МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Определение содержания крахмала и глюкозы Метод тендеризации с помощью ферментных препаратов

СТ РК ИСО 13965-2009

ISO 13965:98 Meat and meat products -determination of starch and glucose contents - enzymatic method (IDT)

Издание официальное

Комитет по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан (Г осстандарт)

Астана

Предисловие

1    ПОДГОТОВЛЕН И ВНЕСЕН республиканским государственным предприятием «Казахстанский институт стандартизации и сертификации» и техническим комитетом по стандартизации № 44 «Технолог» (товарищество с ограниченной ответственностью «Эксперт-Консалтинг»)

2    УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Председателя Комитета по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан от 17 августа 2009 года № 418-од

3    Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 13965:98 Meat and meat products - determination of starch and glucose contents - enzymatic method (Мясо и мясопродукты. Определение содержания крахмала и глюкозы. Метод тендеризации с помощью ферментных препаратов), с дополнительными требованиями, которые по тексту приведены курсивом

4    В настоящем стандарте реализованы нормы Законов Республики Казахстан «О техническом регулировании», «Об обеспечении единства измерений», технического регламента «Требования к безопасности мяса и мясной продукции»

5    СРОК ПЕРВОЙ ПРОВЕРКИ ПЕРИОДИЧНОСТЬ ПРОВЕРКИ

6    ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Нормативные документы по стандартизации», а текст изменений - в ежемесячно информационных указателях «Государственные стандарты». В случае пересмотра (отмены) или замены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликовано в информационном указателе «Государственные стандарты»

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Комитета по техническому регулированию и метрологии Министерства индустрии и торговли Республики Казахстан

II

СТ РК ИСО 13965-2009

A_2s - оптическая плотность, измеренная в 9.4.6, испытательного раствора

для определения крахмала;

10.1.2    Расчет содержания безводного крахмала вычисляют по формуле (2):

му = VI,    _э    (2)

d -к -m-V₂ ■ 1000 х 10

где му - численное значение содержание безводного крахмала, выраженное в процентном отношении, образца;

M_s - разница оптической плотности, вычисленная по 10.1.1;

M_rgs - относительная молекулярная масса глюкозы в крахмале

(M_rg_S — M_rgi_ucose - Mnvatej- — 162.1),

Д - численное значение конечного значения, в мл, в кювете (1, = 3,04 см³); / - коэффициент разбавления;

d - численное значение оптической длины пути, в сантиметрах, кюветы; к - численное значение молярного коэффициента поглощения, в литрах на миллимольный сантиметр, НАДО {к = 6,30 при измерении при 340 нм);

т - численное значение массы, в граммах, рабочей части образца по 9.1;

V₂ - численное значение объема, в мл, добавленного экстракта образца по

9.4.3.

Полученные результаты округляют до двух знаков после запятой.

10.2    Содержание глюкозы

10.2.1    Разницу оптической плотности вычисляют по формуле (3):

И=(4-Д,Н4^,),    (3)

где M_g - разница оптической плотности из-за содержания глюкозы;

А_1Ь - оптическая плотность, измеренная в 9.4.5, реактивного исходного раствора;

A_lg - оптическая плотность, измеренная в 9.4.5, испытательного раствора

для определения глюкозы;

А_2Ь - оптическая плотность, измеренная в 9.4.6, реактивного исходного

раствора;

A_2g - оптическая плотность, измеренная в 9.4.6, испытательного раствора

для определения глюкозы;

10.2.2    Расчет содержания глюкозы вычисляют по формуле (4):

9

где и',,    -    численное    значение    содержание глюкозы, выраженное в

процентном отношении, испытательного образца;

AA_g - разница оптической плотности, вычисленная в 10.2.1;

M_rg - относительная молекулярная масса глюкозы {M_rg = 180,2);

Fj - численное значение конечного значения, в мл, в кювете (1, = 3,04 мл);

/ - коэффициент разбавления;

d - численное значение оптической длины пути, в сантиметрах, кюветы;

к - численное значение молярного коэффициента поглощения, в литрах на миллимольный сантиметр, НАДО (к = 6,30 при измерении при 340 нм);

т - численное значение массы, в граммах, рабочей части образца по 9.1;

V₂ - численное значение объема, в мл, добавленного экстракта образца в

9.4.2;

Округлить полученные результаты до двух знаков после запятой.

