Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

9 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли растворимого азота после обработки пепсином в разведенной соляной кислоте

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51423-99 (ИСО 6655-97)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения массовой доли растворимого азота после обработки пепсином в разведенной соляной кислоте

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51423-99

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы*

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ГК 4 «Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 578-ст

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6655—97 «Корма для животных. Определение содержания растворимого азота после обработки пепсином в разведенной соляной кислоте*, за исключением 2, 6

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

53    II

Страница 3

ГОСТ Р 51423-99 (ИСО 6655-97)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения массовой доли растворимого азота после обработки пепсином в разведенной соляной кислоте

Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials. Method for determination of soluble nitrogen fraction of total та» after treatment with pepsin in dilute hydrochloric add

Дата введения 2001—01—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли растворимого азота после обработки пепсином в разведенной соляной кислоте.

Настоящим методом определяется суммарная массовая доля белкового и небелкового азота.

Примечания

1    Значения, получаемые настоящим методом, не связаны напрямую с показателем перевари вас мости in vivo.

2    Если массовую долю небелкового азота нужно исключить из результата испытания, ее следует определить соответствующим методом.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте используют ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ Р 51417-99 (ИСО 5983—97) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Определение массовой доли азота и расчет массовой доли сырого протеина. Метод Къельдаля

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498—98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

3    Сущность метода

Инкубация пробы в растворе пепсина в разведенной соляной кислоте при 40 ‘С в течение 48 ч. Фильтрование суспензии и определение массовой дачи азота в фильтрате или в осадке на фильтре методом Къельдаля по ИСО 5983. В последнем случае дополнительно проводят определение массовой доли азота в пробе в соответствии с ИСО 5983.

4    Реактивы

Используют реактивы квалификации х.ч. или ч.д.а.. во всех реактивах (за исключением стандартных материалов) должны отсутствовать азотсодержащие компоненты.

4.1    Дистиллированная или деминерализованная вода.

4.2    Разведенная соляная кислота молярной концентрации с (НС1) = 0,075 моль/дм3.

* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 |1|.

Издание официальное

S4

1

Страница 4

ГОСТ I» 51423-99

4.3    Пепсин активностью 2,0 единиц/м г в соответствии с определением, данным в приложении Л.

4.4    Раствор пепсина в соляной кислоте активностью пепсина около 400 единиц/дм’.

Растворяют (0,2±0.001) г пепсина в 1 дм3 разведенной соляной кислоты. Раствор готовят

непосредственно перед использованием.

Если активность пепсина отклоняется от 2,0 единии/мг, регулируют массу пепсина таким образом, чтобы получить раствор активностью пепсина 400 единиц/дм3.

4.5    Соляная кислота молярной концентрации с (НО) = 7,5 моль/дм5 = 1,125 г/см5).

§ Оборудование и материалы

Используют обычное лабораторное оборудование.

5.1    Водяная баня или инкубатор для поддержания -температуры (40±1) "С.

5.2    Колбы Къельдаля соответствующей вместимости.

5.3    Фильтровальная бумага, быстро фильтрующая кислотостойкая.

5.4    Оборудование для перегонки и фильтрации.

6    Отбор проб

6.1    Отбор проб - по ГОСТ 13496.0.

Проба, получаемая лабораторией, должна быть действительно представительной и защищена от изменений своих качеств при транспортировании и хранении.

7    Подготовка испытуемых проб

7.1    Подготовка испытуемых проб — по ГОСТ Р 51419

Если массовая доля жира в пробе превышает 10 %, жир экстрагируют в соответствии с ГОСТ Р 51419 и учитывают это при расчете (раздел 9).

8    Проведение испытания

8.1    Взятие навески

Берут навеску подготовленной пробы массой около 2 г с точностью до 0,001 г.

8.2    Инкубация

Навеску пробы помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, добавляют 450 см' раствора пепсина, предварительно подогретого до 40 *С. Содержимое колбы перемешивают для предотвращения агломерации. Проверяют pH суспензии, которая должна быть ниже 1,7. Колбу помещают на водяную баню или в инкубатор, установленный на 40 ‘С, и выдерживают ее там в течение 48 ч. Содержимое колбы перемешивают через 8.24 и 32 ч.

