Товары в корзине: 0 шт Оформить заказ
Стр. 1
 

42 страницы

Описывает методы оценки возможного раздражающего и сенсибилизирующего действия медицинских изделий и материалов, входящих в их состав. Стандарт включает в себя: а) требования к описанию исследуемых образцов; b) детальное описание методов исследования; c) ключевые факторы, влияющие на интерпретацию полученных результатов. В приложении А приведены инструкции по подготовке образцов для проведения вышеуказанных исследований. Стандарт распространяется на категории изделий в соответствии с ИСО 10993-1. Подготовку образцов к исследованиям проводят в соответствии с приложением А. В приложении B приведены дополнительные специфические методы исследования для изделий, используемых интрадермально, орально, вагинально, контактирующих с пенисом, в офтальмологии.

 Скачать PDF

Идентичен ISO 10993-10:2002

Отменен, с 01.01.2013 действует ГОСТ ISO 10993-10-2011 (ИУС 3-2013)

Оглавление

1 Область применения

2 Нормативные ссылки

3 Термины и определения

4 Основные принципы поэтапного подхода

5 Предварительный анализ исследуемых образцов

     5.1 Общие сведения

     5.2 Виды материалов

     5.3 Данные о химическом составе

     5.4 Характеристика материалов

6 Методы исследования раздражающего действия

     6.1 Методы in vitro

     6.2 Факторы, влияющие на планирование исследования и выбор методов in vitro

     6.3 Исследование раздражающего действия на кожу экспериментальных животных

     6.4 Исследование раздражающего действия на коже человека

7 Методы исследования гиперчувствительности замедленного типа

     7.1 Выбор метода

     7.2 Выбор концентрации испытуемого образца

     7.3 Прочие факторы, влияющие на полученные результаты исследований

     7.4 Метод максимального сенсибилизирующего воздействия

     7.5 Метод закрытых накожных аппликаций для выявления гиперчувствительности замедленного типа

8 Ключевые факторы при интерпретации результатов исследований

Приложение А (обязательное) Подготовка материалов для исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия

Приложение В (справочное) Дополнительные методы исследования раздражающего действия

Приложение С (справочное) Дополнительная информация

Приложение D (справочное) Сведения о соответствии национальных стандартов Российской Федерации ссылочным международным стандартам

Библиография

 

42 страницы

Дата введения01.09.2010
Добавлен в базу01.09.2013
Завершение срока действия01.01.2013
Актуализация01.01.2019

Этот ГОСТ находится в:

Организации:

02.12.2009УтвержденФедеральное агентство по техническому регулированию и метрологии535-ст
ИзданСтандартинформ2010 г.
РазработанАНО ИМБИИТ

Medical devices. Biological evaluation of medical devices. Part 10. Tests for irritation and delayed-type hypersensitivity

Нормативные ссылки:
Стр. 1
стр. 1
Стр. 2
стр. 2
Стр. 3
стр. 3
Стр. 4
стр. 4
Стр. 5
стр. 5
Стр. 6
стр. 6
Стр. 7
стр. 7
Стр. 8
стр. 8
Стр. 9
стр. 9
Стр. 10
стр. 10
Стр. 11
стр. 11
Стр. 12
стр. 12
Стр. 13
стр. 13
Стр. 14
стр. 14
Стр. 15
стр. 15
Стр. 16
стр. 16
Стр. 17
стр. 17
Стр. 18
стр. 18
Стр. 19
стр. 19
Стр. 20
стр. 20
Стр. 21
стр. 21
Стр. 22
стр. 22
Стр. 23
стр. 23
Стр. 24
стр. 24
Стр. 25
стр. 25
Стр. 26
стр. 26
Стр. 27
стр. 27
Стр. 28
стр. 28
Стр. 29
стр. 29
Стр. 30
стр. 30

ГОСТ Р исо

10993-10-

2009

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫМ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ МЕДИЦИНСКИЕ

ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ

Часть 10

Исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия

ISO 10993-10:2002

Biological evaluation of medical devices — Part 10: Tests for irritation and delayed-type hypersensitivity (IDT)

Издание официальное

Москва

Стандартинформ

2010

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1    ПОДГОТОВЛЕН Автономной некоммерческой организацией «Институт медико-биологических исследований и технологий» (АНО «ИМБИИТ»)

2    ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 422 «Оценка биологического действия медицинских изделий»

3    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 2 декабря 2009 г. № 535-ст

4    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 10993-10:2002 «Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия» (ISO 10993-10:2002 «Biological evaluation of medical devices — Part 10: Tests for irritation and delayed-type hypersensitivity»).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении D

5    ВЗАМЕН ГОСТ Р ИСО 10993.10-99

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок— в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

© Стандартинформ, 2010

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Таблица 1 — Система классификации кожных реакций

Реакция

Оценка в баллах

Эритема и образование струпа

Отсутствие эритемы

0

Очень слабая эритема (едва заметная)

1

Хорошо различимая эритема

2

Умеренная эритема

3

Резко выраженная эритема (темно-красная) с образованием струпа

4

Образование отека

Отсутствие отека

0

Очень слабый отек (слегка заметный)

1

Заметный отек, выступающий над поверхностью кожи и имеющий четко выраженные границы

2

Умеренный отек (выступающий над поверхностью кожи около 1 мм)

3

Выраженный отек (распространенный, выступающий над поверхностью кожи более чем на 1 мм)

4

Максимально возможное число баллов

8

Примечание — Другие кожные реакции должны быть внесены в отчет об исследовании и зарегис-

трированы.

6.3.5.3 Многократный аппликационный метод

При многократном воздействии регистрируют состояние кожи в месте аппликации через 1 ч после удаления образца и непосредственно перед следующей аппликацией. После последней аппликации регистрируют состояние каждого участка через 1,24, 48 и 72 ч после снятия образцов. Более длительное наблюдение (но не более 14 сут) проводят при стойких изменениях кожи для определения их обратимости.

6.3.6 Оценка результатов

При остром воздействии определяют индекс первичного раздражения (ИПР), при этом для каждого животного складывают баллы первичного раздражения, вызванного исследуемым материалом, включая отеки и эритемы, в каждый интервал времени наблюдения и делят их на общее число наблюдений (на 6 — по 2 на каждый интервал времени). Если в исследованиях использовался контроль, вычисляют балл первичного раздражения контроля. Для объективности исследований из балла первичного раздражения исследуемого материала вычитают балл первичного раздражения контроля.

Для вычислений используют только данные наблюдений, полученные через 24, 48, 72 ч. Наблюдения, сделанные при определении дозы или позже чем через 72 ч, во внимание не принимают.

Для получения ИПР складывают баллы каждого животного и делят на число особей.

При многократном воздействии определяют индекс суммарного раздражения, при этом для каждого животного складывают баллы раздражения, включая эритемы и отеки, в каждый интервал времени. Делят полученное число на общее число наблюдений и получают средний балл раздражения для каждого животного.

Для получения индекса суммарного раздражения складывают средние баллы раздражения всех подопытных животных и делят на число особей.

Индекс суммарного раздражения сравнивают со значениями, представленными в таблице 2, и регистрируют в отчете об исследовании.

Таблица 2 — Степени ответной реакции на раздражение у кроликов

Ответная реакция

Число баллов

Незначительная

От 0 до 0,4

Слабая

От 0,5 до 1,9

Умеренная

От 2,0 до 4,9

Выраженная

От 5,0 до 8,0

Примечание — Индекс суммарного раздражения позволяет экстраполировать на человека результаты определения ИПР на химические вещества у кроликов, учитывая предыдущий опыт исследования ряда химических веществ на обоих видах.

Для каждого случая определяют максимальный ответ на раздражение, фиксируют время, при котором это раздражение возникает, и его продолжительность.

Оценка в баллах и описания, представленные в таблице 2, характеризуют индексы первичного и суммарного раздражений.

