Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на молоко и молочные продукты и устанавливает метод определения массовых долей лактозы и галактозы в присутствии других сахаров

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения, обозначения и сокращения

4 Сущность метода

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Отбор проб

8 Проведения испытания

9 Выражение результатов

10 Отчет об испытании

Приложение А Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51259-99 (ДИН 10344-82)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Метод определения лактозы и галактозы

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51259-99

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля 1999 г. № 121

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 10344—82 «Молоко и молочные продукты. Ферментативное определение лактозы и галактозы* с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3,4. 5,6 и 7)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II    260

Страница 3

ГОСТ Р 51259-99 (ДИН 10344-82)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения лактозы и галактозы

Milk and milk products.

Method for determination of lactose and galactose content

Дата введения 2000—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты и устанавливает метод определения массовых долей лактозы и галактозы п присутствии других сахаров.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 2493-75 Калий фосфорнокислый двузамешенный 3-водный. Технические условия

ГОСТ 3652-69 Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4174-77 Цинк сернокислый 7-вещный. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Натрия пироокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу

3    Определения, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением: массовые доли лактозы и галактозы в молоке и молочных продуктах: Массовые доли лактозы

и галактозы, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в г/100 г.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАД — р-никотинамидадениндинуклеотид;

НАДН — |}-никотинамидадениндинуклеотид (восстаноаченная форма);

ГЗ - (V-галактозилаза;

ГДГ — р-галактозодегидрогеназа;

Е—международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 "С 1 мкмоля вещества в минуту.

Издание официальное

12-3-706

261

I

Страница 4

ГОСТ Р 51259-99

4    Сущность метода

Метод определения галактозы основам на окислении галактозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием НАД в присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НЛДН. эквивалентной массовой доле галактозы в пробе (свободная галактоза).

Метод определения лактозы основан на пиролизе лактозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии ГЗ до глюкозы и галактозы, окислении имеющейся в пробе галактозы (свободная галактоза плюс образовавшаяся при гидролизе лактозы) под действием НАД в присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении массовой дат образовавшегося НЛДН, эквивалентного массовой доле галактозы, и расчете массовой доли лактозы по разности оптических плотностей данного раствора и раствора, используемого при определении свободной галактозы.

5    Реактивы

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидисгиллированной.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения лактозы и галактозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

5.1    Раствор сернокислого цинка

30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ZnS04 • 7Н:0) растворяют в 100 см’ дистиллированной воды. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.

5.2    Раствор гексациано-(Н)-фсррата калия

15 г гексаииано-(М)-феррата калия (KJFe(CN)J ЗН;0) растворяют в 100см3 дистиллированной воды. Раствор хранят при температуре 4 'С I мес.

5.3    Гидроокись натрия по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации c

5.4    Цитратиый буферный раствор

2,8 г тринатрнйцнтрата дигидрата (CbH40,Na,-2Н.О). 0.625 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 (MgSO,- 7Н:0) и 0,042 г моногидрата лимонной кислоты по ГОСТ 3652 (С,НкО. Н.О) растворяют в 40 см1 дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до 6,6 pH несколькими каплями раствора серной кислоты по ГОСТ 4204 молярной концентрации ctH,S04) = = 2 моль/дм5 или раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации c(NaOH) = = 0,1 моль/дм1. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 см1. Буферный раствор устойчив при температуре 4 *С 3 мес.

5.5    Буферный раствор днфосфага калия

8,3 г дифосфата калия по ГОСТ 2493 (KtP,0?) растворяют в 40 см* дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до 8.6 pH раствором серной кислоты но ГОСТ 4204 молярной концентрации f(H,SOj = 2 мол ь/дм*. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 см1. Буферный раствор устойчив при температуре 4 "С 2 мес.

5.6    Раствор НАД

0,035 г НАД растворяют в 7 см1 нитратного буфера по 5.4. Раствор устойчив при температуре 4 С три недели.

