Устанавливает метод определения количества колониеобразующих единиц живых микрооргнаизмов - дрожжевых грибов, плесневых грибов и бактерий, которые могут существовать на корковых пробках и при определенных условиях могут расти в спиртовой среде.
Стандарт распространяется на корковые пробки, которые подвергались стерилизации.
Переиздание. Март 2007 г.
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Сущность метода
4 Реактивы и культуральные среды
5 Аппаратура
6 Отбор проб
7 Условия испытаний
8 Экстрагирование
9 Проведение испытаний
10 Контрольные исследования
11 Инкубация
12 Обработка результатов
13 Отчет об испытаниях
8 страниц
Дата введения | 01.01.2006 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.09.2013 |
Завершение срока действия | 01.07.2018 |
Актуализация | 01.01.2021 |
26.07.2005 | Утвержден | Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии | 198-ст |
---|---|---|---|
Разработан | ТК 415 Средства укупорочные | ||
Издан | Стандартинформ | 2005 г. | |
Издан | Стандартинформ | 2007 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ISO 10718:2002
Cork stoppers — Enumeration of colony-forming units of yeasts, moulds and bacteria capable of growth in an alcoholic medium
(IDT)
Издание официальное
2
Москва Стандартинформ 2005 |
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
1 ПОДГОТОВЛЕН И ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 415 «Средства укупорочные» на основе собственного аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 3
2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 июля 2005 г. № 198-ст
3 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 10718:2002 «Корковые пробки — Определение количества колониеобразующих единиц дрожжевых грибов, плесневых грибов и бактерий, способных расти в спиртовой среде» (ISO 10718:2002 «Cork stoppers — Enumeration of colony-forming units of yeasts, moulds and bacteria capable of growth in an alcoholic medium»). Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004 (подраздел 3.5)
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет
© Стандартинформ, 2005
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
Cork stoppers.
Method for enumeration of colony-forming living microorganisms capable of growth in an alcoholic medium
Дата введения — 2006—01—01
Настоящий стандарт устанавливает метод определения количества колониеобразующих единиц живых микроорганизмов — дрожжевых грибов, плесневых грибов и бактерий, которые могут существовать на корковых пробках и при определенных условиях могут расти в спиртовой среде.
Настоящий стандарт распространяется на корковые пробки, которые подвергались стерилизации.
В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт:
ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218:1996) Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочного стандарта в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) документом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
Сущность метода заключается в определении количества колоний живых микроорганизмов (дрожжевых грибов, плесневых грибов и бактерий) с помощью инкубации в культуральной среде после извлечения их из спиртового раствора, содержащего винную кислоту, путем мембранной фильтрации.
4.1 Рекомендуемый физиологический раствор (0,85%-ный NaCI) или раствор Рингера (1/4Х) следующего состава:
хлорид натрия 2,25 г/л;
хлорид калия 0,105 г/л;
хлорид кальция-6Н20(СаС12-6Н20) 12 г/л;
бикарбонат натрия 0,05 г/л;
конечный pH (полученный определением в смеси) 7,0 ± 0,2.
Издание официальное
дрожжевой экстракт 4,0 г/л;
4.2 Рекомендуемая среда WLD (для подсчета бактерий) следующего состава:
гидролизат казеина 5,0 г/л;
глюкоза (виноградный сахар) 50,0 г/л;
первичный фосфат калия 0,55 г/л;
хлорид магния 0,425 г/л;
хлорид кальция 0,125 г/л;
сульфат магния 0,125 г/л;
сульфат марганца 0,0025 г/л;
хлорид железа 0,0025 г/л;
бромкрезол зеленый 0,022 г/л;
циклогексимид (акгидион) 0,004 г/л;
конечный pH (полученный определением в смеси) 5,5 ± 0,2.
4.3 Рекомендуемая среда M-Green (для подсчета дрожжевых и плесневых грибов) следующего
9.0 г/л;
50.0 г/л;
10.0 г/л; 2,10 г/л;
2.0 г/л; 0,05 г/л; 0,05 г/л; 0,026 г/л; 4,6 ± 0,2.
