ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ ПО ХИМИЧЕСКИМ СРЕДСТВАМ БОРЬБЫ С ПРЕДАТЕЛЯМИ, БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ й СОРНЯКАМИ ПРИ МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕН® МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ 3 ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Часть XI

Москва - 1981

Гооударотвенная комиссия по химичеоким средотваы борьбы вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОКОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ, КОРМАХ И ВНЕШНЕЙ СРЕДЕ

Чноть Х1-я

Данные методики апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экопертов при Госкомиссни по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР

Москва - 1981

Ц ■ ^;''.'М''/ .Таким образом: на I. сNT;поверхности субстрата содержится' V;

V::K:Svj'=i^;"    Л:vv i■/.-;.t;i_c:>'::y.r

'fM',Ял>'около '714. определяемых микрроргашз1змов,_:й v ■

Ст р*

6* Методические указания по определению остаточных количеств рицида "П" в риса и вода газожидкостной

хроматографией .................. 93

7# Методические указания по определению матилнитрофооа, фенитр.ооксона и п-нитрокрезола в зерне и продуктах переработки зерна методом хроматографии в тонком

олое.......... 103

8. Энзимно-хроматографический метод определения фоо-фороргэнических пестицидов л рэотительных продуктах и биооубстратах.................. 109

Азотсодержащие пестициды

1. Производные мочевины* гуанидина, дитио-карбаминовой кислоты, анилиды карбоновых кислот, нитропроизводные, дитиокарбаыаты

I. Методические указания по определению дуада в растительном материале, почве и воде хроматографией в

тонком слое ...... .............. 118

2♦ Методические указания по определению остаточных количеств гербицида ыалорана в почвах с различным содержанием гуыуоа методом ТОК........... 124

3.    Методические указания по определению остаточных количеств НЕ-166 в огурцах хроматографией в тонком

слое и фотометрическим методом....... 129

4.    Методические указания по определению остаточных количеств твиде к са в воде и почве.......... 136

5.    Методические указания по определению ФДН t/^/'-ди-

метил-//-(3-хлорфенил)-гуанидиаа) в огурцах и воде методом тонкослойной хроматографии ........ 139

6.    Методические указания по определению дитэна М-45 в

продуктах питания растительного происхождения и воде ...... 149

П. Гетероциклические соединения -

7.    Методические указания по определению базаграна в

воде, почве, зерне и растительном материале ....    152

ЗГ5

Стр,

8.    Методичеокие указания по определению фунгицида бай-

летона методом ТСХ в почве, корнях,зеленых листьях, плодах томатов и огурцов . *........*.    .    .    159

9.    Методические указания по газожидкостно-хроматографическому определению бентазона в почве ч растениях 166

10. Методические указания по определению диквэта в семенах подсолнечника и масле из семян подсолнечника

опектрофотоыетричеоким методом .......... 174

II* Методические указания по определению ыетазина в воде, почве, овощах и биологическом материале методом хроматографии в тонком олое сорбента....... 181

12. Методические указания по определению остаточных количеств оимм-триазиновых гербицидов (симазина, зт-рэзина, пропазина, прометрина, оемвронз, мезорани-ла, метазина, метопротрина) в почве газожидкоотной

хрома тогрзфией.................. 188

13.    Методические указания по определению котофора в семенах хлопчатника методом хроматографии в тонком

слое..................... .    198

14.    Методические указания по определению ронстарч (ок-

сидиазона) в рисе методами газовой и тонкослойной хроматографии......... 205

15.    Методические указания по определению тачпгьрена в

воде методом тонкослойной хроматографии ...... 209

16.    Методические указания по определению тероацилэ в

эфирных маслах и эфиромэсличноы    сырье    методом    газожидкостной хроматографии........... .    214

I?. Методические указания по определению трифоринэ в

воде....................... 220

18.    Методические указания по определению остаточных ко

личеств текто(тиэбэидазолэ) в картофеле и свекле тонкослойной хроматографией ............ 227

19.    Методические указания по определению остаточных ко

личеств фонаэоне в почве, воде, свекле и растительных объектах газожидкостной    хроматографией    ....    234

