Р 52.24.566-94
Рекомендации. Методы токсикологической оценки загрязнения пресноводных экосистем

P 52.24.566-94

РЕКОМЕНДАЦИИ

Методы токсикологической оценки загрязнения пресноводных экосистем

Федеральная служба России по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды Москва 1994

P 52.24—94

РЕКОМЕНДАЦИИ

Методы токсикологической оценки загрязнения пресноводных экосистем

Федеральная служба России по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды Москва 1994

P 62.24—94

1.    Утвержден

2.    Разработчики

8. Одобрено 4 Зарегистрирован

б. Введен впервые

ПРЕДИСЛОВИЕ

_ГУЭМЗ    21.07.94    г._

наименование утверждающего органа, дата

А. В. Жулидов, канд. биол. наук;

инициалы н фамилии руководителя

Т. А. Хоружая, д-р биол. наук, с.н.с.;

разработки (темы} и остальных разработчиков, ученые степени,

Л. М. П редей на, канд. хим. наук;

звания

Е. Н. Бакаева, канд. биол. наук;

Е. В. Морозова, канд. биол. наук.

на заседании секции по методам х и ми чес -кого и радиоактивного мониторинга

наименование центральное комиссии; дата

_ГУЭМЗ_

сокращенное наименование организации за M l от 21.07.94 г.

дата

11

P 52.24—94

СО Д E F’ЖАН И Е

1    Область применения..........................1

2    Нормативные ссылки .........................1

3    Определения..............................8

4    Общие положения...................... б

6 Отбор, хранение и подготовка проб для биотестирования .........9

б Биотестирование в режимных наблюдениях ГСН Росгидромета......10

6.1    Виотест на дафяиях........................11

6.1.1    Принцип метода.......................11

6.1.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......12

6.1.3    Подготовка к биотестированию................12

6.1.4    Проведение биотеста.....................13

6.1.6    Регистрация показателей выживаемости и плодовитости дафний . 14

6.1.6    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности воды . . 14

6.1.7    Пример биотестирования на дафниях.............16

6.2    Биотест на цериодафниях.......... 18

6.2.1    Принцип метода.......................18

6.2.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......18

6.2.3    Подготовка к биотестированию................18

6.2.4    Проведение биотеста....... 19

6.2.6    Регистрация показателей выживаемости и плодовитости    . . .    . 19

6.2.6    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности воды    .    . 20

6.3    Биотест на водорослях.......................20

6.3.1    Принцип метода.......................20

6.3.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы . ......21

6.3.3    Подготовка к биотестированию................21

6.3.4    Проведение биогостирования.................22

6.3.6    Регистрация численности клеток водорослей .........23

6.3.6    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности воды    .    . 23

6.3.7    Примеры биотестирования на водорослях . ;.....*    .    .    .    . 26

6.4    Биотост па парамециях ......................34

6.4.1    Принцип метода.......................84

6.4.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......34

6.4.3    Подготовка к биотестированию................36

6.4.4    Проведение биотсстирования..... 36

6.4.6    Регистрация показателей выживаемости и размножения    .... 36

6.4.6    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности воды    .    . 36

6.4.7    Пример биотестирования на парамециях...........39

6.6 Биотест на коловратках.......... 44

6.6.1    Принцип метода.......................44

6.6.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......46

6.6.3 Подготовка к биотест и ро вал ню........... 46

6.6.4    Проведение биотест и рования.................46

III

P 62.24—94

0.6.6 Регистрация показателей выживаемости и плодовитости . . . . 46 0.6.6 Обработка результатов, расчеты и оцеика токсичности воды . . 47

0.6.7 Пример биотеотированмя на коловратках...........49

0.0 Вмотает на рыбах.........................63

0.0.1 Принцип метода.......................68

6.0.2 Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......63

0.0.3 Подготовка и проводе и и© биотестнров&вия...........64

0.0.4 Обработка результатов, расчеты и оцеика токсичности воды . . 66 0.0.6 Пример биотестирования на рыбах..............60

