Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

38 страниц

487.00 ₽

Купить ГОСТ Р ИСО 10993.10-99 — официальный бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее

Официально распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль".

Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.

Способы доставки

  • Срочная курьерская доставка (1-3 дня)
  • Курьерская доставка (7 дней)
  • Самовывоз из московского офиса
  • Почта РФ

Устанавливает методы оценки возможного раздражающего и сенсибилизирующего действия медицинских изделий и материалов. Настоящий стандарт распространяется на категории изделий в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993.1.

  Скачать PDF

Действие завершено 01.09.2010

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Определения

4 Общие положения

5 Методы исследования раздражающего действия

5.1 Факторы, влияющие на проведение исследований и выбор методов

5.2 Раздражающее действие на кожу

5.3 Раздражающее действие на глаза

5.4 Раздражающее действие при внутрикожном введении

6 Исследование сенсибилизирующего действия

6.1 Факторы, которые следует учитывать при выборе метода

6.2 Метод максимального сенсибилизирующего воздействия

6.3 Метод закрытых накожных аппликаций

Приложение А Подготовка образцов

Приложение Б Методы получения вытяжек из образцов

Приложение В Выбор и содержание экспериментальных животных

Приложение Г Дополнительные методы исследования раздражающего действия

Приложение Д Дополнительная информация

Приложение Е Изучение сенсибилизирующего действия на белых крысах

Приложение Ж библиография

Показать даты введения Admin

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Изделия медицинские

ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ

Часть 10

Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия

БЗ 12-99/690


Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Предисловие

1    РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским и испытательным институтом медицинской техники (ВНИИИМТ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 422 «Оценка биологического действия медицинских изделий»

2    ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 29 декабря 1999 г. № 862-ст

3    Настоящий стандарт, за исключением раздела 3 и приложения Е, представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 10993.10—95 «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия»

4    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов, 2000

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

Таблица 3 — Система классификации повреждения глаза

Реакция

Оценка в баллах

1 Роговица

Степень помутнения (площадь поражения) Отсутствие

0

Генерализованное или диффузное помутнение, детали радужной оболочки хорошо различимы

1*

Легко различимое полупрозрачное помутнение, детали радужной оболочки замутнены

2*

Опалесцирующее помутнение, детали радужной оболочки не различимы, размер зрачка опре-

3*

делить невозможно

Помутнение светонепроницаемо, радужная оболочка не видна

4*

Площадь пораженной роговицы

Одна четверть (или менее)

0

Более одной четверти, но меньше половины

1

Более половины, но меньше трех четвертей

2

Более трех четвертей и площадь всего глаза

3

2 Радужная оболочка

Нормальная

0

Складчатость выше нормы, заметное набухание, сосуды инъецированы (один или все указан-

1*

ные симптомы), радужная оболочка реагирует на свет (реакция положительная) Реакция на свет отсутствует, увеличение кровоизлияний (один или все симптомы)

2*

3 Конъюнктива

Краснота (относится к конъюнктиве век и глазного яблока, исключая роговицу и радужную оболочку)

Нормальные сосуды

0

Сосуды заметно инъецированы (выше нормы)

1

Более выраженная диффузная краснота, отдельные сосуды плохо различимы

2*

Диффузная резко выраженная краснота

3*

4 Хемоз (отек конъюнктивы)

Отсутствие отека

0

Слегка заметный отек (включая мигательную перепонку)

1

Выраженный отек с частичным выворотом век

2*

Отек с половинным закрытием века

3*

Отек с закрытием века от половинного до полного

4*

5 Выделения

Отсутствие выделений

0

Незначительные выделения, отличающиеся от нормальных (не учитывать наличие выделений

1

во внутреннем углу глаза, наблюдаемое и у контрольных животных) Выделения на веках и шерсти вокруг глаз

2

Выделения на веках, шерсти вокруг глаз и значительной площади мордочки

3

* Положительный результат.

Животным, которым проводят многократные инстилляции материала, глаза осматривают до, непосредственно после и через 1 ч после каждой процедуры.

Если наблюдается выраженное раздражение после последней процедуры, наблюдение продолжают. Наблюдение продолжают в случае изменений роговицы или других признаков раздражения глаза для оценки прогрессирования и обратимости возникших патологических процессов.

Оценивают и регистрируют любые наблюдаемые реакции в соответствии с классификацией, представленной в таблице 3.

Немедленный вывод животных из эксперимента проводят с использованием гуманных методов умерщвления в следующих случаях:

-    тяжелые поражения глаз (такие, как изъявление или образование струпа на конъюнктиве, перфорация на роговице, скопление крови и гноя в передней камере глаза);

-    выраженная эритема или нагноение;

-    серьезные изъязвления роговицы.

7

Животное выводят из эксперимента при обнаружении максимального в соответствии с системой классификации таблицы 3 действия — отсутствия светового рефлекса (степень поражения радужной

з*

оболочки 2) или помутнения роговицы (степень 4) без видимого улучшения в течение 24 ч, или воспаления конъюнктивы (хемоз степени 4 совместно с гиперемией степени 3) — без видимого улучшения через 48 ч с умерщвлением их гуманным методом.

5.3.7    Оценка результатов

Выявленные различия в состоянии исследуемого и контрольного глаза описывают и объясняют, используя классификацию таблицы 3.

5.3.7.1    Острое воздействие

Если при воздействии исследуемого материала в подопытном глазу более чем у одного животного обнаружены патологические изменения (отмеченные в таблице 3 знаком «*»), считают, что материал обладает раздражающим действием и дальнейшие исследования не проводят.

Если патологические изменения выявлены в подопытном глазу только одного из трех кроликов или при сомнительных результатах, исследования повторяют на большем количестве животных.

Если при исследовании на большем количестве животных патологические изменения в подопытном глазу (отмеченные в таблице 3 знаком «*») обнаруживаются более чем у половины кроликов исследуемой группы на любой стадии обследования, считают, что материал обладает раздражающим действием.

При тяжелом поражении глаза даже у одного животного материал считают сильным раздражителем.

5.3.7.2    Многократное или длительное воздействие

Если при многократном воздействии на глаз более чем у половины животных исследуемой группы возникают патологические изменения (отмеченные в таблице 3 знаком «*») на любой стадии обследования, считают, что исследуемый материал обладает раздражающим действием.

5.3.8    Представление результатов

В отчет об исследовании включают:

-    описание исследуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

5.4 Раздражающее действие при внутрикожном введении

5.4.1    Цель исследований

Оценка способности материала оказывать раздражающее действие при внутрикожном введении.

