МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Единая
система защиты от коррозии и старения
ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ
Методы испытаний на биостойкость
Single corrosion and ageing
protectiol system. Cooling lubricant.
Bioresistance test methods
|
ГОСТ
9.085-78
|
Издание
с Изменением № 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89).
Постановлением
Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. №
1699 дата введения установлена
с 01.07.79
Ограничение
срока действия снято по протоколу № 3-93 Межгосударственного совета по
стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
Настоящий стандарт
распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и
устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий
и плесневых грибов.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
1.
МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
1.1. Сущность метода
Сущность
метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в
условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
1.2. Отбор проб
1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ
2517-85 массой 50 г.
1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и
стерилизации.
1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
1.2.4. Виды бактерий
1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов
бактерий:
Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
Pseudomonas aeruginosa Migyla;
Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
Staphylococcus aureus Rosenbach.
Кроме чистых культур
допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых
СОЖ.
1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии
микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают
непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в
год-два.
1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. № 1).
1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как
указано в ГОСТ 9.082-77.
1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:
термостат, обеспечивающий поддержание постоянной
температуры (30 ± 2) °С*;
электроплитка с закрытой спиралью*;
потенциометр по ГОСТ
9245-79;
горелки газовые*;
цилиндры металлические,
полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ
5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
чашки биологические (Петри)
по ГОСТ
25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;
груша резиновая*;
доска для сушки посуды;
аппарат для встряхивания
колб и пробирок;
стандарты мутности;
рН-метр лабораторный типа
ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;
ножницы, пинцеты, скальпели*;
штативы лабораторные*;
бульон мясо-пептонный (МПБ)
по ГОСТ
9.082-77;
агар мясо-пептонный (МПА) по
ГОСТ
9.082-77;
спирт этиловый
ректификованный технический по ГОСТ
18300-87, высшего сорта;
кислота соляная по ГОСТ
3118-77;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79,
безводный.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
* По документации, утвержденной в установленном порядке.
1.4. Подготовка к испытаниям
1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для
испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.
1.4.3. Рецептура сред приведена в табл. 1.
Таблица 1
Наименование реактивов
|
Среда
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
МПА
|
Агар
индикаторный
|
Сорокина
|
Сусло-агар
|
Чапека-Докса
с агаром
|
Чапека-Докса
с агаром без сахарозы
|
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г
|
-
|
-
|
0,5
|
-
|
0,7
|
0,7
|
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г
|
-
|
-
|
1,0
|
-
|
0,3
|
0,3
|
Магний сернокислый, г
|
-
|
-
|
0,2
|
-
|
0,5
|
0,5
|
Натрий азотнокислый, г
|
-
|
-
|
-
|
-
|
2,0
|
2,0
|
Натрий сернокислый, г
|
-
|
0,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
Калий хлористый, г
|
-
|
-
|
-
|
-
|
0,5
|
0,5
|
Железо сернокислое, г
|
-
|
-
|
0,01
|
-
|
0,01
|
0,01
|
Железо лимоннокислое, г
|
-
|
0,5
|
-
|
-
|
-
|
-
|
Аммоний хлористый, г
|
-
|
-
|
0,1
|
-
|
-
|
-
|
Спирт этиловый ректификованный, г
|
|
|
5,0
|
|
|
|
Сахароза, г
|
-
|
-
|
-
|
-
|
30,0
|
-
|
Пептон бактериологический, г
|
-
|
10,0
|
-
|
-
|
-
|
-
|
Агар микробиологический, г
|
20,0
|
12,0
|
|
20,0
|
20,0
|
Выщелоченный
20,0
|
Мясо-пептонный бульон, см3
|
До 1000
|
-
|
-
|
-
|
-
|
-
|
Сусло пивное, см3
|
-
|
-
|
-
|
До 1000
|
-
|
-
|
Вода дистиллированная, см3
|
-
|
1000
|
До 1000
|
-
|
До 1000
|
До 1000
|
1.4.4. Чистые культуры бактерий
пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.
1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в
течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные
пробирки, содержащие 10 см3 водопроводной воды.
1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см3.
1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1 -
2 см3) в стерильную пробирку.
1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
1.5. Проведение испытаний
1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см3,
содержащую 200 - 300 см3 среды 1, помещают в водяную баню и
выдерживают при температуре (100 ± 2) °С до тех пор, пока среда полностью не
расплавится.
Расплавленную питьевую среду
охлаждают до температуры 40 - 50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных
культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см3 на
100 см3 среды.
(Измененная редакция, Изм. №
1).
1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см3 в чашки Петри.
1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с
помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из
которых вносят по 0,1 см3 испытуемой СОЖ.
1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат
при (30 ± 2) °С.
1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
1.5.6. Испытания повторяют 3 - 4 раза.
1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и
осматривают.
1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале,
приведенной в табл. 2.
