Сертификация: тел. +7 (495) 175-92-77
Стр. 1
 

10 страниц

304.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы

Введен впервые. Переиздание

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение, обозначения и сокращения

4 Сущность метода и реакции

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Проведение испытания

8 Выражение результатов

9 Точность определения

10 Отчет об испытании

Приложение А Статистические результаты кругового испытания

Приложение Б Библиография

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51240-98 (ДИН 1140-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Страница 2

ГОСТ Р 51240-98

Предисловие

1    РЛЗРЛБО ГЛН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасности*

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. № 463

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН ЕН 1140—94 -Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-глюкозы и D-фруктозы. Спектрофотометрическое определение НЛДФН (ни коти намид аден и иди нуклеотид-фосфата)* с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7, 8 и 9 и пункт 6.1)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован it распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

II    128

Страница 3

ГОСТ Р 51240-98 (ДИН 1140-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ С Т АН Д А РТ РОСС ИЙ СК О Й ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-глюкозы и О-фруктозы

Fruit and vegetable juices. Determination of D-glucosc and D-fructose content

Дата введения 1999-07-01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы.

2    Нормативные ссылки

13 настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 4523-77 Магний сернокислый 7-водный. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

3    Определение, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующими определениями:

массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы во фруктовых н овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в граммах на кубический дециметр.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения.

АТФ    — аденозин-5'трифосфат;

АДФ    — аденознн-5'-дифосфат;

НАДФ — р-никотииам ид адениндинуклеотцдфосфат;

НЛДФН — р-ннкотипамидадениндинуклеотидфосфат (восстановленная форма);

Г-6-Ф    — глюкозо-6-фосфат:

ф-6-ф    — фруктозо-6-фосфат;

ГК    — гексокиназа;

I 6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

ФГИ    — фосфоглюкозои зомераза;

Е    — международная единица.определяет количество (активность) фермента,которое

служит катализатором для превращения при 25 *С 1 мкмоля вещества в минуту.

Издание официальное

129

1

Страница 4

ГОСТ Р 51240-98

4 Сущность метода и реакции

4.1    Сущность метода

Метод 11, 2] основан на фосфорилировании D-глюкозы и D-фруктозы под действием АТФ в присутствии ГК с образованием Г-6-Ф и Ф-6-Ф, преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в пноконат-6-фосфат и НЛДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НЛДФН. эквивалентной массовой концентрации D-глюкозы; изомеризации Ф-6-Ф в Г-6-Ф в присутствии ФГИ, преобразовании Г-6-Ф под действием НЛДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НЛДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НЛДФН. эквивалентной массовой концентрации D-фруктозы в пробе.

4.2    Реакции, происходящие при определении D-глюкозы:

D-глюкоза + АТФ ГК } Г-6-Ф + АДФ,    (1)

Г-6-Ф + НЛДФ* Г6Ф“ДГ глкжонат-6-фосфат + НЛДФН + Н*.    <2)

4.3    Реакции, происходящие при определении D-фруктозы:

D-фруктоза + ЛТФ ГК , Ф-6-Ф + ЛДФ,    <3)

Ф-6-Ф ФГИ ; Г-6-Ф,    (4)

Г-6-Ф + НЛДФ’ Г6Ф~ДГ) глюконат-6-фосфат + НЛДФН + Н*

(5)

5 Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-глюкозы и D-фруктозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты триэтаноламингидрохлорида, динатрневой соли р-ннкотинамидадениндинуклео-тидфосфата (Р-НАДФ-№2) и динатрневой соли аденозин-5'-трифосфата (АГФ-NajH, ЗН,0) должны содержать не менее 90 % основного вещества.

5.2    Буферный раствор гидрохлорида триэтанолами на активной кислотностью 7,6 pH

14.0 г триэтаноламингидрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,6 pH приблизительно 5 см3 раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации с (NaOH) = 5 моль/дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100.0 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 'С 1 мес.

5.3    Раствор НЛДФ

0,06 г динатрневой соли р-ннкотинамцдадениндинуклеотидфосфата (р-НЛДФ-Naj) растворяют в 6 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 *С 1 мес.

5.4    Раствор ЛТФ

0,3 г динатрневой соли аденозин-5'-трифосфата (ЛТФ-№2Н2 ЗН,0) и 0,3 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 *С 1 мес.

5.5    Суспензия ферментов ГК и Г6Ф-ДГ

Раствор гексокиназы массовой долей 0,002 г/см3 и удельной активностью не менее 280 Е/см3, содержащий глюкозу в качестве субстрата и ЛТФ. и раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы массовой далей 0,001 г/см3 и удельной активностью не менее 140 Е/см3, содержащий глюкозы-6-фосфат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH4),S04) = 3,2 моль/дм3. Суспензия устойчива при температуре 4 “С 12 мес.

2    130

Страница 5

ГОСТ Р 51240-98

5.6 Суспензия фермента ФГИ

Раствор фосфоглюкозаизомеразы массовой концентрацией 0,002 г/см3, удельной активностью не менее 700 Е/см3, содержащий фруктозо-6-фосфат в качестве субстрата, суспендируют в растворе сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH,,)2S04) = 3,2 моль/дм5. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппарату ра, а также указанная в 6.1—6.4.