11 Точность метода

11.1    Точность

Точность метода была установлена межлабораторными испытаниями, проведенными согласно ГОСТ ИСО 5725-1, ГОСТ ИСО 5725-2, ГОСТ ИСО 5725-3, ГОСТ ИСО 5725-4, ГОСТ ИСО 5725-5, ГОСТ ИСО 5725-6.

11.2    Повторяемость

11.2.1 Содержание безводного крахмала

Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученные в результате применения такого же метода на идентичном испытательном материале с содержанием крахмала между 0,3 % и 0,4 % в такой же лаборатории таким же лаборантом с использованием такого же оборудования в коротком интервале времени, не превышающая более чем 5    %    случаев, превышающие пределы

повторяемости, которые вычисляются по следующей формуле (5):

r_s = 0,102 + 0,132 X w _s,    (5)

где r_s - численное значение предела повторяемости, которое выражено в процентном отношении массой, для содержания безводного крахмала;

СТ РК ИСО 13965-2009

w_s - среднее значение двух результатов для содержания безводного крахмала.

11.3    Содержание глюкозы

Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученные в результате применения такого же метода на идентичном испытательном материале с содержанием крахмала между 0,3 % и 1,2 % в такой же лаборатории таким же лаборантом с использованием такого же оборудования в коротком интервале времени, не превышающая более чем 5    %    случаев, превышающие пределы

повторяемости, которые вычисляются по формуле (6):

r_g =0,197 + 0,070 xw_g,    (6)

где r_g - численное значение предела повторяемости, которое выражено в процентном отношении массой, для содержания глюкозы;

w_g - среднее значение двух результатов для содержания глюкозы.

11.4    Воспроизводимость

11.4.1    Содержание безводного крахмала

Абсолютная разница между двумя единичными результатами испытания, полученные в результате применения такого же метода на идентичном испытательном материале с содержанием крахмала между 0,3 % и 5,0 % в разных лабораториях разными лаборантами с использованием различных оборудований, не превышающая более чем 5 % случаев, превышающие пределы повторяемости, которые вычисляются по формуле

(V):

R_s=0,229 + 0,232 xw_g,    (7)

где R_s - численное значение предела воспроизводимости, которое выражено в процентном отношении массой, для содержания безводного крахмала;

w_s - среднее значение двух результатов для содержания безводного крахмала.

11.4.2    Содержание глюкозы

Абсолютная разница между двумя единичными результатами испытания, полученные в результате применения такого же метода на идентичном испытательном материале с содержанием крахмала между 0,3 % и 1,2 %в разных лабораториях разными операторами с использованием

11

различных оборудований, не превышающая более чем 5 % случаев, превышающие пределы повторяемости R_g, которые вычисляются по

формуле (8):

R_g = 0,232 + 0,086 х w_g ,    (8)

где R_g - численное значение предела воспроизводимости, которое выражено в процентном отношении массой, для содержания глюкозы; w_g - среднее значение двух результатов для содержания глюкозы.

12 Оформление результатов испытаний

Протокол испытания должен содержать следующую информацию:

-    применяемый метод отбора образцов, если известен;

-    применяемый метод испытания;

-    все операционные детали, неустановленные настоящим стандартом или рассмотренные в качестве необязательного, вместе с деталями случая, которые могут влиять на результат испытания;

-    полученные результаты испытания; или

-    результаты испытания, в случае если проверялось повторяемость.

12

СТ РК ИСО 13965-2009

Приложение А

(информационное)

Пример нанесения данных на график и экстраполяции значений

оптической плотности

Рисунок А.1 - Пример нанесения данных на график и экстраполяции

значений оптической плотности

13

СТ РК ИСО 13965-2009

УДК 637.5:637.04/.07:543:637.5.039:637.5.032:577:006.354(574)

МКС 67.120.10

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, крахмал, глюкоза, реактив, метод тендеризации, ферментные препараты

Басута_ж.    кол койылды IlimiMi 60x84 1/16

Кдтазы офсетак. K,apin Typi «KZ Times New Roman», «Times New Roman»

Шартты баспатабаты 1,86. Таралымы_дана. Тапсырыс

«Казахстан стандарттау жэне сертификаттау институты» республикалык мемлекеттж кэсторны 010000, Астана каласы Орынбор Kemeci, 11 уй, «Эталон орталыты» тимараты Тел.: 8(7172) 240074

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

МЯСО И МЯСОПРОДУКТЫ

Определение содержания крахмала и глюкозы Метод тендеризации с помощью ферментных препаратов

Дата введения 2010-07-01

1    Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод тендеризации ферментными препаратами для определения содержания безводного крахмала и глюкозы для мяса и мясных продуктов, включая мясо домашней птицы.

