси натрия (6.1.4) и доводят активную кислотностьдо pH = 8, используя для контроля потенциометрический анализатор.

8.1.5    Содержимое химического стакана переносят в мерную колбу вместимостью 100 см5, ополаскивая стакан водой несколько раз до полного удаления содержимого из химического стакана, доводят водой объем до метки и перемешивают.

8.1.6    Смесь фильтруют через фильтровальную бумагу, отбрасывая первые 2 см1 фильтрата.

8.2 Проведение измерений оптической плотности

8.2.1    Измерения проводят при комнатной температуре буферного раствора и воды.

8.2.1.1    В кювету спектрофотометра пипеткой наливают растворы, объем которых должен соответствовать таблице 1.

Таблица I

Наименование

Объем раскшра. см'

При измерении фильтрата и стандартного раствора

При нулевом определении

Буферный раствор (6.1.6)

1.00

1.00

Раствор НАДН (6.1.8)

0.10

0.10

Суспензия МДГ/ЛДГ (6.1.10)

0.02

0.02

Фильтрат (8.1.6) и стандарты И раствор (6.1.12)

2.00

Фильтрат нулевого определения (7)

2.00

8.2.1.2    Растворы в кюветах перемешивают пластиковыми мешалками, выдерживают в водяной бане при температуре от 20 до 25 'С в течение 5 мин.Затем измеряют оптическую плотность раствора Д, в каждой кювете относительно воздуха при длине волны 340 нм, используя спектрофотометр.

8.2.1.3    В кюветы с фильтратами приливают по 0.02 см3 раствора цитрат-л иазы (6.1.11).

8.2.1.4    Растворы в кюветах перемешивают и выдерживают в водяной бане при температуре от 20 до 25 "С в течение 10 мин.

52

4

Страница 7

ГОСТ Р 51459-99

8.2.1.5 Измеряют оптическую плотность раствора ЛП1 в каждой кювете относительно воздуха при длине ваты 340 нм.

8.2.2 Вычисляют оптическую плотность фильтрата Д и оптическую плотность растворов для нулевого определения Л( по формулам:

(1)

(2)

где /Со, — оптическая плотность фильтрата, измеренная перед добавлением иитрат-лиазы;

/1|1К — оптическая плотность фильтрата, измеренная после добавления иитрат-лиазы и выдерживания в водяной бане при температуре от 20 до 25 'С в течение 10 мин;

Allt — оптическая плотность растворов холостого определения, измеренная перед добавлением иитрат-лиазы;

Аш — оптическая плотность растворов холостого определения, измеренная после добавления цитрат-лиазы, и выдерживания в водяной бане при температуре от 20 до 25 “С в течение 10 мин.

8.2.3 Если оптическая плотность А, или Л( превышает 0,800, измерения повторяют по

8.1.5 — 8.2.2. используя более разбавленные растворы фильтратов. Если разбавление не проводят, то принимают значения К6 = К, = 2 см3.

9 Обработка результатов

Массовую долю лимонной кислоты X, %, вычисляют по формуле

1,915    -А,)    У7


(3)


т


y=Mt -Л')М    и, У2 У, Vt_ т _

kirn    У2У,    Уь


где Д — оптическая плотность фильтрата;

А( — оптическая плотность растворов нулевого определения;

Л/—    молекулярная масса безводной лимонной кислоты.    Л/=    192,1    г/моль;

к —    коэффициент молярного поглощения НЛДН на длине волны 340 нм.    к = 6.3 106 см2/моль;

/ —    длина оптического пути кюветы. / = 1 см;

т —    масса навески продукта, г;

К, — объем жидкости в кювете спектрофотометра, Vf = 3.14 см1;

V; — объем фильтрата в кювете спектрофотометра. V, = 2,00 см3;

Уг — объем, до которого был доведен фильтрат в процессе установления активной кислотности pH = 8,0 (8.1.5), V} = 100 см3;

Vx — объем фильтрата (8.1.3). отобранный для устаноатения активной кислотности, Vt = 25 см3;

Kj — объем суспензии (8.1.1), Vi = 100 см3;

Уь — объем фильтрата (8.1.6). взятого при необходимости для разведения, см3;

Нт — объем, до которого при необходимости был разбавлен фильтрат (8.1.6), см3.

Результаты измерений массовой доли лимонной кислоты выражают до второго десятичного знака. Если массовая доля лимонной кислоты менее 1 %, то результаты измерений выражают до третьего десятичного знака.

10 Метрологические характеристики

10.1    Сходимость

Относительная величина разницы между результатом любого из двух определений и среднеарифметическим значением результатов этих определений, полученных при определении одной и той же пробы одним и тем же лаборантом, пользующимся одними и теми же приборами, за короткий промежуток времени не должна превышать 5 % при вероятности Р = 0.95.

10.2    Воспроизводимость

Относительная величина разницы между результатом любого из двух определений и среднеарифметическим значением результатов этих определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробои, не должна превышать 8 % при вероятности Р = 0,95.

10.3    Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 5 %, то повторно проводят два новых определения.

53

5

Страница 8

ГОСТ Р 51459-99

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Библиография

|1|    ТУ    6-09-1926—77    Трихлорчксусная кислота

121    ТУ    6-09-07-676-76    Диглицин

|3|    ТУ    10П-124—67    Соль динатрисвая никотинамидадениндинуклеотида

|4|    Номенклатура ферментов. Рекомендации    Номенклатурного Комитета Международ

ного Союза по Биохимии. Нью-Йорк. 1984

УДК 637.2/.3/. 147.2:006.354    ОКС    67.100.30    Н19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: сыр и плавленый сыр. ферментативный метод, определение, массовая доля лимонной кислоты, метрологические характеристики

54

6