6.3.7 Представление результатов

В отчет об исследованиях включают:

-    описание испытуемого образца;

-    предполагаемый способ применения материала или изделия;

-    подробное описание подготовки образца к исследованиям;

-    вид экспериментальных животных;

-    способ аппликации исследуемых образцов;

-    методы ведения наблюдений и их регистрации;

-    оценку результатов.

6.4 Исследование раздражающего действия на коже человека

6.4.1    Введение

В настоящее время прогноз кожного раздражения у человека для определения вредных факторов основан на использовании подопытных животных (см. приложение С). Тем не менее, существуют проблемы экстраполяции от животных на человека. Для химикатов, контакт человека с которыми высок (например, косметика и чистящие средства), оценку риска часто проводят с помощью аппликационного метода на коже человека.

Исследования на человеке могут служить нескольким целям:

a)    прямое определение опасности для человека проведением тестирования химикатов на людях, а не на лабораторных животных;

b)    предоставление оценки риска для определенных химикатов, контакт человека с которыми

высок;

c)    облегчение экстраполяции данных, полученных ранее при исследованиях лабораторных животных, на человека.

Настоящий стандарт позволяет прямое получение для человека данных по раздражению кожи в целях определения вредных факторов. Его целью является определение, представляет ли собой материал опасность, ведущую к значительному раздражению кожи после острого воздействия.

Клинические испытания должны проводиться в соответствии с ИСО 14155-1 и ИСО 14155-2.

Примечание — ВС.1 приложения С приведена дальнейшая информация по исследованиям раздражения.

6.4.2    Предварительный анализ

Для уверенности в том, что исследование не представляет собой никакого значительного риска для здоровья, должна быть в наличии адекватная информация по токсичному профилю материала и (где применимо) составляющих его химикатов, включая данные впитывания через кожу.

Материалы не должны испытываться на людях, если

a)    в прогнозирующей пробе было показано, что они являются раздражителями, in vitro или in vivo,

b)    в прогнозирующей пробе было показано, что они являются едкими, in vitro или in vivo,

c)    потенциальная едкость для кожи человека может быть спрогнозирована на основе соотношения структура/действие и/или физико-химических свойств, таких как сильная кислота или щелочь,

d)    они представляют риск сенсибилизации кожи или дыхательных путей,

e)    они представляют любую степень опасности острой токсичности при условиях исследования

и/или

f)    они представляют любую генотоксичную, репродуктивную или канцерогенную опасность.

Дальнейшие инструкции по выбору добровольцев приведены в 6.4.5.1 и С.1 приложения С.

6.4.3    Принцип метода

Однократную дозу тестируемого материала наносят под окклюзией на кожу добровольцев. Раздражение сводится к минимуму нанесением исследуемого материала на короткие периоды. Более длительные периоды воздействия могут быть приемлемы при определенных условиях.

Основным способом оценки является определение пропорции добровольцев, у которых появилось кожное раздражение, связанное с реакцией на сопутствующий материал положительного контроля.

6.4.4    Описание метода

6.4.4.1 Выбор добровольцев для исследования

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

Настоящий стандарт предназначен для проведения испытаний на здоровых добровольцах. Выбранным добровольцам должно быть, по меньшей мере, 18 лет; они не должны быть беременными или кормить грудью. Кроме того, добровольцы с известной чувствительностью к исследуемому материалу или демонстрирующие любые признаки дерматита должны быть исключены из исследования. Выбор добровольцев должен проходить под наблюдением дерматолога или другого квалифицированного специалиста.

6.4.4.2    Приготовление доз

Жидкие исследуемые материалы обычно используют в неразведенном виде. При исследовании твердых веществ увлажняют исследуемый материал небольшим количеством воды (обычно 0,2 мл) или, при необходимости, другим подходящим раствором для обеспечения хорошего контакта с кожей. Необходимо учитывать структуру твердого вещества, и выбор подготовки исследуемого материала должен быть обоснован. При использовании увлажненных образцов необходимо убедиться, что каждый субъект получает одинаковое количество исследуемого материала. Используют одинаковое количество воды для увлажнения кожи каждого добровольца в исследовании и отражают это количество документально.

При использовании растворителя необходимо учитывать его влияние на кожное раздражение исследуемым материалом. Если в качестве смачивающего агента для твердых соединений используется растворитель, не являющийся водой, рассматривают возможность применения аппликации с контрольным раствором (контроль растворителя) на каждом субъекте.

6.4.4.3    Проведение исследования

6.4.4.3.1    Число добровольцев

Исследование должно быть выполнено, по меньшей мере, на 30 добровольцах, не менее трети из которых должны быть противоположного пола.

6.4.4.3.2    Способ аппликации исследуемого материала

Наносят исследуемый материал на неповрежденную кожу в приемлемом месте, например, на верхнюю внешнюю части руки, посредством окклюзионной камеры, содержащей марлевую прокладку. Место нанесения должно быть одинаковым для всех добровольцев и отражено документально. Обычно размер аппликации должен составлять как минимум 1,8 см, предпочтительно 2,5 см в диаметре. Аппликация должна находиться в контакте с кожей с помощью подходящей нераздражающей повязки, включая нераздражающую липкую ленту, в течение всей продолжительности периода воздействия.

Аппликация должна содержать адекватную дозу на площадь единицы: оптимальным считается примерно от 50 до 100 мг исследуемого материала на квадратный сантиметр. При нанесении жидких исследуемых материалов обычно добавляют от 0,2 до 0,4 мл к марлевой прокладке, пока та не становится влажной. При исследовании твердых материалов обычно 0,2 г исследуемого материала смачивают и добавляют к марлевой прокладке. Как альтернативный метод нанесения твердых материалов марлевую прокладку смачивают и исследуемым материалом покрывают весь испытуемый участок.

6.4.4.3.3    Продолжительность воздействия

Во избежание неприемлемо сильных реакций необходимо использовать адаптированный подход к исследованию. Методика последовательной аппликации дает возможность развития положительного, но не тяжелого, ответа на раздражитель. Аппликации применяют прогрессивно, начиная с длительности в 15 и 30 мин, и до 1,2, 3 и 4 ч. Возможно пропустить 15 и/или 30-минутные периоды воздействия при наличии достаточных признаков того, что чрезмерных реакций не произойдет после 1-часового воздействия. Переход к более длительному воздействию, включая 24-часовое воздействие закрытой аппликацией на новом участке кожи, будет зависеть от отсутствия кожного раздражения (оцениваемого по меньшей мере до 48 ч), возникающего от более краткого воздействия, для обеспечения того, чтобы любая замедленная реакция на раздражитель была адекватно оценена.

Аппликацию материала на более длительный период воздействия всегда проводят на ранее не обработанный участок.

В конце периода воздействия удаляют остатки исследуемого материала, используя, по показаниям, воду или соответствующий растворитель, не меняющий существующей кожной реакции или целостности эпидермиса.

6.4.4.3.4    Ограничения в длительности воздействия

В дополнение к информации об увеличении длительности аппликации, как описано в 6.4.4.3.3, если есть подозрения, что материал может вызвать сильное раздражение, необходимо использовать значительно сокращенное время воздействия, возможно, в ограниченной по численности группе добровольцев. Прогресс исследования затем может быть определен на основе полученных данных. Последующие аппликации наносят только после получения результатов данных после 48/72 ч.

9

6.4.4.3.5 Клиническое наблюдение и оценка кожных реакций

Обработанные участки осматривают на предмет признаков раздражения и кожную реакцию оценивают немедленно после удаления аппликации и после 1 ч до 2,24,48 и 72 ч после удаления аппликации. Если необходимо определить обратимость ответа, период наблюдения может быть продлен более 72 ч. Дополнительно состояние кожи до и после исследования должно быть тщательно описано (например, пигментация и степень увлажнения). Кожное раздражение оценивают и записывают согласно оценочной шкале в таблице 3.