Прочие леотиииды

I* Методические указания по определению остаточных

количеств хлората магция полярографическим молодой ••• 243

2.    Методические указания по определению нортрода в

ьодз, черноземной почве и сахарной свекле............    2v8

3.    Методические указания по определению содержания

общей ртути в гное, яйцах, рыбе, молочных продуктах, почве ..... *    Zxj

Бактериальные пестициды

1.    Методические указания по определению микробиологи

ческих инсектицидов не прямым иммунофлюореопентныи методом .............................................. 268

2.    Методические указания пи определению вктаницина А

в воздухе методом тонкослойной хроматографии ......... 2?6

3.    Методические указания по определению полиэдров* ви

руса ядерного полиэдроаа капустной совки на растительных объектах иммунофлюоресдентньш методом . *..... 260

тов в воде, почве и растительном материале    289

2. Методические указания по определению актеллика

растительной продукции, почве и воде ........ 296

Настоящие методичеокие указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других Министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде*

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомио-сии по химическим средствам борьбы о вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР* (Председатель группы экспертов М.А.Клисенко)*

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им.Е.ИЛарциновокого и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минэдрава СССР.

УТВЕРЖДАЮ Заместитель Главного Государственного врачи СССР

_{_}______А.И,Зайченко

19 октября 1С?9г № 2С89-79-

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИНСЕКТИЦИДОВ НЕПРЯМЫМ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНШ МЕТОДОМ

Известный в настоящее время микробиологические препараты для защиты растений могут быть вирусной, бактериальной и грибной природы* Все вирусные препараты, получаемые в промышленных иди лабораторных условиях, содержат в качестве действующего начала випусные включения типа полиэдров и Ли гранул размером от 0,2 до 5 и более микрон.

Бактериальные препараты, такие как энтобактерин, дендро-бациллин, инсектин, гоыелин и некоторые другие, имеют В своем составе опоры и кристаллический токсин, размеры которых лежат в пределах разрешения обычного светового микроскопа. Грибные препараты боверия и внтомофгории также имеют корпускулярную природу, так включают прежде всего споры, а также конидии, ги-фальные и мицедиадькые тела грибов.

Все биологические препараты в большинстве случаев выпускаются в виде порошка светло-оерогс цвета, состоящего из соответствующих компонентов действующего начала и наполнителя (каолин кли тальк).

Принцип уетода

Метод йммунофдуорбсцекцид, разработанный в 1940 году Куксом с сотрудниками ( Coonе. ас al. 19-11,    )    заключается

в том, что в моле куду антитела вводится ^сь Ор о'хро/*!, Ростворзд

ч •: •_;меч.ешшх, фдуорохромом. айтмтел ^6радат^ащ:МЬ^^Р^ _f ;.с^    .. ;

. •' соответствувдий .антиген. В результате' происходит;сшзывакле ‘ -'‘ л :;ай'тйгена /с )‘й ОченшЩвнтитёлЙ*|.^

• • -^;/;^    • ////./''ж; - - -Н-ж •• /••'' /^v V^:V^;- >"'/ ж'/l-^^{: ; :}-

ЙЙйлп^ршйЬЁЗикёп■■ В случае цервой модк^каади флуорёоцируюишмз: л,; йу/UiKp^    метят    ям^ннугйс^    kg^р^ю нгано^ж^;^

ант^-. ,": :

.'{■!

■    Й/^йй . ^    методе:.используют немечеш^    сыро--    /;йй

,.;. • ротку я флу оресщфу иду ю антисыворотку. В /этом случае на дрепа- / • .. ;>

/_:\//йР^/Щ^    :.    Д f^: К;^йадй’>^

/. • /до    ,    затек    нёсшзыващукюя^ сыворотку отш    фяаи~/ .