По истечении 48 ч в колбу вносят 15 см3 соляной кислоты, с (НС1) = 7,5 моль/дм3, и охлаждают содержимое до 20 ‘С. Объем в колбе доводят водой до метки, содержимое перемешивают и фильтруют через фильтровальную бумагу. Дальнейшее испытание проводят по 8.3 или 8.4.

8.3    Определение массовой доли азота в фильтрате

8.3.1    Минерализация

Отбирают 250 см3 фильтрата и переносят его в колбу Къельдаля. В колбу добавляют реактивы, необходимые для минерализации, как указано в ГОСТ Р 51417, 8.2.1. Содержимое колбы доводят до кипения.

Г1 р и м с ч а и и с — Рекомендуется вмести в колбу реактив, предогврашающий ценообразование.

Содержимое колбы выпаривают при интенсивном кипении почти до полного испарения воды. Остаток воды удаляют с осторожностью, снижая интенсивность нагрева. После того, как жидкость в колбе станет прозрачной, нагревание продолжают еще в течение 1 ч, затем колбу охлаждают.

8.3.2    Отгонка и титрование

Отгонку аммиака и титрование проводят по ГОСТ Р 51417, 8.2.2 и 8.2.3.

55

2

Страница 5

ГОСТ Р 51423-99

S.3.3 Контрольный опыт

Контрольный опыт проводят, выполняя тс же операции с использованием тех же реактивов, за исключением навески пробы. Обработку результатов проводят в соответствии с разделом 9.

8.4 Определение массовой доли азота в осадке после фильтрации N.4.1 Минерализация осадка после фильтрации

Фильтр и осадок на нем промывают теплой водой до полного удаления кислоты. Фильтр с осадком переносят в колбу Къельдаля и дальнейшее испытание проводят по 8.3.1 настоящего стандарта.

8.4.2    Отгонка и титрование — по ГОСТ Р 51417. 8.2.2 и 8.2.3.

5.4.3    Определение массовой доли азота в пробе

Массовую долю азота в подготовленной пробе определяют в соответствии с ГОСТ Р 51417.

8.4.4    Контрольный опыт

Контрольный опыт проводят, выполняя тс же операции с использованием тсх же реактивов, за исключением навески пробы.

9    Обработка результатов

9.1    Расчет массовой доли растворимого азота при выполнении испытания по 8.3

При условии, что для улавливания аммиака из пробы и в контрольном опыте    использовались

равные количества серной кислоты ГОСТ Р 51417, массовую долю    растворимого    азота    в    пробе    lVt,

г/кг. рассчитывают по формуле

ц,_2 (У.-^сЛ/    (1)

1    т

где У0 — объем раствора гидроксида натрия, пошедший на титрование в контрольном опыте ГОСТ Р 51417, 4.9.1. см3;

У, — объем раствора гидроксида натрия, пошедший на титрование в опыте с пробой по 8.3.2 ГОСТ Р 51417, 4.9.1, см3; с — молярная концентрация раствора гидроксида натрия, использованного на титрование, ГОСТ Р 51417, 4.9.1. моль/дм3;

Л/ — молярная масса азота, r/моль (Л/ = 14 г/моль); т — масса навески, г.

Результат испытания округляют с точностью до 0.1 г/кг.

9.2    Расчет массовой доли растворимого азота при выполнении испытания по 8.4

При условии, что для улавливания аммиака из пробы и в контрольном опыте использовались равные количества серной кислоты по ГОСТ Р 51417, массовую долю растворимого азота в пробе W2, r/кг, рассчитывают по формуле

(2)

24    т

где — массовая доля азота в пробе, определенная по S.4.3, г/кг.

Результат испытания округляют с точностью до 0.1 г/кг.

9.3    Расчет массовой доли растворимого сырого протеина

Массовую долю растворимого сырого протеина рассчитывают умножением массовой доли растворимого азота на 6,25.

10    Точность метода

10.1    Межлабораторное испытание

Результаты межлабораторного испытания точности метода приведены в приложении Б. Полученные точностные характеристики применимы только для исследованных объектов в исследованном диапазоне концентраций анализируемого вещества.