состава:
дрожжевой экстракт глюкоза (церелоза) пептон
сульфат магния фосфат калия диастаза (амилаза) тиамин бромкрезол
конечный pH (полученный определением в смеси)
4.4 Винная кислота.
4.5 Этиловый спирт, 96%-ный.
4.6 Поверхностно-активное вещество.
4.7 Триптоновый гель.
4.8 Дифенил.
Реактивы и культуральные среды хранят в соответствии с рекомендациями производителя.
Рекомендуемая микробиологическая лабораторная аппаратура указана ниже.
5.1 Система мембранной фильтрации.
Рекомендуется использовать одну из систем мембранной фильтрации, указанных в 5.1.1 и 5.1.2.
5.1.1 Стерильная фильтрационная система, готовая в применению, включающая полипропиленовую воронку вместимостью не менее 100 мл, стерильную мембрану (пористостью 0,45 мкм), стерильную чашку и вакуумный насос с трехходовым краном для его отключения.
5.1.2 Традиционная фильтрационная система, включающая воронку минимальной вместимостью 100 мл (из нержавеющей стали, стекла или поликарбоната), которая может быть простерилизована в автоклаве или в печи, стерильную мембрану (пористостью 0,45 мкм), стерильную чашку Петри с фильтровальной бумагой и вакуумный насос.
5.2 Термостат, температура которого может поддерживаться на уровне (30 ±2) °С.
5.3 Холодильник, температура в котором может поддерживаться от 2 °С до 8 °С.
5.4 Орбитальный шейкер с планшетным или круговым вибратором, установленный на скорость от 140 до 160 об/мин, или возвратно-поступательный шейкер, который может быть установлен на скорость от 140 до 160 движений вперед и назад.
5.5 pH-метр с температурной компенсацией, точностью ± 0,1 при 25 °С.
5.6 Стеклянные колбы с винтовыми крышками соответствующей вместимостью, позволяющей поместить четыре пробки в 100 мл раствора.
Отбор проб проводят в асептических условиях.
Образцы (пробы) до проведения испытаний хранят в стерильных сосудах при температуре от 2 °С до 8 °С.
Подготовку материалов к испытаниям и сами испытания проводят в асептических условиях и в соответствии с требованиями ГОСТ Р 51446.
8.1 Готовят физиологический раствор или раствор Рингера (4.1). При перемешивании добавляют поверхностно-активное вещество (4.6) до получения концентрации 10 г/л, а затем добавляют триптоно-вый гель (4.7) до получения концентрации 1 г/л. После этого с помощью винной кислоты (4.4) доводят pH до 3—3,5. Наливают в каждую колбу (5.6) примерно по 90 мл раствора и подвергают стерилизации.
8.2 После охлаждения в каждую колбу в асептических условиях добавляют по 10 мл этилового спирта (4.5).
8.3 Помещают в каждую колбу по четыре корковых пробки так, чтобы они были полностью погружены в раствор. Встряхивают колбы в течение 1 ч со скоростью от 140 до 160 об/мин при температуре от 20 °С до 25 °С.
Число колб зависит от выбранной схемы отбора проб. Половину колб используют для посева на рекомендуемую среду WLD, другую половину — для посева на рекомендуемую среду M-Green. Для каждой культуральной среды готовят дополнительную колбу для контрольного опыта.
Испытания проводят в соответствии с 9.2 с использованием стерильной фильтрационной системы и стерильных культуральных сред, готовых к применению, а затем в соответствии с 9.3, используя фильтрационную систему, которую предстоит стерилизовать, и обезвоженные культуральные среды.
Готовят фильтрационную систему (5.1.1).
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 8. В конце фильтрации отключают вакуум от линии отсасывания, чтобы установить равновесие с атмосферным давлением.
Непосредственно перед посевом в рекомендуемую среду WLD (4.2) добавляют дифенил (4.8), растворенный в 10%-ном растворе этанола, чтобы достичь концентрации дифенила 30 ppm (млн-1). Добавляют рекомендуемую среду WLD, содержащуюся в ампулах, ненадолго подключают к вакууму для отсасывания, затем отключают вакуум. Удаляют фильтрационную установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не допустить реинфицирования. Убирают цилиндрическую часть воронки. Крышку воронки помещают в систему фильтр/чашка Петри.