‘о логическим раствором и наносят/^    «ьн-/ . ;,

TJECJKi;--■    -;■>    -ЙЙ

/ ходит да осаждение сыворотки: на антягене/ед    •    ;    ;

; ййя^    ^    •    .    /

///а/'н    йрёципйтирует флуореог^    й/ Й;;й/ Й/' /;Й-.-

/ Укрзонный .метод находит широкое дрямененяе ярд выявлена разй V

Й/Щй;йчньЩШ

У /./•'• :-■'■’>/    Й:'-й    ^оактиш^я^астворы..    г-’:    ₍    ^/'ч;:'-^/    ^:'-^::-^;';^;V-'^:-/''    .; ' ;

jVй'тЙ'^::;/''’= ;/Й^ный:раствор.силиката нёт|?ия'раот1юрййог .уУя'ацетоне*'■’ТОСТ^"26C^7lV^,.'■/;/;.-;Г^.-^;Л'/йй;!^

■    ;\7Г-/^?:-^-^;,^:,,'■'; спёцй(^ческЩ^

^: Мертколят натрия. (тимероал_р. импорт,).* или Сорная кислота/,

;, 1^ . _v ..

.    /    ^    /3^зиолрг«нг?окиЛ раствор//'"'' ■/ /Й'^:'ЙЙЙ й Й/. ^:/й •••.•,•'• '^:

/Щ§ ■ ■ ;V.:    /■^г    /:

/Л Люминооцирунцая ослиная сыворотка против • - ^:    глобу-

;^_:^;динов;^:крЬ^    ■    {

I;⁵,?:    ■■■ | t- -Дв ^ -^Г; ? л л ^    Н ■-Л

■^.:^_;Ц.-;'-;-'(.^;.' Кофдуоресцврующое имыероионкоо масло или диаетилфталах.

■^;' ■ ,    ,. - Лшиносцонтнпй микроскоп (марки ЫЛ-1, !.Ui2-2_f . МБИ-15 и _v. _

'ДР->:^s;    ^:^:к-^::'" •'’ • ■.^:"

;: v : , • ' Цонтри^га (ЦЛС^1/ЩН-1 и др.). Йапотки не Х,0 и 5 мл>

'■ :"Г V ■;■•■;

^; ■ ’    Глазшв пипетки иди' капельницы’ по ,Строшоивд,/Оот ШСТП ;, •; •

Й^:-Ш

Ш"■; '^ШЛ. '.Пенициллишже^флакошх^-v.^' С:^'v:"    1

v-.^/    Химические стаканы на 200-250 ыд, *ГОСТ 6236-52V •

^^'.'';_:;v.:H *:Еума»^

’./'.^:;.. 'Г^. ■ г ‘ ЦОДУаёйИ^ SM^ipiipC^CnO^^MeoklJX^pominbB^ . ; ';-W;'Ъл;-};:.

• cugopojog    "'.'■    '    ■    '■    •    ••    .    ;"'    '    /    •’    ^::

;    ' Спеедфичоскве спдороики против- микроорганизмов, входящих

", 'в ■ соЬтаа 'биопрепрротов, мо-гут, готовиться централизованно в *:' л_: ,.у. \

.специальном 'Контрольном- институте или, в существующих 'институ-'; тах (12Ши^шлрспарвт, В113Р, BliilHiiMaP). /    :^:0V'

Щ ;;.■: ■■ :£Д Примечание:- стандартные лшинесцируицир сиьорбтки против^- .

■■'?^'{■’•■'■>■. ¹ ■':•    ,:.л.■:    !■' сывороточных глобулинов кролика можно.подучить .

из Института эпидемиологии и микробиологии ^:>'\у. '

, . ■•    ' •    . им.Н.Ф.Гьыалеи. Адрес,инртитута:,Ыооква Д-^^.    .-

’ ,> ■улЛ'аыалев, 18, толефон 1У40СХ)б. д<050; - . V

Для яыодунязации используют молодых кроликов весом 2,5 -3 кг. В случае работы о вирусными препаратами в количестве антигенов служат высоко очищенные дифференциальным центрифугированием вирусные включения: полиэдры или гранулы. Способ иммунизации - внутривенный. Схемы иммунизации кроликов приведены в таблицах I и 2,