Метод считается пригодным для количественного определения содержания крахмала и глюкозы до уровней 0,30 %.

Метод настоящего стандарта не может применяться для химически модифицированного крахмала или их производных.

2    Нормативные ссылки

Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные нормативные документы:

СТ РК 1.9-2007 Государственная система технического регулирования Республики Казахстан. Порядок применения международных, региональных и национальных стандартов иностранных государств, других нормативных документов по стандартизации в Республике Казахстан.

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения.

ГОСТ ИСО 5725-2-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения.

ГОСТ ИСО 5725-3-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерения.

ГОСТ ИСО 5725-4-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений.

Издание официальное

ГОСТ ИСО 5725-5-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений.

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике.

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 31104-2002 Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб.

ИСО 3696:87 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний.*

ПРИМЕЧАНИЕ При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов по ежегодно издаваемому информационному указателю «Указатель нормативных документов по стандартизации» по состоянию на текущий год и соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный документ заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) документом. Если ссылочный документ отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3    Термины и определения

В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:

3.1    Содержание крахмала мяса и мясных продуктов, %: Содержание крахмала, определенное в соответствии с методами, описанными настоящим стандартом и выраженное в процентном отношении массой.

3.2    Содержание глюкозы мяса и мясных продуктов, %: Содержание глюкозы, определенное в соответствии с методами, описанными в настоящем стандарте и выраженное в процентном отношении массой.

4    Сущность метода

4.1    Гидролиз крахмала представлен в рабочей части образца с ферментами а -амилаза при pH = 5,0 за 15 мин. Определение содержание крахмала с использованием следующих ферментных реакций.

4.2    Гидролиз водорастворимого крахмала ддя получения глюкозы с применением амилоглюкозидаза (АГЗ):

AGS

крахмал + (п-1) Н₂0 -= глюкоза

При определении содержания глюкозы данный шаг пропускается.

СТ РК ИСО 13965-2009

* Применяется в соответствии с СТ РК 1.9.

4.3    Фосфорилирование глюкозы, генерированная посредством аденозины 5'-трифосфата (АТФ) для получения глюкозы 6-фосфата (Г-6-Ф) с использованием гексокиназа (ГК):

глюкоза + АТФ == глюкоза 6-фосфат + (АДФ)

4.4    Окисление глюкозы 6-фосфата (Г-6-Ф)    посредством

никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) до глюконата 6-фосфата с использованием глюкозы 6-фосфата дегидрогеназа (Г-6-ФДГ):

G-6-PDH    ^    ^

глюкоза 6-фосфат + НАДФ + - глюконат 6-фосфат + НАДФГ + Г⁺

4.5    Спектрометрическое измерение количества    приведенного

никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) при длине волны 340 нм.

5 Реактивы

5.1    Вода, соответствующая, по меньшей мере, степени чистоты 3 в соответствии с ИСО 3696.

5.2    а -амилаза ферментная суспензия.

Приготовление жидкого фермента теплостойкого а -амилаза, выведенного из Bacillus licheniformis (Termamyl® 120L ).

5.3    Раствор гидроксида натрия c/NaOH) = 5 моль/дм³.

Растворить 200 г гидроксида натрия в воде. Охладить до комнатной температуры, разбавить до 1000 см³ и помешать.

5.4    Раствор гидроксида натрия, c/NaOH) = 5 моль/ дм³.

Растворить 20 г гидроксида натрия в воде. Охладить до комнатной температуры, разбавить до 1000 см³ и перемешать.

5.5    Раствор сульфата аммония, сДМСДБОД = 3,2 моль/ дм³.

Растворить 20 г гидроксида натрия в воде. Разбавить до 1000 см³ и

помешать.