Таблица 2
Балл
|
Характеристика балла
|
0
|
При
осмотре невооруженным глазом наблюдаются большие, четко выраженные зоны
отсутствия роста микроорганизмов (зоны ингибирования) вокруг цилиндриков,
содержащих СОЖ. Диаметр зоны ингибирования 1,5 - 2,0 см. Полная
бактериостойкость
|
I
|
При
осмотре невооруженным глазом заметны зоны отсутствия роста микроорганизмов.
Диаметр зоны ингибирования 0,8 - 1,0 см. Удовлетворительная бактериостойкость
|
II
|
При
осмотре невооруженным глазом не наблюдается зон отсутствия роста
микроорганизмов. Небактериостойкость СОЖ
|
1.7. Требования безопасности -
по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический
контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.
Количество микроорганизмов
не должно превышать 5000 - 7000 кл/м3 воздуха.
2.
МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ]
БАКТЕРИЙ
2.1. Сущность метода
Сущность метода заключается
в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с
образованием сероводорода и сульфидов металлов.
Микроорганизмы образуют
черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости
СОЖ.
2.2. Отбор проб - по
п.п. 1.2.1 - 1.2.3.
2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.
Допускается использование
ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas,
Achromobacter и др.
2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п. 1.3 со следующим дополнением:
аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;
натрий сернокислый
кристаллический по ГОСТ 4171-76;
железо лимоннокислое,
кристаллическое, ч. д. а.*;
пептон бактериологический*;
* По документации, утвержденной в установленном порядке.
2.4. Подготовка к испытаниям - по п.п. 1.4.1 - 1.4.4.
2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные
культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях
из пораженных СОЖ.
Для выращивания культуры
используют среду 3.
2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1 - 0,2 см3 переносят
пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см3 водопроводной воды.
2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2
млн/см3.
2.4.4. Срок хранения суспензии - не более 1 ч.
2.5. Проведение испытаний
2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8 - 9 см3 в
стеклянные пробирки, добавляют по 0,5 - 1 см3 суспензии, тщательно
перемешивают и закрывают притертыми пробками.
2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30 ± 2)
°С в течение 20 - 24 ч.
2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой
СОЖ. Для этого 1 см3 зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и
заливают 10 см3 предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С
- 45 °С средой 2.
2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1
см3 бактериальной суспензии и 10 см3 среды 2.
2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми
пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30 ±
2) °С.
2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и
осматривают.
2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры
бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на
новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии
бактерий.
2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале,
приведенной в табл. 3.
Таблица 3
Балл
|
Характеристика балла
|
0
|
Цвет
индикаторного агара не меняется, что соответствует отсутствию роста
сульфатредуцирующих бактерий. Полная бактериостойкость СОЖ.
|
I
|
Появляются
единичные черные колонии в индикаторном агаре. Удовлетворительная
бактериостойкость СОЖ.
|
II
|
По
всей толщине индикаторного агара образуются многочисленные черные колонии.
Небактериостойкость СОЖ.
|
2.5.8, 2.6. (Измененная редакция,
Изм. № 1).
2.7. Требования безопасности - по п. 1.7.
3.
МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
3.1. Сущность метода
Сущность
метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях,
оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
3.2. Отбор проб - по п.п. 1.2.1 - 1.2.3.
3.2.1. Виды грибов
Aspergillus niger van Thieghem;
Chaetomium globosum Kunze;
Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;
Cladosporium resinae Albida;
Penicillium chrysogenum Thom;
Penicillium ochro-cloron Biorge;
Trichoderma koningii Oudemans;
Trichoderma viride Pers. ex. Fr;
Torula convoluta Harz;
Cepha losporium acremonium Corda.
3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии
микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают
непосредственно перед испытаниями.
3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. № 1).
3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.
3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
3.4. Подготовка к испытаниям
3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для
испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.
3.4.3. Рецептура сред приведена в табл. 1.
3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п. 3.2.1.
3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор
грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.
3.5. Проведение испытаний
3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 см3, содержащую среду 5
в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100 ± 2) °С на водяной бане до
полного расплавления среды.
3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40 - 45 °С и
заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью
градуированной пипетки - 2 см3 на 100 см3 среды.
3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью
пинцета 3 полных металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см3
испытательной СОЖ.
3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. № 1).
3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. № 1).
3.5.6. Чашки Петри
помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор
устанавливают в термостат с температурой (28 ± 2) °С.
3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку
эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.
3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и
осматривают.
3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной
в табл. 4.
Таблица 4
Балл
|
Характеристика балла
|
0
|
Рост
плесневых грибов отсутствует. Полная грибостойкость СОЖ.
|
I
|
Рост
грибов едва виден. Спорообразование не наблюдается. Удовлетворительная
грибостойкость СОЖ.
|
II
|
Рост
грибов отчетливо виден, появляется спорообразование. Негрибостойкость СОЖ
|
3.7. Требования безопасности -
по ГОСТ 9.048-89.
СОДЕРЖАНИЕ
1. Метод испытаний на стойкость к
воздействию аэробных бактерий. 1
2. Метод испытаний на стойкость к воздействию
анаэробных [сульфатредуцирующих] бактерий. 3
3. Метод испытаний на стойкость к
воздействию плесневых грибов. 4
|