Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли зеараленона.

Предел обнаружения зеараленона составляет около 50 мкг/кг

Отменён

стандарт принят с правом досрочного введения

Действие завершено 01.03.2016

Оглавление

1 Область применения

2 Сущность метода

3 Нормативные ссылки

4 Реактивы

5 Оборудование и материалы

6 Отбор проб

7 Порядок проведения испытания

8 Обработка результатов

9 Точность

10 Оформление результатов испытания

Приложение А Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51425-99 (ИСО 6870-85)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения массовой доли зеараленона

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51425-99

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы*

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постано&тением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 580-ст

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6870—85 «Корма для животных. Определение содержания зеараленона*, за исключением разделов 3, 6

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 2005 г.

© И11К Издательство стандартов. 2000 © Стандарт» нформ, 2005

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

Страница 3

ГОСТ Р 51425-99 (ИСО 6870-85)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения массовой доли зеараленона

Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials.

Method for determination of zearalenone fraction of total mass

Дата введения 2001—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли зеараленона.

Предел обнаружения зеараленона составляет окаю 50 мкг/кг.

2    Сущность .метода

Анализируемое вещество экстрагируют из навески испытуемого продукта смесью апетопнтрнла и раствора хлористого калия, фильтруют, берут аликвоту и обезжиривают ее изооктаном с последующей очисткой смесыо ацетонитрила, воды, ацетата свиниа и диатомовой земли; после фильтрования экстрагируют аликвотное количество хлороформом, который впоследствии испаряется.

Растворяют сухой экстракт смесыо бензола и ацетонитрила, аликвотную порцию этого раствора подвергают двухмерной тонкослойной хроматографии. Содержание зеараленона определяют визуально или путем измерения интенсивности флуоресценции пятна в ультрафиолетовом излучении и сравнения с известными количествами зеараленона, нанесенными на ту же пластину, что и экстракт испытуемой пробы.

Подтверждение идентичности зеараленона проводят с помощью бисдиазотированного бензн-

дина.

3    Нормативные ссылки

ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

4    Реактивы

Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а:

вода дистиллированная;

ацетонитрил;

изооктан;

хлороформ:

смесь бензола и ацетонитрила в объемном соотношении 9К ; 2;

Предупреждение — Бензол токсичен при вдыхании и контакте с кожей. Огнеопасен.

* Дейсгиует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 [ 11.

Издание официальное

1

Страница 4

ГОСТ Р 51425-99

проявляющие растворители (смесь толуола, зтилацетата и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6 : 3 : 1 и смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95 : 5); раствор хлористого катя массовой концентрации 40 г/дм'; раствор уксуснокислого свинца готовят следующим образом:

200 г уксуснокислого свинца помешают в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 1000 см1, добаатяют 3 см3 уксусной кислоты, доводят водой до метки и перемешивают: бисдназотнрованный бензидиновый реактив.

Приготовление раствора бензидина массовой концентрации 5 г/дм5.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 приливают 20 см} воды. 1,5 см3 соляной кислоты и вносят 0,5 г бензидина. доводят водой до метки и перемешивают.

Раствор следует хранить в защищенном от света месте в склянке из темного стекла. Приготоатение реактива

Равные объемы растворов бензидина и нитрита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 охлаждают примерно до температуры от 0 до минус 5 *С, тщательно перемешивают. Полученный раствор мутный и имеет тем но-пурпурный цвет. Перед использованием его доводят до температуры окружающей среды, раствор приобретает желтый цвет.

Реактив готовят непосредственно перед использованием;

Предупреждение — Бензидин яатяется канцерогенным веществом. Токсичен при вдыхании, контакте с кожей, приеме внутрь.

диатомовая земля (цеолит 545). промытая соляной кислотой: азот;

зеараленон. стандартный раствор в бензоле массовой концентрации 10 мкг/см3.

На спектрометре определяют спектр поглощения раствора в диапазоне длин волн 300 и 330 нм, используя кювету толщиной просвечиваемого слоя 10 мм относительно бензола; регистрируют максимальное поглощение А, которое должно состаатять примерно 317 нм.

Массовую концентрацию зеаратенона с. мкг/см3, рассчитывают по формуле

318/11000    п\

Ш—'    {

где 318 — молярная масса зеараленона, г/моль;

6060 — коэффициент молярной экстипкнии, дм3/моль см.