10.2    Сходимость

Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытаний, по-

3

56

Страница 6

ГОСТ Р 51423-99

лученными настоящим методом на одной и той же пробе в одной лаборатории одним и тем же оператором с использованием одного и того же оборудования в течение короткого промежутка времени, превышает значения показателя г, приведенные в таблице 1, не более чем в 5 % случаев.

10.3 Воспроизводимость

Абсолютная разница между двумя единичными результатами испытаний, полученными настоящим методом на одной и той же пробе в различных лабораториях различными операторами с использованием различного оборудования, превышает значения показателя R. приведенные в таблице 1, не более чем в 5 % случаев.

Таблица 1 — Пределы сходимости г и воспроизводимости R

П роба

Среднее мшчснис массоиой доли раснихримою сырою npoiciiHa, г/кг сухого продукта

г. г/кг

Л. г/кг

Мука люцерны

136.6

7,2

26.5

Кукурузный кормовой глютен

141.5

8,9

28.9

Кокосовая мука

149.5

7.4

31.6

Травяной силос

192.9

7,9

36.3

Костная мука

512.0

8,9

63.!

Перьевая мука

574,3

22.1

166.3

11 Оформление результатов испытания

Отчет о результатах испытания должен содержать:

-    всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

-    метод, в соответствии с которым произведен отбор проб (если известен);

-    метод испытания;

-    полученный результат испытания, представленный в виде содержания растворимого азота или растворимого сырого протеина (в последнем случае указывают коэффициент пересчета 6.25);

-    если проверена сходимость, окончательный результат с оценкой сходимости;

-    все подробности проведения испытания, не указанные в настоящем стандарте, или рассматриваемые как несущественные вместе со всеми побочными обстоятельствами, которые могли влиять на результаты испытания.

57

4

Страница 7

ГОСТ Р 51423-99

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(обязательное)

Определение активности пепсина

А. I Область распространения

Настоящее приложение устанавливает метод определения активности пепсина, используемый при определении массовой доли растворимого азота после Обработки пепсином в разведенной соляной кислоте. А.2 Определение

В настоящем приложении использован следующий термин с соответствующим определением: единица активности пепсина: Масса пепсина, необходимая для высвобождения за одну минуту при определенных условиях тога количества оксиарильных групп, которое при взаимодействии с реактивом Фалина—1Сиокаято дает оптическую плотность, эквивалентную 1 мкмоль тирозина в тех же условиях.

А.З Сущность метода

Обработка гемоглобина пепсином в разведенной соляной кислоте. Осаждение негидролизованной части белка трихлоруксусной кислотой. Фильграпня и добавление пироокиси натрия и реактива Фалина—Сиокалго. Измерение оптической плотности этого раствора при длине волны 750 нм и определение соответствующей массы тирозина с помощью градуировочного графика.

А.4 Реактивы

Используют реактивы квалификации х.ч. или чл.а., дистиллированную или деминерализованную воду:

соляную кислоту малярной концентрации с (НО) = 0.2 моль/дм3;

соляную кислоту молярной концентрации с (НО) = 0,06 моль/дм

соляную кислоту молярной концентрации с (HCI) = 0,025 моль/дм’;

раствор трихлоруксусной кислоты массовой концентрации с (CCljCOjH) = 50 г/дм3;

раствор гидроксида натрии молярной концентрации с (NaOH) = 0.5 моль/гиг1:

реактив Фалина—Сиокалто

В круглодонную колбу со шлифом вместимостью 2 дм ’ помешают 100 г дигидрага вольфрамата натрии (Nai W04 - 2HiO), 25 г дигидрата молибдата натрия (Na:MoOc ■ 2Н20) и 700 см3 воды. В колбу добавляют 50 см ’ фосфорной кислоты, р(Н3Р04) = 1,71 г/см1 и 100 см5 концентрированной соляной кислоты. р(НО) = ■= 1.19 г/см*. К колбе присоединяют обратный холодильник, раствор доводят до кипения и аккуратно кипятят я течение 10 ч. Затем колбу охлаждают, отсоединяют обратный холодильник, добавляют 175 г дигидрата сульфата лития (Li2S04 • 2Н,0), 50 см5 воды и 1 см-1 брома. Содержимое колбы кипятят в течение 15 мин для удаления избытка брома.

