Купить СТБ ISO 22662-2011 — бумажный документ с голограммой и синими печатями. подробнее
Цена на этот документ пока неизвестна. Нажмите кнопку "Купить" и сделайте заказ, и мы пришлем вам цену.
Распространяем нормативную документацию с 1999 года. Пробиваем чеки, платим налоги, принимаем к оплате все законные формы платежей без дополнительных процентов. Наши клиенты защищены Законом. ООО "ЦНТИ Нормоконтроль"
Наши цены ниже, чем в других местах, потому что мы работаем напрямую с поставщиками документов.
Устанавливает стандартный метод определения содержания лактозы в сыром молоке, молоке, подвергнутом тепловой обработке, сухом молоке, сырых и пастеризованных сливках. Данный метод не применим к кисломолочным продуктам и молоку, в которое были добавлены олигосахариды.
1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины и определения
4 Сущность метода
5 Реактивы
6 Оборудование
7 Отбор проб
8 Подготовка пробы
9 Методика
9.1 Подготовка стандартного раствора
9.2 Подготовка пробы
9.3 Подготовка фильтрата
9.4 ВЭЖХ-определение
10 Вычисление и представление результатов
10.1 Вычисление
10.2 Представление результатов
11 Прецизионность
11.1 Межлабораторное испытание
11.2 Повторяемость
11.3 Воспроизводимость
12 Протокол испытания
Приложение А (справочное) Межлабораторные испытания
Библиография
Дата введения | 01.01.2012 |
---|---|
Добавлен в базу | 01.01.2019 |
Актуализация | 01.01.2021 |
30.05.2011 | Утвержден | Госстандарт Республики Беларусь | 25 |
---|---|---|---|
Разработан | РУП Институт мясомолочной промышленности | ||
Издан | БелГИСС | 2011 г. |
Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Определение содержания лактозы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (контрольный метод)
МАЛАКО I МАЛОЧНЫЯ ПРАДУКТЫ
Вызначэнне змяшчэння лактозы метадам высокаэфектыунай вадкаснай храматаграфМ (кантрольны метад)
(ISO 22662:2007, IDT)
Издание официальное
Г осстандарт Минск
УДК 637.14.044.074:543.544.5(083.74)(476) МКС 67.100.01 КП 03 ЮТ
Ключевые слова: сырое молоко, молоко, подвергнутое тепловой обработке, сухое молоко, сырые и пастеризованные сливки, определение, высокоэффективная жидкостная хроматография, содержание лактозы, обработка результатов
ОКП РБ 15.51.11, 15.51.12, 15.51.20
Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации».
1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским дочерним унитарным предприятием «Институт мясо-молочной промышленности» Республиканского унитарного предприятия «Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по продовольствию» (РУП «Институт мясомолочной промышленности»)
ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь
2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ постановлением Госстандарта Республики Беларусь от 30 мая 2011 г. № 25
3 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 22662:2007 Milk and milk products - Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (Reference method) [Молоко и молочные продукты. Определение содержания лактозы методом высокоэффективной жидкостной храматографии (контрольный метод)].
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 «Молоко и молочные продукты» технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 «Пищевые продукты», Международной федерацией молочной промышленности (IDF), Международной организацией по стандартизации (ISO).
Перевод с английского языка (еп).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий государственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Национальном фонде ТИПА.
В разделе «Нормативные ссылки» и тексте стандарта ссылки на международные стандарты актуализированы.
Степень соответствия - идентичная (ЮТ)
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
© Госстандарт, 2011
Настоящий стандарт не может быть воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта Республики Беларусь
Издан на русском языке
Таблица А.З - Результаты исследования сухого молока | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
а) Только семь лабораторий предоставили результаты исследования сухого молока. |
8
Библиография
[1] ISO 707 Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб
[2] ISO 5725-1 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений.
Часть 1. Общие принципы и определения
[3] ISO 5725-2 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений.
Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения
[4] Biggs D. A., Szijarto, L., Оперативный метод определения лактозы в молоке, J. Dairy Sci. 1963, 46, стр. 1196-200
[5] Harvey, J., Высокоэффективный метод жидкостной хроматографии для определения лактозы в молоке, Austral. J. Dairy Technol, 1988, 43, стр. 19-20
[6] Brans, С., Olieman, С., Изучение высокоэффективной жидкостной хроматографии редуцирующих сахаров, применяемые для определения лактозы в молоке, J. Chromatogr, 1983, 259, стр. 79 - 86
[7] Koops, J., Olieman, С., Текущий контроль молока на ферме с помощью анализатора молока «MilkoScan» 203.3. Сравнительный анализ поляриметрии, ВЭЖХ, ферментативного анализа и редуктометрии для определения лактозы. Калибровка при инфракрасном анализе лактозы. Вычисление суммарного содержания твердых частиц по результатам инфракрасных измерений, Neth. Milk Dairy J, 1985, 39, стр. 89-106
9
Ответственный за выпуск В. Л. Гуревич
Сдано в набор 06.06.2011. Подписано в печать 24.06.2011. Формат бумаги 60x84/8. Бумага офсетная. Гарнитура Arial. Печать ризографическая. Уел. печ. л. 1,51 Уч.-изд. л. 0,61 Тираж экз. Заказ
Издатель и полиграфическое исполнение: Научно-производственное республиканское унитарное предприятие «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) ЛИ № 02330/0552843 от 08.04.2009. ул. Мележа, 3, комн. 406, 220113, Минск.
СТБ ISO 22662-2011
Содержание
1 Область применения............................................................................................................................1
2 Нормативные ссылки...........................................................................................................................1
3 Термины и определения......................................................................................................................1
4 Сущность метода..................................................................................................................................1
5 Реактивы................................................................................................................................................1
6 Оборудование.......................................................................................................................................2
7 Отбор проб............................................................................................................................................3
8 Подготовка пробы.................................................................................................................................3
9 Методика...............................................................................................................................................3
9.1 Подготовка стандартного раствора..............................................................................................3
9.2 Подготовка пробы...........................................................................................................................3
9.3 Подготовка фильтрата...................................................................................................................4
9.4 ВЭЖХ-определение.......................................................................................................................4
10 Вычисление и представление результатов.......................................................................................6
10.1 Вычисление...................................................................................................................................6
10.2 Представление результатов.......................................................................................................6
11 Прецизионность....................................................................................................................................6
11.1 Межлабораторное испытание.....................................................................................................6
11.2 Повторяемость.............................................................................................................................6
11.3 Воспроизводимость......................................................................................................................6
12 Протокол испытания.............................................................................................................................6
Приложение А (справочное) Межлабораторные испытания.................................................................7
Библиография............................................................................................................................................9
III
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
Milk and milk products Determination of lactose content by high-performance liquid chromatography (reference method)
Дата введения 2012-01-01
Настоящий стандарт устанавливает стандартный метод определения содержания лактозы в сыром молоке, молоке, подвергнутом тепловой обработке, сухом молоке, сырых и пастеризованных сливках.
Данный метод не применим к кисломолочным продуктам и молоку, в которое были добавлены олигосахариды.
Приведенные международные стандарты обязательны для применения в настоящем стандарте. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).
ISO 648:2008 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной меткой
ISO 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний
В настоящем стандарте используют следующий термин с соответствующим определением:
3.1 содержание лактозы: Массовая доля веществ, определенная методом, установленным настоящим стандартом.
Примечание - Содержание лактозы, %.
К взвешенному объему молока и лактозы добавляют внутренний стандартный раствор гидрата [0(+)-мелицитоза]. Химический реактив (раствор Биггса - Цижарто) добавляют для выделения жировых и протеиновых фракций молока. Перед вводом пробу дважды фильтруют, сначала через бумажный фильтр, а затем через нейлоновый фильтр 0,45 мкм. Лактозу и внутренний стандартный раствор гидрата [0(+)-мелицитоза] разделяют с помощью катионообменной колонки в свинцовой форме и детектируют с помощью дифференциального рефрактометра или другого подходящего детектора. В качестве подвижной фазы используют воду для высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Используют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не указано иное.
Издание официальное
Фильтруют воду, соответствующую требованиям ISO 3696, класс 1, полученную из водоочистительной установки (6.9), с помощью блока для фильтрации растворителей (6.10). Для улучшения производительности насоса и достижения стабильности базовой линии ежедневно дегазируют подвижную фазу, выбрав один из имеющихся методов, например барботирование гелием, обработка ультразвуком, вакуумом, или линию системы дегазации.
