Стр. 1
 

8 страниц

244.00 ₽

Купить официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Распространяется на сухое молоко всех видов и устанавливает метод определения молочной кислоты и ее солей - лактатов

Данные о замене опубликованы в ИУС 9-2011

Действие завершено 01.01.2012

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определение

4 Сущность метода

5 Реактивы

6 Средства контроля и вспомогательные устройства

7 Порядок подготовки к проведению измерений

8 Порядок проведению измерений

9 Правила обработки результатов измерений

10 Оформление результатов измерений

Показать даты введения Admin

Страница 1

ГОСТ Р 51196-98 (ИСО 8069-86)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО СУХОЕ

Метод определения молочной кислоты и лактатов

Издание официальное

Москва Стандартинформ 1    2009

Страница 2

ГОСТ Р 51196-98

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Московской государственной академией пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. № 334

3    Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 8069—86 «Сухое молоко. Определение содержания молочной кислоты и лактатов. Ферментативный метод* с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 3 и 7.1)

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5    ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2009 г.

© ИПК Издательство стандартов, 1998 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2009

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

II

Страница 3

ГОСТ Р 51196-98 (ИСО 8069-86)

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО СУХОЕ Метод определения молочной кислоты и лактатов

Dried milk.

Method for determination of lactic acid and lactates

Дата введения 2000 — 01 — 01

1    Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сухое молоко всех видов и устанавливает метод определения молочной кислоты и ее солей — лактатов.

2    Нормативные ссылки

ГОСТ 26809— 86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу

3    Определение

Массовая доля молочной кислоты и лактатов в сухом молоке, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах молочной кислоты на 100 г сухого обезжиренного вещества.

4    Сущность метода

Восстанавливают пробу сухого молока в теплой воде, осаждают жиры и белки и фильтруют пробу. Полученный фильтрат обрабатывают ферментами и биохимическими реагентами, добавляемыми одновременно, но действующими последовательно:

-    L-лактатдегндрогеназа (L-ЛДГ) и D-лактатдегндрогеназа (0-.1ДГ) в присутствии никотина-мидаденнндинуклеотида (НАД) окисляют лактат до пирувата, восстанавливая НАД до НАДН:

О-ЛДГ

L-ЛДГ

Ь-лактат/П-лактат+НАД-*-------> НАДН+пируват+Н*;

-    глутаматпируваттрансфераза (ГПТ) в присутствии L-глутамата преобразует пируват в L-ала-нин и L-глутамат в альфа-кетоглугарат:

ГПТ

пмруват+ L-глутамат-------> L-a.iaMHH + 2-OKCOMyTapaT.

Измеряют массовую долю образовавшегося НАДН, эквивалентную массовой доле молочной кислоты и лактатов в пробе, на спектрофотометре при длине волны 340 нм.

5    Реактивы

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллнрованиой. Вода для приготовления растворов других реактивов и проб должна быть дистиллированной.

Препарат НАД должен содержать не менее 90 % основного вещества.

И шине официальное

I

Страница 4

ГОСТ Р 51196-98

5.1    Раствор гексаиианоферрата (II) калия

Растворяют 35.9 г гексаиианоферрата (II) калия K4|Fe(CN6)| х ЗН,0 в воде и доводят объем раствора до 1 дм5. Раствор перемешивают.

5.2    Раствор сульфата цинка

Растворяют 71,8 г сульфата цинка гептагидрата (ZnS0s7H,0) в воде и доводят объем раствора до 1 дм3. Раствор перемешивают.

5.3    Раствор гидроксида натрия c(NaOH) = 0.1 моль/дм3

Растворяют 4.00 г гидроксида натрия (NaOH) в воде и доводят объем раствора до 1 дм*. Раствор перемешивают.

5.4    Буферный раствор активной кислотности 10,0 pH

Растворяют 7.92 г глицилглишша (C4HkN,05) и 1.47 г L-глутаминовой кислоты (CJH9N04) в

S0 см3 воды. Устанавливают активную кислотность раствора (10,0i0.1) pH при 20 'С раствором гидроксида натрия с (NaOH) = 10 моль/дм3 и доводят объем раствора водой до 100 см3. Раствор перемешивают.

Раствор устойчив 3 мес при температуре от 0 до 5 *С.