5.7    Суспензия фермента ГЗ

Сухой лиофилизат р-галактозидазы из Е. coli массой 0.005 г и активностью 150 Е суспендируют в 1 см’ раствора аммония сернокислого по ГОСТ3769 молярной концентрации c((NH4),S04) = = 2,2 моль/дм5. Суспензия устойчива при температуре 4 ‘С 12 мес.

5.8    Суспензия ферменга ГДГ

Сухой лиофилизат р-галактозодегидрогеназы из Pseudomonas fluorescens массой 0,005 г и активностью 25 Е смешивают с 1 см5 раствора аммония сернокислого по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NHJ,S04) = 2,2 моль/дм5. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.

262

2

Страница 5

ГОСТ Р 51259-99

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная г» 6.1—6.7.

6.1    Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0,0001 г.

6.2    Дозаторы пипеточные объемами доз 100, 50 и 25 см' и относительной погрешностью дозирования ± 1% {1) или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0: 1,0; 0.5; 0,2; 0.1 и 0,02 см1 и допускаемой относительной погрешностью ±1 %.

6.3    Колба мерная номинальной вместимостью 100 см1 и допускаемой относительной погрешностью ±0.2 %.

6.4    Фильтры гофрированные бумажные диаметром 15 см по ГОСТ 12026.

6.5    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя I см для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм.

6.6    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.7    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический, позволяющий проводить измерения при длинах волн 334. 340 или 365 нм. допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1%.

6.8    Бумага индикаторная универсальная для интервала измерений активной кислотности от 1 до 10 pH.

Допускается использовать другие средства измерений с метрологическими характеристиками и лабораторное оборудование с техническими характеристиками, не уступающими перечисленным выше.

7    Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 26809.

8    Проведение испытания

8.1    11еред испытанием пробу хорошо перемешивают.

8.2    Пробу продукта массой 1,0000 г количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см>.

Пастообразные пробы предварительно разбавляют небольшим количеством дистиллированной волы и затем количественно переносят в мерную колбу.

В колбу добавляют 50 см1 дистиллированной воды. Содержимое колбы хорошо перемешивают.

Масса пробы зависит от массовой концентрации лактозы по 9.1. Навеску пробы подбирают таким образом, чтобы массовая концентрация лактозы в фильтрате по 8.4 составляла от 0.05 до 1,00 г/дм*.

8.3    В колбу последовательно добавляют I см‘ раствора сернокислого цинка и 1 см4 раствора гексациано-(11)-феррата калия. Посте добавления каждого реагента содержимое колбы энергично перемешивают. Затем нейтрализуют раствор в колбе, добавляя раствор гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 0,25 моль/дм '. Контроль активной кислотности осуществляют индикаторной бумагой. Доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и выдерживают колбу 15 мин при комнатной температуре.

8.4    Содержимое колбы фильтруют через сухой гофрированный бумажный фильтр. При необходимости для получения прозрачного фильтрата проводят повторное фильтрование.

Дчя получения прозрачных фильтратов допускается использовать для осаждения белков и жиров меньшие количества сернокислого цинка и гексациано-(П)-фсррата калия по 8.3.

8.5    Контрольное определение и определение галактозы и лактозы

8.5.1 Контрольное определение

8.5.1.1В первую кювету спектрофотометра (фотометра) последовательно дозируют 0,20 см3 ра-створа НАД в нитратном буфере. 0,02 см1 суспензии фермента ГЗ, 1,00 см' буферного раствора л «фосфата калия и 2.00 см1 дистиллированной воды. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 15 мин.

I2-J*

263

3

Страница 6

ГОСТ Р 51259-99

8.5.1.2    Измеряют оптическую плотность — Аи раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.5.1.3    В кювету добавляют 0,02 см* суспензии ГДГ. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и остаатяют на 30 мин при комнатной температуре.

8.5.1.4    Измеряют оптическую плотность — Ан раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.5.2 Определение свободной галактозы

Определение можно не проводить, если свободная галактоза отсутствует в пробе.

8.5.2.1    Во вторую кювету спектрофотометра (фотометра) последовательно дозируют 0,20 см* раствора НАД в нитратном буфере. 0.1 см' прозрачного фильтрата по 8.4, 1.00 см' буферного раствора дифосфата калия и 1.90 см5 дистиллированной воды. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 15 мин.