Колбу охлаждают, раствор декантируют в мерную колбу вместимостью 1 дм3. Объем содержимого в колбе доводят до метки дистиллированной водой, раствор перемешивают и фильтруют. Остаточная зеленоватая окраска раствора не допускается.

Перед использованием один объем реактива разводят двумя объемами волы: раствор гемоглобина

Берут навеску гемоглобино-протеинового субстрата окало 2 г по методу Айсона, соот ветствующую 354 мг азота, и помещают ее в колбу со шлифом вместимостью 200 см3 и отметкой на уровне 100 см3.

Примечание— При необходимости определяют массовую долю азота в субстрате с помощью микрометода Късльдатя. Ожидаемая массовая доля азота составляет 17.7 %.

В колбу с субстратом вносят небольшое количество разведенной соляной кислоты, с (НО) = = 0.06 моль/дм', подсоединяют колбу к вакуумному насосу и перемешивают содержимое до полного растворения гемоглобина. После этого спускают вакуум и. при постоянном перемешивании, добавляют в колбу разведенную соляную кислот)' той же молярной концентрации до отметки на уровне 100 см5.

Раствор готовят непосредственно перед использованием:

стандартный раствор тирозина молярной концентрации c-(CqH,|NOj) = 0.2 ммоль/дм3.

Для приготовления основного раствора в мерной колбе вместимостью 1 дм3 растворяют 181,2 мг тирозина в разведенной соляной кислоте, с (HCI) “ 0,06 моль/дм\ доводят сю объем содержимого в колбе до метки.

20 см3 основного раствора переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем содержимого в колбе до метки разведенной соляной кислотой, с (НО) = 0.06 моль/дм3.

Молярная концентрация тирозина в приготовленном стандартном растворе составляет 0,2 мкмоль/см3 (0,2 ммоль/дм3).

А.5 Оборудование

Используют обычное лабораторное оборудование: водяную баню для поддержания температуры (25±1) 'С:

1

   58

Страница 8

ГОСТ Р 51423-99

спектрофотометр для проведения измерений при длине волны 750 нм:

хронометр для измерения времени с точностью до 1 с;

pH-метр для измерения pH с точностью ло 0.1 единицы;

стеклянную палочку, один коней которой толще другого.

А.6 Проведение испытания

А.6.1 Приготовление раствора пепсина

Навеску пепсина массой 150 мг (или массу, необходимую для получения оптической плотности 0,35±0,035) растворяют в 100 см5 разведенной соляной кислоты, с (HCI) = 0,06 моль/дм3.

2 см3 приготовленного раствора переносят пипеткой в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят объем содержимого в колбе разведенной соляной кислотой, с (НС1) *= 0,025 моль/дм3, до метки. Значение pH приготовленного раствора должно быть 1,6±0,1.

Колбу с раствором погружают в водяную баню температурой 25 “С.

А.6.2 Гидролиз

В пробирку с помошью пипетки переносят 5.0 см3 раствора гемоглобина и нагревают на водяной бане до 25 *С. В пробирку вносят 1,0 см3 раствора пепсина; содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой, совершая около 10 возвратно-поступательных движений. Пробирку выдерживают на водяной бане при (25±1)‘С в течение 10 мин ± 1 с. отсчитывая время с момента внесения раствора пепсина. Необходимо точно соблюдать продолжительность и температуру инкубации. По окончании инкубации в пробирку добавляют

10.0    см* раствора трихлоруксусной кислоты, предварительно подогретою до (25±1) ‘С, содержимое пробирки перемешивают и фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.

А.6.3 Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности

5.0    см5 фильтрата переносят пипеткой в коническую колбу вмссгимостью 50 см3. В колбу добавляют

10.0    см5 раствора гидроксила натрия и. при постоянном перемешивании. 3,0 ext’ разбавленного реактива Фолина—Сиокалто. Через 5 — 10 мин измеряют оптическую плотность расгвора на спектрофотометре при длине волны 750 нм в кювете рабочей длиной 1 см. В качестве расгвора сравнения используют воду.

