Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пропизахлора в зернобобовых (соя и соевое масло) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4Л3265—15

Издание официальное

Москва • 2015

Федеральная служба по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пропизахлора в зернобобовых (соя и соевое масло) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3265—15

ББК 51.23 062

062 Определение остаточных количеств пропизахлора в зернобобовых (соя и соевое масло) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.—14 с.

ISBN 978—5—7508—1385—8

1.    Разработаны сотрудниками ФГБНУ Всероссийский НИИ защиты растений Федерального агенства научных организаций (В. И. Долженко,

И. Л. Цибульская, А. С. Комарова. Т. Д. Черменская).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному сани гарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22 мая 2015 г. № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 9 июня 2015 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978—5—7508—1385—8

€> Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.1.3265— 15

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

А. Ю. Попова

9 июня 2015 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пронизахлора в зернобобовых (соя и соевое масло) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3265—15

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.187/ 01.00043/2014.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения остаточных количеств пропизахлора в бобах и масле сои в диапазоне 0,05—0,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Пропизахлор

2-chloro-6’-cthyl-N-isopropoxymethylacet-ortho-toluidide (ИЮГ1АК)

Структурная формула:

Молекулярная масса: 283,8.

Брутто формула: C15H22CINO2.

Химически чистое вещество представляет собой маслянистую жидкость от пурпурного до светло-коричневого цвета.

Темперагура плавления: 21,6 °С.

Давление пара при 20 °С: 4,0 МПа.

Растворимость в воде: 184 мг/дм³ (при 20 °С).

Стабильность к гидролизу: стабилен, при 50 °С: DT50 "= 5 дней (pH от 4 до 9).

Период полураспада в почве: DT₅₀ - от 4 до 14 дней.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD50 для млекопитающих для крыс 2 088—3 433 мг/кг, острая дермальная токсичность LD50 для млекопитающих превышает 2 ООО мг/кг. Ингаляционная токсичность LC50 для крыс более 5 ООО мг/м³. Оказывает раздражающее действие на кожу и слизистую глаз, канцероген. Класс опасности по ВОЗ III. Не токсичен для пчел, не опасен для почвенных микроорганизмов.

Область применения препарата. Селективный системный гербицид для борьбы с широколиственными сорняками и однолетними травами, адсорбируется корнями.

Механизм действия. Ингибирование синтеза белка.

Гигиенические нормативы для лропизахлора в России: МДУ кукуруза, рапс (зерно, масло), подсолнечник (семена, масло) 0.1 мг/кг.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р - 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности* (границы относительной погрешности (Р = 0,95Х ± 6, % 11оказатель повторяемости (относительное среднс-квадрати-чсское отклонение повторяемости), ог,% 1Указатель воспроизводимости (относительное средне-квадратическое отклонение воспроизводимости). % Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % Бобы сои от 0,05 до 0,5 вкл. 24 9 12 25 34 Масло сои от 0,05 до 0,5 вкл. 24 9 12 25 34 * Соответствует расширенной неопределенности UtmM при коэф( га к =2 жциснтс охва-

Л

Таблица 2 Полнота извлечения пропизахлора, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект Метрологические парамегры, Р = 0,95, п - 20 Предел количественного определения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Полнота извлечения вещества, % Стан дартное отклоне ние, % Доверительный интервал среднего результата, ±,% Бобы сои 0,05 0,05—0,5 85,2 4,26 5,97 Масло сои 0,05 0,05—0,5 85,8 4,24 5,95

2. Метод измерений

Метод основан на определении пропизахлора методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием УФ-детектора после его экстракции из образцов бобов и масла сои ацетонитрилом, очистки в системе несмешиваюшихся растворителей и на патронах для твердофазной экстракции.

Идентификация пропизахлора проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки. Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства и мереный Хроматографическая система: ультраэффек-тивный жидкостный хроматограф с быстро-сканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, стандартным автосамплером, термостатом колонки; компьютерное программное обеспечение Весы аналитические с пределом взвешивания до 210 г и пределом допустимой погрешности 0,2 мг

Весы технические с пределом взвешивания до 400 г и допустимой погрешностью 0,1 г Колбы мерные на 10, 100 см^{3 1}

Микродозаторы одноканальные переменного

объема от 100 до 1 ООО мм³ и от 1 до 5 см³

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ    23932-    -90

Примечание. Допускаегся использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил для ВЭЖХ

Вода для лабораторного анализа (бидистилли-

рованная. деионизованная)

Пропизахлор с содержанием основного вещества 98,9 %

Кислота ортофосфорная, хч //-Гексан, хч

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 43 : 57

Смесь № 1: гексан-этилацетат в соотношении 4 : 1 по объему

Смесь № 2: гексан-этилацетат з соотношении 95 : 5 по объему Этилаиетат, хч

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой ква-шфикаиией. не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой трифункциональной Сбфенильной фазой, (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм Вакуумный манипулятор для работы с ■ кэтронами для твердофазной экстракции Воронки делительные вместимостью 250 см³ ГОСТ 25336--82 Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10,25, 100 см¹    ГОСТ 9737-93

Патроны для твердофазной экстракции, заполненные слабокислым сорбентом на

основе силикагеля с постоянной активностью ТУ 4215-002-05451931—94 Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см^{3 2}

МУК 4.2.3265-15

Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар Центрифуга со скоростью вращения 4 ООО об./мин

Устройство перемешивающее (50—200 колебаний в мин)    ТУ 4389-007-44330709—11

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматофаф.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматофафии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматофафа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля пофешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

-выполнение измерений на жидкостном хроматофафе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору. ³

7. Подготовка к определению

7. /. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1—0,2 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Кондиционирование двух патронов для твердофазной экстракции

Последовательно соединенные патроны промывают 5 см³ смеси № 1, затем 5 см³ гексана.

7.3. Приготовление растворов

7.3.1.    0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ± 0,01) г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм³, растворяют в бидисгиллированной воде и доводят объем до метки.

7.3.2.    Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 43 : 57 по объёму, используя мерные цилиндры.

7.3.3.    Для приготовления гексана, насыщенного ацетонитрилом, в делительной воронке интенсивно встряхивают гексан и ацетонитрил в соотношении 5:1 по объёму и после разделения отбирают верхний слой.

7.4. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.4.1.    Основной раствор с концентрацией 0.5 мг/см³: точную навеску лрогшзахлора (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью i 00 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

7.4.2.    Приготовление градуировочных растворов.

Градуировочные растворы с концентрациями пропизахлора 0,25,

0.5. 1,0, 2,5 и 5,0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 43 : 57).

7.4.2.1.    Раствор N2 I с концентрацией 5,0 мкг/см*: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 1,0 см³ основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.

7.4.2.2.    Раствор № 2 с концентрацией 2,5мкг/см*: в мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,5 см³ основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

,4

МУК 4.2.3265—15

7.4.2.3.    Раствор № 3 с концентрацией 1,0мкг/см : в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.4.    Раствор Ns 4 с концентрацией 0,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.4.2.5.    Раствор Ns 5 с концентрацией 0,25 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0,5 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0—4 °С в течение 7 дней, градуировочные растворы использовать в день приготовления.

При изучении полноты определения пропизахлора используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

7.5. Построение градуировочного графика Для установления градуировочной характеристики (площадь пика-концентрация пропизахлора в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации пропизахлора в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С = KS, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

1

2

3