5.4.2    Исключение из исследования

Материалы, обладающие раздражающим действием на кожу, слизистую глаза или ткани мышц, или pH которых меньше или равно 2 или больше или равно 11,5, исследованиям не подвергают.

5.4.3    Исследуемый материал

Исследованиям подвергают вытяжку из образца, которую готовят в соответствии с приложением Б.

5.4.4    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых кроликов-альбиносов одной линии обоего пола массой не менее 2 кг.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с приложением В.

Для первичной оценки исследуемого материала используют не менее трех кроликов.

При неудовлетворительных или сомнительных результатах, полученных при первичной оценке, проводят дополнительные исследования.

5.4.5    Методика проведения исследований

За сутки до проведения исследования тщательно выстригают шерстный покров на спине животных, оставляя достаточные промежутки между участками кожи, где предполагают произвести инъекции вытяжек.

Внутрикожное введение 0,2 мл вытяжки, приготовленной с использованием полярной модельной среды, производят в пяти участках кожи на одной стороне спины каждого кролика в соответствии с рисунком 2. Для инъекций используют иглы самых маленьких размеров с учетом вязкости вводимых вытяжек.

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

Одновременно вводят 0,2 мл полярной контрольной модельной среды в пяти участках кожи с той же стороны спины каждого кролика (рисунок 2).

Описанную выше процедуру повторяют с вытяжкой, приготовленной с использованием неполярной модельной среды, и с неполярной контрольной модельной средой с другой стороны спины каждого кролика (рисунок 2).

Голова

1

®

0

1

2

0

0

2

3

0

0

3

4

0

0

4

5

0

0

5

6

0

0

6

7

0

0

7

8

0

0

8

9

0

0

9

10

0

0

10

Рисунок 2 — Расположение точек внутрикожных инъекций

Введение 0,2 мл вытяжки с неполярной модельной средой


Введение 0,2 мл вытяжки с

полярной модельной средой


Введение 0,2 мл - неполярной контрольной модельной среды


Введение 0,2 мл полярной контрольной« модельной среды


Если применяют другие растворители, описанные процедуры повторяют как для вытяжек, приготовленных с их использованием, так и для самих растворителей.

5.4.6 Обследование животных

Отмечают состояние мест инъекции непосредственно сразу, через 24, 48 и 72 ч после введения.

9

Оценивают степень тканевой реакции, включая эритему и отек, в соответствии с классификацией, представленной в таблице 4, для каждого места инъекции и каждого интервала времени наблюдения и регистрируют результаты.

Таблица 4 — Система классификации местной реакции при внутрикожном введении

Реакция

Оценка в баллах

Эритема и образование струпа

Отсутствие эритемы

0

Очень слабая эритема (слегка заметная)

1

Заметная эритема

2

Умеренная эритема

3

Выраженная эритема (ярко-красная) с образованием струпа

4

Образование отека

Отсутствие отека

0

Очень слабый отек (слегка заметный)

1

Заметный отек

2

Умеренный отек (выступающий над поверхностью кожи около 1 мм)

3

Выраженный отек (распространенный, выступающий над поверхностью кожи бо-

4

лее чем на 1 мм)

Максимально возможное количество баллов

8

Примечание — Другие возникшие в месте инъекции реакции должны быть отмечены в отчете об

исследовании

Примечание — Внутрикожное введение масляных растворов заведомо вызывает раздражение.

4—2689

Внутривенное введение соответствующих прижизненных красителей, таких как трипановый синий или Evans blue, сделанное перед последним (72 ч после введения вытяжки) обследованием животных, позволяет лучше оценить реакцию на внутрикожное введение вещества, окрашивая места возникшего раздражения.

Для оценки по возможности применяют методы, наименее травмирующие животных.

5.4.7 Оценка результатов

Определяют индекс первичного раздражения, при этом для каждого животного складывают баллы первичного раздражения, включая эритему и отек, отдельно для каждой исследуемой вытяжки, учитывая каждый интервал времени наблюдения, и делят на общее количество наблюдений. Такие же расчеты производят для участков, на которые воздействуют контрольным раствором. Разность баллов, полученных для исследуемого материала и контрольного раствора, дает балл первичного раздражения, который используют для вычисления индекса первичного раздражения.

Используют наблюдения, полученные только через 24, 48 и 72 ч после введения.

Для получения индекса первичного раздражения (ИПР) складывают баллы первичного раздражения каждого животного и делят на общее число животных.

Таблица 5 — Степени ответной реакции на раздражение у кроликов

Ответная реакция

Количество баллов

Отсутствие

ОтО до 0,4

Слабая

» 0,5 » 1,9

Умеренная

» 2,0 » 4,9

Выраженная

» 5,0 »8,0

Оценка в баллах и описания, представленные в таблице 5, характеризуют индексы первичного и суммарного раздражения.

5.4.8 Представление результатов

В отчет об исследовании включают:

-    описание исследуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

6 Исследование сенсибилизирующего действия

Существует несколько методов изучения сенсибилизирующего действия на коже морских свинок. Обычно применяют два метода: метод максимального сенсибилизирующего воздействия (Magnusson & Kigman) и метод закрытых накожных аппликаций (Buehler). Исследования проводят, используя один из этих методов. Метод максимального сенсибилизирующего воздействия в соответствии с 6.2 более чувствителен и является предпочтительным, особенно при оценке вытяжек из материалов и изделий. Перечень альтернативных методов приведен в приложении Д.

6.1 Факторы, которые следует учитывать при выборе метода

При выборе метода учитывают биохимические и физические характеристики исследуемого материала. Метод максимального воздействия требует внутрикожного введения, следовательно, если исследуемый материал нельзя ввести внутрикожно, в качестве альтернативного используют метод накожных аппликаций.

Выбранный растворитель должен повышать чувствительность метода благодаря частичному растворению материала и проникновению в более глубоко лежащие слои. Концентрация исследуемого материала должна быть максимально возможной, но не оказывать влияния на интерпретацию результатов. Важным фактором при местном воздействии является концентрация материала на поверхности кожи, а не его объем. Возможности метода накожных аппликаций будут рассмотрены ниже.

Невозможно избежать повреждения кожи, если внутрикожно вводят адьювант Фрейнда.

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

Время экспозиции вещества на каждой стадии эксперимента должно способствовать успеху эксперимента. Оно может варьировать для достижения этой цели. Все стадии (предварительная внутрикож-ная сенсибилизация, фаза местного воздействия, провокационная проба) имеют важное значение, но основной целью является выявление возможной гиперчувствительности замедленного типа. Подсчет баллов на контактирующих с материалом участках кожи не может использоваться для интерпретации результатов.

