СОВЕТ ЭКОНОМИЧЕСКОЙ ВЗАИМОПОМОЩИ
СТАНДАРТ СЭВ СТ СЭВ 4251-83
ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 26 апреля 1984 г. № 1440 стандарт Совета Экономической Взаимопомощи СТ СЭВ 4251—83 «Пищевые продукты. Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов» введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта СССР
в договорно-правовых отношениях по сотрудничеству
с 01.07.85
СТАНДАРТ СЭВ
Настоящий стандарт СЭВ является обязательным в рамках Конвенции о применении стандартов СЭВ
СОВЕТ
ЭКОНОМИЧЕСКОЙ
ВЗАИМОПОМОЩИ
Взамен PC 4В69—75 и PC 4870—75
ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ
Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов
Группа Н09
1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в селективную агаризованную среду, культивировании посевов при (24 ±1) °С в течение 5 d, подсчете всех видимых колоний дрожжей и плесневых грибов, типичных по макро-н (или) микроскопической морфологии.
2. ПРОБЫ
2.1. Пробы отбирают и подготавливают к анализу по СТ СЭВ 3013-81 и СТ СЭВ 3014-81.
2.2. Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления разведения, должна составлять не менее (10±1) g (cm3), а предназначенной для непосредственного высева в питательные среды— не менее 1 g (cm3).
3. АППАРАТУРА
Для проведения анализа применяют аппаратуру по СТ СЭВ 3014—81 со следующим дополнением:
1) микроскоп;
2) термостатна (24± 1) °С;
3) чашки бактериологические с внутренним диаметром (90±2) или (100±2) mm;
4) пипетки вместимостью 1 и 10 cm3;
5) стекла предметные;
6) петли бактериологические;
7) фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,5—
0,8 pm;
8) палочки стеклянные с загнутым концом.
Утвержден Постоянной Комиссией по сотрудничеству в области стандартизации Дрезден, декабрь 1983 г.
4. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
4.1. Для проведения анализа применяют:
1) дрожжевой экстракт в порошке сухой;
2) глюкозу;
3) агар;
4) сусло солодовое неохмеленное или виноградное, с массовой долей сухих веществ 7—8%;
5) кислоту лимонную, 20%-ный водный раствор;
6) бенгальскую красную, 0,15%-ный раствор; готовят следующим образом: 0,15 g бенгальской красной растворяют в 100 cm3 дистиллированной воды и стерилизуют в течение 15 min при температуре (121 ± 1) °С. Стерильный раствор хранят в герметически закрытом сосуде не более двух недель при температуре (4±1) °С;
7) . основу для агаризованных питательных сред с антибиотиками; готовят следующим образом: 5g дрожжевого экстракта, 20 g глюкозы, 20 g агара добавляют к 1000 cm3 дистиллированной воды. Смесь подогревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45—55 °С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,5±0,1, стерилизуют в течение 15 min при (121 ±1) °С. Основу среды хранят при температуре (4±1) °С не более 14 d;
8) среду агарнзованную с хлортетрациклином и хлорамфенн-колом; готовят следующим образом: к 950 cm3 расплавленной и охлажденной до 45—47 °С основы добавляют по 25 cm3 свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации растворов хлорамфеникола и хлортетрациклина;
9) среду агарнзованную с окситетрациклином; готовят следующим образом: к 900 cm3 расплавленной и охлажденной до 45—47°С основы добавляют 100 cm3 свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора окситетрациклина;
10) среду агаризованную с хлорамфениколом; готовят следующим образом: к 975 cm3 расплавленной и охлажденной до 45— 47°С основы добавляют 25 cm3 свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора хлорамфеникола (допускается хлорамфеникол стерилизовать вместе с основой в течение 15 min при (121±1) °С);
11) среду агаризованную с окситетрациклином и гентамицином, готовят следующим образом: перед применением к 1000 cm3 расплавленной и охлажденной до 45—47 °С основы добавляют 100 cm3 раствора окситетрациклина и 10 cm3 раствора гентамицина свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации.