Повторяют эту процедуру с каждой колбой.
Подсоединяют наполненную воронку со стерильной мембраной к фильтрационной головке вакуумного насоса. В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 8. В конце фильтрации отключают вакуум от линии отсасывания, чтобы установить равновесие с атмосферным давлением. Добавляют культуральную среду M-Green (4.3), содержащуюся в ампуле, ненадолго подключают к вакууму для отсасывания и затем отключают вакуум. Удаляют фильтрационную установку и вставляют пробку фильтрационной системы в ее основание, чтобы не допустить реинфицирования. Убирают цилиндрическую часть воронки. Крышку воронки помещают в систему фильтр/чашка Петри.
Повторяют эту процедуру с каждой колбой.
Обезвоженную культуральную среду вновь гидратируют с использованием стерилизованной и деминерализованной воды.
3
Готовят и стерилизуют рекомендуемые среды WLD (4.2) и M-Green (4.3), следуя инструкциям производителя.
Добавляют дифенил (4.8), растворенный в 10%-ном растворе этанола, к среде WLD, чтобы достичь концентрации дифенила 30 ppm (млн-1).
Готовят чашки Петри.
Стерилизуют и готовят фильтрационную систему (5.1.2).
В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 8, используя стерильную мембрану. Помещают мембрану на чашку Петри со средой WLD.
Повторяют процедуру с каждой колбой.
В асептических условиях фильтруют экстракционный раствор, приготовленный в соответствии с разделом 8, используя стерильную мембрану. Помещают мембрану на чашку Петри со средой M-Green.
Повторяют процедуру с каждой колбой.
Готовят контрольные исследования для каждой среды.
Переворачивают чашки Петри со средами WLD и M-Green и выдерживают в термостате (5.2) при температуре (30 ± 2) °С в течение 3 дней.
Наблюдают за ростом и подсчитывают колонии на каждой чашке каждые 24 ч.
После окончания инкубации подсчитывают колонии бактерий на каждой чашке со средой WLD, каждый раз сравнивая результат с последним установленным показателем.
Для каждой чашки число колониеобразующих единиц (КОЕ) на корковой пробке определяют по следующей формуле
где Л/ь — общее число подсчитанных колоний бактерий;
4 — число испытываемых корковых пробок.
За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение установленных показателей, полученных для каждой чашки, округленное в большую сторону до ближайшего целого числа.
После окончания инкубации подсчитывают колонии дрожжевых и плесневых грибов на каждой чашке со средой M-Green, каждый раз сравнивая результат с последним установленным показателем.
Для каждой чашки число колониеобразующих единиц (КОЕ) на корковой пробке определяют по следующей формуле
Nv.™ (2)
4 ’ v '
где Л/у m — общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов;
4 — число испытываемых корковых пробок.
За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение установленных показателей, полученных для каждой чашки, округленное в большую сторону до ближайшего целого числа.
4
Отчет об испытаниях должен содержать следующую информацию:
a) ссылку на настоящий стандарт;
b) данные отбора проб и критерии идентификации образца;
c) дату проведения испытаний и полученные результаты;
d) все подробности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте, или любых выбранных операций;
e) любые факторы, которые могли оказать неблагоприятное влияние на результаты испытаний.
5
УДК 683.531.13:006.354 ОКС 55.040 Д97 О КП 92 9983
Ключевые слова: корковые пробки, микроорганизмы, колониеобразующие единицы (КОЕ) дрожжевых грибов, плесневых грибов и бактерий
Редактор Л. И. Нахимова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор М.И. Першина Компьютерная верстка И.А. Налейкиной
Сдано в набор 02.08.2005. Подписано в печать 12.08.2005. Формат 60 х 841/в. Бумага офсетная. Гарнитура Ариап. Печать офсетная. Уел. печ.л. 0,93. Уч.-изд.л. 0,70. Тираж 180 экз. Зак. 553. С 1671.
ФГУП «Стандартинформ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gostinfo.ru info@gostinfo.ru Набрано во ФГУП «Стандартинформ» на ПЭВМ Отпечатано в филиале ФГУП «Стандартинформ» —тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.