Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить ГОСТ Р 51425-99 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли зеараленона.

Предел обнаружения зеараленона составляет около 50 мкг/кг

  Скачать PDF

Переиздание. Сентябрь 2005 г.

Действие завершено 01.03.2016

Оглавление

1 Область применения

2 Сущность метода

3 Нормативные ссылки

4 Реактивы

5 Оборудование и материалы

6 Отбор проб

7 Порядок проведения испытания

8 Обработка результатов

9 Точность

10 Оформление результатов испытания

Приложение А (справочное) Библиография

Показать даты введения Admin

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения массовой доли зеараленона

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 580-ст

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6870—85 «Корма для животных. Определение содержания зеараленона», за исключением разделов 3, 6

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 2005 г.

© И ПК Издательство стандартов, 2000 © Стандартинформ, 2005

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метол определения массовой лоли зсаралснона

Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials.

Method for determination of zearalcnone fraction of total mass

Дата введения 2001—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли зеар&леноиа.

Предел обнаружения эеараленона составляет около 50 мкг/кг.

2    Сущность метола

Анализируемое вещество экстрагируют из навески испытуемою продукта смесью ацетонитрила и раствора хлористого калия, фильтруют, берут аликвоту и обезжиривают ее изооктаном с последующей очисткой смесью ацетонитрила, воды, ацетата свинца и диатомовой земли; после фильтрования экстрагируют аликвотное количество хлороформом, который впоследствии испаряется.

Растворяют сухой экстракт смесью бензола и ацетонитрила, аликвотную порцию этого раствора подвергают двухмерной тонкослойной хроматографии. Содержание зсаралснона определяют визуально или путем измерения интенсивности флуоресценции пягна в ультрафиолетовом излучении и сравнения с известными количествами зсаралснона, нанесенными налу же пластину, что и экстракт испытуемой пробы.

Подтверждение идентичности зсаралснона проводят с помощью бисдиазотированного бензи-

дина.

3    Нормативные ссылки

ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

4    Реактивы

Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а:

вода дистиллированная;

ацетонитрил;

изооктан;

хлороформ;

смесь бензола и ацетонитрила в объемном соотношении 98 : 2;

Предупреждение — Бензол токсичен при вдыхании и контакте с кожей. Огнеопасен.

• Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 |1].

Издание официальное

прои&’1нющис растворители (смесь толуола, этил ацетата и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6 : 3 : 1 и смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95 : 5);

раствор хлористого к&пия массовой концентрации 40 г/дм5;

раствор уксуснокислого свинца готовят следующим обратом:

200 г уксуснокислого свинца помешают в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 1000 см3, добавляют 3 см3 уксусной кислоты, доводят водой до метки и перемешивают;

бисдиазотированный бензидиноный реактив.

Приготовление раствора бензидина массовой концентрации 5 г/дм3.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 приливают 20 см3 воды, 1,5 см3 соляной кислоты и вносят 0,5 г бензидина, доводят водой до метки и перемешиваю!.

Раствор следует хранить в защищенном от света месте в склянке из темного стекла.

Приготовление реактива

Равные объемы растворов бензидина и нитрита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 охлаждают примерно до температуры от 0 до минус 5 *С, тщательно перемешивают. Полученный раствор мутный и имеет темно-пурпурный цвет. Перед использованием егодоводят до температуры окружающей среды, раствор приобретает желтый цвет.

Реактив готовят непосредственно перед использованием;

Предупреждение — Бензидин является канцерогенным веществом. Токсичен при вдыхании, контакте с кожей, приеме внутрь.

диатомовая земля (цеолит 545), промытая соляной кислотой;

азот;

зсаратснон, стандартный раствор в бензоле массовой концентрации 10 мкг/см3.

На спектрометре определяют спектр поглощения раствора в диапазоне длин волн 300 и 330 нм, используя кювету толщиной просвечиваемого слоя 10 мм относительно бензола; регистрируют максимальное поглощение А, которое должно составлять примерно 317 нм.

Массовую концентрацию зсаралснона с, мкг/см3, рассчитывают по формуле

О)

318 /f 1000 6060 ’

где 318 — молярная масса зсаралснона, г/моль;

6060 — коэффициент молярной экстинкции, дм3/моль см.

5 Оборудование и материалы

Для проведения испытания применяют обычное лабораторное оборудование: мельницу для измельчения продукта до такой степени, чтобы он полностью проходил через сито, диаметр отверстий которого равен 1 мм;

встряхиватсль со скоростью встряхивания 100 колебаний в минуту;

бумагу фильтровальную средней плотности (рыхлая фильтровальная бумага даст мутный раствор, плотная фильтровальная бумага будет забиваться); испаритель ротационный с круглолонной колбой;

оборудование для тонкослойной хроматографии, т. с. оборудование для подготовки пластин и нанесения пятен (капиллярные пипетки или микрошприцы), емкость для проявления и распылитель для напыления реактива на пластины (пульверизатор);

пластины стеклянные для тонкослойной хроматографии размером 200 х 200 мм подготавливают следующим образом: 30 г силикагеля G-HR помещают в коническую колбу, приливают 60 см3 воды, закрывают и тщательно перемешивают в течение 1 мин. Полученную суспензию наносят на пластины таким образом, чтобы подучить равномерный слой толщиной 0,25 мм. Высушивают слой на воздухе и хранят пластины в эксикаторе. Перед использованием пластины активируют, выдерживая их в печи при температуре 110 'С в течение 1 ч.