5.5    Раствор НАД

Растворяют 350 мг НАД (C,,H,7N7014P,) в 10 см’ воды.

Раствор устойчив I мес при температуре от 0 до 5 ‘С.

Во время использования сосуд с раствором должен быть погружен в емкость с колотым льдом.

5.6    Раствор L-ЛДГ

Растворяют 10 мг L-ЛДГ из мускульных тканей свиньи в I см3 раствора глицерина массовой доли 50 % (активная кислотность приблизительно 7 pH).

Удельная активность раствора L-ЛДГ должна быть не менее 5500 Е/см3 при 25 ‘С. Раствор устойчив 12 мес при температуре от 0 до 5 “С.

Во время использования сосуд с раствором должен быть погружен в емкость с колотым льдом.

5.7    Суспензия D-ЛДГ

Смешивают 5 мг D-ЛДГ из Lactobacillus leichmannii с I см3 раствора сульфата аммония c((NH4)2S04) = 3,2 моль/дм3 (активная кислотность приблизительно 6 pH).

Удельная активность суспензии D-ЛДГ должна быть не менее 1500 Е/см’ при 25 “С. Суспензия устойчива 12 мес при температуре от 0 до 5 ‘С. Во время использования сосуд с суспензией должен быть погружен в емкость с колотым льдом.

5.8    Суспензия Г П Т

Суспензию ГП Г из сердца свиньи концентрации 20 мг/см3 удельной активности 1600 Е/см3 при 25 *С в растворе сульфата аммония c((NHt)2S04) = 3,2 моль/дм5 готовят центрифугированием 2 см3 суспензии концентрации 10 мг/см3 в течение 10 мин (при факторе разделения центрифуги 4000 £). Отбирают 1 см3 надосадочной жидкости и отбрасывают, а оставшуюся суспензию используют для анализа.

Готовая суспензия устойчива при температуре от 0 до 5 *С 12 мес. На время работы сосуд с суспензией помешают в емкость со льдом.

5.9    Раствор L-л актата лития

Растворяют 50 мг L-лактата лития (CjH,O.Li) в воде и доводят объем раствора до 500 см3. Раствор перемешивают.

5.10    Раствор D-л актата лития

Растворяют 50 мг D-лактата лития (C-H,0-Li) в воде и доводят объем раствора до 500 см3. Раствор перемешивают.

6 Средства контроля и вспомогательные устройства

Обычная лабораторная аппаратура, в том числе указанная в 6.1 —6.11.

6.1    Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ±0,001 г.

6.2    Стаканчик стеклянный для взвешивания или бюкса вместимостью 50 см3.

6.3    Цилиндр градуированный вместимостью 50 см3 и допускаемой относительной погрешностью ±2 %.

6.4    Колбы мерные вместимостью 100 см3 и допускаемой относительной погрешностью i0,2 %.

2

Страница 5

ГОСТ Р 51196-98

6.5    Дозаторы пипеточные объемами доз 0.02: 0.05; 0,2; 1 и 2 см5 и относительной погрешностью дозирования ±1 %.

6.6    Пипетки градуированные вместимостью 2. 5 и 10 см-' и допускаемой относительной погрешностью *1 %.

6.7    Воронка стеклянная для фильтрования диаметром 7 см.

6.8    Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см, свободные от молочной кислоты и лактатов.

6.9    Палочка стеклянная.

6.10    Палочки пластиковые или иные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.11    Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: длина волны 340 нм; спектральный интервал — не более 10 нм; интервал измерений оптической плотности — от 0.000 до 2,000: погрешность установки длины волны — ±3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений — не более 0,15 %.

Кюветы фотометрические толшиной поглошающего слоя I см.

7    Порядок подготовки к проведению измерений

7.1    Отбор проб - по ГОСТ 26X09.

7.2    Пробу хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава.

8    Порядок проведения измерений

При проведении измерений следует избегать загрязнений, в том числе связанных с поглощением влаги или конденсацией ее на стенках сосудов.

8.1    Проверка активности реактивов

При приготовлении новой порции реактивов (5.5—5.8) и хранении готовых реактивов без использования более двух недель или изменении условий хранения проверяют активность реактивов.

