Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧНСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указании МУК 4.1.3489/1—17

Издание официальное

Москва *2018

Федеральная служба но надзору в сфере зашиты нрав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3489/1—17

Магний сернокислый (сульфат магния), безводный хч    ГОСТ 4523-77

Натрий сернокислый (сульфат) безводный, хч    ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый (хлорид натрия), хч    ГОСТ 4233-77

Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми пропиламинными группами: (CHjfcNHz (SPA), площадь поверхности -570 м/Г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм

Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (СН₂),₇СНз (С18ЕС), площадь поверхности -547 м²/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм

Графитизированная сажа (GCB), специфическая площадь поверхности - 100 м²/г, размер частиц 120/400 меш

Силикагель 60, нейтральный, для колоночной хроматографии (размер частиц 63—200 меш)

Уксусная кислота, ледяная, хч    ГОСТ 61-75

Флорисил, активный, для колоночной хроматографии (размер частиц 60—100 меш)

Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид,

пентоксид фосфора), хч    ГОСТ 22300-76

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройства, материалы Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер, диапазон регулировки оборотов 50—

200 об./мин, орбита до 10 мм Баня водяная

Баня ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц Воронки химические стеклянные конусные Воронка Бюхнера

Виала стеклянная на 1,5 см¹ с крышкой и фторопластовой прокладкой Груша резиновая Измельчитель бытовой

Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см³ Колба Бунзена

Колбы круглодонные на шлифе (для упаривания) вместимостью 25, 50 и 150 см³ Колбы плоскодонные конические вместимостью 250 см³

Колонка стеклянная длиной 25 см, внутренним диаметром 10—12 мм Холодильник/морозильник бытовой Насос водоструйный

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Пробирки полипропиленовые це    е    с

крышками вместимостью 2 и 50 см Ректификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30

Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающий вакуум до 10 мбар

Стаканы химические с носиком вместимостью 400 см³

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Фильтры мембранные для фильтрации проб

с помощью шприца, размер пор 0,22 мкм

Фильтры бумажные средней плотности, обеззо-

ленные    ТУ    2642-001-68085491—11

Центрифуга лабораторная, роторная, скорость

вращения до 4 000 об./мин

Хроматографическая капиллярная кварцевая

колонка длиной 30 м, внутренним диаметром

0,25 мм, содержащая сорбент: 5 %- фенил и

95 %- диметилполисилоксан (толщина пленки

сорбента 0,25 мкм)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 14 %- цианопро-пилфенил, 86 % - метил полис ил океан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм)

Шприцы медицинские одноразовые вместимо-

стью 5 см¹    ГОСТ    24861—91

Примечание. Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовые хроматографы.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-15. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда -по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3.    При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать федеральные нормы и правила в области промышленной безопасности «Правила промышленной безопасности опасных производственных объектов, на которых используется оборудование, работающее под избыточным давлением» (утв. приказом Ростехнадзора от 25.03.2014 № 116). Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом капиллярной газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

—    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

-    выполнение измерений на газовых хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, раствора внесения, установление градуировочных характеристик, подготовка смеси солей и сорбентов, подготовка колонки, проверка поведения веществ на ней.

7.7. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонке с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Ацетонитрил Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.2. Приготовление раствора уксусной кислоты в ацетонитриле с объемной долей 1 % (1%-й раствор)

В мерную колбу вместимостью I ООО см³ помещают 300—400 см³ ацетонитрила, вносят 10 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.3. Приготовление раствора ацетона в ацетонитриле с объемной долей 30 % (30%-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 300—400 см³ ацетонитрила, вносят 300 см³ ацетона, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.4.1. Исходный раствор фипронила для градуировки (концентрация 100 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,01 ± 0,0001) г фипронила, растворяют в 50—70 см³ ацетона, доводят ацетоном до мет-

ки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.4.2.    Исходный раствор фипронил-сульфона для градуировки

(концентрация 100 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,01 ± 0,0001) г фипронил-сульфона, растворяют в 50—70 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике при температуре (4 ± 2) °С в течение 6 месяцев.

7.4.3.    Рабочий раствор № 1 фипронила и фипронил-сульфона для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают по 1,0 см³ исходных градуировочных растворов фипронила и фипронил-сульфона с концентрациями 100,0 мкг/см³ (п. 7.4.1 и 7.4.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 1 с концентрациями фипронила и фипронил-сульфона по 1,0 мкг/см³.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом «добавок».