7    Виотеотировавие в оперативных работах по оценке качества поверхвостыых

вод.........•........................68

7.1    Биотесты на ракообразных.....................66

7.2    A-Z Ph-Tcr ва водорослях.....................00

7.2.1    Принцип методики .....................00

7.2.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......01

7.2.3    Подготовка к биотестировавню............. .    •    .    01

7.2.4    Проведение биотестированмя и регистрация показателей .    .    .02

7.2.6    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности    воды    .    .    08

7.2.0    Примеры биотестировавия на водорослях с помощью A-Z-Ph-теста.    04

7.3    Экспресо-бнотест на парамециях.............. .    ,    . 07

7.3.1    Принцип метода.......................07

7.3.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......07

7.3.3    Подготовка к биотестированню................08

7.3.4    Проведение биотестирования.................08

7.3.6    Регистрация показателя выживаемости ............08

7.3.0    Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности    воды    .    .    08

7.3.7    Пример а кс пресс-б и ответа на парамециях...........09

7.4    Экспресс-биотест на коловратках................. . 72

7.4.1    Принцип метода.......................72

7.4.2    Необходимые материалы, оборудование, реактивы.......72

7.4.3    Подготовка и проведение биотестированмя...........78

7.4.4    Регистрация численности микроводорослей . .........78

7.4.6 Обработка результатов, расчеты и оценка токсичности    воды    .    .    74

7.4.0    Пример экс пресс-биотеста на коловратках...........76

7.0 Виотестирование на природных популяциях гмдробионтов......78

7.6.1    Общие положения..................«...    78

7.6.2    Получение тест-объектов.....................

7.6.3    Проведение биотестировавия............ .    .    .    . 80

7.6.4    Регистрация показателей и оценка токсичности воды......80

8    Статистическая обработка результатов биотестировавия . ........81

9    Оценка токсичности воды по данным биотестировавия о использованием

набора биотестов...........................82

10    Оценка токсикологического состояния водного объекта или его участка . . 83

11    Представление результатов биотестирования природной воды ......86

12    Требования к технике безопасности.....................

13    Требования к квалификации оператора ...................

IV

P 52.24—94

Приложение Л (информационное) Характеристика тест-объекта рачка

Daphnia magna S............................86

Приложение В (справочное) Содержание культуры дафний в лабораторных

условиях ............................... 89

Приложение В (обязательное) Форма записи результатов биотестироьания

природной воды на дафниях (цериодафннях)..............92

Приложение Г (информационное) Характеристика теот-объекта рачка

Ceriodaphnia affinis..........................94

Приложение Д (справочное) Содержание культуры цериодафний в лабораторных условиях ........................... 97

Приложение Е (информационное) Характеристика водорослевых тест-

объектов ...............................99

Приложение Ж (соравочвое) Содержание культуры водорослей в лабораторных условиях............................101

Приложение И (обязательное) Форма эаоиои результатов биотестирования

природной воды ва водорослях.................. .    103

Приложение К (обязательное) Форма записи результатов биотестирования

природной воды на водорослях с использованием A-Z-Ph-теста.....104

Приложение Л (информационное) Характеристика тест-объекта инфузории Paramecium caudatum........................106

Приложение М (справочное) Содержание культуры парамеций в лаборатор

вых условиях............................106

Приложение Н (обязательное) Форма записи результатов биотести роьания

природной воды на парамециях....................108

Приложение П (обязательное) Форма записи результатов экспреос-био-

теста природной воды на парамециях .................110

Приложение Р (информационное) Характеристика теот-объекта коловратки

Brachlonu§ calyciflorua РаНая.....................Ill

Приложение С (справочное) Содержание культуры коловраток в лабораторных условиях............................114

Приложение Т (обязательное) Форма записи результатов биотестирования

природной воды ва коловратках...................116

Приложение У (обязательное) Форма записи результатов экспресс-био-

теста на коловратках ........................117

Приложение Ф (информационное) Характеристика рыб как тест-объектов 118 Приложение X (справочное) Содержание рыб в лабораторных условиях . 120 Приложение Ц (обязательное) Форма записи результатов биотестирования

