Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций изопротиолана в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3494—17

Издание официальное

Москва • 2018

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций изопротиолана в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3494—17

7.7. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха Диаметр фильтра высокой плотности должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25—30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.8.    Подготовка фильтров из пенополиуретана

для отбора проб воздуха

7.8.1. Приготовление 5%-го раствора диэтилового эфира в н-гексане В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 5 см³ диэтилового эфира, доводят н-гексаном до метки, перемешивают.

7.8.2. Подготовка фильтров из пенополиуретана для отбора проб воздуха Пенополиуретановые фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера 5%-м раствором диэтилового эфира в н-гексане.

До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.9.    Подготовка салфеток для проведения смыва

7.9.1.    Приготовление раствора натрия углекислого

с массовой долей 5 % (5%-й раствор)

Навеску (25 ± 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.9.2.    Подготовка салфеток для проведения смыва

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 х 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и условия хранения проб

8.1. Воздушная среда Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02—81 «ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест», ГОСТ 12.1.005-88

«ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» и Р 2.2.2006—05 (прилож. 9, обязательное) «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», пункт 2 «Контроль соответствия максимальным ПДК».

Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через систему, состоящую из последовательно соединенных бумажных фильтров высокой плотности и фильтров из пенополиуретана. Для определения вещества на уровне предела обнаружения (0,002 мг/м³) необходимо отобрать 50 дм³ воздуха (воздух рабочей зоны), для атмосферного воздуха необходимо отобрать 150 дм* воздуха на уровне предела обнаружения (0,0007 мг/м³). Экспонированные фильтры помещают в полиэтиленовые пакеты. Срок хранения экспонированных проб воздуха, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике (при 4—6 °С), в защищенных от света условиях не более 5 суток.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре -18 °С.

8.2. Смывы с кожных покровов Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой пли другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения экспонированных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике (при 4—6 °С), в защищенных от света условиях не более 7 дней.

Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре не выше -18 °С.

9. Выполнение измерений

9.1. Воздушная среда Экспонированные фильтры переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 20 см³ смеси ацетонитрила и бидистилли-рованной воды (9 : 1 по объему), помещают на встряхиватель на 10 ми-

пут. Растворитель сливают, фильтр из пенополиуретана отжимают с помощью стеклянной палочки. Фильтры еще дважды обрабатывают новыми порциями растворителя объемом 20 см³, выдерживая на встря-хивателе по 5 минут.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию изопротиолана в хроматографируемом растворе.

9.2. Смывы с кожных покровов Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 см³ подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика изопротиолана и с помощью градуировочного графика определяют концентрацию вещества в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

10.1. Воздушная среда Концентрацию вещества в пробе воздуха (.X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

к

С - концентрация изопротиолана в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W ~ объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура: 20 °С -воздух рабочей зоны и 0 °С - атмосферный воздух), дм³:

у _ R'P'M

' “ 273 + Т ⁹

Т - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

/ - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 — для атмосферного воздуха.

10.2. Смывы с кожных покровов

Концентрацию вещества в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

Х*= С * IV, где

С - концентрация вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде: результат анализа X в мг/м³ или мкг/смыв (с указанием площади смыва в см²), характеристика погрешности 8, % (табл. 1), Р = 0,95 или (X ± Д) мг/м³ (мкг/смыв, площадь смыва, см²), Р = 0,95, где X- среднее арифметическое результатов определений, мг/м³ (мкг/смыв);

Д - граница абсолютной погрешности, мг/м³ (мкг/смыв):

<5 - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание изопротиолана в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,002 мг/м³*; в пробе атмосферного воздуха — менее 0,0007 мг/м³*; в пробе смыва - менее О, I мкг/смыв*».

* - 0,002 мг/м³; 0,0007 мг/м³; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 50 дм³ воздуха рабочей зоны; при отборе 150 дм³ атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см^) соответственно.

12. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)—02 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

12.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончанию серии анализов. Измерения проводят не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание изопротиолана в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 2,5 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

|Л'-С|-100 А = --^-<    В, гае

А - величина расхождения, %;

X- концентрация изопротиолана в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора изопротиолана, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (В - 10 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее

стабильности с использованием других градуировочных растворов изо-протиолана, предусмотренных МИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.5.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

12.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом «добавок».

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с фильтра, а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы -X. Во вторую часть вносят добавку анализируемого компонента (величина добавки С_д должна соответствовать 50—150 % от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - Х\ Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (Х') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т. д.).

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С_ь >    +    Д, , где

± А_л £ (± Д_{д х},) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой), мг/м³, мкг/смыв.

Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать с последующим уточнением по мерс накопления информации на основе выражения:

4»= ± 0,84 Д, где А - граница абсолютной погрешности, мг/м³, мкг/смыв:

S - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

= Х'~ Х~Сь где

X', X, С_д - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно (мг/м³, мкг/смыв).

Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (Air) с нормативом контроля (К).

Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

VU*K    0)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

\X,-X₂\ZR_y где    (2)

R - предел воспроизводимости (табл. 1), мг/м³, мкг/смыв.

R = 0,10 • X (воздушная среда),

R - 0,24 • X (смывы с кожи).

X = V₂ (Х\ + Х₂), где Xj, Х₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³, мкг/смыв.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.

ББК 51.21+51.24 И37

ИЗ7    Измерение концентраций изопротиолана в воздухе рабо

чей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—16 с.