5.6    Ацетатный буфер c(CH₃C0₂Na) = 0,1 моль/л, pH = 5,0.

Разбавить 6,80 г тригидрат ацетат натрия c(CH₃C0₂Na-3H₂0) в 400 см³ воды. Урегулировать pH до 5,0 раствором соляной кислоты или гидроксидом натрия с помощью pH-метра по 6.2. Разбавить до 500 см³ и перемешать.

Раствор может храниться до 3 месяцев в темном месте при температуре

4 °С.

5.7    Цитратный буфер, с(цитрат) = 0,05 моль/л, pH = 4,6.

Разбавить 440 мг моногидрат лимонной кислоты 1СН,0/Н-,0) _и 850 мг дигидрат трисодиум цитрата (C₆H₅Na₃07-2H₂0) в воде. Развести водой до 100 мл и помешать. Проверить pH измерителем кислотности по 6.2 и отрегулировать по необходимости раствором соляной кислоты или гидроксидом натрия.

Раствор может сохраняться до 3 месяцев при температуре 4 °С в темном месте.

з

СТ РК ИСО 13965-2009

5.8    Триэтаноламиновый буфер, с(триэтаноламин) = 0,75 моль/ дм³, pH =

7,6.

Разбавить 14,0 гидрохлорид триэтаноламина (СбН|₅ЫОгНС1) и 0,25 г гептагидрат сульфата магния (MgS04-7H₂0) в 80 см³ воды. Урегулировать pH с помощью pH-метра раствором гидроксидом натрия (см. 5.3 и 5.4). Разбавить до 100 см³ и перемешать.

Раствор допускается хранить в темном месте до 4 недель при температуре

4°С.

5.9    Раствор никотинамид аденин динуклеотид фосфата c(P-NADP-Na₂) =

12,4 х Ю'³ моль/л.

Разбавить 100 мг двунатриевой солью НАДО в 10,0 см³ воды и перемешать.

Допускается раствор хранить в темном месте до 4 недель при температуре

4 °С.

5.10    Раствор аденозина-5'- трифосфата c(5'-ATP-Na₂H₂-3H₂0)    ~

81 х Ю '³ моль/дм³.

Разбавить 500 мг 5'-ATP-Na₂H₂-3H₂0 и 500 мг безводного гидрокарбоната натрия (ЫаНСОД в 10,0 см ³ воды и перемешать.

Допускается раствор хранить в темном месте до 4 недель при температуре

4 °С.

5.11    Амилоглюкозидаза (АГЗ; ЕС 3.2.1.3) ферментативная суспензия в растворе сульфата аммония (5.5), р (АГЗ) = 10 мг/см³.

Удельная активность фермента должна быть 14 единиц на мг.

Суспензия может храниться в темном месте до 12 месяцев при температуре 4 °С.

5.12    Гексокиназа (ГК; ЕС 2.7.1.1)/глюкоза 6-фосфат дегидрогеназа (G-6-PDH; ЕС 1.1.1.49), ферментативная суспензия в растворе сульфата аммония (см. 5.5), р (ГК) = 2 мг/см³ и р (G-6-PDH) = 1 мг/см³.

Удельная активность обеих ферментов должна быть 140 единиц на мг. Суспензия может храниться в темном месте до 12 месяцев при температуре

4°С.

6 Аппаратура

6.1    Механическое или электрическое оборудование, гомогенизирующее образец.

Данное оборудование должно включать высокоскоростной вращающий измельчающий аппарат, или дробилку с соответствующей пластинкой с отверстиями диаметром не более 4,00 мм.

6.2    pH-метр (кислотный измеритель).

6.3    Гофрированная фильтровальная бумага, без содержания глюкозы диаметром 15 см.

4

СТ РК ИСО 13965-2009

6.4    Пипетки, калиброванные, для ферментативного анализа или автоматические автопипетки соответствующего качества со следующими объемами: 20, 50,100 и 200 мкл.

6.5    Маленькая пластмассовая лопаточка, для смешивания содержимого кювета по 6.9.

6.6    Водяная баня, обеспечивающая температуру (60 ± 2) °С.

6.7    Плита нагревательная.

6.8    Спектрометр, допускающий измерение при длине волны 340 нм.

