Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации    _

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест

Сборник методических указаний МУК 4.2.3249—14 МУК 4.2.3251—14 МУК 4.2.3253—14 МУК 4.2.3255—14 МУК 4.2.3257—14

Выпуск 1

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест

Сборник методических указаний МУК 4.2.3249—14 МУК 4.2.3251—14 МУК 4.2.3253—14 МУК 4.2J255—14 МУК 4.2.3257—14

Выпуск 1

ББК 51.21 И37

И37 Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест: Сборник методических указаний. Вып. 1.—М: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—40 с.

ISBN 978—5—7508—1414—5

1.    Разработаны и подготовлены ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова Минздрава России (д.б.н. И. И. Шеина).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6.11.2014 № 2).

3.    Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 30 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21

Ответственный за выпуск Н. В. Митрохина

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная вёрстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 21.08.15 Формат 60x88/16    Печ.    л. 2,5

Тираж 150 экз.    Заказ    54

Федеральная служба по надаору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательскою обеспечения Федерального цекгра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а

Отделение реализации, тсл./факс 952-50-89

€> Роспотребнадзор, 2015 О Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.2.3249—14, 4.2.3251—14,4.2.3253—14, 4.2.3255—14, 4.2.3257—14

Содержание

Микробиологическое измерение концентрации Rhodococcus jialingiae lkp ВКПМ Ac-1957 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3249—14..................................................................................................5

Микробиологическое измерение концентрации Azotobacter chroococcum ВН-1811 ВКПМ В-9029 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3251—14................................................................................................12

Микробиологическое измерение концентрации Bacillus mucilaginosus Вас-10 ВКПМ В-8966 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3253—14................................................................................................19

Микробиологическое измерение концентрации L. xylanilyticus 5rb ВКПМ

В-11685 в атмосферном воздухе населенных мест: МУК 4.2.3255—14..........26

Микробиологическое измерение концентрации Yarrowia lipolytica 2кр ВКПМ Y-4043 в атмосферном воздухе населенных мест:

МУК 4.2.3257—14................................................................................................33

3

МУК 4.2.3249—14,4.2.3251—14,4.2.3253—14, 4.2.3255—14,4.2.3257—14

Введение

Сборник методических указаний «Измерение концентраций штаммов микроорганизмов в атмосферном воздухе населенных мест» (выпуск 1) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций микроорганизмов их предельно допустимым концентрациям (ПДК), что является обязательным при осуществлении санитарно-эпидемиологического контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю биотехнологических штаммов в атмосферном воздухе населенных мест разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и Р 8.563—96 «Методики выполнения измерений».

Методики выполнены с использованием современных и адекватных микробиологических методов исследования и позволяют контролировать концентрации биотехнологических штаммов микроорганизмов на уровне и ниже их ПДК в атмосферном воздухе населенных мест, установленных в гигиенических нормативах.

Методические указания по измерению концентраций штаммов микроорганизмов в атмоферном воздухе населенных мест предназначены для лабораторий центров гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, санитарно-микробиологических лабораторий промышленных предприятий, а также для научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований, для осуществления контроля за содержанием штаммов в атмосферном воздухе населенных мест. ¹

МУК 4.2.3249—14

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

30 декабря 2014 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическое измерение концентрации Rhodococcus jialingiae lkp ВКПМ Ас-1957 в атмосферном воздухе населенных мест

Методические указания МУК 4.2.3249—14

назван. Является компонентом биопрепарата по биоремедиации почв, грунтов, водоемов и стоков от нефти и нефтепродуктов.

По анализу секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК, выделенный штамм является Rhodococcus jialingiae (99%). Аэроб. Способен к росту на средах, содержащих источники углерода. Хорошо утилизирует фруктозу, сорбит, маннит, инозит, слабее глюкозу, сахарозу, мальтозу, сукцинат, цитрат и бензоат, активно разлагает тирозин.

По систематическому положению относится к группе нокардио-формных актиномицетов к подгруппе бактерий, содержащих миколовые кислоты.

Макроскопически колонии микроорганизма круглые, непрозрачные, слизистые, блестящие, плоские, вершина приподнята, края ровные, окраска розовато-кремовая.