5 Оборудование и материалы

Для проведения испытания применяют обычное лабораторное оборудование: мельницу для измельчения продукта до такой степени, чтобы он полностью проходил через сито, диаметр отверстий которого равен I мм;

встряхнватель со скоростью встряхивания 100 колебаний в минуту;

бумагу фильтровальную средней плотности (рыхлая фильтровальная бумага дает мутный раствор. плотная фильтровальная бумага будет забиваться); испаритель ротационный с круглодонной колбой;

оборудование для тонкослойной хроматографии, т. е. оборудование для подготовки пластин и нанесения пятен (капиллярные пипетки или мнкрошпрниы), емкость для прояатения и распылитель для напыления реактива на пластины (пульверизатор);

пластины стеклянные для тонкослойной хроматографии размером 200 х 200 мм подготаашва-ют следующим образом: 30 г силикагеля G-HR помещают в коническую колбу, приливают 60 см3 воды, закрывают и тщательно перемешивают в течение 1 мин. Полученную суспензию наносят на пластины таким образом, чтобы получить равномерный слой толщиной 0,25 мм. Высушивают слой на воздухе и хранят атастины в эксикаторе. Перед использованием пластины активируют, выдерживая их в печи при температуре 110 “С в течение I ч.

Указанного количества суспензии силикагеля достаточно для подготовки 5 пластин. Допускается использовать пластины промышленного применения, если результаты, полученные с их применением, будут сравнимы с результатами, полученными на пластинах, подготовленных по вышеописанному способу;

лампы ультрафиолетовые с короткой длиной волны (253 нм).

Страница 5

ГОСТ Р 51425-99

Интенсивность излучения должна обеспечивать четкую видимость пятна в 25 иг эеараленона на тонкослойной пластине при установке лампы на расстоянии 100 мм от пластины;

Предупреждение — При работе с ультрафиолетовыми лучами в целях безопасности следует надевать защитные очки.

пробирки с полиэтиленовой пробкой вместимостью 10 см3; флуороде»Iситометр (при наличии); баню водяную температурой 60 *С;

колбы конические с притертой пробкой вместимостью 500 см3;

воронки делительные вместимостью 250 см5;

цилиндры мерные вместимостью 100 и 250 см3;

пипетки вместимостью 50 и 100 см3;

микрошприцы.

6    Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.

7    Порядок проведения испытания

7.1    Подготовка испытуемой пробы

Пробу, предназначенную для испытания, измельчают так. чтобы она полностью проходила через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Тщательно перемешивают.

7.2    Взятие навески для проведения испытаний

50 г испытуемой пробы взвешивают в конической каабе с точностью 0.01 г.

7.3    Экстрагирование

В колбу с навеской приливают 1S0 см’ ацетонитрила и 20 см3 раствора хлористого калия, тщательно отмеренные мерным цилиндром. Закрывают колбу, перемешивают и устанавливают на встряхиватель на 30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через фильтровальную бумагу.

100 см3 фильтрата переливают пипеткой в делительную воронку, где фильтрат двукратно обезжиривают изооктаном по 50 см' каждый раз.

Ацетонитриловую фазу переносят в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.

7.4    Очистка

К полученному остатку приливают 20 см5 ацетоиитрила, 60 см? воды и 20 см3 раствора уксуснокислого свинца, тщательно отмеренных мерным цилиндром. Перемешивают и ставят в водяную баню на 10 мин при температуре 60 *С для образования осадка. Затем добавляют 5 г диатомовой земли, перемешивают и фильтруют через фильтровальную бумагу.

50 см5 фильтрата отбирают пипеткой в делительную воронку и проводят тройную переэкстра-кцию хлороформом по 50 см5 каждый раз. Хлороформную фракцию высушивают над сульфатом натрия. Собирают фракции хлороформа в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.

Сухой остаток растворяют в хлороформе и количественно переносят в пробирку, затем высушивают досуха в токе азота на водяной бане.

При помощи микрошприца осторожно добавляют в пробирку 0.5 см* бензол-ацетонитриловой смеси и пробирку плотно закрывают пробкой.

7.5    Проведение двухмерной тонкослойной хроматографии 7.5.1 Нанесение растворов (рисунок I)

На пластине проводят две прямые линии, параллельные прилегающим сторонам (на расстоянии от краев на 50 и 60 мм соответственно), с целью отметки границы перемещения растворителей.

С помощью микрошприцев на пластину наносят растворы в точках по схеме, указанной на рисунке 1.

-    А — 25 мкдм3 очищенного экстракта.

-    В— 10 мкдм5 стандартного раствора.

-С— 5 мкдм' стандартного раствора.

• D — 10 мкдм5 стандартного раствора.

-    15 мкдм5 стандартного раствора.

3

Страница 6

ГОСТ Р 51425-99

Высушивают пластину струей воздуха или азотом.

Полученные пятна должны быть диаметром около 5 мм.

I

I

I

В

О

с

А

20

130

30

Рисунок 1 — Ыансссние растворов и проявление хроматограммы

7.5.2 Проявление (рисунок 1)

Проявляют хроматограмму в направлении 1, используя смесь толуола, этнлацетата и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6:3:1 слоем в 10 мм в насыщенной камере для хроматографирования, защищенной от воздействия света, до тех пор. пока фронт растворителя не достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и дают подсохнуть окаю 15 мин при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.

Примечание —После проявления в направлении / хроматограмму просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 253 нм, и возможные пятна зеараленона отмечают карандашом (пятно в точке Б свидетельствует о наличии зсараленона).

