Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

10 страниц

304.00 ₽

Купить ГОСТ Р 51240-98 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы.

  Скачать PDF

Переиздание

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение, обозначения и сокращения

4 Сущность метода и реакции

5 Реактивы

6 Аппаратура

7 Проведение испытания

8 Выражение результатов

9 Точность определения

10 Отчет об испытании

Приложение А Статистические результаты кругового испытания

Приложение Б Библиография

Показать даты введения Admin

ГОСТ Р 51240-98 (ДИН 1140-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-глюкозы и D-фруктозы

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

I РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. № 463

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН EH 1140—94 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-глюкозы и D-фруктозы. Спектрофотометрнческое определение НАДФН (никотинамндадсннндинуклсотид-фосфата)* с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7, 8 и 9 и пункт 6.1)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания на территории Российской Федерации без разрешения Госстандарта России

128

ГОСТ Р 51240-98 (ДИН 1140-94)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метол определения D-глюкозы и D-фруктозы

Fruit and vegetable juices. Determination of D-glucose and D-fructose content

Дата введения 1999—07—01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ 4523-77 Магний сернокислый 7-водный. Технические условия ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

3    Определение, обозначения и сокращения

3.1    В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующими определениями:

массовые концентрации D-глюкозы и I)-фруктозы во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосолержащих напитках: Массовые концентрации D-глюкозы и D-фруктозы. определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в граммах на кубический дециметр.

3.2    В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения.

АТФ    — аденозин-5'трнфосфат;

АДФ    — аденозин-5'-дифосфат;

НАДФ — Р-никотннамидадениндинуклеотидфосфат;

НАДФН — р-никотинамилалснннлинуклсотидфосфат (восстановленная форма);

Г-6-Ф    — глюкозо-6-фосфат:

Ф-6-Ф    — фруктозо-6-фосфат:

ГК    — гексокиназа;

Г6Ф-ДГ — глюкозо-6-фосфатдсгидрогсназа;

ФГИ — фосфоглюкозоизомераза;

Е    —    международная единица.определяет количество (активность) фермента.которое

служит катализатором для превращения при 25 *С I мкмоля вещества в минуту.

И найме официальное

4 Сущность метола и реакции

4.1    Сущность метода

Метод (1,2) основан на фосфорилировании D-глюкозы и D-фруктозы под действием АТФ в присутствии ГК с образованием Г-6-Ф и Ф-6-Ф. преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глкжонат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой кон-иеитрации образовавшегося НАДФН, эквивалентной массовой концентрации D-глюкозы: изомеризации Ф-6-Ф в Г-6-Ф в присутствии ФГИ. преобразовании Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ в глюконат-6-фосфат и НАДФН, фотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДФН. эквивалентной массовой концентрации D-фруктозы в пробе.

4.2    Реакции, происходящие при определении D-глюкозы:

D-глюкоза + АТФ ^ , Г-6-Ф + АДФ,

Г-6-Ф + НАДФ*- Г6Ф~ДГ ГЛЮКонат-6-фосфат + НАДФН + Н*.    (2)

4.3    Реакции, происходящие при определении D-фруктозы:

D-фруктоза + АТФ ^ t Ф-6-Ф + АДФ.

(4)

(5)

Ф-6-Ф ФГИ , Г-6-Ф,

Г-6-Ф + НАДФ* Г6Ф ДГ, глюконат-6-фосфат + НАДФН + Н+

5 Реактивы

5.1    Общие требования

При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-глюкозы и D-фруктозы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

Препараты триэтаноламин гидрохлорида, ди натриевой соли 3 - и и кот и нам идаде и и иди ну клео-тидфосфата (3-HAJW>-Na2) и динатриевой соли аденозин-5'-трнфосфата (АТФ-№2Н2-ЗН20) должны содержать нс менее 90 % основного вещества.

5.2    Буферный раствор гидрохлорида триэтаноламина активной кислотностью 7,6 pH

14,0 г триэтаноламингндрохлорида и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Активную кислотность раствора устанавливают равной 7,6 pH приблизительно 5 см3 раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации с (NaOH) = 5 моль/дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 ‘С I мсс.