7.4.4.    Серия Ne 1 (МСД). Рабочие растворы Ns 2-6 фипронила и

фипронил-сульфона для градуировки (концентрации 0,002—0,05 мкг/см³)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 см¹ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 7.4.3), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №2—6 с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,002; 0,005; 0,01; 0,02 и 0,05 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике (4 ± 2) °С в течение одной недели.

7.4.5.    Серия Ns 2 (ДЭЗ). Рабочие растворы Ns 2'—б' фипронила и

фипронил-сульфона для градуировки (концентрации 0,005—0,05 мкг/см³)

В 5 мерных колб вместимостью 100 см³ помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 2,5 и 5,0 см³ градуировочного раствора № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см³ (п. 7.4.3), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2*—6' с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,005; 0,01; 0,02; 0,025 и 0,05 мкг/см³ соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре (4 ± 2)°С в течение одной недели.

7.5. Приготовление смеси солеи для экстракции Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4 ± 0,01) г магния сернокислого и (1 ± 0,01) г натрия хлористого, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

Примечание. Возможно использование коммерческих наборов солей QuEChERS для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

7.6. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 2 см³ помещают (50 ± 4) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина, (50 ± 4) мг графитизированной сажи, (150 ± 4) мг магния сернокислого и (50 ± 4) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование коммерческих дисперсионных наборов QuEChERS для фруктов и овощей с маслом и пигментами, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 2 см³.

7.7. Подготовка колонки для очистки экстракта Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 10—12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, засыпают 2 г флорисила, 2 г силикагеля и 6 г безводного сульфата натрия, легко утрамбовывая каждый слой. Колонку промывают последовательно 25 см³ ацетона и 25 см³ ацетонитрила. Скорость прохождения растворителя 1— 2 капли в секунду. Не допускать высыхания верхнего слоя! Колонка готова к работе.

7.8. Проверка хроматографического поведения фипронила и фипронил-сульфона на колонке В круглодонную колбу вместимостью 25 см³ помешают 1,0 см³ градуировочного раствора №6' с концентрацией фипронила и фипронил-сульфона 0,05 мкг/см³ (п. 7.4.5), упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 35—40 °С. Остаток растворяют в 3,0 см³ ацетонитрила, помещая на ультразвуковую баню на 30 с. Полученную пробу наносят на колонку, подготовленную по п. 7.8.

Колбу обмывают дважды ацетонитрилом, порциями по 3 см³, которые также наносят на колонку. Скорость прохождения растворителя через колонку1—2 капли в секунду. Элюат отбрасывают. Вещества элюируют 75 см³ ацетонитрила, собирая 5 порций элюента по 15 см³ в 5 круглодонных колб для упаривания вместимостью 50 см³. Растворы упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, сухой остаток растворяют в 1 см³ ацетона, анализируют содержание фипронила и фипро-нил-сульфона по п. 9.3.1 или 9.3.2.

Фракции, содержащие фипронил и фипронил-сульфон, объединяют и вновь анализируют. Устанавливают уровень веществ в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

Примечание. Проверку хроматографического повеления веществ следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

7.9. Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие линейную (с угловым коэффициентом) зависимость площади пика от концентрации фипронила или фипронил-сульфона в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки № 2—6 (серия 1) и № 2—6' (серия 2).

В инжектор газового хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3.1 или п. 9.3.2. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков веществ, на основании которых строят градуировочные зависимости.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб осуществляют в соответствии с ГОСТ 30363-13 «Продукты яичные жидкие и сухие пищевые. Технические условия», ГОСТ 31654-12 «Яйца куриные пищевые. Технические условия», ГОСТ 31467-12 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям».

Пробы продуктов яичных сухих пищевых хранят при комнатной температуре не более 2 недель. Пробы яиц хранят при температуре (4 ± 2)°С не более недели, мяса и субпродуктов птиц - не более суток. Для длительного хранения пробы продуктов яичных сухих пищевых, яиц, мяса и субпродуктов птицы помещают в морозильную камеру (температура не выше -18 °С).

9. Выполнение определения

9.1.    Способ 1 9.1.1 Экстракция

Образец продуктов яичных сухих пищевых, взбитых яиц, измельченного мяса или субпродуктов птицы массой 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см³. Пробу взбитых яиц, измельченного мяса н субпродуктов птицы помещают на 10—15 мин в морозильную камеру. Добавляют 10 см³ 1%-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле (подготовленного по п. 7.5). Далее в пробу меланжа вносят 10 см* бидистиллированной воды, в пробу порошка яичного белка пастеризованного - 15 см³ бидистиллированной воды. Помещают в пробирку керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 1 мин, вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 7.6), закрывают крышкой и снова интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу помещают на 10—15 мин в морозильную камеру, центрифугируют в течение 5 мин при скорости вращения 4 000 об./мин и подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 9.1.2.