Далее проводят хроматографирование в направлении 2. используя для этой цели смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95 : 5 слоем 10 мм в ненасыщенной камере в защищенном от света месте, пока фронт растворителя не достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и подсушивают ее при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.

7.6    Определение

Для определения используют два способа: визуальный или флуороденситометрическое измерение. Последний способ используют при наличии аппарата.

7.6.1    Визуальное определение

Определяют количество зеараленона в экстракте путем сравнения интенсивности флуоресценции в ультрафиолетовом свете пятна экстракта испытуемой пробы с интенсивностью свечения пятен С, D и £стандартного раствора, поместив пластину на расстоянии 10 см от ультрафиолетовой лампы. При необходимости осуществляют интерполирование полученных данных.

Если интенсивность флуоресценции пятна экстракта испытуемой пробы объемом 25 мкдм1 превышает интенсивность свечения пятна стандартного раствора зеараленона объемом 15 мкдм3, то наносят меньший объем экстракта в точку А или разбавляют экстракт смесью бензола с ацетоннт-рилом и повторяют тонкослойное хроматографирование, начиная с 7.5.

7.6.2    Флуороденситометрическое определение

Измеряют интенсивность флуоресценции пятен флуороденситометром, например на волне возбуждения в 313 нм и волне эмиссии в 443 нм (максимальная эмиссия при 470 нм).

Определяют содержание зеараленона в экстракте, нанесенном на пластину, путем сравнения интенсивности флуоресценции пятна экстракта с интенсивностью свечения пятен С, D и Е стандартного раствора.

7.7    Проверочное испытание на присутствие зеараленона

Напыляют на пластину, подготоапенную по 7.5 бнедназотированиый бензидин. Зеараленон дает яркое кирпично-красное пятно при температуре окружающей среды, выцветающее после 15-минутной экспозиции на воздухе.

8 Обработка результатов

8. i Визуальное on/wde.ieiiue

Содержание зеараленона X, мкг/кг, рассчитывают по формуле

X.'™.

т К

где с — массовая концентрация зеараленона в стандартном растворе, мкг/см3;

(2)

Страница 7

ГОСТ Р 51425-99

V, — конечный объем экстракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3;

Н3, У2 — объемы стандартного раствора зеараленона и экстракта соответственно, с одинаковой интенсивностью флуоресценции, мкдм3; т — масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г

(12.5).

8.2 Флуородснситометрическос определение

Содержание зеараленона. X,, мкг/кг, рассчитывают по формуле

jri-si.    <3)

где т1 — масса зеараленона в пятне экстракта (с учетом объема К2), выявленная при определении, нг;

К, — конечный объем экстракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3; т — масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г

(12.5);

У2 — объем экстракта, наносимого на пластину, мкдм3 (25 мкдм3).

9 Точность

Международные испытания, проведенные в 20 лабораториях (из которых только 16 представили результаты, приемлемые для кукурузы В), каждая из которых провела 3 измерения, позволили получить статистические данные, приведенные в таблице I.

Таблица!    В    микрограммах    на    килограмм

Проба

Кукуруза А

Кукуруза В (кукуруза А. разбавлошам на 1/3)

Количество лабораторий, представивших необходимые ре

зультаты

20

15

Средняя величина

734

219

Стандартные отклонения повторяемости S,

78

34

Коэффициент отклонения повторяемости

11 %

15 %

Повторяемость 2,S3 S,

221

96

Стандартное отклонение воспроизводимости или сходимости

282

125

Коэффициент отклонения воспроизводимости или сходи

мости. %

38

57

Воспроизводимость или сходимость 2.83 SK

798

354

Примечание— Кукуруза В — это кукуруза А. разба&тенная 3 раза кукурузой, не содержащей

эеараленон.

10 Оформление результатов испытания

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    используемый метод;

-    полученные результаты;

-    любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.

5

Страница 8

ГОСТ Р 51425-99

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

Библиография

11 ] ИСО 6497 Корма для живагиых. Методы отбора проб

УДК 636.085.001.4 : 006.354    ОКС    65.120    С19    ОКСГУ    9709

9209

Ключевые слова: корм, комбикорм, комбикормовое сырье, эеараленон, массовая концентрация, хроматографирование, метод

Редакюр Л. В. Каретникова Технический рецактор В.Н. Прусакасо Корректор Т.П. Кононепко Компьютерная верстка В.И. Грищенко

Подписано в печать 29.09.2005.    Формат 60Х841/»- Бумага офсетнам. Гарнитура Таймс. Печать офсетная.

Уел. иеч. я. 0.93. Уч.-итд. я. 0.67. Тираж 41 зкл. Зак. 204. С 1963.

ФГУП • Сташтартинформ», I2399S Москва. Гранатный пер.. 4. www.gostinfo.ru    info© goklinfo.ru

Набрано в Издательстве на ПЭВМ Отпечатано во ФГУП •Стаиларгкнформ*