5.3    Раствор НАДФ

0,06 г динатриевой соли 3- и и коти на м идаде н и иди нуклеотндфосфата (3-НАДФ-№2) растворяют в 6 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 *С I мес.

5.4    Раствор АТФ

0.3 г динатриевой соли аденозин-5'-трнфосфата (АТФ-№2Н2-ЗН20) и 0,3 г углекислого кислого натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 6 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Раствор устойчив при температуре 4 'С I мсс.

5.5    Суспензия ферментов ГК и Г6Ф-ДГ

130

Раствор гексокиназы массовой долей 0,002 г/см3 и удельной активностью не менее 280 Е/см3, содержащий глюкозу в качестве субстрата и АТФ. и раствор глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы массовой далей 0,001 г/см3 и удельной активностью не менее 140 Е/см3. содержащий глюкозы-6-фосфат в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 малярной концентрации с ((NH4)2S04) = 3,2 моль/дм3. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.

2

ГОСТ Р 51240-98

5.6 Суспензия фермента ФГИ

Раствор фосфоглюкозанзомеразы массовой концентрацией 0.002 г/см1, удельной активностью не менее 700 Е/см1, содержащий фруктозо-6-фосфат в качестве субстрата, суспендируют в растворе сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации с ((NH4)2S04) = 3.2 моль/дм1. Суспензия устойчива при температуре 4 *С 12 мес.

6    Аппаратура

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.4.

6.1    Дозаторы пипеточныс (3) объемами доз 100. 50 и 25 см1 и относительной погрешностью дозирования ±1 % или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2.0; 1.0; 0.5; 0.2; 0.1 и 0.02 см1 и допускаемой относительной погрешностью ±1 %.

6.2    Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя I см для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм.

6.3    Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавление длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.4    Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334. 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1 %.

6.5    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0,0001 г.

7    Проведение испытания

7.1    Подготовка пробы к испытанию

Как правило, пробы нс нуждаются в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытаний по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.

Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептурам натурального сока, нектара или сокосодержащего налитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.

Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.

При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты испытаний выражают в граммах на килограмм продукта.

Продукты с мутной взвесью перед испытанием хорошо перемешивают.

Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значений массовых концентраций D-глюкозы и D-фруктозы в интервале от 0.1 до 1.0 г/дм1 Допускается использование при проведении испытания окрашенной разбавленной пробы.

7.2    Определение

7.2.1    Общие требования

Определение проводят при постоянной температу ре в интервале от 20 до 25 °С. Допускается проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 ‘С при условии получения равноценных результатов.

Абсорбционный максимум НАДФМ находится при длине волны 340 нм. При использовании спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят при максимуме поглощения света НАДФМ. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.

Для дозирования буферных растворов, а также растворов проб, ферментов и коферментов используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.

7.2.2    Контрольный раствор

В фотометрическую кювету вносят 1,00 см1 раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.2, 0.10 см1 раствора НАДФ по 5.3. 0.10 см1 раствора АТФ по 5.4 и 2.00 см1 дистиллированной волы. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной паючкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствор;» — М|)к относительно оптической плотности воздуха.

7.2.3    Раствор пробы

В фотометрическую кювету вносят 1.00 см3 буферного раствора триэтаноламингидрохлорида по 5.2, 0,10 см' раствора НАДФ по 5.3, 0,10 см' раствора АТФ по 5.4, 0,10 см' подготовленной пробы по 7.1 и 1,90 см' дистиллированной воды. Раствор перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной паючкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора — (At )пр относительно оптической плотности воздуха.

7.2.4    Ферментативная реакция и количественное определение

В каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0,02 см3 суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной наточкой и выдерживают от 10 до 15 мин. Затем измеряют оптические плотности растворов — (/Ь)пр и (^2>к относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через 2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мни и оптические плотности растворов увеличиваются с течением времени, то значения Мт)™ и Мт)к определяют методом экстраполяции на момент внесения суспензии ферментов ГК и Г6Ф-ДГ по 5.5.