При микроскопическом исследовании культура представлена кокковидными клетками, иногда палочками, неравномерными по толщине грамположительными клетками, споры отсутствуют. В молодой культуре палочки проявляют склонность к ветвлению (образование примитивного мицелия), диаметр клеток 0,6—0,8 мкм, длина в среднем составляет 4—8 мкм, в случае примитивного мицелия - до 10—12 мкм. Цикл развития хорошо выражен, на ранних стадиях (20—24 ч) наблюдается элементарное ветвление, в дальнейшем (3—4 сут.) происходит распад длинных клеток на палочковидные и кокковидные элементы.

Мезофил. Рост очень хороший - через 24 ч при 25—28 °С образует колонии на глюкозо-пептонном агаре. Выдерживает концентрации хлорида натрия до 1 % и немного более.

Штамм растет на жидких и агаризованных средах - глюкозо-пептонном агаре (ГПА), мясо-пептонном агаре (МПА), АГВ-среде, картофельном агаре (КА). Можно культивировать в LB-бульоне, на LB-ara-ре и готовой глюкозо-пептонной среде (ГПС).

Штамм R. jialingiae lkp депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ Ас-1957.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 5 ООО кл/м³.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнения измерений количества бактерий в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 50 до 50 000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95.

МУК 4.2.3249—14

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из атмосферного воздуха населенных мест бактерий на глюкозо-пептонный агар и подсчете количества выросших колоний по типичным культурально-морфологическим и физиологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы, реактивы и питательные среды.

5.1. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и пределом допустимой погрешности ± 2,5 мм рт. ст.

Весы лабораторные, аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг Колбы мерные 2-100-2,2-250-2, 2-1000-2 Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см³ Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25 и 50 см³

Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения 0—55 °С

Аспирационный аппарат и устройство для отбора проб воздуха

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5.2. Вспомогательные устройства и материалы Шкаф сушильный стерилизационный, позволяющий поддерживать температуру (160 ±5) °С

Термостаты, позволяющие поддерживать рабочую температуру (28 ± 2) и (37 ± 2) °С Автоклав электрический ²

Стерилизаторы паровые медицинские Дистиллятор

Облучатель бактерицидный настенный Холодильник бытовой Микроскоп биологический с иммерсионной системой

Лупа с увеличением х10 Пробирки типов П1, П2 Спиртовки лабораторные стеклянные Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов Воронки конусные диаметром 40—45 мм Г руша резиновая Петля бактериологическая Марля медицинская Вата медицинская гигроскопическая Бумага фильтровальная лабораторная

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.5. Реактивы и питательные среды Агар микробиологический    ГОСТ 17206-96

Вода дистиллированная    ГОСТ 6709-90

Глюкоза    ГОСТ 6038-79

Пептон сухой ферментативный    ГОСТ 13805-76

Спирт этиловый технический    ГОСТ 17299-78

Спирт этиловый ректификованный    ГОСТ Р 51652-2000 или

ГОСТ 18300-87 Натрий хлористый, хч    ГОСТ 4233-77

Глюкозо-пептонная среда стандартная

Примечание. Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток штамма в атмосферном воздухе населенных мест соблюдают следующие требования.

6.1. СП 1.3.2322—08 «Безопасность работы с микроорганизмами III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных

болезней».

МУК 4.2.3249—14

6.2.    СП 1.3.2518—09. Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322—08.

6.3.    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.4.    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.5.    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Приготовление сред, подготовку к анализу проводят в следующих условиях:

- температура воздуха    (20 ± 5 ) °С;

-    атмосферное давление (760 ± 20) мм рт. ст.;

-    влажность воздуха    не    более    80    %.

9. Приготовление питательных сред

9.1. Глюкозо-пептонный агар (ГПА)

Для приготовления используют сухую готовую глюкозо-пептонную среду: 50,0 г порошка размешивают в 1 000 мл дистиллированной воды. Можно использовать отдельные компоненты среды следующего состава: пептон - 20,0 г; глюкоза - 10,0 г; хлорид натрия - 5,0 г; агар-агар - 15,0 г. Сухие компоненты растворяют в 1 000 см³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают и нагревают до полного растворения агара.

Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 250— 500 см³ и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

9.2. Глюкозо-пептонный агар с 1 %-м хлоридом натрия

Приготовление среды проводят аналогично п. 9.1, добавляя 10 г/л хлорида натрия, т. е. в 2 раза больше рекомендованного количества.

Готовые среды хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8 °С в течение 14 дней, не более. ³

1

2

3