6.1    Дозаторы пинеточные |3| объемами доз 100, 50 и 25 см3 и относительной погрешностью дозирования т\ % или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1.0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0.02 см3 и допускаемой относительной погрешностью ±1 %.

6.2    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толшиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленые длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1 %.

6.5    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0.0001 г.

7    Проведение испытания

7.1    Подготовка пробы к испытанию

Как правило, пробы не нуждаются в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытаний по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептурам натурального сока, нектара или сокосодержашего напитка. При этом относительную плотность разбаатенной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты испытаний выражают в граммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесыо перед испытанием хорошо перемешивают.

Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значений массовых концентраций /^-глюкозы и D-фруктозы в интервале от 0.1 до 1.0 г/дм3. Допускается использование при проведении испытания окрашенной разбавленной пробы.

7.2    Определение

7.2.1    Общие требования

Определение проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 'С. Допускается проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 *С при условии получения равноценных результатов.

Абсорбционный максимум НЛДФН находится при длине ваты 340 нм. При использовании спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят при максимуме поглощения света НЛДФН. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.

Для дозирования буферных растворов, а также распюров проб, ферментов и коферментов используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.

7.2.2    Контрольный риствор

В фотометрическую кювету вносят 1,00 см3 раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.2, 0.10 см3 раствора НЛДФ по 5.3. 0.10 см3 раствора ЛТФ по 5.4 и 2.00 см3 дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора — (Л,)* относительно оптической плотности воздуха.

3

Страница 6

ГОСТ Р 51240-98

7.2.3    Раствор пробы

В фотометрическую кювету вносят 1,00 см-' буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.2. 0,10 см3 раствора НАДФ по 5.3, 0.10 см- раствора АТФ по 5.4. 0.10 см3 подготовленной пробы по 7.1 и 1.90 см3 дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора — (Л,)пр относительно оптической плотности воздуха.

7.2.4    Ферментативная реакция и количественное определение

В каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0.02 см3 суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой и выдерживают от 10 до 15 мин. Затем измеряют оптические плотности растворов — (Л2)пр и (Л,)к относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через 2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптические плотности растворов увеличиваются с течением времени, то значения (Л2), и (Л,)к определяют методом экстраполяции на момент внесения суспензии ферментов ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5.

Далее в каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0,02 см3 суспензии фермента ФГИ по 5.6, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают от 10 до 15 мин и затем измеряют оптические плотности растворов — (Л3)пр и (А3)к относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через 2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптические плотности растворов увеличиваются с течением времени, то значения (Л3)пр и (Л3)к определяют методом экстраполяции на момент внесения фермента ФГИ по 5.6.

8 Выражение результатов

8.1    В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете НЛДФН приводит к изменению оптических плотностей растворов (Д40. и ДAD ,|,р), а его массовые концентрации пропорциональны массовым концентрациям D-глюкозы и D-фруктозы.

Ч.МеИ2-^|)Яр-И2-^.    (6)

~    “ ^г)цр — Из — Л:)*-    (7)

8.2    Массовую концентрацию D-глюкозы в пробе р(0.гл> и/или D-фруктозы в пробе р0р, г/дм3, вычисляют в соответствии с законом Ламберта-Бера по формуле

-- иУ'Г ЬА.    <*>

к е 8 У2 1000

где М — молярная масса глюкозы или фруктозы. 180.16 г/моль;

К, — общий объем раствора в кювете,см3;

F— фактор разбавления по 7.1;

е — молярный коэффициент поглощения НЛДФН,дм3 ммоль-■ см-‘;

-    при длине волны 340 нм — 6,3.

-    при длине волны 365 нм — 3.4 (ртутная лампа),

-    при длине волны 334 нм — 6.18 (ртутная лампа);

5— толщина поглощающего слоя в кювете.см:

V2 — объем пробы.см3.

Если нет отклонений от объемов, указанных в 7.2.2 и 7.2.3, то

Ро.фр5,837.^.

8.3    При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численные коэффициенты (5,801 и 5.837) в уравнениях (9) и (10) могут быть иными из-за изменения общего объема раствора (К,) в кювете.

8.4    За результат испытаний принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до десятых долей.

4    132

Страница 7

ГОСТ Р 51240-98

9 Точность определения

9.1 Сходимость

Абсолютные расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должны превышать более чем в 5 % случаев значений показателей сходимости г, г/дм5, рассчитываемых по формулам для:

D-глюкозы г = 0,42 + 0.027р,, D-фруктозы г = 0,15 + 0,033р2,

(11)

(12)

где р, — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-глюкозы:

р2 — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-фруктозы.