Далее в каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0,02 см'суспензии фермента ФГИ по 5.6, перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной наточкой, выдерживают от 10 до 15 мин и затем измеряют оптические плотности растворов — (Н3)пр и (А3)к относительно оптической плотности воздуха.

Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний спектрофотометра через 2 мин. Если ферментативная реакция не завершилась через 15 мин и оптические плотности растворов увеличиваются с течением времени, то значения M3)np и M3)K определяют методом экстраполяции на момент внесения фермента ФГИ по 5.6.

8 Выражение результатов

8.1    В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете НАДФН приводит к изменению оптических плотностей растворов (А40.гл и Д4^р), а его массовые концентрации пропорциональны массовым концентрациям D-глюкозы и D-фруктозы.

Д^О-гя " 1*2 ~ ^|)пр ~ (^2 ^|)к»

Д^о-фр " <^з — ^2)np ~ iAi — Л2)к.    (7)

8.2    Массовую концентрацию D-глюкозы в пробе p(D.,я) и/кли D-фруктозы в пробе pDwj,p. г/дм3, вычисляют в соответствии с законом Ламберта-Вера по формуле

_ М К, F    (8)

Р еб К, 1000 АА

где М— молярная масса глюкозы или фруктозы, 180,16 г/моль;

У\ — общий объем раствора в кювете.см3;

F— фактор разбавления по 7.1;

е — молярный коэффициент поглощения НАДФН.дм3 ммоль”1 см”1;

-    при ян и не волны 340 нм — 6,3,

-    при дтннс волны 365 нм — 3.4 (ртутная лампа),

-    при длине волны 334 нм — 6.18 (ртутная лампа);

8 — толщина поглощающего слоя в кювете.см;

У2 — объем пробы,см'.

Если нет отклонений от объемов, указанных в 7.2.2 и 7.2.3. то

PD-гя = 5.801

(9)

е »

PD-фр " 5.837

е

(Ю)

8.3    При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численные коэффициенты (5,801 и 5,837) в уравнениях (9) и (10) могут быть иными из-за изменения общего объема раствора (У у) в кювете.

4

8.4    За результат испытаний принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до десятых долей.

132

ГОСТ P 51240-98


9 Точность определения

9.1 Сходимость

Абсолютные расхождения между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должны превышать более чем в 5 % случаев значений показателей сходимости г, г/дм3, рассчитываемых по формулам для:


D-глюкозы г = 0,42 + 0.027р,, D-фруктозы г = 0,15+ 0,033р2,


(11)

(12)


где р| — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-глюкозы;

р2 — среднеарифметическое результатов двух параллельных определений массовой концентрации D-фруктозы.

9.2 Воспроизводимость

Абсолютные расхождения между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должны превышать более чем в 5 % случаев значений показателей воспроизводимости R. г/дм3, рассчитываемых по формулам для:


D-глюкозы Rm 1,00 + 0,042р3; D-фруктозы R = 1,05 + 0,045р4>


(13)

(14)


где рз — среднеарифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-глюкозы; р4 — среднеарифметическое результатов двух измерений массовой концентрации D-фруктозы.

10 Отчет об испытании

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    информация, которая необходима для идентификации пробы (вид пробы, ее происхождение, описание);

-    ссылка на настоящий стандарт;

-    дата и способ отбора пробы (если возможно);

-    дата доставки пробы;

-    результаты испытаний и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;

-    лата испытаний;

-    информация о выполнении условий воспроизводимости метода;

-    замечания об особенностях проведения испытаний;

-    особые условия проведения испытаний, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать алияние на результаты испытаний.


133


5


ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное)

Статистические результат кругового испытания

Проведенное в соответствии с |4| круговое испытание дало следующие характеристики точности метода дли глюкозы и фруктозы, приведенные в таблицах A.I и А.2.

Испытание проводилось под руководством Отдела пищевой химии Института Макса фон Петтенкофера Федерального министерства здравоохранении, г. Берлин, ФРГ.

Год проведении кругового испытании    — 1983.

Число участвовавших лабораторий    — 22.