8.1.1    Для проверки активности реактивов в две мерные колбы (6.4) вместимостью 100 см3 вносят по 10 см’ L-лактата лития (5.9). в две другие мерные колбы (6.4) вместимостью 100 см3 вносят по К) см3 D-лакгата лития (5.10). Определяют концентрации L-молочной кислоты и ее лактатов, а также концентрацию D-молочной кислоты и ее лактатов (8.5.2—8.6).

8.1.2    Концентрации D-лактата лития, Ха шнч, и L-лактата лития. A", IillwM> мг/дм3, вычисляют по формулам:

Хо-якт = 346 X д Л;

^L-лакгт = 341 х АЛ.

где Д А — разность оптических плотностей, рассчитанная по 8.6.4.

8.1.3    Принимая во внимание чистоту реактивов, определенная концентрация лактата лития при проверке активности реактивов должна состамять (100^5) % концентрации приготовленных растворов.

Если определяемое значение не попадает в этот интервал, проверяют реактивы, технику измерения, точность пипеток и дозаторов, а также исправность спектрофотометра. После этого тестирование повторяют до получения удовлетворительных результатов.

8.2    Подготовка пробы

Пробу продукта помешают в контейнер вместимостью, в два раза превышающей объем пробы, с герметично закрывающейся крышкой, тщательно перемешивают, энергично встряхивая и переворачивая контейнер.

В процессе подготовки пробы необходимо исключить ее контакт с атмосферой, чтобы уменьшить абсорбцию влаги.

8.3    Масса навески

В стеклянном стаканчике (6.2) взвешивают 1,000 г пробы.

8.4    Подготовка контрольной пробы

Контрольное испытание проводят, как описано в 8.5—8.6. используя те же реактивы, но без пробы продукта. Для испытания пробы продукта (8.6) берут 1,0 см3 фильтрата (8.5.3).

I

Страница 6

ГОСТ Р 51196-98

8.5    Приготовление раствора пробы и удаление белка

8.5.1    Навеску сухого молока (8.3) растворяют при помешивании стеклянной палочкой (6.9) в 20 см3 воды температурой от 40 до 50 ’С. количественно переносят в мерную колбу (6.4) вместимостью 100 см3 и охлаждают до комнатной температуры (20 *С).

8.5.2    К раствору в колбе (8.5.1) последовательно добавляют 5,0 см3 раствора гексацианофер-рата (II) калия (5.1), 5.0 см' раствора сульфата цинка (5.2), 10 см3 раствора гидроксида натрия (5.3), тщательно перемешивая содержимое колбы после добавления каждого компонента и доводят объем раствора водой до 100 см3. Снова тщательно перемешивают раствор и выдерживают 30 мин при комнатной температуре.

8.5.3    Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр (6.8), отбрасывая первую порцию фильтрата.

8.6    О п р е д е л е н и е

8.6.1    В спектрофотометрическую кювету (6.11) пипеточным дозатором (6.5) вносят:

-    1,0 см3 фильтрата (8.5.3);

-    1.0 см5 буферного раствора (5.4);

-    0.20 см3 раствора НАД (5.5);

-    0.02 см5 суспензии ГГ1Т (5.8).

Содержимое кюветы перемешивают палочкой (6.10).

8.6.2    Кювету выдерживают 5 мин, затем измеряют оптическую плотность раствора относительно воды при длине волны 340 нм.

В кювету добавляют 0.02 см3 раствора L-ЛДГ (5.6) и 0,05 см3 раствора D-ЛДГ (5.7). Раствор перемешивают палочкой (6.10).

Примечание — Раздельное определение L- и П-молочных кислот и их лактатов в пробе можно осуществить добавлением или L-ЛДГ или D-ЛДГ.

8.6.3    Раствор (8.6.2) выдерживают при комнатной температуре 45 мин и измеряют оптическую плотность. Раствор выдерживают еше 15 мин и снова измеряют оптическую плотность (измерения после 60 мин реакции).

Примечание— Если требуется определить содержание только L-молочной кислоты и ее лактатов. измерения производят соответственно через 30 и 45 мин.

8.6.4    Рассчитывают разность измеренных значений оптических плотностей по формуле

\А = | (А „60—Л „о)—4(/1 пбо~~Л „45)1--1(Л кбо—Л *о) 4(А Кьа—А k4s)|.