А.6.4 Контрольное испытание

Контрольное испытание проводят при каждом определении.

5.0    см3 раствора гемоглобина переносят пипеткой в пробирку, подогревают на водяной бане до (25±1) ‘С, добавляют 10,0 см3 расгвора трихлоруксусной кислоты, предварительно подогретого до (25±1) ‘С. Содержимое пробирки перемешиваю! и вносят 1.0 см5 раствора пепсина. Расгвор в пробирке псрсх1ешивают стеклянной палочкой. Пробирку выдерживают на водяной бане при температуре (25±1) ‘С в течение 10 мин ±1 с. после чего раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу. Дальнейшее испытание выполняют по А.6.3.

А.6.5 Построение !ралунровочного графика

В шесть конических колб вмссгимостью 50 см3 помешают 0; 1,0; 2,0; 3,0; 4.0 и 5,0 см5 стандартного раствора тирозина, что соответствует 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 и 1.0 мкмоль тирозина. В колбы добаатяют разведенную соляную кислоту, с (HCI) = 0.2 моль/дм3, в таком количестве, чтобы обьем содержимого в каждой колбе составил 5,0 см3.

В каждую колбу вносят по 10,0 см3 расгвора гидроксида натрия и. при постоянном перемешивании.

3.0    см3 разбавленного реактива Фолина—Сиокалто. Измеряют оптическую плотность растворов в соответствии с А.6.3.

Строят градуировочный график зависимости оптической плотности от массы тирозина в микромолях.

А. 7 Обработка результатов

По градуировочному графику определяют массу тирозина в микромолях, соответствующую оптической плотности окрашенного раствор;!, скорректированной с результатом контрольного испытания.

Активность пепсина а, мкмоль/г в минуту при (25±1) ‘С. рассчитывают по формуле

а = ЫЛ    (АЛ)

т t ’

где п — масса тирозина, найденная по градуировочному графику, мкмоль; т — масса пепсина, взятая в А.6.1. мг;

/— продолжительность реакции, мин (/ = 10 мин).

Примечание— Две единицы активности пепсина на миллиграмм, полученные настоящим методом, соответствуют 3.64 мпллисдиницам Айсона на миллиграмм (в микромолях тирозина на миллиграмм в минуту при 35,5‘С) или 36400 коммерческим единицам на грамм (в микромолях тирозина на грамм за 10 мин при 35.5 °С).

59

6

Страница 9

ГОСТ Р 51423-99

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)

Результаты межлабораторного испытания

Точность настоящего метода установлена в результате межлабораторного испытания, проведенного на международном уровне ИСО/ТК 34/ПК 10. В лом испытании принимали участие 19 лабораторий, каждая из которых провела по три параллельных определения шести образцов.

Таблица Б.1

napauetp

М ука люцерны

Кукурузный

кормовой

глютен

Кокосовая

мука

Травиной

силос

К ос 1 мая мука

Перьснля

мука

Количество лабораторий, оставшихся после исключения выпавших лабораторий

17

18

17

18

15

17

Среднее значение массовой доли растворимою азота, г/кг сухого продукта

136.6

141.5

149.5

192.9

512.0

574.3

Стандартное отклонение сходимости S,, г/кг

2.5

3,1

2.6

2.8

3,2

7.8

Коэффициент вариации сходимости. %

1.8

2,2

1,7

1.4

0.6

1.4

Предел сходимости г(г= 2.8 5,). г/кг

7,2

8,9

7.4

7.9

8.9

22,1

Стандартное отклонение воспроизводимости Sr. г/кг

9,4

10.2

11,2

12.8

22.3

58,8

Коэффициент вариации воспроизводимости, %

6,8

7,2

7,5

6.6

4.4

10,2

Предел воспроизводимости R (Я = 2,8 SK), г/кг

26,5

28.9

31.6

36.3

63.1

166.3

ПРИЛОЖЕНИЕ В (справочное)

Библиография

11J ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб

ОКС 65.120    С19    ОКСТУ    9209,

9709

Ключевые слова: корма, комбикорма, комбикормовое сырье, растворимый азот, пепсин, соляная кислота

60

7