Возможно применение неинвазивных биоинженерных методов (см. приложение С).

Таблица 3 — Исследование раздражения на коже человека, оценочная шкала

Описание ответной реакции

Баллы

Нет реакции

0

Слабо положительная реакция (обычно охарактеризованная легкой эритемой и/или сухостью на большей части обработанного участка)

1

Умеренно положительная реакция (обычно отчетливая эритема или сухость, возможно распространяющаяся за пределы обработанного участка)

2

Сильно положительная реакция (сильная и зачастую распространяющаяся эритема с отеком и/или образованием струпа)

3

Предполагается, что добровольцы с баллом 1 и более после воздействия длительностью менее 4 ч покажут более сильную реакцию при воздействии материала длительностью в 4 ч. Как только была получена оценка 1 балл или выше, необходимость подвергать реагирующего добровольца дальнейшей обработке материалом отпадает. Может понадобиться дальнейшее наблюдение для надлежащего ухода за добровольцем. В дополнение к наблюдению за раздражением любые другие эффекты должны быть отражены документально и полностью описаны. Например, добровольцы должны быть обучены делать комментарии в связи с нанесением аппликаций (например, сенсорные эффекты), а эксперты должны быть готовы отмечать немедленные ответы (например, крапивницу), когда аппликации удалены. Такие наблюдения могут не обозначать раздражающего эффекта, но они должны быть включены в отчет об исследовании, если замечены. При их важности они должны быть учтены в управлении исследованием для обеспечения надлежащего ухода за добровольцами.

Критическими полученными данными является число добровольцев, у которых появилось или ожидалось появление раздражения кожи после воздействия до 4 ч. Время, требующееся для выработки индивидуального ответа (если таковой есть), не является оцениваемой частью результатов; оно имеет отношение только к обеспечению надлежащего ухода за добровольцами.

6.4.4.3.6 Обоснование и выбор вещества для положительного контроля

Так как клинические исследования демонстрируют вариацию в своих ответах на раздражители, необходимо включить положительный контроль для определения адекватности группы испытуемых для обнаружения раздражающих эффектов исследуемого соединения. В качестве положительного контроля предпочтительно использовать 20 %-ный додецилсульфат натрия (SDS), так как его раздражающий эффект хорошо охарактеризован (см. С.1 приложения С). При обосновании возможно использовать другой контроль.

Стандартный положительный контроль может быть включен в качестве опорной точки. Кожное раздражение не является абсолютным феноменом. Любой материал может стать причиной кожного раздражения в зависимости от дозы, характера и длительности воздействия. Таким образом, исследования раздражения на коже человека почти всегда являются сравнительными и должны быть привязаны к известной химической раздражительности.

6.4.5 Данные и отчетность

6.4.5.1    Данные

Данные, включая результаты воздействия положительного и отрицательного контролей, должны быть суммированы в форме таблицы, показывающей для каждого индивидуума оценку раздражения через 24, 48 и 72 ч после удаления аппликации, а также любые другие наблюдаемые эффекты.

6.4.5.2    Оценка/интерпретация данных

Целью данного исследования является определение, представляет ли собой материал потенциальную опасность, ведущую к значительному раздражению кожи после острого воздействия. Таким образом, если материал вызывает раздражение кожи у объектов исследования с частотой, сходной

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

или превышающей положительный контроль, то он будет рассматриваться как значительный кожный раздражитель. С другой стороны, если материал вызывает раздражение кожи в объектах исследования с частотой, которая значительно меньше положительного контроля, то он не может рассматриваться в качестве значительного кожного раздражителя. Важно, чтобы предварительные данные, полученные в ходе наблюдения за добровольцами, не были спутаны с конечными данными, т.е. пропорцией субъектов, показывающих раздражающую реакцию. Также важно не путать индивидуальные различия в подверженности кожному раздражению с общим потенциалом исследуемого материала к раздражению кожи.

6.4.5.3 Отчет об исследовании

Отчет об исследовании должен содержать следующую информацию:

a)    этические аспекты и информационное согласие добровольцев;

b)    данные об исследуемом материале:

-    физические параметры и, где применимо, физико-химические свойства;

-    идентификационные данные;

c)    носитель (растворитель):

-    идентификация и обоснование выбора носителя, используемого для увлажнения твердого исследуемого материала;

d)    данные о добровольцах:

-    число добровольцев, обработанных исследуемым веществом;

-    распределение добровольцев по возрасту/полу;

e)    результаты:

-    уровень ответов в 0; 1,2; 24; 48 и 72 ч и в любое другое время наблюдений;

-    занесение в таблицу данных раздражительной реакции для каждого индивидуума в каждый временной период наблюдения (с суммированной частотой показателей раздражительной реакции после, например 24, 48 и 72 ч после удаления аппликации);

-    описание всех наблюдаемых реакций на раздражитель;

-    описание любых других эффектов в дополнение к наблюдаемому раздражению;

-    статистическую обработку результатов (сравнение с положительным контролем, например, используя точный критерий Фишера);

-    описание или ссылку на исследование на животных in vitro или in vivo, если таковое было проведено перед исследованием на добровольцах, включая детали процедуры и полученные результаты с материалами исследования и ссылками;

f)    обсуждение результатов.

7 Методы исследования гиперчувствительности замедленного типа

7.1    Выбор метода

Наиболее широко для исследования гиперчувствительности замедленного типа материалов применяют два метода: метод максимального сенсибилизирующего воздействия (GPMT) и метод закрытых накожных аппликаций (Buehler).

Метод максимального сенсибилизирующего воздействия более чувствителен и является предпочтительным для простых веществ. Этот метод применим для исследования экстрактов. Однако значимость этого метода показана для простых химических веществ.

Недавно был утвержден в качестве международного метод оценки простых химических веществ — местная проба на лимфоузле мыши (LLNA) как альтернатива оценке на коже морских свинок [83].

Примечание — Перечень альтернативных методов приведен в приложении С.

7.2    Выбор концентрации испытуемого образца

7.2.1 Общие сведения

Данные методы для исследования потенциального сенсибилизирующего действия простых химических веществ рекомендованы только для одного значения концентрации на каждое исследование. Однако результаты исследования сильно зависят от дозы введенного вещества. Если метод используется для оценки сенсибилизирующего действия экстракта, рекомендуется проведение количественного и качественного анализа его состава.

11

7.2.2    Индукционная фаза

Скорость сенсибилизации в большой степени зависит от индукционной дозы, которая должна вызывать умеренное раздражение кожи. Если порог раздражения кожи не достигнут, то выбирают более высокую концентрацию, но которая не должна сказываться на здоровье животного. Индукционную дозу выбирают на основе предварительных экспериментов. Неразбавленные экстракты на основе известных растворов для парентерального введения не нуждаются в предварительных исследованиях.

7.2.3    Провокационная фаза

Концентрацию провокационной пробы также определяют в ходе предварительных экспериментов на животных, ранее не подвергавшихся воздействию исследуемого материала. Концентрация провокационной пробы должна быть ниже порога концентрации, вызывающей раздражение кожи. Рекомендуется использовать более чем одну концентрацию для провокационной пробы для того, чтобы сделать более легкой оценку результатов (см. С.2 приложения С).

7.3    Прочие факторы, влияющие на полученные результаты исследований

При выборе метода учитывают биохимические и физические характеристики исследуемого материала. Метод максимального воздействия требует внутрикожного введения, следовательно, если исследуемый материал нельзя ввести внутрикожно, необходимо использовать альтернативный метод.

Выбранный растворитель должен повышать чувствительность метода благодаря частичному растворению материала и проникновению в более глубоко лежащие слои кожи. Концентрация исследуемого материала должна быть максимально возможной, но не оказывать влияния на интерпретацию результатов. Важным фактором при местном воздействии является концентрация материала на поверхности кожи, а не его объем. Большинство исследователей предпочитает растворы, потому что дисперсии склонны к образованию осадка, что затрудняет точное дозирование. Примерами носителей для внутрикожной инъекции служат солевой раствор, пропиленгликоль и растительное масло.