Указанного количества суспензии силикагеля достаточно для подготовки 5 пластин. Допускается использовать пластины промышленного применения, если результаты, полученные с их применением, будут сравнимы с результатами, полученными на пластинах, подгото&зенных по вышеописанному способу;

лампы ультрафиолетовые с короткой длиной волны (253 нм).

ГОСТ Р 51425-99

Интенсивность излучения должна обеспечивать четкую видимость пятна в 25 нг эсараленона на тонкослойной пластине при установке лампы на расстоянии 100 мм от пластины;

Предупреждение — При работе с ультрафиолетовыми лучами в целях безопасности следует надевать защитные очки.

пробирки с полиэтиленовой пробкой вместимостью 10 см3; флуородснситомстр (при наличии); баню водяную температурой 60 *С;

колбы конические с притертой пробкой вместимостью 500 см3;

воронки делительные вместимостью 250 см3;

цилиндры мерные вместимостью 100 и 250 см3;

пипетки вместимостью 50 и 100 см3;

микрошприцы.

6    Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ 13496.0.

7    Порядок проведения испытания

7.1    Подготовка испытуемой пробы

Пробу, предназначенную для испытания, измельчают так, чтобы она полностью проходила через сито с отверстиями диаметром I мм. Тщательно перемешивают.

7.2    Взятие навески для проведения испытаний

50 г испытуемой пробы взвешивают в конической колбе с точностью 0,01 г.

7.3    Экстрагирование

В колбу с навеской приливают 180 см3 ацетонитрила и 20 см3 раствора хлористого калия, тщательно отмеренные мерным цилиндром. Закрывают колбу, перемешивают и устанавливают на встряхиватсль на 30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через фильтровальную бумагу.

100 см3 фильтрата переливают пипеткой в делительную воронку, где фильтрат двукратно обезжиривают изооктаном по 50 см3 каждый раз.

Ацетонитриловую фазу переносят в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.

7.4    Очистка

К полученному остатку приливают 20 см3 ацетонитрила, 60 см3 воды и 20 см3 раствора уксуснокислого свинца, тщательно отмеренных мерным цилиндром. Перемешивают и ставят в водяную баню на 10 мин при температуре 60 *С для образования осадка. Затем добааляют 5 г диатомовой земли, перемешивают и фильтруют через фильтровальную бумагу.

50 см3 фильтрата отбирают пипеткой в делительную воронку и проводят тройную переэкстра-кцию хлороформом по 50 см3 каждый раз. Хлороформную фракцию высушивают над сульфатом натрия. Собирают фракции хлороформа в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.

Сухой остаток растворяют в хлороформе и количественно переносят в пробирку, затем высушивают досуха в токе азота на водяной бане.

При помощи микрошприца осторожно добавляют в пробирку 0,5 см3 бензол-анетонитриловой смеси и пробирку плотно закрывают пробкой.

7.5    Проведение двухмерной тонкослойной хроматографии

7.5.1 Нанесение растворов (рисунок 1)

На пластине проводят две прямые линии, параллельные прилегающим сторонам (на расстоянии от краев на 50 и 60 мм соответственно), с целью отметки границы перемещения растворителей.

С помощью микрошприцев на пластину наносят растворы в точках по схеме, указанной на рисунке I.

-    А — 25 мкдм3 очищенного экстракта.

-    В — 10 мкдм3 стандартного раствора.

-    С — 5 мкдм3 стандартного раствора.

-    D — 10 мкдм3 стандартного раствора.

-    Е — 15 мкдм3 стандартного раствора.

3

Высушивают пластину струей воздуха или азотом.

2

8

(

(

1

Е

D

С

8

А

шв

°

20

130

50

Полученные пятна должны быть диаметром около 5 мм.

7.5.2 Прояалснис (рисунок 1)

Проявляют хроматограмму в направлении I, используя смесь толуола, этилацетага и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6:3:1 слоем в 10 мм в насыщенной камере для хроматофафирования, защищенной от воздействия света, до тех пор, пока фронт растворителя нс достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и дают подсохнуть около 15 мин при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.

Рисунок 1 — Нанесение расгнорон и проявление хроматограммы

П ри мечам не — После проявления и направлении 1 хроматограмму просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 253 нм, и возможные пятна эеараленоиа отмечают карандашом (пятно в точке В свидетельствует о наличии эсаралснона).