9.1.2. Очистка экстракта

Надосадочную жидкость (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 1,5—1,8 см³ с помощью пипетки переносят в полипропиленовую центрифужную пробирку, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 7.6. Закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 с. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4 000 об./мин и помещают в морозильник на 10—15 мин. Отбирают с помощью медицинского шприца раствор, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в стеклянную виалу на 1,5 см³ и анализируют по п. 9.3.1 или 9.3.2.

9.2.    Способ 2

9.2.1. Экстракция

Пробу продуктов яичных сухих пищевых, взбитых яиц, измельченного мяса или субпродуктов птицы массой 25 г помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ 30%-го раствора ацетона в ацетонитриле (подготовленного по п. 7.3). Вручную перемешивают в течение 1 мин, выдерживают на ультразвуковой бане в

течение 15 с и помещают на аппарат для встряхивания на 15 мин. Затем пробу помещают на 1 ч в морозильную камеру.

Раствор фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Осадок на фильтре промывают 30 см³ 30%-го раствора ацетона в ацетонитриле.

Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр на 250 см³. Общий объем экстракта доводят до 150 см³ ацетонитрилом. Перемешивают и пипеткой вместимостью 10 см³ отбирают аликвоту объемом 6 см³ (1/25 часть экстракта, соответствует 1 г пробы) для очистки на колонке по п. 9.2.2.

9.2.2. Очистка экстракта на колонке с сорбентами

Аликвоту экстракта объемом 6 см³ (полученную по п. 9.2.1) наносят на колонку, подготовленную по п. 7.7. Скорость прохождения растворителя через колонку - 1—2 капли в секунду.

Фипронил и фипронил-сульфон элюируют с колонки 75 см³ ацетонитрила (элюент), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 см³, раствор упаривают до объема приблизительно 5 см³ при температуре не выше 35 °С, переносят раствор в круглодонную колбу на 25 см³, омывая колбу на 150 см³ три раза ацетонитрилом порциями по 2—3 см³ и упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 см³ ацетона, помещают на ультразвуковую баню на 30 с и анализируют содержание веществ по п. 9.3.1 или 9.3.2.

Примечание Объем злюента может быть изменен в соответствии с результатами проверки хроматографического поведения веществ на колонке по п. 7.7.

9.3. Условия хроматографирования

9.3.1. Метод газожидкостной хроматографии с масс-селективным детектором (МСД)

Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детекторам (МСД)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5 % - фенил, 95 % - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура детектора: квадруполя - 150°С, источника - 230 °С, переходной камеры - 280 °С.

Температура испарителя: 270 °С.

Темперагура термостата колонки программированная. Начальная температура — 100°С, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 15

градусов в минуту до температуры 220 °С, выдержка 5 мин, затем нагрев колонки со скоростью 20 градусов в минуту до температуры 270 °С, выдержка 3 мин.

Газ 1 (гелий): поток в колонке 1,2 см³/мин,

давление 12,93 psi, средняя линейная скорость 40,853 см/с.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Режим регистрации индивидуальных ионов

Отношение масса-заряд: фипронил - 367 (количественный расчет),

255,213

фипронил-сульфон - 383 (количественный расчет), 255,452

Линейный диапазон детектирования: 0,002—0,05 нг.

Ориентировочное время удерживания: фипронила— 11,35 мин, фи-пронил-сульфона - 13,12 мин.

9.3.2. Метод газожидкостной хроматографии электронозахватным детектором (ДЭЗ)

Гновый хроматограф, снабженный электронозахватным детекторам (ДЭЗ)

Хроматографическая капиллярная кварцевая колонка длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 14 % - цианопро-пилфенил, 86 % - метилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура: детектора - 280 °С,

Испарителя - 260 °С

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 180°С, выдержка 3 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 250 °С, выдержка 6 мин, затем нагрев колонки со скоростью 25 градусов в минуту до температуры 270 С.

Газ 1 (азот): давление 100 кПа, скорость 29 см/с.

Газ 2: деление потока 1 : 2, сброс 5,5 см³/мин.

Хроматографируемый объем: 2 мм³.

Линейный диапазон детектирования: 0,01—0,1 нг.

Ориентировочное время удерживания: фипронила - 10,59 мин, фи-пронил-сульфона - 12,31 мин.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор фипронила или фипронил-сульфона с концентрацией 0,05 мкг/см³, разбавляют ацетоном, не более чем в 50 раз.