Расхождение в результатах, полученных разными лабораториями, возможно по нескольким причинам. В процедуре испытаний важно следующее: окружающие условия, место испытания на животном, метод удаления волос или химической депиляции, тип пластыря, объем исследуемого материала, качество окклюзии, время экспозиции и осмотра животных. Реактивность животных также изменяется в зависимости от генетических факторов и сезонных колебаний.

Сравнение подопытных животных с положительной реакцией с животными контрольных групп дает возможность адекватно выявить положительную реакцию, при этом тяжесть возникших патологических изменений также имеет значение для интерпретации результатов. Пограничные реакции в спорных случаях лучше всего разрешаются повторным исследованием. Гистопатологические исследования, как показано, не помогают в оценке результатов.

Чтобы гарантировать воспроизводимость и чувствительность испытательной процедуры, тесты с известными контактными аллергенами, например меркаптовензотиазолом (mercaptobenzothiazole), гексилом коричным альдегидом (hexyl cinnamic aldehyde) и бензокаином (benzocaine), должны регулярно выполняться.

7.4    Метод максимального сенсибилизирующего воздействия

7.4.1    Цель исследования

Исследование проводят для определения потенциальной способности материала оказывать сенсибилизирующее действие на кожу морских свинок.

7.4.2    Подготовка исследуемого материала

Твердые вещества (включая порошки) или жидкость готовят к исследованиям в соответствии с приложением А. Концентрация пробы должна быть максимально возможной, но не мешать интерпретации результатов (см. 7.4.4.2).

7.4.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых морских свинок-альбиносов одной линии, любого пола, массой до начала эксперимента 300—500 г. В эксперименте не используют беременных самок или животных после спаривания.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с ИСО 10993-2.

Предварительные тесты должны быть выполнены на одном наборе животных, чтобы определить оптимальные концентрации для исследования (см. 7.4.4.2).

Для исследования порошкообразных или жидких материалов используют не менее 10 животных на каждый исследуемый образец, и не менее пяти животных составляют контрольную группу. Для проведения предварительных исследований используют дополнительное число животных.

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

При исследовании экстрактов также используют не менее 10 животных для каждого экстракта, и не менее пяти морских свинок составляют контрольную группу для каждого раствора. Для проведения предварительных исследований используют дополнительное число животных.

Если испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных полностью отрицательное, маловероятно, что дальнейшее испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных даст положительные результаты. Однако, если проявятся какие-нибудь сомнительные реакции, перепроверка должна быть выполнена (см. 7.4.6). Если сомнительные реакции остаются, проводят новое исследование на минимум 20 опытных и 10 контрольных животных.

7.4.4 Проведение исследования

7.4.4.1    Подготовка

Шерсть на подопытных участках кожи тщательно выстригают до начала исследования.

Доза, вводимая внутрикожно в каждый исследуемый участок, составляет 0,1 мл.

Для аппликаций пропитывают испытуемой пробой фильтровальную бумагу или гигроскопичную марлевую подушечку (4—8 см2), которые прикладывают на выстриженные участки кожи и фиксируют окклюзионной повязкой вокруг тела животного.

7.4.4.2    Предварительные испытания

Предварительные испытания предназначены для того, чтобы определить концентрацию испытуемой пробы, которая будет использоваться в основном исследовании, см. 7.4.4.3.

Неразведенные экстракты при использовании известных растворителей не нуждаются в предварительном испытании.

Должно быть рассмотрено возможное влияние введения полного адъюванта Фрейнда (FCA) в сочетании с испытуемым материалом во время основного теста и, таким образом, возможное искажение результатов.

Согласно применению испытывают крайние разведения на трех животных.

Через 24 ч снимают повязку и образцы и оценивают состояние опытных участков на наличие эритемы и отека в соответствии с таблицей 4 (по классификации Magnusson и Kligman).

Для индукционной фазы в основном тесте выбирают самую высокую концентрацию, которая не вызывает более чем очень слабую эритему, и не оказывает общего отрицательного воздействия на животных.

Таблица 4 — Система классификации реакции кожи

Описание ответной реакции

Баллы

Нет видимых изменений

0

Дискретная или очаговая эритема

1

Умеренная и сплошная эритема

2

Интенсивная эритема и припухлость

3

7.4.4.3 Основной тест

7.4.4.3.1 Внутрикожная индукционная фаза

Каждому животному в выстриженные участки кожи (А, В и С) в соответствии с рисунком 2 проводят парные внутрикожные инъекции в объеме 0,1 мл.

А: Смесь полного адъюванта Фрейнда с выбранным растворителем в соотношении V/V = 50/50. Необходимо использовать физиологический солевой раствор (в соответствии с Британской Фармакопеей, Фармакопеей США или эквивалентный) для водорастворимых материалов.

В: Испытуемый образец (неразведенный экстракт); контрольным животным вводят только растворитель.

С: Испытуемый образец в концентрации, выбранной для участка В, эмульгированный с полным адъювантом Фрейнда в соотношении VA/= 50/50 и растворителем (50 %); контрольным животным вводят только эмульсию контрольного раствора с адъювантом.

13

1


1 — голова; 2 — 0,1 мл внутрикожная инъекция (см. 7.4.4.3.1); 3 — выстриженная внутрилопаточная область; 4 — хвост

Рисунок 2 — Расположение участков внутрикож-ной инъекции

7.4.4.3.2    Местная индукционная фаза

Через семь дней (+1 день) после внутрикожной индукционной фазы начинают накожные аппликации исследуемого материала на участки инъекций, на внутрилопаточную область каждого животного, используя для этого пропитанные кусочки фильтровальной бумаги или марли площадью 8 см2.

При этом используют концентрацию согласно 7.4.4.3.1 для участка В. Если максимальная концентрация, которая может быть достигнута в 7.4.4.3.1, не вызывает раздражения, предварительно обрабатывают область аппликации 10 %-ным раствором натрия додецил сульфата, вмассировав в кожу за (24 + 2) ч до аппликации. Накладывают окклюзионную повязку. Удаляют повязку через (48 ± 2) ч.

Предпочтительны свежеприготовленные экстракты. Если экстракты приготовлены ранее чем за 24 ч, то стабильность экстрактов при хранении должна быть проверена.

Процедуру с контрольными животными повторяют в том же режиме, используя только контрольный раствор.

7.4.4.3.3    Провокационная фаза

Через 14 дней (+ 1 день) после завершения местной индукционной фазы провоцируют всех опытных и контрольных животных испытуемым материалом. Для этого проводят аппликации исследуемого материала в концентрации согласно 7.4.4.3.1 для участка С на интактные участки кожи бока каждого животного, используя фильтровальную бумагу или гигроскопичную марлевую подушечку. Разбавления этой концентрации могут также быть наложены к другим интактным участкам подобным образом. Накладывают фиксирующую окклюзионную повязку. Удаляют повязку и аппликации через (24 + 2) ч.

7.4.5    Обследование животных

Осматривают поверхность участков, где проводили провокационную пробу подопытных и контрольных животных, через 24; 48 ч после снятия повязки. Для визуализации реакций кожи рекомендуют использование естественного или освещения с полным спектром.

Описывают и оценивают степень кожной реакции, включая эритему и отек, в соответствии с таблицей 4 (по Magnusson и Kligman) для каждого участка и в каждый интервал времени наблюдения.

Настоятельно рекомендуется, чтобы описание было сделано без учета предварительного воздействия, чтобы минимизировать погрешность в оценке результатов.

7.4.6    Оценка результатов

Если оценка в баллах, полученная в подопытной группе, равна 1 или выше, о наличии сенсибилизации говорят в том случае, если у контрольных животных этот показатель менее 1 балла. Если оценка в баллах у контрольных животных равна 1 или выше, то реакция кожи подопытных животных, которая превышает самую сильную реакцию, наблюдаемую в контроле, является результатом сенсибилизации.

Если реакция сомнительная, проводят дополнительную провокационную пробу. Результат испытания может быть представлен как частота положительных результатов провокационной пробы в опытной и контрольной группах.

Иногда в подопытной группе у большего, чем в контроле, числа животных выявлена ответная реакция, однако интенсивность реакции не выше, чем у контрольных животных. В этом случае проводят дополнительную провокационную пробу для получения более четкого ответа организма. При необходимости дополнительную провокационную пробу проводят в срок от 1 до 2 нед после первой провокации. При этом применяют описанный выше метод, используя другой бок животного.

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

Рекомендуется использовать новую контрольную группу с введением адъюванта.

7.4.7 Отчет об исследовании

В отчет об исследовании включают:

a)    описание исследуемого материала или изделия;

b)    предполагаемый способ применения материала или изделия;

c)    подробное описание подготовки образца к исследованию;

d)    описание экспериментальных животных;

e)    способ нанесения испытуемых проб;

f)    маркировку участков введения и их описание;

д) данные наблюдений;

h) оценку результатов.

7.5 Метод закрытых накожных аппликаций для выявления гиперчувствительности

замедленного типа

7.5.1    Цель исследования

Оценивают потенциальную способность материала оказывать кожное сенсибилизирующее действие на морских свинках.

7.5.2    Подготовка испытуемого образца

Если материал не может быть использован как есть, он должен быть подготовлен в соответствии с приложением А, с использованием полярного и неполярного растворителей. Форма и размеры конкретных устройств (например электродов) должны быть учтены.

7.5.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют здоровых молодых половозрелых морских свинок-альбиносов одной линии, любого пола, массой до начала эксперимента 300—500 г. В эксперименте не используют беременных самок или животных после спаривания.

Акклиматизацию и содержание животных осуществляют в соответствии с ИСО 10993-2.

Предварительные тесты должны быть выполнены на одном наборе животных, чтобы определить оптимальные концентрации для исследования (см. 7.5.4.2).

Для исследования порошкообразных или жидких материалов используют не менее 10 животных на каждый исследуемый образец, и не менее пяти животных составляют контрольную группу. Дополнительное число животных используют для проведения предварительных исследований.

При исследовании экстрактов также используют не менее 10 животных для каждого экстракта, и не менее пяти морских свинок составляют контрольную группу для каждого раствора. Дополнительное число животных используют для предварительных исследований.

Если испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных полностью отрицательное, маловероятно, что дальнейшее испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных даст положительные результаты. Однако, если проявятся какие-нибудь сомнительные реакции, должна быть выполнена перепроверка (см. 7.5.6). Если сомнительные реакции остаются, проводят новое исследование на минимум 20 опытных и 10 контрольных животных.

7.5.4    Проведение исследования

7.5.4.1    Подготовка

Шерсть на подопытных участках кожи тщательно выстригают до начала эксперимента. Для всех способов применения пропитывают исследуемым материалом фильтровальную бумагу или гигроскопичную марлевую подушечку соответствующих размеров, прикладывают ее к выстриженному участку и фиксируют окклюзионной повязкой на 6 ч.

Чтобы обеспечить плотное прилегание испытуемого образца к коже, животное рекомендуется фиксировать.

Если используют обертывание, его адекватность должна быть оценена в каждом эксперименте.

7.5.4.2    Предварительные испытания

Предварительные испытания проводят для того, чтобы определить концентрацию исследуемого материала, которая будет использована в основном испытании в соответствии с 7.5.4.3.

Медицинские изделия, предназначенные для типичного использования, и неразведенные экстракты, полученные при использовании обычных растворителей, не требуется подвергать предварительному тестированию.

Для всех способов применения пропитывают исследуемым материалом фильтровальную бумагу или гигроскопичную марлевую подушечку соответствующих размеров, прикладывают ее к выстриженному участку и фиксируют окклюзионной повязкой на 6 ч.

15

Описывают и оценивают степень кожной реакции, включая эритему и отек, в соответствии с таблицей 4 (по Magnusson и Kligman) для каждого участка через 24 и 48 ч после удаления повязки.

Выбирают:

a)    для индукционной фазы в основном испытании — наивысшую концентрацию, которая вызывает незначительную эритему, но не оказывает общего отрицательного влияния на организм животного;

b)    для провокационной фазы в основном эксперименте — наивысшую концентрацию, которая не вызывает эритемы.

7.5.4.3 Основное испытание

7.5.4.3.1    Индукционная фаза

Наносят испытуемый образец актуальным способом на выстриженную область левой верхней части спины каждого животного, используя адекватный путь и концентрации, выбранные по 7.5.4.2, перечисление а). Удаляют фиксирующие приспособления и повязку через 6 ч. Повторяют эту процедуру последовательно три дня в неделю в течение трех недель. Контрольным животным проводят все процедуры в том же режиме, используя при этом только контрольный раствор.

7.5.4.3.2    Провокационная фаза

Через 14 дней (+ 1 день) после последней индукционной аппликации проводят провокационную пробу с испытуемым материалом. Провокационную пробу проводят способом однократной местной аппликации на выстриженный интактный участок кожи каждого животного, используя соответствующий исследуемый материал в концентрации, выбранной в 7.5.4.2, перечисление Ь). Удаляют фиксирующие приспособления и повязку через 6 ч.

7.5.5    Обследование животных

Через (24 + 2) ч после первой или второй провокационной пробы проводят:

a)    удаление шерсти у всех животных на подопытных участках и окружающей их коже с помощью депилятора, имеющегося в продаже, в соответствии с прилагаемой к нему инструкцией или

b)    выбривание шерсти у всех животных на подопытных участках и окружающей их коже.

Полностью обмывают теплой водой лишенную волос область и высушивают кожу полотенцем

перед возвращением животных в клетки. Не менее чем через 2 ч после описанной выше процедуры удаления шерсти оценивают состояние исследуемых участков в соответствии с таблицей 4. Осмотр повторяют через (48 + 2) ч после провокационного воздействия.

Использование естественного или освещения с полным спектром рекомендуют для визуализации реакций кожи.

Настоятельно рекомендуется, чтобы описание было сделано без учета предварительного воздействия, чтобы минимизировать погрешность в оценке результатов.

7.5.6    Оценка результатов

Если оценка в баллах, полученная в подопытной группе, равна 1 или выше, о наличии сенсибилизации говорят в том случае, если у контрольных животных этот показатель менее 1 балла. Если оценка в баллах у контрольных животных равна 1 или выше, то реакция кожи подопытных животных, которая превышает самую сильную реакцию, наблюдаемую в контроле, является результатом сенсибилизации.

Если реакция сомнительная, проводят дополнительную провокационную пробу. Результат испытания может быть представлен как частота положительных результатов провокационной пробы в опытной и контрольной группах.

Иногда в подопытной группе у большего, чем в контроле, числа животных выявлена ответная реакция, однако интенсивность реакции не выше, чем у контрольных животных. В этом случае проводят дополнительную провокационную пробу для получения более четкого ответа организма. При необходимости дополнительную провокационную пробу проводят в срок от 1 до 2 нед после первой провокации. При этом применяют описанный выше метод, используя другой бок животного.

Рекомендуется использовать новую нативную контрольную группу.

7.5.7    Отчет об исследовании

В отчет об исследовании включают:

a)    описание исследуемого материала или изделия;

b)    предполагаемый способ применения материала или изделия;

c)    подробное описание подготовки образца к исследованию;

d)    описание экспериментальных животных;

e)    способ нанесения испытуемых проб;

f)    маркировку участков введения и их описание;

д) данные наблюдений;

h) оценку результатов.

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

Содержание

1    Область применения............................................1

2    Нормативные ссылки............................................1

3    Термины и определения..........................................2

4    Основные принципы поэтапного подхода.................................2

5    Предварительный анализ исследуемых образцов............................3

5.1    Общие сведения............................................3

5.2    Виды материалов...........................................3

5.3    Данные о химическом составе....................................3

5.4    Характеристика материалов.....................................4

6    Методы исследования раздражающего действия............................4

6.1    Методы in vitro.............................................4

6.2    Факторы, влияющие на планирование исследования и выбор методов in vitro..........4

6.3    Исследование раздражающего действия на кожу экспериментальных животных........5

6.4    Исследование раздражающего действия на коже человека....................8

7    Методы исследования гиперчувствительности замедленного типа..................11

7.1    Выбор метода.............................................11

7.2    Выбор концентрации испытуемого образца............................11

7.3    Прочие факторы, влияющие на полученные    результаты исследований.............12

7.4    Метод максимального сенсибилизирующего    воздействия....................12

7.5    Метод закрытых накожных аппликаций для выявления гиперчувствительности замедленного

типа..................................................15

8    Ключевые факторы при интерпретации результатов исследований.................17

Приложение А (обязательное) Подготовка материалов для исследования раздражающего

и сенсибилизирующего действия............................18

Приложение В (справочное) Дополнительные методы исследования раздражающего действия . . 19

Приложение С (справочное) Дополнительная информация......................31

Приложение D (справочное) Сведения о соответствии национальных стандартов Российской

Федерации ссылочным международным стандартам.................34

Библиография................................................35

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

8 Ключевые факторы при интерпретации результатов исследований

Методы, включенные в настоящий стандарт, являются важным инструментом при разработке безопасной продукции при условии, что их выполняет и интерпретирует обученный персонал.

Обнаруженное любым из методов сенсибилизирующее действие не является причиной невозможности применения данного материала или изделия, так как объем образца при проведении испытаний может существенно превышать объем, используемый в реальных условиях. Найденный любым утвержденным методом отрицательный эффект свидетельствует о необходимости дальнейшего анализа, что позволит уменьшить риск исследований на коже человека.

При интерпретации результатов не следует опираться только на исследования, полученные методами, изложенными в настоящем стандарте. Отрицательный результат не всегда исключает возможность того, что продукция может вызывать аллергическую реакцию кожи. Как отрицательный, так и положительный результаты должны быть тщательно проверены для исключения ложного вывода. Для обоснования результата его необходимо проверить, используя другие источники информации, такие как:

a)    претензии со стороны изготовителя и покупателя;

b)    опыт работы с изделиями, содержащими сходные составляющие;

c)    результаты диагностических тестов в дерматологических клиниках;

d)    ретроспективные эпидемиологические данные.

17

Введение

Соблюдение положений стандартов серии ИСО 10993 «Оценка биологического действия медицинских изделий» позволит обеспечить системный подход к исследованию биологического действия медицинских изделий.

Целью этих стандартов не является безусловное закрепление единообразных методов исследований и испытаний за группами однородных медицинских изделий в соответствии с принятой классификацией их по виду и длительности контакта с организмом человека. Поэтому планирование и проведение исследований и испытаний должны осуществлять специалисты, имеющие соответствующую подготовку и опыт в области санитарно-химической, токсикологической и биологической оценок медицинских изделий.

Стандарты серии ИСО 10993 являются руководящими документами для прогнозирования и исследования биологического действия медицинских изделий на стадии выбора материалов, предназначенных для их изготовления, а также для исследований готовых изделий.

В серию ИСО 10993 входят следующие части под общим названием «Оценка биологического действия медицинских изделий»:

Часть 1 — Оценка и исследования;

Часть 2 — Требования к обращению с животными;

Часть 3 — Исследования генотоксичности, канцерогенности и токсического действия на репродуктивную функцию;

Часть 4 — Исследование изделий, взаимодействующих с кровью;

Часть 5 — Исследование на цитотоксичность: методы in vitro;

Часть 6 — Исследование местного действия после имплантации;

Часть 7 — Остаточное содержание этиленоксида после стерилизации;

Часть 9 — Основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деградации;

Часть 10 — Исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия;

Часть 11 — Исследование общетоксического действия;

Часть 12 — Приготовление проб и стандартные образцы;

Часть 13 — Идентификация и количественное определение продуктов деградации полимерных медицинских изделий;

Часть 14 — Идентификация и количественное определение продуктов деградации изделий из

керамики;

Часть 15 — Идентификация и количественное определение продуктов деградации изделий из металлов и сплавов;

Часть 16 — Моделирование и исследование токсикокинетики продуктов деградации и вымывания;

Часть 17 — Установление пороговых значений для вымываемых веществ;

Часть 18 — Исследование химических свойств материалов;

Часть 19 — Исследование физико-химических, морфологических и топографических свойств материалов;

Часть 20 — Принципы и методы исследования иммунотоксического действия медицинских изделий.

Настоящий стандарт гармонизирован со многими стандартами и руководствами, включая BS 5736, Руководящие документы OECD, Американскую фармакопею и Европейскую фармакопею. Это позволяет настоящему стандарту быть основным документом для выбора и проведения исследований, позволяющих оценить раздражающее и сенсибилизирующее действия, относящиеся к безопасности медицинских материалов и изделий.

IV

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ МЕДИЦИНСКИЕ ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕДИЦИНСКИХ ИЗДЕЛИЙ

Часть 10

Исследования раздражающего и сенсибилизирующего действия

Medical devices. Biological evaluation of medical devices.

Part 10. Tests for irritation and delayed-type hypersensitivity

Дата введения — 2010 — 09 — 01

1    Область применения

Настоящий стандарт описывает методы оценки возможного раздражающего и сенсибилизирующего действия медицинских изделий и материалов, входящих в их состав.

Настоящий стандарт включает в себя:

a)    требования к описанию исследуемых образцов;

b)    детальное описание методов исследования;

c)    ключевые факторы, влияющие на интерпретацию полученных результатов.

В приложении А приведены инструкции по подготовке образцов для проведения вышеуказанных исследований.

Настоящий стандарт распространяется на категории изделий в соответствии с ИСО 10993-1. Подготовку образцов к исследованиям проводят в соответствии с приложением А.

В приложении В приведены дополнительные специфические методы исследования для изделий, используемых интрадермально, орально, вагинально, контактирующих с пенисом, в офтальмологии.

2    Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие международные стандарты:

ИСО 10993-1:1997* Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 1. Оценка и исследования

ИСО 10993-2 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 2. Требования к обращению с животными

ИСО 10993-9 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 9. Основные принципы идентификации и количественного определения потенциальных продуктов деструкции

ИСО 10993-12 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 12. Приготовление проб и стандартные образцы

ИСО 10993-13 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 13. Идентификация и количественное определение продуктов деструкции полимерных медицинских изделий

ИСО 10993-14 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 14. Идентификация и количественное определение продуктов деструкции изделий из керамики

ИСО 10993-15 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 15. Идентификация и количественное определение продуктов деструкции изделий из металла и сплавов

* Заменен на ИСО 10993-1:2003.

Издание официальное

ИСО 10993-18 Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 18. Исследование химических свойств материалов

ИСО 14155-1 Клинические исследования медицинских изделий. Часть 1. Общие требования

ИСО 14155-2 Клинические исследования медицинских изделий. Часть 2. Протокол клинических исследований

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ИСО 10993-1, а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    аллерген: Вещество или материал, которые способны вызывать специфичную гиперчувствительность таким образом, что при последующем воздействии вещества или материала с аналогичной характеристикой возникает аллергический эффект.

3.2    контрольный раствор: Порция раствора, приготовленная также, как и идентичный раствор, используемый для подготовки исследуемых образцов, предназначенная для определения фонового ответа растворителя.