где А а60 — оптическая плотность пробы через 60 мин (8.6.3);

А 1|в — оптическая плотность пробы через 5 мин (8.6.2);

Л ll4J — оптическая плотность пробы через 45 мин (8.6.3);

Ак60 — оптическая плотность контрольной пробы через 60 мин (8.6.3);

— оптическая плотность контрольной пробы через 5 мни (8.6.2);

A k4J — оптическая плотность контрольной пробы через 45 мин (8.6.3).

Примечания

1    В некоторых случаях может иметь место медленно текущая побочная реакция. Изменение оптической плотности, вызванное этой реакцией, исключают экстраполяцией оптической плотности на нулевой момент времени.

2    Если оптическую плотность измеряют через 30 и 45 мин. формула имеет вид

Д А = !(/! „4J—^по)—-ЗМ п45 А п30>| — |М ха—A KU)—3(А Л KjU)|.

где А „зн — оптическая плотность пробы через 30 мин (8.6.3);

A — оптическая плотность контрольной пробы через 30 мин (8.6.3).

8.6.5    Если разность оптических плотностей, рассчитанная в соответствии с 8.6.4, превышает 0,500. определение повторяют (8.6.1—8.6.4), разводя дистиллированной полой растворы пробы продукта (8.5.3) и контрольной пробы (8.4).

4

Страница 7

ГОСТ Р 51196-98

9    Правила обработки результатов измерений

9.1    Метод расчета

Массовую долю молочной кислоты и лактатов X в сухом молоке, выраженную в г молочной кислоты на 100 г сухого обезжиренного вещества, вычисляют по формуле

X = AUliU    я    J£L„    М>1;

е х 1 х т    У2 х V3    И'.хв

где Л — разность оптических плотностей (8.6.4);

А/ — молярная масса молочной кислоты. А/ = 90.1 г/моль;

К, — объем раствора в кювете (8.6.2). см’

(для определения D- и L-молочных кислот I'', — 2.29 см3, для определения L-молочной кислоты    V,    =    2.24    см3,

для определения D-молочной кислоты    К,    =    2,27    см3);

Н4 — объем подготовленного к анализу раствора (8.5.2), см3 (Vx = 100 см3);

V3 — объем разведенного фильтрата (8.6.5), см3 (если испытание проводилось без разведения фильтрата, то V} = 1,0 см3); г. — коэффициент оптической плотности НАДН. дм3-ммоль~|см~|, равный: при длине волны 340 нм — 6,3, при длине волны 365 нм — 3,5, при длине волны 334 им — 6,18;

I — толщина поглощающего слоя в кювете, см; т — масса навески сухого молока, г (8.3);

V2 — объем фильтрата (8.5.3) в спектрофотометрической кювете (8.6.4), см3;

Vb — объем фильтрата (8.5.3), взятый для разведения (8.6.5), см3 (если испытание проводилось без разведения фильтрата, то У} = 1 см3);

WM — массовая доля сухого обезжиренного вещества в пробе продукта, %.

Результат определяют с точностью 0.001 % (г/100 г).

9.2    Точность

Примечание — Сходнхнкть и воспроизнолимосгь были рассчитаны по результатам межлабора-торных испытаний.

9.2.1    Сходимость

Абсолютное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать г = 0,010 г/100 г. если среднее арифметическое результатов не превышает 0.060 г/100 г включительно.

Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать 15 % среднего арифметического значения, если оно превышает 0.060 г/100 г.

9.2.2    Воспроизводимость

Абсолютное расхождение результатов двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать R = 0.015 г/100 г, если среднее арифметическое результатов не превышает 0,100 г/100 г включительно.

Относительное расхождение результатов двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать 20 % среднего арифметического значения, если оно превышает 0.100 г/100 г.

10    Оформление результатов измерений

В отчете об испытании должны быть указаны:

-    используемый метод;

-    полученные результаты:

-    любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.

5

Страница 8

ГОСТ Р 51196-98

УДК 637.143.001.4:006.354    ОКС 67.100.10    Н19    ОКСТУ    9209

Ключевые слова: сельскохозяйственные продукты, молочные продукты, молоко, сухое молоко, химический анализ, определение массовой доли, молочная кислота, лактаты

6