9.2 Воспроизводимость

Абсолютные расхождения между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях. не должны превышал» более чем в 5 % случаев значений показателей воспроизводимости R. г/дм3, рассчитываемых по формулам для:

D-глюкозы R = 1,00 + 0,042р3; D-фруктозы R = 1,05 + 0.045р.,,

(13)

(14)

где р3 - среднеарифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-глюкозы: р4 — среднеарифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-фруктозы.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вид пробы, ее происхождение, описание);

-    ссылка на настоящий стандарт;

-    дата и способ отбора пробы (если возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытаний и наименования единиц измерений, в которых они приводятся:

-    дата испытаний;

-    информация о выполнении условий воспроизводимости метода;

-    замечания об особенностях проведения испытаний;

-    особые условия проведения испытаний, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испытаний.

133

5

Страница 8

ГОСТ Р 51240-98

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Статистические результаты кругового испытания

Проведенное в соответствии с |4| круговое испытание дало следующие характерист ики точности метода для глюкозы и фруктозы, приведенные в таблицах А-I и А.2.

Испытание проводилось под руководством Отдела пищевой химии Института Макса фон Петтенкофера Федерального министерства здравоохранения, т. Берлин, ФРГ.

Год проведения кругового испытания    —    I9S3.

Число участвовавших лабораторий    —    22.

Количество проб    —    4.

Таблица АЛ — Глюкоза

Наимсиопанис величины, характернейшей кругом* испыта

Значение величины для пробы

ние

А

в

с

D

Число лаборагорий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы

19

17

15

16

Число исключенных лабораторий

3

5

7

6

Чисто принятых результатов

105

94

80

84

Среднеарифметическое (р,), г/дм'

26,2

34.9

53,5

79.9

Срсднеквадратическое отклонение результатов определений {.ч}. г/дм1

0,389

0,562

0,539

0,959

Относительное срсднеквадратическое отклонение результатов определений {RSDj, %

1.48

1.61

1,01

1.20

Показатель сходимости (г), г/дм5

1,1

1.6

1,5

2,7

Срсднеквадратическое отклонение результатов измерений (5Д), г/дм'

0,754

1,003

1,140

1,403

Относительное среднеквадратическос отклонение результатов измерений (RSDs). %

2,88

2,87

2,13

1.75

Показатель воспроизводимости < /?), г/дм*

2,1

2.8

3,2

3,9

Таблица А.2 — Фруктоза

Наименование величины, характер и »>к>шсн к руг опое испыта

Значенис величины для пробы

ние

А

в

С

о

Число лабораторий, оставшихся после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы

15

16

18

17

Число исключенных лабораторий

6

5

3

4

Число принятых результатов

81

85

100

92

Среднеарифметическое (р,), т/дм1

66.5

27.7

55.6

80.6

Срсднеквадратическое отклонение результатов определений (5,). Г/ДМ!

0.887

0.423

1), 548

1,011

Относительное срсднеквадратическое отклонение результатов определений ( RSDj, %

1.33

1,53

0.99

1.25

Показатель сходимости (R), т/дм1

2,5

1,2

1.5

2,8

Срсднеквадратическое отклонение результатов измерений (.*„>. г/дм-

1.553

0.796

1.323

1.630

6    134

Страница 9

ГОСТ Р 51240-98

Окончание таблицы А. 2

Наименование величины, характеризую шей крутым; испытание

Значение величины для пробы

А

в

С

D

Относительное срсднеквадратическое отклонение ре

зультатов измерений (RSDJ, %

2,33

2.87

2.38

2.02

Показатель воспроизводимости (Л), г/дм'

4,3

2,2

3,7

4.6

Примечания

1    Установлена линейная зависимость для глюкозы и фруктозы между r,R и среднеарифметическими.

2    Характер проб:

-    А — яблочный сок,

-    В — абрикосовый нектар,

-    С — нектар черной смородины,

-    D — виногралный сок (красный).

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)

Библиография

11 ] Bcstimmung der Glucose und Fructose; Enzymatisch: Nr. 55, 1985. — In: Analvscn/lSammlung| Internationale Fruchtsaft—Union. — Loseblattausgabe. stand 1989. Zug: Schwcizerischer Ohstverband

|2| Unteisuchung von Lebcnsmitleln: Bcstimmung von Glucose und Fructose in Fruchtsaeftcn: L31.00-I2. 1984—11. — In: Amtliche Sammlung von Untcrsuchungsverfahren nach § 35 LMBG: Verfahren zur Probenahmc und Unteisuchung von Lcbensmittcln, Tabaktr/eugnissen, kosmetischen Mitteln und Bedarfgegenstaenden/Bundcsgcsund-heitsamt. Loseblattausgabe, Stand 31.12.1991. Bd. 1. — Berlin. Kocln: Beulh Verlag GmbH |3| ТУ 64—13329—81 Дозаторы пипеточные

|4| ИСО 5725—86 Точность методов испытания. Опрслсленне повгоряемосги и воспроизводимости для метода стандартного испытания с помощью межлабораторных испытаний

135

7

Страница 10

ГОСТ Р 51240-98

ОКС 67.080    Н59    ОКСТУ 9109

Ключевые слова: фруктовый сок; овощной сок: нектар; сокосодержаший напиток: D-глюкоза, D- фру ктоза; с не ктрофотом етрия

136

8