ПРИМЕЧАНИЕ Если пригоден спектрометр, оснащенный ртутной паровой лампой, то снятие показаний может осуществляться при 365 нм и 334 нм. Коэффициент молекулярного поглощения к для НАДФ равняется 3,51 ммоль¹ -см¹ при 365 нм и 6,18 л-ммоль ¹ -см¹ при 334 нм.

6.9    Кюветы, изготовленные из кварца или стекла, с крышкой, или одноразовые кюветы для разового пользования, изготовленные из полиметакрилат, оптической длины пути 10 мм.

6.10    Аналитические весы, допускающие взвешивание с точностью до 0,1 мг.

6.11    Мерные колбы по ГОСТ 1770.

6.12    Часы.

7    Отбор проб

7.1    Отбор представительной пробы массой не менее 200 г - по ГОСТ 31104.

7.2    Образцы хранят таким образом, чтобы избежать порчи и изменения состава.

8    Подготовка образца к испытаниям

Образец необходимо гомогенизировать с помощью оборудования по 6.1. Температура материала образца не должна превышать 25    °С.    При

применении мясорубки, образец необходимо пропустить, по меньшей мере, дважды через нее.

Наполнить подходящий воздухонепроницаемый контейнер подготовленным образцом. Хранить образец в герметично закупоренной до конца заполненной в контейнере, таким образом, чтобы избежать порчи и изменения состава. Анализировать образец по возможности сразу после гомогенизации, но не позднее чем через 24 часа.

5

9 Порядок проведения контроля

ПРИМЕЧАНИЕ Мышечный гликоген, который возникает, как правило, в колбасах, не препятствуют при выполнении измерений. Мальтоза препятствует, потому что данный дисахарид подвергается гидролизу амилоглюкозидазой в глюкозу. Мальтоза (и глюкоза) может, следовательно, экстрагироваться из образца алкоголем.

9.1    Рабочая часть образца

Если испытательный образец содержит мальтозу, то удостоверьтесь, что содержание воды не превышает 20 % . По требованию высушить рабочую часть образца.

Взвесить 400 мг приготовленного рабочего образца (см. раздел 8) с точностью до 0,1 мг в центрфужной пробирке. Продолжать действия в соответствии с 9.2.

Если образец не содержит мальтозы, то взвесить между 100 мг и 1,0 г приготовленного рабочего образца с точностью до 0,1 мг в 100 см мерной колбе.

Добавить 30 см³ ацетатного буфера по 5.6 и продолжать действия в соответствии с 9.3.

9.2    Экстракция мальтозы (и глюкозы)

Промыть образец три раза 10 см³ 40 % (V/V) этанолом и центрифугировать после каждого промывания. Профильтровать надосад очную жидкость. Соединить осадок в центрфужной пробирке вместе с тем, что на фильтре и

3    3

слить в коническую колбу в местимостью 100 см с использованием 4x5 см ацетатного буфера по см. 5.6. Добавить 10 см³ ацетатного буфера по 5.6.

9.3    Приготовление экстракта

Пипеткой по 6.4 с объемом 50 см суспензией а -амилаза по 5.2 поместить в коническую колбу, содержащий образец. Закрыть коническую колбу алюминиевой фольгой и довести до кипения на плите по 6.7 на 15 мин. Взбалтывать колбу время от времени.

Затем держать коническую колбу при температуре 60 ° С на водяной бане 15 мин. Количественно переместить содержимое конической колбы мерную колбу вместимостью 100 см . Промыть коническую колбу теплой водой и добавить моечную муть в мерную колбу. Дать ей остудиться до комнатной температуры от 20 °С до 25 °С и разбавить до метки водой. Профильтровать по 6.3, по меньшей мере, 10 см экстракта образца, отбрасывая первые несколько миллилитров и следовать в соответствии с 9.4.

СТ РК ИСО 13965-2009

Подержать образцы, содержащие жир до 1 часа в холодильнике до момента фильтрации.

9.4 Определение

9.4.1    Приготовить реактивный исходный раствор как приведено далее. Пипеткой по 6.4 взять 0,2 см³ цитратного буфера по 5.7 и 0,1 см³ воды, поместить в кювету имеющую лопатку .