природной воды на рыбах......................123

Приложение Ш (обязательное) Характеристика пробы природной воды и условий отбора............................124

Приложение Щ (обязательное) Результаты биотестирования пробы природной воды..............................125

Приложение Э (обязательное) Форма заключения о токсикологическом состоянии водных экосистем......................126

Приложение Ю (справочное) Список литературы............127

Библиографические данные .....................128

V

ВВЕДЕНИЕ

Необходимость ввести в практику мониторинга качества поверхностных вод методы оценки токсикологического состояния водных объектов связана с резким ухудшением экологической обстановки в ряде регионов страны. Активно проявляется влияние ранее совершенно не рассматривавшихся факторов загрязнения природных вод токсическими веществами. Объем сточных вод, сбрасываемых в водоемы и водотоки, в настоящее время достаточно велик, тогда как химический контроль за сбросом токсичных компонентов недостаточен. Последнее обусловлено постоянным увеличением числа загрязняющих веществ, трудностями аналитического определения и нормирования, принципиальной невозможностью учета суммарных эффектов и процессов преобразования^ загрязняющих веществ. Наиболее приемлемым выходом из создавшейся ситуации является внедрение в практику мониторинга поверхностных вод методов биотестирования токсичности.

Биотестирование в настоящее время — обязательный элемент системы охраны поверхностных вод^Введены нормативы качества воды по данным биотестирования¹. Требования к режимным наблюдениям за загрязнением поверхностных вод суши сети Государственной службы наблюдений (ГСН) Росгидромета предусматривают оценку токсикологического₂состояния водных объектов с использованием биотестирования .

Настоящие рекомендации содержат следующие разделы:

1)    биотестирование в режимных наблюдениях ГСН Росгидромета,

2)    биотесты для оперативных работ по оценке качества поверхностных вод.

Нормативы приведены в следующих документах: 1) Правила охраны поверхностных вод (типовые положения); 2) РД 118-02-90. Методическое руководство по биотсстированию воды (см. п. 2).

²РД 52.24.309—92. Организация и проведение режимных наблюдений за загрязнением поверхностных вод суши на сети Роскомгидромета.

VI

ПРОЕКТ РЕКОМЕНДАЦИЙ

Методы токсикологической оценки загрязнения пресноводных экосистем

Дата введения

1 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящие методические рекомендации предназначены оперативно-производственным подразделениям Росгидромета, наблюдающим за загрязнением поверхностных вод суши в рамках ГСН, и являются методическим пособием для проведения наблюдений по токсикологическим показателям.

2 НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

1    ГОСТ 17.1.1.01-77. Использование и охрана вод. Основные термины и определения. Введ. с 01.07.78.—М.:'Изд-во стандартов, 1984.—18 с.

2    ГОСТ 17.1.8.07-82. Гидросфера. Правила контроля качества воды водоемов и водотоков. Введ. с 01.01.83 до 01.01.90. — М.: Изд-во стандартов, 1986. —12 с.

3    ГОСТ 17.1.5.01-80. Гидросфера. Общие требования к отбору проб донных отложений водных объектов для анализа на загрязненность. Введ. с 01.01.82 до 01.01.89.—М.: Изд-во стандартов, 1980.—5 с.

4    ГОСТ 17.1.5.05-85. Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору проб поверхностных и морских вод, льда и атмосферных осадков. Введ. с 01.07.86.—М.: Изд-во стандартов, 1985.—15 о.

1

б ГОСТ 19179/73. Гидрология суши. Термины и определения. Введ. с 01.01.75 до 01.01.80. — М.: Изд-во стандартов, 1978.—34 с.

6    ГОСТ 27065-86 (СТ СЭВ 5184—85). Качество вод. Термины и определения. Введ. с 01.01.87. — М.: Изд-во стандартов, 1987. —9 с.