Растворяют количество гидрата 0(+)-мелицитозы в воде (5.1), необходимое для получения конечной концентрации, эквивалентной 50 мг/мл безводной формы.
Раствор гидрата 0(+)-мелицитозы может храниться при температуре 4 °С не более одной недели.
Перед использованием моногидрат а-лакгозы просушивают в течение 4 ч при температуре 70 °С. Охлаждают до комнатной температуры в эксикаторе.
Примечание - После сушки лактоза остается в форме моногидрата.
Растворяют 25 г дигидрата ацетата цинка (Zn(CH3COO)2 ■ 2Н20) и 12,5 г моногидрата фосфорновольфрамовой кислоты (W12036 ■ Н3РО4 ■ Н20) приблизительно в 100 мл воды класса «для ВЭЖХ» (5.1) в мерной колбе с одной меткой, емкостью 200 мл.
Добавляют 20 мл ледяной уксусной кислоты (СН3СООН). Разбавляют до метки 200 мл водой класса «для ВЭЖХ» (5.1) и перемешивают. После использования раствор может храниться не более одной недели при температуре 4 °С.
Стандартное лабораторное оборудование, а также дополнительно следующее:
6.1 Ионообменная колонка ВЭЖХ длиной 300 мм, внутренним диаметром 7,8 мм, с 8%-ным кросс-связанным сополимером на основе полистирола дивинилбензольной катионообменной смолы, упакованная в свинцовую форму.
В целях увеличения срока службы ионообменной колонки допускается заменять защитную колонку приблизительно через 200 впрыскиваний.
6.4 Нагреватель колонки, позволяющий поддерживать постоянную температуру (85 ± 1) °С.
6.5 Насос для ВЭЖХ, позволяющий поддерживать скорость потока от 0 до 10 мл/мин.
Примечание - Ручную инъекцию можно также использовать.
Примечание - Возможно использование других детекторов, например испарительного детектора светорассеяния.
6.8 Программное обеспечение, позволяющее выполнять: автоматическое впрыскивание, сбор данных, обработку данных и управление хроматографической информацией.
6.9 Водоочистительная установка, позволяющая обеспечить очищение воды, соответствующей 1 сорту согласно требованиям ISO 3696, имеющая удельное сопротивление от 10 до 18 МОмсм.
6.10 Блок для фильтрации растворителей, включая источник создания вакуума с мембранным фильтром, имеющим размер пор 0,45 мкм и диаметр 47 мм.
6.11 Аналитические весы с точностью взвешивания до 1 мг и с наименьшим пределом взвешивания до 0,1 мг.
6.12 Водяная баня, позволяющая поддерживать температуру от 38 °С до 40 °С.
6.13 Точное дозирующее устройство, точная автоматическая пипетка или пипетки с одной меткой, отвечающие требованиям ISO 648, класс А, емкостью 2 мл.
6.14 Воронка с фильтром диаметром 75 мм.
6.15 Фильтровальная бумага диаметром 110 мм, Ватман № 1 или аналогичная.
6.16 Нейлоновый шприц-фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Примечание - Можно использовать встроенный фильтр с таким же размером пор.
6.17 Шприц с наконечником Люэра емкостью 5 мл.
6.18 Флаконы для ВЭЖХ с крышками.
6.19 Мерные колбы с одной меткой емкостью (10 ± 0,02) мл.
Примечание - Можно также использовать колбы, имеющие емкость более 10 мл, с учетом фактора концентрации.
В лабораторию следует поставлять отобранную пробу. Она не должна быть повреждена или изменена в процессе транспортирования или хранения.
Отбор проб не является частью метода, указанного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в [1].
Испытуемый образец с жидким молоком и сливками нагревают на водяной бане (6.12) до температуры от 38 °С до 40 °С. Испытуемый образец аккуратно перемешивают путем неоднократного переворачивания бутылки. Образец быстро охлаждают до температуры (20 ± 1) °С, аккуратно перемешивая пробу непосредственно перед взвешиванием испытуемого образца (9.2).
9.1 Подготовка стандартного раствора
9.1.1 Взвешивают с точностью до 1 мг и переносят в мерную колбу с одной меткой (6.19) емкостью 10 мл соответствующее количество моногидрата а-лакгозы (5.3) необходимое для получения конечной концентрации, эквивалентной 20 мг/мл раствора безводной а-лакгозы.