ISBN 978-5-7508-1641-5

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В. Н. Ракитский, Н. Е. Федорова, Л. Г. Бондарева).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24 ноября 2017 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 29 декабря 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.21+51.24

Редактор Л. С. Кучурова Компьютерная верстка Е. В. Ломановой

Подписано в печать 9.10.18 Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,0

Т ираж 150 экз.    Заказ    46

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, ВадковскиЙ пер., д. 18, стр. 5,7

Оригинал-макет подготовлен к печати и т иражирован Федеральным центром гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Реализация печатных изданий, тслУфакс: 8 (495) 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2018

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

29 декабря 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций изопротиолана в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.3494—17_

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации изопротиолана в диапазоне 0,002—0,04 мг/м³, 0,0007 —0,014 мг/м³ и 0,1—2,0 мкг/смыв соответственно.

Методические указания носят рекомендательный характер. Изопротиолан

2-(1,3-Дитиоланилиден-2)-малоновой кислоты диизопропиловый эфир (IUPAC).

Структурная формула:    Н₅С^    /^СН*

Эмпирическая формула: Ci₂H_l80₄S₂.

Молекулярная масса: 290,4.

Бледно-желтый пылящий порошок с раздражающим запахом, Тпп = 54,5 °С, Тки* = 167—169 °С при 18,8 МПа Растворимость в воде (20 °Q: 54 мг/дм³, хорошо растворим в большинстве органических растворителях.

Область применения. Изопротиолан - фунгицид, используется как регулятор роста растений, обладает лечебным действием.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, МГ/м , м кг/см ы в Показатель точности (граница относительной погрет носги), ± 8 %, Р = 0,95 Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), % Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение вос-произво-димо-сти), (Тц, % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % Атмосферный воздух 0,0007— 0,014 21 2,4 3,4 7 10 Воздух рабочей зоны 0,002— 0,04 21 2,4 3,4 7 10 Смывы с кожных покровов о J о 23 6,1 8,5 17 24

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п - 20) приведены в табл. 2. Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Мсзролошческие параметры, Р = 0,95, п ~ 20 предел обнаружения, мг/м3, мкг/смыв диапазон определяемых концентраций, мг/м3 полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±, % Атмосферный воздух 0,0007 0,0007— 0,014 84,4 2,4 1,3 Воздух рабочей зоны 0,002 0,002—0,04 84,4 2,4 1,3 Смывы с кожных покровов 0,1 0 1 о 85,0 2,4 2,1

2. Метод измерений

Измерения концентраций изопротиолана выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на систему фильтров, состоящую из фильтра высокой плотности и фильтра из пенополиуретана, экстракцию проводят смесью ацетонитрила и воды в соотношении 9 : 1 по объему. Смывы с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 84,4 %, с поверхности кожи -

85.0    %.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф с быстросканирую-щим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, термостатом колонки Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст.

Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности 0,0001 г Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Меры массы

Пробоотборное устройстве 2-канальное, с диапазонами расхода 0,2—1,0 дм³/мин и 5,0—

1.0    дм³/мин

Термометр лабораторный шкальный, пределы измерения от -35 до +55 °С Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 100, 500 и 1 000 см³ Мерные колбы вместимостью 25, 100, 500 и 1 000 см³

Пипетки мерные объемом 1,2, 5 и 10 см³ Виалы хроматографические из темного стекла, объемом 2 см³

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Изопротиолан, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 100 % Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (бидистил-лированная или деионизованная)

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный

Калий марганцовокислый (перманганат калия), хч

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Спирт этиловый (этанол) ректификованный

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора), хч Гексан, осч

Диэтиловый эфир, чда

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер, диапазон регулировки оборотов 50— 200 об./мин, орбита до 10 мм Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц Бумажные фильтры высокой плотности, обез-золенные (фильтры)

Бязь хлопчатобумажная белая Колбы конические круглодонные (для упаривания) на шлифе вместимостью 150 см⁵ Линейка измерительная Мембраны микропористые капроновые, размер пор 0,45 мкм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный Пинцет медицинский нержавеющий Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой

Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30

Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

Стаканы химические с носиком вместимо-

стью 150 см³    ГОСТ    25336—82

Стекловата

Стеклянные палочки

Пробоотборный картридж, заполненный

пенополиуретаном

Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм. внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращснно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами С-8 или С-18, зернением 5 мкм

Примечание. Допускается использование вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.    Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-2015. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

5.    Требования к оператору

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыты работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (201 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.7. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентокси-дом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в ёмкости из темного стекла.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 700 см³ ацетонитрила и 300 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.4.1.    Исходный раствор изопротиолана для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,0100 ± 0,0001) г изопротиолана, растворяют в 50—60 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца в защищенных от света условиях.

7.4.2.    Рабочий раствор N9 1 изопротиолана для градуировки и внесения (концентрация 10,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного градуировочного раствора с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.4.1), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор № 1 с концентрацией изопротиолана 10,0 мкг/см³.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца в защищенных от света условиях.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом «внесено-найдено» и контроля качества результатов измерений методом «добавок».

7.4.3. Рабочие растворы №2—7 изопротиолана для градуировки (концентрация 0,05—2,5 мкг/см³). В 6 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10 и 25 см³ рабочего раствора № 1 с концентрацией 10,0 мкг/см³ (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №2—7 с концентрациями изопротиолана 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см³.

Растворы хранят в холодильнике при температуре А—6 °С в течение месяца в защищенных от света условиях.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации изопротиолана в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных ниже. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков изопротиолана, на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.6. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором и термостатом колонки.

Хроматографическая колонка стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми алкильными группами (С-18 или С-8), зернением 5 мкм.

Рабочая длина волны: 305 нм.

Температура колонки: 25 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-бидистиллированная вода (70 : 30, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования: 1—50 нг.