Среды с антибиотиками хранению не подлежат. В случае необходимости для ингибирования развития воздушного мицелия •плесневых грибов, «к среде с антибиотиками дебавляют раствор
красной бенгальской так, чтобы ее окончательная концентрация была 150 rng на 1000 cm3 готовой среды;
12) солодовое неохмеленное сусло; готовят следующим образом: к 1000 cm3 водопроводной воды, подогретой до (50±1)°С, прибавляют 200 g молотого ячменного солода. Смесь тщательно перемешивают в течение 30 min, подогревают на водяной бане со скоростью 1 °С в min до (55±1)°С, выдерживают паузу 15 min, затем вновь с той же скоростью поднимают температуру до 63— 65 °С и удерживают ее на этом уровне в течение 1 h. Температуру поднимают со скоростью 1°С в 1 min до (72=Ы)°С и выдерживают сусло при этой температуре до полного осахаривания. Степень осахаривания сусла проверяют раствором Люголя. Для этого каплю сусла переносят в фарфоровую чашку и осторожно прибавляют к нему каплю раствора Люголя. Окончательно осаха-ренное сусло не должно менять окраску в присутствии индикатора. Полученное сусло фильтруют через полотно или фильтровальную бумагу, доливают до 1000 cm3 и стерилизуют 30 min в автоклаве при 107—110°С. Затем сусло декантируют. Прозрачное сусло разбавляют водой до получения раствора с массовой долей сухих веществ 7—8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют в течение 20 min при (116±1)°С. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ в растворе до 7—8%;
13) сусло солодовое агаризованное; готовят следующим образом: к 1000 cm3 солодового неохмеленпого или виноградного сусла с массовой долей сухих веществ 7—8% прибавляют 20 g агара. Среду нагревают на водяной бане до полного расплавления агара и фильтруют через гигроскопическую вату или фильтровальную бумагу. Фильтрат разливают в стерильные колбы или пробирки и стерилизуют в течение 15—20 min при (116+1) °С. Охлаждают до (45—55) °С и устанавливают pH 3,6±0,1, добавляя 2—3 cm2 стерильного 20%-иого раствора лимонной кислоты. Готовую среду хранят в холодильнике при температуре (4+1) °С не более 7с1;
14) гентамицин, 0,5%-ный водный раствор;
15) окситетрациклии, основание или гидрохлорид, 0,1%-ный водный раствор;
16) хлортетрациклии, гидрохлорид, 0,4%-ный водный раствор;
17) хлорамфеникол (леиомецитин), 0,4%-ный водный раствор.
4.2. Для приготовления растворов антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, используют дистиллированную или бидистиллированную воду с pH от 6,8 до 7,0.
4.3. Перед применением растворы антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, стерилизуют методом мембранной фильтрации.
Стерильные растворы антибиотиков для инъекций допускается использовать без предварительной мембранной фильтрации.
5. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ
5.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество дрожжей и плесневых грибов в 1 g (cm3) исследуемого продукта.
5.2. Высевают по 1 cm3 продукта и (или) его соответствующих разведений параллельно в две стерильные чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую инокулум, добавляют не позднее чем через 15 пип (14+1) cm3 агаризованиой среды, охлажденной до (45±1)°С. Среду немедленно тщательно перемешивают и оставляют для застывания.
5.3. Для ориентировочных исследований пищевых продуктов допускается посев на поверхность плотных питательных сред по СТ СЭВ 3015—81, п. 2.4.
5.4. Для пищевых продуктов, в которых предполагают содержание небольшого количества дрожжей, допускается использовать метод мембранной фильтрации по СТ СЭВ 3015—81, п. 2.6.
5.5. При разногласии в оценке качества продукта используют агаризованную среду с хлорамфениколом и (или) хлорамфенико-ло«у| и хлортетрациклином. Инокуляция проводится глубинным методом по п. 5.2.
5.6. После застывания Сред посевы инкубируют крышкой вверх при (24+1) °С в течение 5 d. Через 3 d инкубирования проводят предварительный учет типичных колоний, а через 5 d — оконча-тельный, наблюдая за ростом дрожжей и плесневых грибов визуально, а при необходимости и микроскопически (методом нативной микроскопии).
6. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
6.1. Результат оценивают по каждой пробе отдельно.
6.2. Для подсчета отбирают чашки с посевами, где выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
6.3. Результаты обрабатывают, пересчитывают и записывают в соответствии с СТ СЭВ 3015—81 отдельно для дрожжей и плесневых грибов.
Колец
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. Автор—Делегация НРБ и ЧССР в Постоянной Комиссии по сотрудничеству в области тццевой промышленности.
2. Темы 20.010.09—81 и 20.010.10—61.
3. Стандарт СЭВ утвержден на 54-м заседании ПКС.
4. Сроки начала -применения стандарта СЭВ:
|
Сроки начала применения стаидаота СЭВ |
Страны — члены СЭВ |
d договорно-правовых отношениях по экономическому и научно-техническому сотрудничеству |
в народном хозяйстве |
НРБ |
Июль 1986 Г. |
|
ВНР |
Июль 1986 г. |
— |
СРВ |
|
|
ГДР |
Июль 1985 г. |
Июль 1985 г. |
Республика Куба |
Июль 1986 г. |
Июль 1986 г. |
МНР |
|
|
ПНР |
|
|
GPP |
Январь 1985 г. |
— |
СССР |
Июль 1985 г. |
|
ЧССР |
Июль 1986 г. |
Июль 1986 г. |
|
5. Срок проверки— 1988 г. |
Сдано в наб. 29.01.86 Подп. и печ. 25.03.85 0.5 уел. пЛл. 0.5 уел. кр.*отт. 0.32 уч.-пэд. л. Ткр. 4000 Цена 3 хоп
Ордена «Знак Почета* Издательство стандартов. 123840, Москва. ГСП. НовопресненскиП пер., 3 Тип. «Московский печатник*. Мосхва. Лялин пер., б. Зак. 168