9.1.2 Растворяют моногидрат а-лакгозы (9.1.1) примерно в 5 мл воды класса «для ВЭЖХ» (5.1) в колбе. Добавляют 2 мл раствора внутреннего стандартного раствора гидрата Э(+)-мелицитозы (5.2). Доводят объем до метки водой класса «для ВЭЖХ» (5.1) и перемешивают путем переворачивания емкости. Выражают конечную концентрацию а-лакгозы в миллиграммах безводной формы на миллилитр.
9.1.3 Фильтруют стандартный раствор через гофрированную фильтровальную бумагу (6.15) с помощью воронки с фильтром (6.14). Отобирают фильтрат в шприц (6.17). Навинчивают нейлоновый шприц-фильтр (6.16) на шприц и затем переносят каждый фильтрат во флакон для ВЭЖХ (6.18). Впрыскивают каждый стандартный раствор дважды в соответствии с требованиями 9.4.2.
Приготовленный таким образом стандартный раствор может обеспечить приготовление трех наборов калибровочных растворов. Каждый набор используют только один раз для калибровки колонки ВЭЖХ. Неиспользованные наборы стандартных растворов лактозы хранят в течение одной недели при температуре 4 °С. Перед использованием стандартные растворы доводят до температуры 20 °С.
Для контроля калибровки вводят стандартный раствор порциями как образец в начале и в конце набора испытуемых образцов.
9.2 Подготовка пробы
9.2.1 Испытуемый образец - жидкое молоко
Взвешивают с точностью до 1 мг около 3 мл приготовленного образца для испытания (см. пункт 8) и переносят в мерную колбу с одной меткой емкостью 10 мл (6.19). Продолжение по 9.3.
^ Ватман является примером подходящего изделия, имеющегося в продаже. Данная информации приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не представляет собой акта одобрения данного изделия со стороны ISO или IDF.
3
Взвешивают с точностью до 1 мг около 0,300 г испытуемого образца и переносят в мерную колбу с одной меткой емкостью 10 мл (6.19). Добавляют 5 мл воды класса «для ВЭЖХ» (5.1), предварительно нагретой до температуры от 50 °С до 60 °С. Тщательно перемешивают до тех пор, пока раствор не станет однородным. Полученный раствор охлаждают до (20 ± 1) °С. Продолжение по 9.3.
Взвешивают с точностью до 1 мг около 1 г испытуемого образца (см. пункт 8) и переносят в мерную колбу с одной меткой емкостью 10 мл (6.19). Продолжение по 9.3.
Добавляют 2 мл внутреннего стандартного раствора гидрата 0(+)-мелицитозы (5.2) и 1,2 мл раствора Биггса - Цижарто (5.4) к содержимому колбы, полученному в соответствии с 9.2.1 - 9.2.3 соответственно. Разбавляют водой класса «для ВЭЖХ (5.1) до метки.
Осторожно перемешивают содержимое, перевернув колбу пять раз. Дают постоять в течение 10 мин при комнатной температуре. Повторяют процесс перемешивания и отстаивания еще 2 раза.
Фильтруют содержимое колбы через гофрированную фильтровальную бумагу (6.15) с помощью воронки с фильтром (6.14). Собирают фильтрат с помощью шприца (6.17). Навинчивают нейлоновый шприц-фильтр (6.16) на шприц, затем переносят фильтрат во флакон для ВЭЖХ (6.18). Вводят раствор для анализа в соответствии с требованиями 9.4.2.
Примечание - Этап фильтрации через фильтровальную бумагу можно заменить центрифугированием образца.
Чтобы достичь стабильности базовой линии, включают дифференциальный детектор рефрактометра (6.7) не менее чем за 24 ч до начала анализа. Устанавливают внутреннюю температуру на 35 °С. Устанавливают насос для ВЭЖХ (6.5) на скорость подачи потока 0,2 мл/мин в течение 20 мин, в то время как нагреватель колонки (6.4) установлен до комнатной температуры.
Увеличивают температуру нагревателем колонки до 85 °С. После достижения этой температуры постепенно увеличивают скорость потока от 0,2 до 0,6 мл/мин. Позволяют системе прийти в равновесие при скорости потока 0,6 мл/мин и при температуре 85 °С в течение 2 ч до тех пор, пока не будет достигнута максимальная стабильность базовой линии.