7    Закон Российской Федерации „Об охране окружающей природной среды**. Статья 58.—М.: Республика, 1992.— С. 43.

8    Закон Российской Федерации „Об охране окружающей природной среды*’. Статья 59. — М.: Республика, 1992. — С. 43—44.

9    Методические рекомендации по установлению предельно допустимых концентраций загрязняющих веществ для воды рыбо-хозяйственных водоемов. — М.: Изд. ВНИРО, 1985—88 с.

10    Методические указания по использованию биотестов для определения предэаморного состояния в карповых прудах.—Л.: Изд. ГосНИОРХ, 1989.—Юс.

11    Методические указания. Экспресс-метод биологической оценки уровня загрязнения водной среды, донных осадков, почвы и живых объектов. — Ростов-на-Дону, 1990.—22 с.

12    МС ИСО 6341—82. Качество воды. Определение угнетения подвижности Daphnia magna St (Cladocera, Crustacea). — M.: Изд-во стандартов. 1987. — 13 с.

13Пввленко В.В., Зимина Т.А., Трубачеева Л.Я. Техническая документация по применению способа оценки сточных вод и химических соединений по токсико-генетическим показателям (Методические указания). — Иркутск: Изд. НИИ биологии при Иркуте, ун-те, 1984. — 24 с.

14    Правила охраны поверхностных вод (типовые положения).—М.: Изд. Госкомприроды СССР, 1991.

15    РД 118-02-90. Методическое руководство по биотестированию воды. — Введ. 06.08.90. — М.: Госкомприрода, 1991. — 47 с.

16    РД 52.24.309—92. Организация и проведение режимных наблюдений за загрязнением поверхностных вод суши на сети Рос ком гид ро мета.—Введ. 01.01.93.—С.-Петербург.: Изд. Роском-гидромета, 1992.—67 с.

17    Руководство по химическому гчализу поверхностных вод суши/ Под ред. А. Д. Семенова.—Л.: Гидрометеоиздат, 1977.— 540 с.

18    ISO 8692. Water quality — Fresh water algal growth inhibition test with Scenedesmus subspicatus and Selenostrum capricomutum. — ISO, 1989.

2

3 ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Р 52.24—94

Здесь и далее все термины даны применительно к воде, водным организмам и водным экосистемам.

Биологическое тестирование (биотестирование) — оценка качества воды по ответным реакциям водных организмов, являющихся тест-объектам и (по ГОСТ 27065-86).

Биотест — совокупность приемов получения информации о токсичности воды (донных отложений) для гидробионтов на основе регистрации реакций тест-объекта.

Взвешенные вещества в природных водах — частицы минерального и органического происхождения, которые по размеру больше, чем коллоидные частицы и находящиеся в воде во взвешенном состоянии. Происхождение их различно: терригенное (продукты размыва почв, горных пород), биогенное (фрагменты тел и экскременты организмов), вулканогенное (обломочный материал вулканических извержений), хемогенное (продукты химических реакций), космогенное (космическая пыль), антропогенное (поступающие со сточными водами). Являются исходным материалом при образовании донных отложений. Их содержание в воде колеблется в широких пределах. От содержания взвешенных веществ зависит прозрачность и цвет природных вод [7] (приложение Ю).

Водный объект — сосредоточение природных вод на поверхности суши, либо в горных породах, имеющее характерные формы распространения и черты режима (по ГОСТ 19179/73).

Водоем — водный объект в углублении суши, характеризующийся замедленным движением воды или полным его отсутствием. Различают естественные водоемы, представляющие собой скопления «оды во впадинах, и искусственные — специально созданные скопления воды в искусственных или естественных углублениях земной поверхности (по ГОСТ 19179/73).

Водоток — водный объект, характеризующийся движением воды в направлении уклона в углублении земной поверхности (по ГОСТ 19179/73).

Зона влияния источника загрязнения — часть водоема или водотока, в которой повышены фоновые значения показателя качества воды, но нарушения норм качества не наблюдается (по ГОСТ 17.1.3.07-82).

3