ББК 51.23 062

0-62 Определение остаточных количеств фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы методом капиллярной газожидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2018.—23 с.

ISBN 978-5-7508-1630-9

1.    Разработаны сотрудниками ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф Ф Эрисмана» Роспотребнадзора (В. Н. Ракитский,

Н. Е. Федорова. М. В Ларькина. С. К. Рогачева, Д. Н. Соболев,

В. В. Баюшева)

2.    Свидетельство об аттестации МИ № РОСС RU.0001.310430/ 0026.09.10.17.

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 5 октября 2017 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978-5-7508-1630-9

€> Роспотребнадзор, 2018

10. Обработка результатов анализа

Содержание фипронила с учетом его метаболита фипронил-сульфона (в эквиваленте фипронила) в пробе (Х_% мг/кг) рассчитывают по формуле:

(А 4 Б К) V С т

А - концентрация фипронила, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

Б - концентрация фипронил-сульфона, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленною для хроматографирования, см³; V - 10 см³ (способ 1) и V = 1,0 см³ (способ 2);

т - масса анализируемого образца, г;

С - коэффициент пересчета, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятой для анализа, С - 1 (способ 1), С = 25 (способ 2);

К - коэффициент пересчета содержания фипронил-сульфона на эквивалент фипронила по соотношению молекулярных масс (К = 0,96).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

г\х,~х\100

—^J-< г, где

(Х,+Х₂)    -

X_h X] — результаты параллельных определений, мг/кг;

г - значение предела повторяемости (табл. 1,2), при этом г = 2,8<т,.

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов Результат анализа представляют в виде:

(X ± Д) мг/кг при вероятности Р - 0,95, где

X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека,

Г лавный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

5 октября 2017 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила и

его метаболита фипронил-сульфона в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.3489/1—17_

Область применения

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода газовой хроматографии с масс-селективным (МСД) и электронозахватным (ДЭЗ) детекторами для определения в продуктах яичных сухих пищевых, яйцах, мясе и субпродуктах птицы массовой концентрации фипронила и его метаболита фипронил-сульфона в диапазонах 0,002—0,05 мг/кг (МСД) и 0,005—0,05 мг/кг (ДЭЗ).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Фипронил

(±)-5-амино-1 -(2,6-дихлор-а,а,а-трифтор-л-толил)-4-трифтормегилсульфинил-пиразол-3-карбонитрил (ИЮПАК)

C₁₂H₄CI₂F₆N₄OS Молекулярная масса: 437,2.

Фипронил представляет собой бесцветный кристаллический порошок с запахом плесени. Температура плавления: 203 °С. Давление паров: 3,7- КГ⁴ МПа (при 25 °С). Удельная плотность: 1,71 г/см³. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: K_owIogP = 3,75 (при pH 7 и 20 °С). Растворимость в воде (мг/дм³, 20 °С): 3,78. Растворимость в органических растворителях (мг/дм³, 20 °С): ацетон - 545 900; метанол -137 500; толуол - 3 000; гексан - 28. Не устойчив к фотолизу: DT_S0 -0,33 дня.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс - 92 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) для кроликов - 354 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - 0,36 мг/дм³ воздуха.

Основным продуктом метаболитической деградации (окисление) фипронила в воде, растениях и почве является фипронил-сульфон.

Фипронил-сульфон (МВ46136)

(±)-5-амино-1-(2,6-дихлор-а,а,а-трифтор-л-толил)-4-трифторметилсульфонил-пиразол-3-карбонитрил (ИЮПАК)

С₁₂Н4 CUWOsS Молекулярная масса: 453,2

Область применения. Фипронил - инсектицид широкого спектра действия - контактный и кишечный яд. Имеет умеренные системные свойства и высокую остаточную активность при обрабатывании листьев, может применяться для обработки и протравливания семян. Блокирует рецепторы насекомых и членистоногих, нарушает передачу нервных импульсов, что приводит к параличу и гибели паразитов.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 и 2 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости (МСД)

Анализи руемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, Р = 0,95), ±5,%	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости). стг, %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), CTR. %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г,%	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (Р = 0,95)
Фипронил
Продукты яичные сухие пищевые	0,002- 0,05	50	7,7	10,8	22	30
Яйца	0,002- 0,05	50	7,1	9,9	20	28
Мясо и субпродукты птицы	0.002- 0.05	50	6.1	8,5	17	24
Фипронил-сульфон
Продукты яичные сухие пищевые	0,002- 0,05	50	8,7	12,2	24	34
Яйца	0,002- 0,05	50	6,5	9,1	18	26
Мясо и субпродукты птицы	0,002- 0,05	50	7,9	11,0	22	31