Через десять дней пооле последней инъекции проводят тотальное обескровливание кроликов. Кровь собирают в стерильные пробирки. Для лучшего отслаивания сыворотки пробирки о кровью помещают на 30 минут в термостат при температуре 37°. Пооле этого сгусток крови отслаивают и оставляют на сутки при 4° для ретракции сгустка. Затем сыворотку отсасывают от сгустка, переносят в стерильные флаконы и центрифугируют в течение 10-15 минут при 800-1000 об/мин. для отделения клеточных компонентов. Пооле этого сыворотку разливают в стерильные ампулы, добавляют консервант (мертиодят, борная кислота) в концентрации 1:10000 и хранят до употребления в холодильнике при 4° или в замороженном виде при температуре -20°. В случае централизованного производства проводят лиофилизацию сывороток.

Для получения иммунных сывороток к действующим компонентам бактериальных препаратов (дендробацилдин, октобактерин) целесообразно использовать методику, предложенную В.И.Полтевым (1969).

Сыворотки готовят к вегетативным формам бактерий. Для зтого бактерии выращивают при температуре 28-30° в течение 8 часов, консервируют 5^ным формалином и хранят в холодильнике.

Перед иммунизацией кроликов взвесь микробов разбавляют раствором 9,555-ного хлористого натрия до оптического стандарта,

271

Тебя»ца 1

Схема вцыушззация хро тазов ддерньшн шявадраыи иэ непарного шедводрдда х ходусткой совах

ДО инъекнй	12 3 4 5	6
Количество вводимого материале в мд/тнто взввол 250 м ян.полиэдров в мд)	1 2 3 5 5	5
Интервалы в даяк	3 3 3 7	7
Таблица 2 Схема иммунизации кроликов гранулами as овимой совки
ДО инъекций	х а а 4 5	6
Количество вводимого бед~ ка в кг (воздушно сухие гранулы).	10,0 10,0 20,0 CQ,G 30,0	30,0
Интервалы в днях	3 3 3 7	7

соответствующего 2 млрд* мдкробншс тел* Антиген вводят внутри-вешю кролику через кэздае 5 дней цо схеме: 1-е введение - 0,5 мл, 2-е I, 3-е - I, 4-а — 1*5 и 5-е 1,5 ыа. Через 5-7 дней у кроликов берут кровь и подучают сыворотку.

Ход аналдз§

На иоле, обработанном биопрепаратом, берется 10 листьев или стеблей растений* В лаборатории на поверхность растительного субстрата, о поменцью грозной пипетки, наносят 2Й-нпп раствор органического стекла В ацетоне, который при комнатной температу* 272

. ре и нике, быстро застывав*, превращаясь в сластичную пленку ’• ’ толщиной от 0,01 до 0,1 мы. Затек пленку о субстрата снимают, но-;

\ рсносят не прсдаотное отекло, на которое нанесен олой 2#~ного раствора оргакичоского отекла в ацетоне. Пленку в этот едой: ’ помещают чистой стороной {т.е. верхней). Раствор 'застывает и '^!уй;фиксирует пленку с отпечатком. Подученный о оуботрата препарат ;_;;j ,^:Д; скрашивают :иымунофдуореоцейтнШ:Н^

Щ плёнку" наносят¹' шмунуюГбц^    разведении

1:10. Препараты остаются :8 контакте с сывороткой в точение •    •

15-20 минут во вдвеной камере (иоподьзкются чашка Петри) при ‘ температуре 37°. Поояе втого препараты промывают дввады по десять , минут физиологическим раотвором и обрабатывают дюминесцирующей . сединой сывороткой против rv глобулинов кролика. Техника : дриыевония люикнесцирующей сыворотки описана в наставлений, при-лапаемом к Канадой партии

Заключается она в следующем: сухую сыворотку, находнщую-■ _: , ся в ампудо, растворяют в 0,5 мл дио тиллиров анно:Гводы. После ■ растворения сыворотку центрифугируют при 3000 оборотов в минуту . в течение 20'минут в пенициллиновом флаконе и осторожно переносят пипеткой в новый флакон.    '.-•■■■    ,

.Сыворотку разводят до рабочего.разведения, указанного на ' этикетке.-^Еазведенную сыворотку наносят на препарат: и оставляют.

о    с    КИМ , ■    ,

контактеУво влажной камере при 37° в течение 15-20 минут.

; ; Затем препараты промывают. дважды в физиологическом растворе, -i ополаскивают дистиллированной водой, подсушивают на воздав и \ просматривают тюд люминесценткььм микроскопом в надаюсцкх сине- ; • фиолетовых лучах. При выявлении полиэдрешнх вирусных включений /Г (препараты ^иВИРШ-ЗКС^п.у    удобнее    пользовать(ж объек-

тивоы с. увеличением 40, в олучае выявления гранул» бхктериаль-. _;._f, них спор я кри о та л ли веского токоина (препараты онтобактерин, ■ • У • децдробацйлл>щ и др), - объективом маслянойиммерсии.. • / ••. / .Ус/::’- *

Для контроля иммунологической; спеди^лчнооти необходим _w ^ * просмотр, контрольных препаратов. ;    .    ■    /•;;

/    I.    Препараты^‘Обработанные по описанной методике» но нё

; содержащие , искомьа вирус^шх включений.^^. -    •/////    .    ~    - '

■ ^v .    2.: Препараты»' заведомо содержащие иокомые вирурше вклкяо-.'

V/-,/ ния.' . '' • ■.. ’ . .'./ У/-/;. У /■';'У■;;^

3. Препараты; обработанные".физиолёгичеоким раствором вмео-* . /:■ ТО мммушюй кроличьей СЫВОроТ1Ш. •

'    4.    Препараты,    обработа}шые нормальной сывороткой вместо .

Г-V специфической. _Л.'-У^;^/'//    /    7//y_f    У/.O/'    -    -    /У/./'

При соблюдении всех условий метода в контрольных препарата^ . •:/,    _; специфическое свечение' отсутствует. ' .

Расч.ет_обнар^же1Щ[0£о_кол11чес2ва действ^кщэг^ ,_х '

/•У;У    ,    ’    '    У    ■    начала^дрепарата^ ./

В ходе анализа. определяют площадь поля зрения микроскопа с рабочим объективом (используя окуляр ~ и объектмикрометры) и .подсчитывают число включений в 100-500 полях. Для удобства сч.е- ■ та определяют в каких пределах перемещения предметного столика / можно получить требуемое, число полей. Так если;работа ведется.

. о объективом х 40, то целесообразно перемещатьсто лик в про-/_: дольном направлении на 30 мм, что будет цоотвотствовать 100 :

/ диаметрам полей зрения. Устрн.овив среднее количестве микроорга/

О признании не подлежащими применению некоторых актов в сфере деятельности Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору по вопросам оформления горных отводов

В целях приведения нормативных правовых актов в соответствие с законодательством Российской Федерации приказываем:

Признать не подлежащими применению:

постановление Министерства природных ресурсов Российской Федерации от 7 февраля 1998 г. № 56 и Федерального горного и промышленного надзора России от 31 декабря 1997 г. № 58 «Об утверждении Инструкции по оформлению горных отводов для разработки месторождений полезных ископаемых» (зарегистрировано Министерством юстиции Российской Федерации 13 марта 1998 г., регистрационный № 1485; Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти, 1998, № 7);

приказ Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору и Министерства природных ресурсов Российской Федерации от 13 июля 2006 г. № 685/159 «О внесении дополнений и изменений в Инструкцию по оформлению горных отводов для разработки месторождений полезных ископаемых» (зарегистрирован Министерством юстиции Российской Федерации 13 июля 2006 г., регистрационный № 8055; Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти, 2006, № зо);

2

постановление Министерства природных ресурсов Российской Федерации и Федерального горного и промышленного надзора России от 25 марта 1999 г. № 18/24 «Об утверждении Инструкции по оформлению горных отводов для использования недр в целях, не связанных с добычей полезных ископаемых» (зарегистрировано Министерством юстиции Российской Федерации 27 апреля 1999 г., регистрационный № 1766; Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти, 1999, №20).

Руководитель Федеральной    Министр природных

службы по экологическому,    ресурсов и экологии

технологическому    Российской Федерации

и атомному надзору

С.Е. Донской