Расположение подопытных участков кожи на теле морской свинки не является обязательным, важно, чтобы провокационная проба была сделана на совершенно новом (не испытывавшем воздействия) месте.

Сравнение подопытных животных после провокации с животными контрольной группы дает возможность выявить положительную реакцию, при этом тяжесть возникших патологических изменений также имеет значение для интерпретации результатов.

Граница ответной реакции на провокационную пробу становится более заметной при ее затухании. Гистологические исследования необязательны.

Положительные результаты не всегда позволяют запретить применение исследуемого материала или изделия, так как доза вещества во время исследований может быть искусственно завышена по сравнению с количеством, применяемым в медицинской практике. Положительные результаты исследования сенсибилизацирующего действия, использующего одну из рекомендуемых методик, дают основание для проведения дополнительных исследований как на морских свинках, так и на человеческом организме, что представляет определенную опасность. Сенсибилизирующая способность вещества или материала может определяться его минимальной концентрацией, которая способна вызвать сенсибилизирующий эффект. Это, как минимум, вызывает, необходимость проверки соответствующих концентраций и носителей.

Повторение исследований с использованием других методик и оценка результатов провокационной пробы позволяет избежать неспецифического действия, что является актуальной научной и практической задачей. Методы с использованием провокационной пробы, которую проводят после аппликаций, позволяют обеспечить безопасность применения изделия или материала.

Практическое применение изделий или материалов, контактирующих с раневой поверхностью или поврежденной кожей и при этом обладающих сенсибилизирующим действием, недопустимо. Однако многие ингредиенты, являющиеся по своей природе потенциальными аллергенами, могут быть использованы в приемлемой концентрации в готовом материале или изделии благодаря своим ценным качествам.

6.2 Метод максимального сенсибилизирующего воздействия

6.2.1    Цель исследования

Оценка возможного сенсибилизирующего действия материала на кожу морских свинок.

6.2.2    Исследуемый материал

Твердые вещества (включая порошки) или жидкость готовят к исследованиям в соответствии с приложением А.

Если исследованиям подвергают вытяжку из образца, ее готовят в соответствии с приложением Б.

6.2.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых морских свинок-альбиносов одной линии обоего пола с исходной массой 300—500 г. В эксперименте не используют беременных самок или животных после спаривания.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с приложением В.

Для исследования порошкообразных или жидких материалов используют не менее 10 животных на каждый исследуемый образец и не менее 5 животных составляют контрольную группу. Дополнительное количество животных используют для проведения предварительных исследований.

При исследовании вытяжек также используют не менее 10 животных для каждой вытяжки и не менее 5 морских свинок составляют контрольную группу для каждого раствора. Дополнительное количество животных используют для предварительных исследований.

Примечание — Для выявления слабо выраженного сенсибилизирующего эффекта допускается удвоение количества экспериментальных животных.

11

6.2.4 Проведение исследования

6.2.4.1    Подготовка

Шерсть на подопытных участках кожи тщательно выстригают за день до начала исследования.

Доза, вводимая внутрикожно в каждый подопытный участок, равна 0,1 мл.

Для всех аппликаций используют кусочки фильтровальной бумаги, пропитанные исследуемым материалом или вытяжкой из него, которые прикладывают на выстриженные участки кожи и фиксируют бинтом вокруг тела животного.

6.2.4.2    Предварительные исследования

Примечание — Предварительные исследования проводят для того, чтобы определить концентрацию исследуемого материала, которая будет использована в основном эксперименте.

Предварительно всем животным вводят адьювант Фрейнда.

Затем двум животным внутрикожно вводят исследуемый материал или вытяжку из него (в выбранном растворителе) определенной концентрации.

Для внутрикожного введения в основном эксперименте берут самую большую концентрацию исследуемого материала, которая не вызывает выраженных изменений кожи и не оказывает общего отрицательного воздействия на животных.

Выборочно проводят аппликации разных концентраций исследуемого материала или вытяжек из него на кожу бока дополнительно еще трем животным. Через 24 ч снимают повязку и образцы и оценивают состояние аппликационных участков на наличие эритемы и отека в соответствии с таблицей 6.

Таблица 6 — Система классификации реакции кожи

Реакция

Оценка в баллах

Эритема или образование струпа

Отсутствие эритемы

0

Очень слабая эритема (слегка заметная)

1

Заметная эритема

2

Умеренная эритема

3

Выраженная эритема (ярко-красная) с образованием струпа

4

Образование отека

Отсутствие отека

0

Очень слабый отек (слегка заметный)

1

Заметный отек

2

Умеренный отек

3

Выраженный отек

4

Примечания

1 Другие возникшие кожные реакции должны быть отмечены в отчете об исследовании.

2 Система оценки степени реакции модифицирована и стандартизована.

Определяют:

а)    если возможно, для фазы местного воздействия в основном эксперименте — наивысшую концентрацию исследуемого материала, которая вызывает легкую эритему, но не оказывает общего отрицательного влияния на организм животных;

б)    для фазы провокационной пробы в основном эксперименте — наивысшую концентрацию, которая не вызывает эритемы.

6.2.4.3 Основной эксперимент

6.2.4.3.1 Внутрикожная предварительная сенсибилизация

Каждому животному в выстриженные участки кожи (1, 2 и 3) в соответствии со схемой рисунка 3 проводят парные внутрикожные инъекции по 0,1 мл нижеперечисленных растворов:

-    смесь адьюванта Фрейнда с выбранным растворителем в соотношении V/ V— 50/50. Растворителем может быть вода или физиологический раствор (в соответствии с Государственной Фармакопеей СССР, Британской Фармакопеей, Фармакопеей США) для водорастворимых материалов. Для нерастворимых в воде материалов примерный список растворителей приведен в приложении Б (Б.2.10);

-    исследуемый материал или вытяжку из него в концентрации, которая определена в предварительном эксперименте; контрольным животным вводят только растворитель;

12

Голова



Внутрикожное введение по 0,1 мл


1 0 2 0


3 0


0 1 0 2


0 3



Межлопаточная

область


Хвост

Рисунок 3 — Расположение точек внутрикожных инъекций


- исследуемый материал или вытяжку из него в концентрации, которая определена в предварительном эксперименте, смешивают с полным адьювантом Фрейнда и растворителем, взятыми в соотношении V / V = 50/50; контрольным животным вводят только растворитель, смешанный с адьювантом.

6.2.4.3.2    Фаза местного воздействия

Через семь дней после внутрикожного введения начинают накожные аппликации исследуемого материала или вытяжки из него на спину в области лопаток каждого животного, используя для этого пропитанные материалом или вытяжкой кусочки фильтровальной бумаги размером 20 х 40 мм. При этом используют концентрацию согласно 6.2.4.2а и соответствующую фиксирующую повязку. Повязку и кусочки фильтров удаляют через (48 ± 2) ч.

Процедуру с контрольными животными повторяют в том же режиме, используя только растворитель.

Если максимальная концентрация, которая получена в соответствии с 6.2.4.2а, не вызывает раздражения, проводят обработку участка 10 %-ным раствором лаурилсульфата натрия в вазелине за (24 ± 2) ч до начала местных аппликаций. С контрольными животными поступают подобным образом.

6.2.4.3.3    Провокационная проба

Через 14 дней после фазы местного воздействия проводят провокационную пробу исследуемого материала или вытяжки с подопытными и контрольными животными. Для этого делают аппликации исследуемого материала или вытяжки на кожу бока каждого животного, используя соответствующие кусочки фильтров, пропитанные исследуемым материалом или вытяжкой из него в концентрации согласно 6.2.4.26, и фиксирующие повязки. Повязку и кусочки фильтров снимают через (24 + 2) ч.

Примечание — Допускается проводить аппликации раствора с уменьшенной концентрацией на другие участки кожи по той же методике.

6.2.5    Обследование животных

Осматривают поверхность участков, где проводили провокационную пробу подопытных и контрольных животных, через 24, 48, 72 ч после снятия повязки.

Описывают и оценивают степень кожной реакции, включая эритему и отек, в соответствии с таблицей 6 для каждого участка и в каждый интервал времени наблюдения.

6.2.6    Оценка результатов

Если оценка в баллах, полученная в подопытной группе, равна 1 или выше, о наличии сенсибилизации говорят в том случае, если у контрольных животных этот показатель менее 1. Если оценка в баллах у контрольных животных равна 1 или выше, то реакция кожи подопытных животных, которая превышает самую сильную реакцию, наблюдаемую в контроле, является результатом сенсибилизации.

Иногда в подопытной группе у большего, чем в контроле, числа животных выявлен сенсибилизирующий эффект, однако интенсивность реакции не выше, чем у контрольных животных. В этом случае проводят дополнительную провокационную пробу с целью получить более четкий ответ организма. При необходимости дополнительную провокационную пробу проводят приблизительно через 7 дней после первой провокации. При этом применяют описанный выше метод, используя другой бок животного.


5-2689


13


6.2.7 Представление результатов

В отчет об исследовании включают:

-    описание исследуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

6.3 Метод закрытых накожных аппликаций

6.3.1    Цель исследования

Оценка возможного сенсибилизирующего действия материала на кожу морских свинок.

6.3.2    Исследуемый материал

Если исследуемый образец представляет собой раствор или жидкость, его готовят в соответствии с приложением А.

Если исследованиям подвергают вытяжку из образца, то ее готовят в соответствии с приложением Б.

6.3.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых морских свинок-альбиносов одной линии обоего пола с исходной массой 300—500 г. В эксперименте не используют беременных самок или животных после спаривания.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с приложением В.

Для исследования твердых, порошкообразных или жидких материалов используют не менее 10 животных на каждый исследуемый материал и не менее 5 животных составляют контрольную группу. Дополнительное количество животных используют для проведения предварительных исследований.

При исследовании вытяжек также используют не менее 10 животных для каждой вытяжки и не менее 5 животных составляют контрольную группу для каждого раствора. Дополнительное количество животных используют для предварительных исследований.

Примечание — Для выявления слабо выраженного сенсибилизирующего эффекта допускается удвоенное количество экспериментальных животных.

6.3.4    Проведение исследования

6.3.4.1    Подготовка

Шерсть на подопытных участках кожи тщательно выстригают за день до начала эксперимента. Для местных аппликаций пропитывают исследуемым материалом или экстрактом кусочки ткани или перевязочного материала соответствующих размеров, прикладывают эти кусочки к выстриженному участку и фиксируют повязкой на 6 ч.

Чтобы обеспечить плотное прилегание исследуемого образца к коже, его прикрепляют с помощью бинта либо фиксируют животное.

Следует учесть, что перевязка является дополнительным стрессовым фактором, влияющим на результаты эксперимента.

6.3.4.2    Предварительные исследования

Примечание — Предварительные исследования проводят для того, чтобы определить концентрацию исследуемого материала или вытяжки из него, которая будет использована в основном эксперименте в соответствии с 6.3.4.3.

Проводят местную аппликацию четырех концентраций исследуемого материала или вытяжки из него на бок каждого из трех животных, используя соответствующие кусочки ткани. Кусочки ткани и фиксирующую повязку снимают через 6 ч. Подопытные участки кожи оценивают на наличие эритемы и отека в соответствии с таблицей 6 через 24 и 48 ч после снятия образцов.

Выбирают:

-    для фазы воздействия в основном эксперименте — наивысшую концентрацию, которая вызывает легкую эритему, но не оказывает общего отрицательного влияния на организм животного;

-    для фазы провокационной пробы в основном эксперименте — наивысшую концентрацию, которая не вызывает эритемы.

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

6.3.4.3 Основной эксперимент

6.3.4.3.1    Основные положения

Используют не менее 10 животных в подопытной и не менее 5 животных в контрольной группе. Если реакция организма на используемый растворитель неизвестна, добавляют соответствующую контрольную группу для растворителя.

6.3.4.3.2    Фаза воздействия

Проводят местную аппликацию исследуемого материала или вытяжки из него на выстриженные участки кожи левой верхней части спины каждого животного, используя пропитанные исследуемым материалом или вытяжкой из него в концентрации, определенной по 6.3.4.2а, кусочки ткани. Фиксирующую повязку и пропитанные кусочки ткани снимают через 6 ч.

Указанную процедуру повторяют в течение трех недель с интервалами в одну неделю. Может быть проведена дополнительная аппликация.

Контрольным животным проводят подобные аппликации в том же режиме, используя при этом только растворитель.

6.3.4.3.3    Провокационная проба

Через 14 дней после последней аппликации у подопытных и контрольных животных проводят провокационную пробу с исследуемым материалом или вытяжкой из него. Провокационную пробу проводят способом однократной местной аппликации на выстриженный, не испытывавший ранее воздействия участок кожи каждого животного, используя соответствующие пропитанные исследуемым материалом или вытяжкой из него в концентрации согласно 6.3.4.26 кусочки ткани. Фиксирующую повязку и кусочки ткани снимают через 6 ч.

6.3.5 Обследование животных

Через (24 ± 2) ч после первой или второй провокационной пробы производят:

-    удаление шерсти у всех животных на подопытных участках и окружающей их коже с помощью депилятора, имеющегося в продаже, в соответствии с прилагаемой к нему инструкцией или

-    выбривание шерсти у всех животных на подопытных участках и окружающей их коже.

Тщательно смывают депилятор теплой водой и сушат кожу полотенцем перед возвращением

животных в клетки. Не менее чем через 2 ч после описанной выше процедуры удаления шерсти оценивают состояние исследуемых участков в соответствии с таблицей 7. Осмотр повторяют через (48 ± 2) ч после провокационного воздействия.

Таблица 7 — Система классификации реакций кожи

Реакция

Оценка в баллах

Эритема и образование струпа

Отсутствие эритемы

0

Очень слабая эритема (слегка заметная)

1

Заметная эритема

2

Умеренная эритема

3

Выраженная эритема (ярко-красная) с образованием струпа

4

Образование отека

Отсутствие отека

0

Очень слабый отек (слегка заметный)

1

Заметный отек

2

Умеренный отек

3

Выраженный отек

4

Примечания

1 Другие возникшие кожные реакции должны быть отмечены в отчете об исследовании.

2 Система оценки степени реакции модифицирована и стандартизирована.

Примечание — Для удобства регистрации первая и вторая оценки состояния кожи после провокационных проб обозначены соответственно как 24- и 48-часовая.

6.3.6 Оценка результатов

Если оценка в баллах, полученная в подопытной группе, равна 1 или выше, о наличии сенсибилизации говорят в том случае, если у контрольных животных этот показатель менее 1. Если оценка в баллах у контрольных животных равна 1 или выше, то реакция кожи подопытных животных, которая превышает самую сильную реакцию, наблюдаемую в контроле, является результатом сенсибилизации.

5*

Иногда в подопытной группе у большего, чем в контроле числа животных, наблюдается сенсибилизирующий эффект, однако при этом интенсивность реакции может быть не выше, чем у контроля. В этом случае проводят дополнительную провокационную пробу с целью выявить ответ организма более четко. При необходимости дополнительную провокационную пробу проводят приблизительно через 7 сут после первой провокации. При этом применяют описанный выше метод, только используют другой бок животного.

6.3.7 Представление результатов

В отчет об исследовании включают:

-    описание исследуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

16

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

Содержание

1    Область применения.......................1

2    Нормативные ссылки.......................1

3    Определения..........................1

4    Общие положения........................2

5    Методы исследования раздражающего действия...............2

5.1    Факторы, влияющие на проведение исследований и выбор методов........2

5.2    Раздражающее действие на кожу..................3

5.3    Раздражающее действие на глаза..................5

5.4    Раздражающее действие при внутрикожном    введении............8

6    Исследование сенсибилизирующего действия................10

6.1    Факторы, которые следует учитывать при выборе метода............10

6.2    Метод максимального сенсибилизирующего    воздействия...........11

6.3    Метод закрытых накожных аппликаций.................14

Приложение А Подготовка образцов....................17

Приложение Б Методы получения вытяжек из образцов..............18

Приложение В Выбор и содержание экспериментальных животных...........20

Приложение Г Дополнительные методы исследования раздражающего действия.......20

Приложение Д Дополнительная информация.................27

Приложение Е Изучение сенсибилизирующего действия на белых крысах.........29

Приложение Ж Библиография.....................31

III

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

ПРИЛОЖЕНИЕ А (обязательное)

Подготовка образцов

А Л Общие положения

При изучении раздражающего и сенсибилизирующего действия и интерпретации результатов учитывают свойства исследуемого материала или изделия, продолжительность, частоту, способ и степень его контакта с организмом. Одним из важных условий проведения исследований является подготовка исследуемого образца.

Примечание — Общее руководство по подготовке образцов приведено в ГОСТ Р ИСО 10993.12, однако приготовление вытяжек для изучения раздражающего и сенсибилизирующего действия имеет свои особенности.

А.2 Непосредственный контакт

А.2.1 Твердые материалы, имеющие подходящую форму (лист, пленка и т. д.), исследуют, не подвергая изменениям.

А.2.2 Порошки (например суперабсорбенты) исследуют при непосредственном нанесении или после приготовления из них пасты с использованием подходящего растворителя.

А.2.3 Жидкости исследуют или непосредственно, не подвергая изменениям, или в виде растворов с использованием подходящего растворителя, при этом параллельно со смешанным, растворенным или суспензированным исследуемым материалом в качестве контрольного раствора используют этот растворитель.

А.2.4 Из твердых материалов готовят образцы размером 25 х 25 мм. Толщина образца зависит от толщины исследуемого изделия, но не должна превышать 5 мм. Отрицательный контроль готовят также. Твердый материал может быть измельчен, если при этом полностью сохраняются его свойства, или в достаточной степени увлажнен водой или подходящим растворителем, не обладающим раздражающим действием, что обеспечивает более тесный контакт материала с кожей. Керамические материалы измельчают, однако следует помнить, что физико-химические свойства керамики меняются при ее переходе в порошкообразное состояние.

Отрицательный контроль должен иметь сходные с исследуемым материалом физические параметры и не оказывать раздражающего действия. В качестве заменителя обычно используют марлю, сложенную вчетверо.

А.2.5 Для материалов, которые требуют растворения, суспензирования или смачивания, подбирают растворитель, который не обладает раздражающим действием. Применяемые растворители приведены в приложении Б.

А.2.6 Раздражающее действие твердых материалов изучают так же, подвергая исследованию вытяжки из них. Вытяжки готовят, используя полярные, неполярные и (или) другие подходящие растворители (приложение Б).

Параллельно с вытяжкой из исследуемого материала в качестве контроля используют экстрагирующий растворитель.

А.2.7 Если изделие поступает в продажу стерильным, то перед изучением исследуемый материал подвергают стерилизации тем же методом. Существуют определенные трудности при исследовании образцов, стерилизованных окисью этилена, поскольку окись этилена и продукты ее деструкции могут оказывать биологическое действие в исследованиях, рекомендованных настоящим стандартом. При обнаружении любого неблагоприятного воздействия на организм проводят исследования, позволяющие дифференцировать, вызвана ли обнаруженная реакция действием самого изучаемого материала или она обусловлена остаточным количеством окиси этилена. Если выявлено первичное раздражающее действие, образец исследуют до и после стерилизации окисью этилена.

17

Введение

Соблюдение положений стандартов серии ГОСТ Р ИСО 10993 «Оценка биологического действия медицинских изделий» позволяет обеспечить системный подход к исследованию биологического действия медицинских изделий.

Целью этих стандартов не является безусловное закрепление конкретных методов исследований и испытаний за группами однородных медицинских изделий в соответствии с принятой классификацией по виду и длительности контакта с организмом человека. Поэтому планирование и проведение исследований и испытаний должны осуществлять специалисты, имеющие специальную подготовку и опыт в области санитарно-химической, токсикологической и биологической оценок медицинских изделий.

Стандарты этой серии являются руководящими документами для прогнозирования биологического действия медицинских изделий на стадии выбора материалов, предназначенных для их изготовления, а также для исследований готовых образцов.

В стандарты серии ГОСТ Р ИСО 10993, имеющие групповой заголовок «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий», входят;

-    часть 1 — оценка и исследования;

-    часть 3 — исследование генотоксичности, канцерогенное™ и токсического действия на репродуктивную функцию;

-    часть 4 — исследование изделий, взаимодействующих с кровью;

-    часть 5 — исследование на цитотоксичность: методы in vitro;

-    часть 6 — исследование местного действия после имплантации;

-    часть 7 — остаточное содержание этиленоксида после стерилизации;

-    часть 9 — основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деструкции;

-    часть 10 — исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия;

-    часть 11 — исследование общетоксического действия;

-    часть 12 — приготовление проб и стандартные образцы;

-    часть 13 — идентификация и количественное определение продуктов деструкции полимерных медицинских изделий;

-    часть 16 — моделирование и исследование токсикокинетики продуктов деструкции и вымывания.

Настоящий стандарт оценивает опасность, возникающую при контакте с изделиями, выделяющими химические вещества, которые могут вызывать раздражение кожи и слизистой, раздражение глаз и сенсибилизацию организма.

Методы исследования, изложенные в стандарте, взяты из международных национальных стандартов, директив и нормативов.

Одна из методик исследования сенсибилизирующего действия, применяемая в России, изложена в приложении Е.

Допускается применять другие методы, обеспечивающие оценку биологического действия медицинских изделий в соответствии с требованиями международных стандартов.

IV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Изделия медицинские ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ

Часть 10

Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия

Medical devices. Biological evaluation of medical devices.

Part 10. Tests for irritation and sensitization

Дата введения 2002—01—01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методы оценки возможного раздражающего и сенсибилизирующего действия медицинских изделий и материалов.

Настоящий стандарт распространяется на категории изделий в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993.1. Подготовку образцов к исследованиям проводят в соответствии с приложением А.

Примечание — Методы исследования изделий специфического способа применения (оральный, вагинальный, ректальный, на пенис) приведены в приложении Г.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 10993.1-99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Оценка и исследования.

ГОСТ Р ИСО 10993.12-99 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Приготовление проб и стандартные образцы.

3    Определения

В настоящем стандарте используют термины, приведенные в ГОСТ Р ИСО 10993.1, а также следующие определения:

3.1    аллергенное действие, сенсибилизация и гиперчувствительность замедленного типа: Аллергическая реакция с вовлечением иммунной системы, которая активизируется в результате предварительной кожной сенсибилизации.

3.2    раздражение: Локализованная воспалительная реакция на однократное, повторное или продолжительное воздействие исследуемого вещества без вовлечения иммунного механизма.

3.3    отек: Увеличение объема ткани вследствие патологической инфильтрации жидкости.

3.4    эритема: Покраснение кожи и слизистых оболочек.

3.5    струп: Корка или бесцветное чешуйчатое образование кожи.

3.6    коррозия: Необратимое разъедание кожи в месте контакта с испытуемым веществом.

3.7    изъязвление: Открытая язва вследствие потери поверхностных тканей.

3.8    некроз: Гибель клеток и (или) тканей.

3.9    отрицательный контроль: Материал, который при исследовании в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993.10 не оказывает раздражающего или сенсибилизирующего действия.

Издание официальное

3.10    положительный контроль: Материал, который при исследовании в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993.10 оказывает воспроизводимое раздражающее или сенсибилизирующее действие.

3.11    растворитель: Вещество (химикат, наполнитель, среда), используемое для смачивания, разбавления, суспензирования, экстрагирования или растворения испытуемого материала.

3.12    контрольный раствор: Растворитель (3.11), используемый для смачивания, разбавления, суспензирования, экстрагирования или растворения испытуемого материала, который оценивается одновременно со смоченным, разбавленным, суспензированным, экстрагированным или растворенным испытуемым материалом.

3.13    образец: Изделие или его часть, подвергаемые исследованию.

3.14    исследуемая проба: Изделие или вытяжка из него, используемые для изучения раздражающего и (или) сенсибилизирующего действия.

4    Общие положения

В настоящем стандарте обоснована целесообразность поэтапного подхода к исследованиям, включающего в себя частично или полностью следующие этапы:

а)    обзор литературы;

б)    исследования in vitro (если они доступны и надежны);

в)    исследования in vivo;

г)    неинвазивные методы испытания на добровольцах.

Обзор литературы включает в себя получение информации о физических и химических свойствах веществ и материалов, а также о сходных по структуре соединениях. Если pH и рКа исследуемой пробы (раствора, жидкости или вытяжки из материала) неизвестны, следует измерить эти показатели до начала исследований in vitro и in vivo;

Исследования in vitro более предпочтительны по сравнению с исследованиями на живом организме и должны постепенно вытеснять последние, поскольку методы in vitro становятся более доступными и надежными.

Для оценки материалов, которые не являются сильными раздражителями и не проявили выраженного сенсибилизирующего действия на этапах а) или б), проводят острые опыты in vivo. Материалы, не проявившие токсического действия в острых опытах, далее подвергают исследованиям при многократном воздействии на организм.

В настоящее время не существует надежных методов in vitro (кроме простейших скрининговых тестов), позволяющих выявить материалы, обладающие раздражающим и сенсибилизирующим действием; существует лишь руководство по проведению исследований in vivo на животных.

Положительный контроль следует применять периодически для подтверждения надежности используемых методов исследований и демонстрации положительной реакции.

Если невозможно адекватно оценить материал с помощью перечисленных методов, необходимо проводить исследования неинвазивными методами на человеческом организме.

5    Методы исследования раздражающего действия

5.1 Факторы, влияющие на проведение исследований и выбор методов

На результаты изучения раздражающего действия оказывают влияние следующие факторы:

-    оценка пятна;

-    степень поражения (окклюзии);

-    способ аппликации исследуемого вещества;

-    место аппликации;

-    продолжительность экспозиции;

-    методика оценки результатов исследований.

Дополнительная информация приведена в приложении Д.

Определенная свобода исследователей в выборе методов и желание модифицировать последние с целью повышения их чувствительности в соответствии с условиями применения материалов, частотой и длительностью их использования требуют сравнения результатов исследований, полученных разными организациями.

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

Описанные методики используют для исследования материалов и изделий, имеющих многократный и (или) длительный контакт с организмом. После консультаций с производителем исследователь должен спланировать эксперимент таким образом, чтобы его продолжительность и (или) концентрация исследуемого вещества превышали применяемые в медицинской практике. Увеличение концентрации вытяжки из материала учитывают при анализе результатов эксперимента.

При использовании материалов, контактирующих со здоровой и тем более поврежденной кожей, не оправдан даже незначительный риск, однако многие потенциальные раздражители находят широкое применение в связи с преобладанием их полезных свойств.

Следует отметить, что если pH исследуемого образца меньше или равно 2,0 или больше или равно 11,5, материал признают потенциальным раздражителем и дальнейшие исследования его не проводят. Экспериментально доказано, что на возникновение серьезных повреждений влияют также концентрация исследуемого вещества, время контакта и его химические и физические свойства. Если при проведении исследований доза материала сознательно аггравирована, незначительное неблагоприятное воздействие последнего не всегда является основанием для его запрещения.

5.2 Раздражающее действие на кожу

5.2.1    Цель исследования

Оценка способности материала оказывать раздражающее действие на кожу.

5.2.2    Исследуемый материал

Твердые вещества (включая порошки) или жидкость готовят к исследованиям в соответствии с приложением А.

Если исследованиям подвергают вытяжку из образца, ее готовят в соответствии с приложением Б.

5.2.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют половозрелых молодых кроликов-альбиносов одной линии обоего пола весом не менее 2 кг.

Акклиматизацию и уход за животными осуществляют в соответствии с приложением В.

Для первичной оценки исследуемого материала используют одно животное.

При выраженной реакции, полученной при исследовании на одном животном, дальнейшие исследования не проводят.

Если при исследованиях твердых или жидких материалов не наблюдается выраженной реакции, далее используют не менее двух животных, а при исследовании вытяжек из материалов — не менее двух животных на каждую вытяжку.

Если результаты исследований, полученные не менее чем на трех животных, сомнительны или неясны, проводят дополнительные исследования.

5.2.4    Проведения исследований

5.2.4.1    Подготовка животных

За сутки до проведения исследований выстригают шерсть на участках площадью примерно 10х 15 см по обеим сторонам спины для аппликации и наблюдения.

Используют животных только со здоровой кожей.

Примечание — Сбривать шерсть на подготовленных участках необязательно, так как практика показала, что это не влияет на результаты исследований.

При многократном воздействии исследования проводят в соответствии с 5.2.4.2, 5.2.4.3 или 5.2.4.4 не более 21 сут.

5.2.4.2    Порошкообразные и жидкие образцы

Наносят 0,5 г или 0,5 мл исследуемого материала на кожу с каждой стороны, как показано на рисунке 1.

Порошкообразный исследуемый материал перед нанесением слегка смачивают водой или другим подходящим растворителем.

Участки с нанесенным материалом сверху покрывают кусочками ткани или марли, сложенными вчетверо, площадью 25 х 25 мм и фиксируют полупрозрачной повязкой. Время экспозиции не менее 4 ч. Удаляют защитную повязку и кусочки ткани, отмечают положение участков. Затем удаляют остатки исследуемого вещества соответствующими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

3

Голова    5.2.4.3 Вытяжки и модельные среды

1 — выстриженный участок спины; 2 — исследуемый участок; 3 — контрольный участок (при необходимости)

Смачивают соответствующей вытяжкой сложенный вчетверо кусочек марли (0,5 мл на кусочек), прикладывают его к участку кожи с каждой стороны спины животного, как показано на рисунке 1. Контрольный кусочек марли, смоченный модельной средой, помещают на кожу другого участка.

Хвост

Покрывают места аппликаций полупрозрачной повязкой не менее чем на 4 ч. Затем снимают фиксирующую повязку и отмечают положение участков, удаляют остатки исследуемого вещества подходящими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

5.2.4.4 Твердые материалы

Рисунок 1 — Расположение аппликаций на коже кролика

Прикладывают образцы исследуемого материала на кожу спины каждого кролика с каждой стороны позвоночника, как показано на рисунке 1. Подобным образом прикладывают контрольные образцы на кожу спины каждого кролика. Поверхность твердых образцов (которые при необходимости могут быть измельчены) смачивают водой или другим растворителем, что позволяет обеспечить более плотное прилегание образца к коже. Если в опыте используют растворитель, учитывают его влияние на результаты эксперимента.

Покрывают исследуемый образец защитным покрытием размером 25 х 25 мм (таким как кусочек ткани или марли) и фиксируют места аппликации полупрозрачной повязкой не менее чем на 4 ч. Затем снимают повязку, отмечают положение участков, удаляют остатки исследуемых материалов подходящими средствами, например, теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

5.2.5 Обследование животных

При остром (однократном) воздействии регистрируют состояние каждого участка кожи, где производили аппликации, через 1, 24, 48 и 72 ч после удаления образцов. Более длительное наблюдение (но не более 14 сут) проводят при возникновении стойких изменений кожи для определения их обратимости.

При многократном воздействии регистрируют состояние кожи в месте аппликации через 1 ч после удаления образца и непосредственно перед следующей аппликацией. После последней аппликации регистрируют состояние каждого участка через 1, 24, 48 и 72 ч после снятия образцов. Более длительное наблюдение (но не более 14 сут) проводят при стойких изменениях кожи для определения их обратимости.

Описывают и оценивают степень кожной реакции, включая эритему и отек, в соответствии с

Таблица 1— Система классификации кожных реакций

Реакция

Оценка в баллах

Эритема и образование струпа

Отсутствие эритемы

0

Очень слабая эритема (слегка заметная)

1

Заметная эритема

2

Умеренная эритема

3

Выраженная эритема (ярко-красная) с образованием струпа

4

Образование отека

Отсутствие отека

0

Очень слабый отек (слегка заметный)

1

Заметный отек, выступающий над поверхностью кожи и имеющий четко

2

выраженные границы

Умеренный отек (выступающий над поверхностью кожи около 1 мм)

3

Выраженный отек (распространенный, выступающий над поверхностью кожи

4

более чем на 1 мм)

Максимально возможное количество баллов

8

Примечание — Другие кожные реакции должны быть зарегистрированы и внесены в отчет об

исследовании

ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

классификацией, представленной в таблице 1, для каждого участка и каждого интервала времени наблюдения. Регистрируют результаты в отчете об исследовании.