8.5.2.2    Измеряют оптическую плотность — Ли раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.5.2.3    В кювету добаатя ют 0,02 смJ суспензии ГДГ. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и остаашют на 30 мин при комнатной температуре.

5.5.2.4    Измеряют оптическую плотность — Л3/ раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.5.3 Определение лактозы

8.5.3.1    В третью кювету спектрофотометра (фотометра) последовательно дозируют 0.20 см' раствора НАД в нитратном буфере. 0,1 см1 прозрачного фильтрата по 8.4 и 0.02 см1 суспензии ГЗ. Содержимое кюветы перемешивают, осторожно встряхивая, и оставляют при комнатной температуре на 15 мин. Затем в кювету последовательно добаваяют 1.00 см1 буферного раствора дифосфата калия и 1,90 см1 дистиллированной воды- Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температу ре на 2 мин.

8.5.3.2    Измеряют оптическую плотность — Ati i раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.5.3.3    В кювету добаатяют 0,02 см' суспензии ГДГ. Содержимое кюветы перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и оставляют на 15 мин при комнатной температуре.

8.5.3.4    Измеряют оптическую плотность — AU t раствора относительно оптической плотности воздуха.

8.6 Измерения оптической плотности растворов по 8.5.2.4 и 8.5.3.4 повторяют через каждые 2 мин до окончания реакции, что выражается в устаноатении постоянной оптической плотности раствора. Подобные измерения необходимо проводить при использовании ферментных препаратов с длительным сроком хранения.

9 Выражение результатов

9.1 После измерений оптических плотностей растворов рассчитывают изменения оптических ачотнос тей растворов, которые вызваны окислением свободной галактозы ДЛ и окислением свободной галактозы и галактозы, образовавшейся при гидролизе лактозы, ДЛ,.,

Ч -    -    Цы-Ц!

(1)

(2)

АА =

Л-t

Изменение оптической плотности раствора ДЛ , вызванное гидролизом лактозы, рассчитывают по ({юрмуле

(3)

Д/1 — ДА — АЛ .

9.2 Массовую долю IV лактозы в пробе, г/100 г, рассчитывают по формуле

где А1г — молярная масса лактозы (безводная форма), 342,30 г/моль: молярная масса моногидрата лактозы, 360.31 г/моль (массовую долю моногидрата лактозы в пробе рассчитывают умножением массовой доли безводной лактозы на коэффициент 1.0588):

264

4

Страница 7

ГОСТ Р 51259-99

—    общий объем растнора в кювете, 3,24 см»;

—    объем, полученный при разбавлении пробы в процессе ее подготовки к испытанию по 8.3, 100 см»;

г — молярный коэффициент поглощения НЛДН,дм* ммоль-' см-':

-    при длине волны 340 нм — 6.3,

-    при длине волны 365 нм — 3,4 (ртутная лампа),

-    при длине полны 334 нм — 6,18 (ртутная лампа); d — толщина поглощающего стоя в кювете, см:

К — объем пробы, 0.10 см’: т — навеска пробы, г.

9.3    Массовую долю \У, галактозы в пробе, г/100 г, рассчитывают по формуле

и'.

где А/ — молярная масса галактозы. 180,16 г/моль.

За результаты испытаний принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, округленные до 0.1 г/100 г для лактозы и до 0.05 г/100 г для галактозы.

9.4    Сходимость

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных водной лаборатории, не должно превышать более чем в5% случаев 0,1 г/ИЮ г для лактозы или 0,05 г/100 г для галактозы.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    вид пробы;

-    способ отбора пробы;

-    массовая доля лактозы в пробе, г/100 г;

-    массовая доля галактозы в пробе, г/100 г;

-    дата испытания.

265

5

Страница 8

ГОСТ Р 51259-99

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Библиография

111 ТУ 64-13329-8I Дозаторы иииеточныс

ОКС 67.100.10    Н19    ОКСТУ    9109

Ключевые слова: молоко; молочные продукты: лактоза: галактоза: ферментативное определение; спек-трофотометрия

266

6