3.3    провокационная проба: Процесс, следующий за фазой индукции, в котором оценивается иммунологический эффект последующих воздействий индуцируемого материала на организм.

3.4    коррозия: Медленное разрушение структуры или материала ткани (например, действие сильного раздражителя).

3.5    гиперчувствительность замедленного типа: Индукция специфически опосредованной Т-лимфоцитами иммунологической памяти на аллерген, воздействующий на организм, приводящей к реакции гиперсенсибилизации замедленного типа после повторного контакта с аллергеном.

3.6    доза: Объем, вводимый в тест-систему за один прием.

3.7    эритема: Покраснение кожи или слизистой оболочки.

3.8    струп: Корка или бесцветная пленка на коже.

3.9    индукция: Процесс, ведущий кобразованию cte novo измененного состояния иммунологической реактивности индивидуума на конкретный материал.

3.10    раздражитель: Агент, производящий раздражение.

3.11    раздражение: Локализованный неспецифический воспалительный ответ на однократное, повторное или продолжительное применение вещества/материала.

3.12    некроз: Гибель одной или более клеток, либо части ткани или органа, ведущая к необратимому поражению.

3.13    отрицательный контроль: Материал или вещество, которое при исследовании описанным путем, демонстрирует пригодность для процедуры получения воспроизводимого соответствующего отрицательного, нереактивного или фонового ответа в тест-системе.

3.14    отек: Увеличение объема ткани вследствие абнормальной инфильтрации жидкости.

3.15    положительный контроль: Материал или вещество, которое при исследовании описанным путем, демонстрирует пригодность для процедуры получения воспроизводимого соответствующего положительного или реактивного ответа в тест-системе.

3.16    растворитель: Материал или вещество, используемое для смачивания, разбавления, сус-пензирования, экстрагирования или растворения материала испытуемого вещества (например, химикат, наполнитель, среда, и т.д.).

3.17    исследуемый материал: Материал, изделие, его часть или компонент, пробу которых подвергают биологическому или химическому испытанию.

3.18    испытуемая проба: Экстракт или порция исследуемого материала, которую подвергают биологическому или химическому испытанию.

3.19    изъязвление: Открытая язва, представляющая разрушение поверхностных тканей.

4    Основные принципы поэтапного подхода

Доступные методы для исследования реакций раздражения или сенсибилизации исследуемых образцов на кожу были разработаны только относительно раздражающего и сенсибилизирующего действия. В настоящем стандарте предложен поэтапный подход, состоящий частично или полностью из следующих этапов:

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

a)    характеристика исследуемого материала, включающая описание химических свойств и анализ испытуемого образца в соответствии с основными положениями ИСО 10993-9; ИСО 10993-13; ИСО 10993-14; ИСО 10993-15 и ИСО 10993-18;

b)    обзор литературы, содержащей оценку химических и физических свойств, а также информацию о потенциально возможном раздражающем и сенсибилизирующем действии компонента исследуемого материала либо о сходных по структуре химических реагентов или веществ;

c)    анализ преимуществ существующих методов исследования в условиях in vitro по сравнению с методами in vivo с целью замены последних на новые, информативные и надежные методы in vitro;

d)    исследования в условиях in vivo на экспериментальных животных.

Примечание — Острые эксперименты на животных должны проводиться для материалов, которые могут и не относиться к сильным раздражающим или сенсибилизирующим агентам при их анализе на этапах а) или Ь). Материалы, не проявившие острого раздражающего эффекта при однократном воздействии на кожу, далее подвергают исследованиям при многократном воздействии.

Метод положительного контроля для оценки сенсибилизирующего действия [7] необходимо проводить в исследовательской лаборатории, по крайней мере, каждые шесть месяцев для подтверждения надежности используемых методов исследований и демонстрации положительной реакции;

e)    неинвазивные методы исследования на добровольцах.

Если исследуемый материал не проявляет токсического, раздражающего и сенсибилизирующего действия при испытаниях на животных, то его раздражающее действие может быть исследовано на коже добровольцев.

5 Предварительный анализ исследуемых образцов

5.1    Общие сведения

Необходимо подчеркнуть, что результатом предварительного анализа может быть заключение о нецелесообразности проведения исследований на раздражающее и сенсибилизирующее действие.

Общие требования приведены в разделе 5 ИСО 10993-1.

5.2    Виды материалов

5.2.1    Предварительное описание

Необходимо помнить, что в процессе изготовления и сборки медицинских изделий могут быть использованы различные химические компоненты, например, смазочные материалы или покрытия для оснастки. Кроме того, в химических компонентах, участвующих в процессе изготовления изделия, в конечной продукции могут присутствовать остаточные количества адгезивов, растворителей и стерилизующих агентов, а также продуктов реакции, образующихся в процессе стерилизации. Насколько велик риск того, что эти вещества опасны для здоровья, зависит от склонности к разрушению или деградации конечного изделия.

5.2.2    Керамики, металлы и сплавы

Данные материалы обычно менее сложны относительно входящих в их состав химических веществ по сравнению с полимерами и материалами из биотканей.

5.2.3    Полимеры

Как правило, данные материалы имеют существенно более сложный состав по сравнению с описанием, приведенным в 5.2.1. Может присутствовать целый ряд примесей, степень полимеризации может варьироваться в широких пределах.

5.2.4    Материалы из биотканей

Эта самая сложная по составу группа материалов. Эти материалы часто содержат остаточные количества веществ, появляющихся в процессе изготовления (например, сшивающие и антимикробные агенты). По плотности образцы одного и того же биологического материала могут отличаться.

Методы настоящего стандарта не предназначены для исследования биотканей, и поэтому они менее адекватны для исследования их раздражающего и сенсибилизирующего действия, чем для материалов другой природы. Например, методы настоящего стандарта не рассматривают сенсибилизирующее действие сшивающих агентов.

5.3 Данные о химическом составе

5.3.1 Общие сведения

Должен быть полностью определен качественный химический состав материала. Необходимо иметь количественные данные относительно биологической безопасности материала. Если количес-

3

твенные данные по биологической безопасности отсутствуют, то этот факт должен быть обоснован и документирован.

5.3.2 Существующие источники сведений о химическом составе

Качественная и количественная информация о составе должна быть получена от поставщика или изготовителя материала.

Для полимеров часто требуется доступ к информации, защищенной правами на интеллектуальную собственность. Для этого необходим договор о конфиденциальности на передачу и использование информации.

Качественная информация о добавках, используемых в процессе переработки (например, вещества, облегчающие высвобождение изделия из формы), также может быть получена от компетентного представителя производства, включая наименование технологических стадий и состав оборудования.

При отсутствии каких-либо сведений о составе необходимо поданным литературы найти для аналогичного материала и добавок рекомендуемые соответствующие методы для их анализа.

Примечание — Состав керамики, металлов и сплавов должен быть определен в соответствии с соответствующими стандартами ИСО 10993 или ASTM (Американского общества по исследованию материалов). Однако, чтобы получить полные и детальные данные о качественном и количественном составах материала, необходимо затребовать их от поставщика или изготовителя исходного материала, а также получить сведения о дополнительных веществах, используемых в процессе переработки. Могут быть использованы также досье на материал или другие источники, если они доступны.

5.4 Характеристика материалов

Если информация о детальном составе материала недоступна или существует только качественная информация, или может ожидаться, что новые или неизвестные вещества могут появиться в процессе производства, может возникнуть необходимость проведения анализа материала.

Необходимо использовать аналитические подходы, соответствующие исследуемому материалу. Все аналитические методики должны быть обоснованы, утверждены и отражены в отчете. Если значение pH материала (химических растворов) не известно заранее, то оно должно быть измерено, по возможности, до испытаний in vivo или in vitro. Химический анализ (качественный и количественный) экстрактов может предоставить полезную информацию. В данном контексте необходимо подчеркнуть, что химический анализ экстракта может дать результаты, делающие исследование раздражительности и сенсибилизации ненужным, так как в них уже может содержаться информация по раздражающему и сенсибилизирующему потенциалу соединений, присутствующих в растворе экстракта.