Примечание — В некоторых случаях могут оказаться полезными гистологические и неинвазивные методы исследования.

5.2.6 Оценка результатов

При остром воздействии определяют индекс первичного раздражения (ИПР), при этом для каждого животного складывают баллы первичного раздражения, вызванного исследуемым материалом, включая отеки и эритемы, в каждый интервал времени наблюдения и делят их на общее число наблюдений (на 6 — по 2 на каждый интервал времени). Если в исследованиях использовался контроль, вычисляют балл первичного раздражения контроля. Для объективности исследований из балла первичного раздражения исследуемого материала вычитают балл первичного раздражения контроля.

Для вычислений используют только данные наблюдений, полученные через 24, 48, 72 ч. Наблюдения, сделанные при определении дозы или позже чем через 72 ч, во внимание не принимают.

Для получения ИПР складывают баллы каждого животного и делят на количество животных.

При многократном воздействии определяют индекс суммарного раздражения, при этом для каждого животного складывают баллы раздражения, включая эритемы и отеки, в каждый интервал времени. Делят полученное число на общее количество наблюдений и получают средний балл раздражения для каждого животного.

Для получения индекса суммарного раздражения складывают средние баллы раздражения всех подопытных животных и делят на количество особей.

Индекс суммарного раздражения сравнивают со значениями, представленными в таблице 2, и регистрируют в отчете об исследовании.

Таблица 2 — Степени ответной реакции на раздражение у кроликов

Ответная реакция

Количество баллов

Отсутствие

От 0 до 0,4

Слабая

» 0,5 » 1,9

Умеренная

» 2,0 » 4,9

Выраженная

» 5,0 » 8,0

Примечание — Индекс суммарного раздражения позволяет экстраполировать результаты определения ИПР на химические вещества у кроликов на человека, учитывая предыдущий опыт исследования ряда химических веществ на обоих видах.

Для каждого случая определяют максимальный ответ на раздражение, фиксируют время, при котором это раздражение возникает, и его продолжительность.

Оценка в баллах и описания, представленные в таблице 2, характеризуют индексы первичного и суммарного раздражения.

5.2.7 Представление результатов

В отчет об исследованиях включают:

-    описание исследуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

5.3 Раздражающее действие на глаза

5.3.1    Цель исследования

Оценка потенциальной способности материала оказывать раздражающее действие на слизистую оболочку глаза.

5.3.2    Исключение из исследования

Материалы или изделия, вызвавшие коррозию и сильное раздражение при действии на кожу, исследованиям раздражающего действия на слизистую глаза не подвергают. Вещества, обладающие сильными кислотными или щелочными свойствами (pH меньше или равно 2,5 или больше или равно 11,5) исследованиям на слизистой оболочке глаза не подвергают, так как их свойство вызывать

5

раздражение и коррозию заранее известно. Очевидно, что такие материалы обладают раздражающим действием на слизистую глаза.

5.3.3    Исследуемый материал

Если исследуемый образец представляет собой жидкость, закапывают 0,1 мл в нижний отдел конъюнктивального мешка.

Твердый или гранулированный продукт измельчают до пылеобразного состояния и затем аккуратно вводят в нижний отдел конъюнктивального мешка глаза такое количество материала, которое занимает объем 0,1 мл, но не более 100 мг.

Примечание — Некоторые материалы нельзя исследовать непосредственно на слизистой глаза, так как возникают механические повреждения.

Если исследуемый материал упакован в шприце или тубе и выделяется под действием давления, получают некоторое количество этого вещества и вводят 0,1 мл так же, как для жидких веществ.

Материал в аэрозольной упаковке разбрызгивают в течение 1 с с расстояния 10 см непосредственно на поверхность открытого глаза или впрыскивают в охлажденную емкость и изучают так же, как жидкие продукты.

Если исследованиям подвергают вытяжку из образца, ее готовят в соответствии с приложением Б и закапывают 0,1 мл вытяжки в нижний конъюнктивальный мешок глаза.

В идентичных условиях готовят контроль с использованием полярных и неполярных растворителей в отсутствии исследуемого вещества.

5.3.4    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых кроликов-альбиносов одной линии обоего пола массой 2—3 кг.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с приложением В.

Для первичной оценки исследуемого материала используют одно животное.

При выраженной реакции, полученной при исследовании на одном животном, дальнейшие исследования не проводят.

Если при исследованиях твердых или жидких материалов не наблюдается выраженной реакции, далее используют не менее двух животных, а при исследовании вытяжек из материалов — не менее двух животных на каждую вытяжку.

Если результаты исследований, полученные не менее чем на трех животных, сомнительны или неясны, проводят дополнительные исследования.

5.3.5    Проведение исследований

Не позднее чем за 24 ч до начала исследований визуально оценивают состояние глаз каждого кролика для выявления выраженных повреждений. При обнаружении патологических изменений хотя бы в одном глазу животное заменяют.

Для более четкого выявления изменения роговицы используют 2 %-ный раствор флуоресцеина натрия.

Используют офтальмоскоп, ручную щелевую лампу или другие устройства.

Вводят исследуемый материал, как указано в 5.3.3.

После инстилляции веки соединяют и держат в таком положении в течение 1 с.

Примечание — Другой глаз животного считают интактным контролем.

Если предполагается многократное или длительное воздействие материала и в остром эксперименте исследуемый материал не проявил ярко выраженной реакции, проводят исследование с многократным воздействием на организм. Продолжительность воздействия определяют в соответствии с продолжительностью воздействия материала или изделия на организм при его применении в медицинской практике.

5.3.6    Обследование животных

Оба глаза животного, которому однократно инсталлировали исследуемый материал, осматривают через 1, 24, 48 и 72 ч после воздействия.

Если имеются стойкие изменения, постоянное наблюдение (но не более 21 сут) проводят для оценки их прогрессирования и обратимости. При обнаружении тяжелых повреждений постоянные наблюдения не проводят.

Оценивают и регистрируют любые наблюдаемые реакции в соответствии с классификацией, представленной в таблице 3.