9.4.2    Приготовить испытательный раствор для определения содержания глюкозы как приведено ниже. Пипетки по 6.4 с объемом цитратного буфера по 5.7 0,2 см³ и экстракта образца (V₂) объемом 0,1 см³ по 9.3 поместить в кювету по 6.9, содержащую лопатку по 6.5.

9.4.3    Приготовить раствор для определения содержания крахмала как приведено ниже. Пипетки по 6.4 с объемом 0,2 см³ цитратного буфера по 5.7 и экстракта образца по 9.3 объемом (V₂) 0,1 см³ поместить в кювету по 6.9, содержащую лопатку по 6.5.

Если концентрация крахмала в растворе-образце превышает 0,4 г/дм³, разбавить его до момента проведения анализа.

9.4.4    Пипеткой по 6.4 отмерить 0,2 см³ суспензии АГЗ по 5.11, поместить в кювету, содержащую реактивный исходный раствор по 9.4.1 и в кювету, содержащую испытательный раствор для определения содержания крахмала по 9.4.3. Пипеткой взять 0,2 см³ воды поместить в кювету, содержащую испытательный раствор, для определения содержания глюкозы по 9.4.2.

Помешать содержимое кюветы вращением и движением лопатки вверх и

вниз.

Закрыть кюветы крышкой или парафиновым листом. Подержать кюветы на водяной бане по 6.6 до 15 минут при температуре (60 ± 2)°С.

Вышеуказанная процедура с пипетками приведена в таблице 1.

Таблица 1

Реактив Реактивный исходный раствор, см3 Испытательный раствор ддя определения содержания глюкозы, см3 Испытательный раствор для определения содержания крахмала, см3 Цитратный буфер 0,2 0,2 0,2 Экстракт образца - 0,1 ОД Вода ОД 0,2 - Суспензия АГЗ 0,02 - 0,02

Объем экстракта образца, отмеренные пипеткой в кювете, могут быть увеличены до 1,00 см³ водным раствором. При необходимости регулируют pH

фильтрата до pH = 4 - pH = 5. Таким образом снижая объем воды, добавленной к реакционной смеси по 9.4.5 получают конечный объем V_x по 9.4.6.

9.4.5    Кювету охлаждают до температуры (22,5 ± 2,5) °С и очищают его наружную поверхность. Пипеткой (6.4) последовательно распределить во все кюветы с объемом 1,00 см³ триэтаноламинового буфера по 5.8, 0,1 см³

3    3

раствора НАДО по 5.9, 0,1 см раствора АТФ по 5.10 и 1,50 см воды. Осторожно перемешивают вращением или с помощью лопатки по 6.5.

Снимают показания оптической плотности А_х по 6.8 каждой кюветы при длине волны 340 нм против воды по истечение 3 мин.

9.4.6    Распределить пипеткой по 6.4 последовательно во все кюветы по 0,02 см³ суспензии rK/G-6-PDH по 5.12. Смешивают содержимое кювет движением лопаты вверх и вниз. Конечное значение кюветы равняется 3,04 см³ (С).

Снимают показания оптической плотности А₂ каждой кюветы при длине волны 340 нм против воды по истечение 15 мин.

ПРИМЕЧАНИЕ Реакция, как правило, длится в пределах от 5 мин до 10 мин. Если реакция не прекращается в течение вышеуказанного времени, повторить снятие показаний каждые 2 минут пока возрастание константы оптической плотности не будет обнаруживаться каждые 2 минут. Экстраполировать оптическую плотность во время добавления фермента EK/G-6-PDH (например, см. рисунок А. 1 приложения А).

10 Обработка результатов

10.1    Содержание безводного крахмала

10.1.1    Разница оптической плотности вычисляют по формуле (1):

M_s=(A_2s-A_ls)-(A_2g-A_lg)-(A_2b-A_lb),    (1)

где АД - разница оптической плотности из-за содержания крахмала;

А_1Ь - оптическая плотность, измеренная в 9.4.5, реактивного исходного раствора;

A_lg - оптическая плотность, измеренная в 9.4.5, испытательного раствора

ддя определения глюкозы;

А_и - оптическая плотность, измеренная в 9.4.5, испытательного раствора ддя определения крахмала;

А_2Ь - оптическая плотность, измеренная в 9.4.6, реактивного исходного раствора;

A_2g - оптическая плотность, измеренная в 9.4.6, испытательного раствора ддя определения глюкозы;