6 Методы исследования раздражающего действия

6.1    Методы in vitro

Два метода in vitro, исследование на коже крыс методом чрескожного электрического сопротивления (TER) и EPISKIN тест, относятся к международным, официально утвержденным альтернативным методам для оценки коррозионного действия на кожу химических веществ. Однако, в настоящее время нет утвержденных методов по исследованию раздражающего действия материалов на кожу.

Национальные и международные организации продолжают работу по разработке и утверждению методов in vitro по раздражающему действию на кожу параллельно с поиском серии альтернативных методов; продолжается разработка методов количественной оценки реакции животных и человека для более четкого определения времени завершения исследования с использованием неинвазивных методов, см. С.1 приложения С.

6.2    Факторы, влияющие на планирование исследования и выбор методов in vitro

Исследование раздражающего действия медицинских изделий проводят с конечным продуктом и (или) с его экстрактом.

На результаты изучения раздражающего действия оказывают влияние следующие факторы:

-    природа изделия, используемого в аппликационном исследовании;

-    доза исследуемого материала;

-    способ аппликации испытуемого материала;

-    степень окклюзии;

-    место аппликации;

-    продолжительность и число экспозиций;

-    методика оценки результатов исследований.

4

ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009

Дополнительная информация приведена в приложении С.

Определенная свобода исследователей в выборе методов и желание модифицировать их для повышения чувствительности в соответствии с условиями применения материалов, частотой и длительностью их использования требуют сравнения результатов исследований, полученных разными организациями. Описанные методики используют для исследования материалов и изделий, имеющих многократный и (или) длительный контакт с организмом. После консультаций с изготовителем исследователь должен спланировать эксперимент таким образом, чтобы его продолжительность и (или) концентрация испытуемого вещества превышали значения, применяемые в медицинской практике. Увеличение концентрации экстракта из материала учитывают при анализе результатов эксперимента.

При использовании материалов, контактирующих со здоровой и тем более поврежденной кожей, не оправдан даже незначительный риск, однако многие потенциальные раздражители находят широкое применение в связи с преобладанием их полезных свойств.

Следует отметить, что если значение pH испытуемого образца меньше или равно 2,0 или больше или равно 11,5, материал признают потенциальным раздражителем и дальнейшие исследования его не проводят. Экспериментально доказано, что на возникновение серьезных повреждений влияют также концентрация испытуемого вещества, время контакта и его химические и физические свойства. Если при проведении исследований доза материала сознательно завышена, то незначительное неблагоприятное воздействие последнего не всегда является основанием для его запрещения.

6.3 Исследование раздражающего действия на кожу экспериментальных животных

6.3.1    Принцип метода

Оценивают потенциальную способность материала оказывать раздражающее действие на кожу животного. В качестве экспериментальной модели предпочтительнее использовать кролика.

6.3.2    Исследуемый материал

Твердые вещества (включая порошки) или жидкость готовят к исследованиям в соответствии с приложением А.

Для демонстрации чувствительности оценки желательно, дополнительно к отрицательному контролю, ввести положительный контроль для каждого животного. Так как образцы и контроль исследуют в двух местах каждый, то следует применять максимально не более двух исследуемых материалов с контролем на одном животном с использованием при аппликации одного и того же растворителя.

6.3.3    Экспериментальные животные и их содержание

Используют половозрелых молодых кроликов-альбиносов одной линии, любого пола, массой не менее 2 кг.

Акклиматизацию и уход за животными осуществляют в соответствии с ИСО 10993-2.

При ожидаемой реакции раздражения для первичной оценки исследуемого материала используют одно животное. Если наблюдается хорошо выраженная положительная реакция (оценочный балл больше двух либо для эритемы, либо для отека, см. таблицу 1), дальнейшие исследования проводят минимум на двух животных.

Если возникновение реакции раздражения маловероятно, то первичную оценку проводят на трех животных.

Если результаты исследований, полученные не менее чем на трех животных, сомнительны или неясны, проводят дополнительные исследования.

6.3.4    Проведение исследований

6.3.4.1    Подготовка животных

Критическим фактором исследования является состояние кожи животного. Используют только животных со здоровой неповрежденной кожей.

За 4—24 ч до начала проведения исследований выстригают шерсть на участках площадью примерно 10 х 15 см по обеим сторонам спины для аппликации и наблюдения.

Примечание — Сбривать шерсть на подготовленных участках необязательно, так как практика показала, что это не влияет на результаты исследований.

При многократном воздействии исследования проводят в соответствии с 6.3.4.2, 6.3.4.3 или

6.3.4.4 в течение не более 21 сут.

6.3.4.2    Аппликация порошкообразных и жидких образцов

Наносят 0,5 г или 0,5 мл исследуемого материала на кожу с каждой стороны, как показано на рисунке 1.

Порошкообразный исследуемый материал перед нанесением слегка смачивают водой или другим подходящим растворителем.

5

Участки с нанесенным материалом сверху покрывают кусочками ткани или марли, сложенными вчетверо, площадью 25 х 25 мм и фиксируют полуокклюзионной или окклюзионной повязкой. Время экспозиции — не менее 4 ч. Удаляют защитную повязку и кусочки ткани, отмечают положение участков. Затем удаляют остатки испытуемого вещества соответствующими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

1

1 — голова; 2 - исследуемая область; 3 — контрольная область; 4 — выстриженная дорсальная область; 5 — контрольная область; 6 — исследуемая область; 7 — хвост

Рисунок 1 — Расположение областей для аппликации

6.3.4.3    Аппликация экстрактов и растворителя

Смачивают соответствующим экстрактом сложенный вчетверо кусочек марли (0,5 мл на кусочек), прикладывают его к участку кожи с каждой стороны спины животного, как показано на рисунке 1. Контрольный кусочек марли, смоченный растворителем, помещают на кожу другого участка.

Покрывают места аппликаций полуокклюзионной или окклюзионной повязкой не менее чем на 4 ч. Затем снимают фиксирующую повязку и отмечают положение участков, удаляют остатки испытуемого вещества подходящими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

6.3.4.4    Аппликация твердых образцов

Прикладывают образцы исследуемого материала на кожу спины каждого кролика с каждой стороны позвоночника, как показано на рисунке 1. Подобным образом прикладывают контрольные образцы на кожу спины каждого кролика. Поверхность твердых образцов (которые при необходимости могут быть измельчены) смачивают водой или другим растворителем, что позволяет обеспечить более плотное прилегание образца к коже (см. приложение А). Если в опыте используют растворитель, учитывают его влияние на результаты эксперимента.

Покрывают исследуемый образец защитным покрытием размерами 25 х 25 мм (таким как подушечка ткани или марли) и фиксируют места аппликации полуокклюзионной или окклюзионной повязкой не менее чем на 4 ч. Затем снимают повязку, отмечают положение участков, удаляют остатки исследуемых материалов подходящими средствами, например теплой водой или другим растворителем, не оказывающим раздражающего действия, и насухо промокают.

6.3.5 Обследование животных

6.3.5.1    Общие положения

Наблюдение за реакцией кожи осуществляют при естественном или близком к естественному искусственном освещении. Описывают и оценивают степень кожной реакции, включая эритему и отек, в соответствии с классификацией, представленной в таблице 1, для каждого участка и каждого интервала времени наблюдения.

Регистрируют результаты в отчете об исследовании.

Примечание — В некоторых случаях можно применять гистологические и неинвазивные методы исследования.

6.3.5.2    Однократный аппликационный метод

При однократном воздействии регистрируют состояние каждого участка кожи, где проводили аппликации, через 1, 24, 48 и 72 ч после удаления образцов. Более длительное наблюдение (но не более 14 сут) проводят при возникновении стойких изменений кожи для определения их обратимости.