Количество проб    — 4.

Таблица A.I — Глюкоза

Наименование величины, характеризующей круговое испыта-

Значение величины ххя пробы

и не

А

В

С

D

Число лабораторий, оставшнхси после исключении тех, в которых полученные результаты были забракованы

19

17

15

16

Чисто исключенных лабораторий

3

5

7

6

Чисто принитых результатов

105

94

80

84

Среднеарифметическое (р,). г/дм1

26,2

34.9

53,5

79.9

Средне квадратическое отклонение результатов определений (г,), г/дм1

0,389

0.562

0.539

0.959

Относительное срсднсквадратнчсскос отклонение результатов определений {RSDJ. %

1.48

1.61

1.01

1.20

Показатель сходимости (г), г/дм1

1,1

1.6

1.5

2,7

Срсднсквадратнчсскос отклонение результатов измерений (5Л). г/дм1

0.754

1.003

1,140

1.403

Относительное срсднсквадратнчсскос отклонение результатов измерений (RSDK). %

2.88

2.87

2.13

1.75

Показатель воспроизводимости (R>. г/дм1

2.1

2.8

3,2

3.9

Таблица А.2 — Фруктоза

Наименование величины, характеризующей круговое испыта-

Значение величины для пробы

нне

А

В

С

D

Число лабораторий, оставшнхси после исключения тех, в которых полученные результаты были забракованы

15

16

18

17

Число исключенных лабораторий

6

5

3

4

Число принитых результатов

81

85

100

92

Среднеарифметическое (р,). г/дм1

66,5

27.7

55.6

80,6

Срсднсквадратнчсскос отклонение результатов определений (5,3. г/дм1

0.887

0.423

0.548

1.011

Относительное срсднсквадратнчсскос отклонение результатов определений (RSDJ. %

1.33

1.53

0.99

1.25

Показатель сходимости (/?), г/дм1

2.5

1.2

1.5

2.8

Срсднсквадратнчсскос отклонение результатов измерений (5Л). Г/дм1

1.553

0.796

1.323

1.630

6

134

Окончание таблицы Л. 2

Наименование величины, характер!! тошен круговое испытание

Значение величины для пробы

А

В

С

D

Относительное срсднсквадратичсскос отклонение результатов измерений (RSDK). %

2.33

2.87

2.38

2.02

Показатель воспроизводимости (Я). г/дм*

4.3

2.2

3.7

4.6


Примечания

1    Установлена линейная зависимость для глюкозы и фруктозы между r.R и среднеарифметическими.

2    Характер проб:

-    А — яблочный сок.

• В — абрикосовый нектар.

-    С — нектар черной смородины.

-    D — виноградный сок (красный).


ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное)


Киблширафия

11| Bestirunning dcr Glucose und Fructose; Enzymatisch: Nr. 55. 1985. In; Analyscn/|Sammlung| Internationale Fruchtsaft—Union. — Loscblattausgabc. stand 1989. Zug: Schwcizcrischcr Obstverband

12| Untcrsuchung von Lebcasmittcln; Bestimntung von Glucose und Fructose in Fruchtsacftcn: L3I.OO-I2, 1984—11. — In: Amtlichc Sammlung von Unlcrsuchungsvcrfahrcn nach § 35 I.V1BG: Verfahren zur Probenahme und Untcrsuchung von Lcbcnsmittcln. Tabakerzeugnissen. kosmctischcn Vlittcln und Bcdarfgcgcnstacndcn/Bundcsgcsund-hciLsanit. Loscblattausgahc. Stand 31.12.1991. Bd. I. — Berlin. Kocln: Bcuth Verlag GmbH |3| ТУ 64—13329—81 Дозаторы пипсточныс

|4| ИСО 5725—86 Точность методов испытания. Определение повторяемости и воспроизводимости для метода стандартного испытания с помощью межлабораторных испытаний


135


7


ОКС 67.080    Н59    ОКСТУ9Ю9

8

Ключевые слова: фруктовый сок: овощной сок; нектар; сокосодержащий напиток; D-глюкоза, D-фруктоза; спектрофотометрия

136

1