Примечание - Ежедневная проверка и регистрация давления системы помогают обнаружить аномальное
изменение давления.
9.4.2 Условия хроматографирования Условия хроматографирования заключаются в следующем: | ||||
|
При детектировании и интеграции тщательно выбирают такие параметры, как чувствительность, масштабный множитель, постоянная времени, ширина пика и пороговая величина. На рисунке 1 показан пример хроматограммы.
Измеряют эффективность колонки, также называемую теоретическим отсчетом Л/, по крайней мере не реже одного раза в неделю. Уменьшение N связано с увеличением ширины полосы пика, которое часто происходит вследствие потери производительности колонки. Вычисляют N по формуле
где fR - время удерживания пика лактозы, мин;
w - ширина пика лактозы, эквивалентная разнице во времени, мин, на уровне 50 % его высоты.
Когда теоретический отсчет уменьшается более чем на 25 % по сравнению с первоначальным измерением, рекомендуют замену колонки.
Примечание - В большинстве случаев рабочие параметры используемой колонки, работающей с низкой эффективностью, могут быть восстановлены в их первоначальном виде путем обратной промывки соответствующим регенерирующим растворителем, указанным в документации изготовителя.
М - 0(+)-мелицитоза;
L - а-лакгоза;
fR- время удерживания;
U - потенциальная разность
Рисунок 1 - Пример хроматограммы пробы сырого молока, содержащей раствор гидрата 0(+)-мелицитозы
Компьютер выполняет вычисления следующим образом:
Во-первых, программное обеспечение (6.8) создает кривую путем построения графика отношения стандартной площади пика лактозы As к соответствующему значению внутреннего стандартного раствора As, умноженному на концентрацию внутреннего стандартного раствора CiS, т. е. (Аз/Д3) х cis в сравнении с концентрацией лактозы Q. Линейное приближение кривой проходит через начало отсчета.
Для того чтобы представить исследуемую пробу для испытания в количественной форме, программное обеспечение делит концентрацию, полученную по калибровочной кривой, на массу пробы для испытания с целью вычисления массовой доли безводной лактозы, выраженную в процентах.
Результаты испытаний округляют до тысячных.
Подробная информация о межлабораторных испытаниях в отношении прецизионности метода приведена в приложении А.
Значения, полученные в результате этих межлабораторных испытаний, не применимы к диапазонам концентрации и матриц, отличных от приведенных.
Допускается абсолютное расхождение не более чем в 5 % результатов между двумя измерениями, полученными при использовании одного и того же метода на идентичном анализируемом продукте в одной и той же лаборатории одним и тем же лаборантом с использованием одного и того же оборудования за короткий промежуток времени:
a) для жидкого молока - 0,06 %;
b) для сливок - 0,06 %;
c) для сухого молока - 0,37 %.
Допускается абсолютное расхождение не более чем в 5 % результатов между двумя единичными измерениями, полученными при использовании одного и того же метода на идентичном анализируемом продукте в разных лабораториях разными лаборантами на различном оборудовании:
a) для жидкого молока - 0,13 %;
b) для сливок - 0,38 %;
c) для сухого молока - 2,94 %.
Протокол испытания должен содержать:
a) информацию, необходимую для полной идентификации образца;
b) использованный метод отбора проб (при наличии данной информации);
c) использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;
d) все рабочие подробности, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как дополнительные, а также информацию об инцидентах, которые, возможно, повлияли на результат (ы) испытаний;
e) полученные результаты испытания и, если была проверена повторяемость, полученные окончательные результаты.
(справочное)
Были проведены совместные международные испытания, в которых участвовали 8 лабораторий из пяти стран, 18 проб (6 - жидкого молока, 6 - сливок и 6 - сухого молока), все полученные с трех молочных заводов Квебека, Канада. Испытания были организованы в рамках программы анализа молочных продуктов фермерских хозяйств Квебека.
Полученные результаты были подвергнуты статистическому анализу в соответствии с [2] и [3] с целью предоставления точных данных, приведенных в таблицах А. 1 - А.З. Все значения, выраженные в процентах, кроме коэффициента вариации, являются массовыми долями.
Таблица А.1 - Результаты исследования жидкого молока | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Таблица А.2 - Результаты исследования сливок | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
7
1