Далее проводят хроматофафированис в направлении 2, используя для этой цели смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95 : 5 слоем 10 мм в ненасыщенной камере в защищенном от света месте, пока фронт растворителя не достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и подсушивают се при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.

7.6    Определение

Для определения используют два способа: визуальный или флуороденситомефическое измерение. Последний способ используют при наличии аппарата.

7.6.1    Визуальное определение

Определяют количество эеараленоиа в экстракте путем сравнения интенсивности флуоресценции в ультрафиолетовом свете пятна экстракта испытуемой пробы с интенсивностью свечения пятен С, Dm Е стандартного раствора, поместив пластину на расстоянии 10 см от ультрафиолетовой лампы. При необходимости осуществляют интерполирование подученных данных.

Если интенсивность флуоресценции пятна экстракта испытуемой пробы объемом 25 мкдм3 превышает интенсивность свечения пятна стандартного раствора эсаралснона объемом 15 мкдм3, то наносят меньший объем экстракта в точку А или разбавляют экстракт смесью бензола с ацетонитрилом и повторяют тонкослойное хроматофафирование, начиная с 7.5.

7.6.2    Флуородснситомстричсскос определение

Измеряют интенсивность флуоресценции пятен флуороденситомстром, например на волне возбуждении в 313 нм и волне эмиссии в 443 нм (максимальная эмиссия при 470 нм).

Определяют содержание эсаралснона в экстракте, нанесенном на пластину, путем сравнения интенсивности флуоресценции пятна экстракта с интенсивностью свечения пятен С, D и Е стандартного раствора.

7.7    Проверочное испытание на присутствие эсаралснона

Напыляют на пластину, подготовленную по 7.5 бисдиазотированный бензидин. Зсаралснон дает яркое кирпично-красное пятно при температуре окружающей среды, выцветающее после 15-минутной экспозиции на воздухе.

8 Обработка результатов

8. / Визуальное определение

Содержание эсаралснона X, мкг/кг, рассчитывают по формуле

у с Ух у>

т V2

где с — массовая кониенфация зеараленона в стандартом растворе, мкг/см3;

4

ГОСТ Р 51425-99

К| — конечный объем экстракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3;

И3, Н2 ~ объемы стандартного раствора зеараленона и экстракта соответственно, с одинаковой интенсивностью флуоресценции, мкдм3; т — масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г (12,5).

8.2 Флуородснситомстрнчсскос определение

».Г»

т У2


(3)


*.«


Содержание зеараленона, Хх, мкг/кг, рассчитывают по формуле

где — масса зеараленона в пятне экстракта (с учетом объема Кг), выявленная при определении, нг;

К| — конечный обьсм эксгракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3; т — масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г (12,5);

К2 — объем эксгракта, наносимою на пластину, мкдм3 (25 мкдм3).

9 Точность

Международные испытания, проведенные в 20 лабораториях (из которых только 16 представили результаты, приемлемые для кукурузы В), каждая из которых провела 3 измерения, позволили получить статистические данные, приведенные в таблице 1.

Таблица!    В    микрограммах    на    килограмм

Проба

Кукуруза А

Кукуруза В (кукуруза А. разбавленная на 1/3)

Количество лабораторий, представивших необходимые результаты

20

IS

Средняя величина

734

219

Стандартные отклонения повторяемости 5,

78

34

Коэффициент отклонения повторяемости

II %

15 %

Повторяемость 2,83 S,

221

96

Стандартное отклонение воспроизводимости или сходимости

282

125

Коэффициент отклонения воепроизводимости или сходимости, %

38

57

Воспроизводимость или сходимость 2,83 S*

798

354

11 р и м еч ан и с — Кукуруза В — это кукуруза А, разбавленная 3 раза кукурузой, не содержащей

зсаралснон.

10 Оформление результатов испытания

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    используемый метод;

-    полученные результаты;

-    любые условия проведения испытаний, нс установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.

5

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

Биб.1И01рафия

|1| ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб

УДК 636.085.001.4 : 006.354    ОКС    65.120    С19    ОКСТУ    9709

9209

92%

Ключевые слова: корм, комбикорм, комбикормовое сырье, зеараленон, массовая концентрация, хроматографирование, метод

Редактор Л. В. Каретникова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор Т.И. Кононенко Компьютерная верстка В. И. Грищенко

Подписано в печать 29.09.2005. Формат 60х84'/*- Бумага офсетная. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Уел. печ. л. 0.93. Уч.-иаа. я. 0,67. Тираж 41 эю. Зак. 204. С 1963.

ФГУП «Стандартанформ». 123995 Москва. Гранатный пер., 4. www.goMinfo.ru info@goMinfo.ru Набрано в Издательстве на ПЭВМ Отпечатано во ФГУП «Стандартаиформ»