Таблица 2 Значения характеристики погрешности, нормативов оперативного контроля точности, повторяемости, воспроизводимости (ДЭЗ)

Анализи руемый объект Диапазон опреде ляемых концен траций, мг/кг Показатель точности (границы относительной погрешности, Р = 0,95), ± 5, % Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), <г»% Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), <7Л, % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), /*,% Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), /?, %,(/> = 0,95) Фипронил Продукты яичные сухие пищевые 0,005- 0,05 50 8,6 12,0 24 34 Яйца 0,005- 0,05 50 7,2 Ю,1 20 28 Мясо и субпродукты птицы 0,005- 0,05 50 6,4 9,0 18 25 Фипронил-сульфон Продукты яичные сухие пищевые 0,005- 0,05 50 5,9 8,2 16 23 Яйца 0,005- 0,05 50 5,0 6,9 14 19 Мясо и субпродукты птицы 0,005- 0,05 50 7,7 10,8 22 30

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п = 20) приведены в табл. 3 (МСД) и 4 (ДЭЗ).

Полнота извлечении веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата (МСД)

Таблица 3

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 предел обнаружения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества, % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±, % Фипронил Продукты яичные сухие пищевые 0,002 0,002—0,05 103,9 8,0 4.2 Яйца 0,002 0,002—0,05 87,7 8,2 4,3 Мясо и субпродукты птицы 0,002 0,002—0,05 91,7 10,4 5,4 Фипронил-сульфон Продукты яичные сухие пищевые 0,002 0,002—0,05 101,2 9,9 5,2 Яйца 0,002 0,002—0,05 86,6 9,3 4,8 Мясо и субпродукты птицы 0,002 0,002—0,05 95,8 13,0 6,8

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднею результата (ДЭЗ)

Таблица 4

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р - 0,95, п = 20 предел обнаружения, мг/кг диапазон определяемых концентраций, мг/кг полнота извлечения вещества % стандартное отклонение, % доверительный интервал среднего результата, ±, % 1 2 3 4 5 6 Фипронил Продукты яичные сухие пищевые 0.005 0.005—0,05 81.9 8,3 4.3 Яйца 0,005 0,005—0,05 89,6 6,0 3,2 Мясо и субпродукты птицы 0,005 0,005—0,05 90,4 5,9 3,1

Продолжение табл. 4

1 I 2 I 3 I 4 I 5 |6 Фипронил-сульфон Продукты яичные сухие пищевые 0,005 0,005—0,05 82,4 6,4 3,4 Яйца 0,005 0,005—0,05 86,4 7,5 3,9 Мясо и субпродукты птицы 0,005 0,005—0,05 90,8 7,7 4,0

2. Метод измерений

Метод основан на определении фипронила и фипронил-сульфона с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с масс-селективным детектором (МСД) и детектором электронного захвата ионов (ДЭЗ).

Метод включает два способа пробоподготовки.

Согласно первому способу экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют ацетонитрилом, содержащим 1% уксусной кислоты, с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния и хлорида натрия), очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе амина, октадецилсилана и графитизированной сажи.

По второму способу экстракцию веществ из анализируемых проб выполняют 30%-м ацетоном в ацетонитриле, пробы вымораживают, фильтруют и очищают аликвоту экстракта на колонке, содержащей силикагель и флорисил.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. и с пределом допустимой погрешности (1 ± 2,5) мм рт. ст.

Весы аналитические с пределом взвешивания 110 г и пределом допустимой погрешности 0,0001 г

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 420 г и пределом допустимой погрешности ±0,01 г Газовый хроматограф, снабженный масс-селективным детектором с пределом детектирования по октафторнафтапину 10~^и г, предназначенный для работы с капиллярными колонками Газовый хроматограф, снабженный электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану 1,6 х- 10~¹⁴ г/с, предназначенный для работы с капиллярными колонками Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 50, 100 и 1 000 см³ Меры массы

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0 и 10 см³ Термометр с диапазоном измерений от 0 до 55 °С и ценой деления 0,1 °С Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 10, 100 и 250 см³

Примечание. Допускается использование других средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Финронил, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,6 % Фипронил-сульфон, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 98,9 %

Азот газообразный нулевой, в баллонах Ацетонитрил для хроматографии, хч Ацетон, осч

Гелий газообразный вч, в баллонах

Вода для лабораторного анализа (бидистиллиро-

ванная или деионизованная)

Калий марганцовокислый (перманганат калия), хч

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный