МУК 4.1.3234-14
Определение остаточных количеств прогексадиона-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств прогсксадиопа-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указании МУК 4.1.3234—14

Издание официальное

Москва *2015

Федеральная служба но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств прогексадиона-кальции в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3234—14

ББК51.23

062

062 Определение остаточных количеств прогексадиона-кальция в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хромато1рафии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015.— 15 с.

ISBN 978—5—7508—1373—5

1.    Разработаны сотрудниками ФБГНУ Всероссийский НИИ защиты растений Федерального агентства научных организаций, Санкт-Петербург, Пушкин (В. И. Должснко, И. А. Цибульская, А. О. Бсрсстсцкий, Е. В. Полуэктова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией но государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 6 ноября 2014 г. № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А. Ю. Поповой 22 декабря 2014 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978—5—7508—1373—5

© Роспотребнадзор, 2015 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2015

МУК 4.1.3234—14

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств прогексадиона-кальцин в зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методическис указания МУК 4.1.3234—14

Свидетельство о метрологической аттестации № 01.5.04.181/ 01.00043/2014.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации прогексадиона-кальция в зерне зерновых культур в диапазоне концентраций 0,025—0,5 мг/кг, в соломе 0,25—2,5 мг/кг.

Методические указания носят рекомендательный характер.

Прогексадион-кальция.

Структурная формула:

о

Кальций 3-оксидо-5-оксо-4~пропионилциклогекса-3-енкарбокси-

3

Брутто формула: C|₀Hi₀CaO₅.

Химически чистое вещество представляет собой мелкодисперсный белый порошок без запаха.

Температура плавления > 360 °С.

Давление пара 1,33 х 10"² мРа (20 °С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода Kow log Р =

-2,90.

Растворимость в воде (мг/дм³,20 °С): 174.

Растворимость в органических растворителях (мг/дм³, 20 °С): метанол -1,11; ацетон - 0,038.

Стабилен в водных растворах (ДТ₅₀ составляет 5 дней при pH 5,0 и температуре 20 °С и 83 дня при pH 9,0). Устойчив к нагреванию до 200 °С и воздействию солнечного света. рКа 5,15.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая оральная токсичность для крыс и мышей > 5 000 мг/кг. При подкожном введении крысам ЬД₅₀ > 2 000 мг/кг. Оказывает слабое раздражающее действие на глаза, по не раздражает кожу (кролики). Ингаляционная токсичность для крыс LCso составляет 4,21 мг на 1 литр воздуха.

Область применения. Регулятор роста растений. Используется в качестве средства от полегания мелкозерновых злаков. Также может быть использован как замедлитель роста дерна, земляных орехов и цветов или для ингибирования удлинения новых побегов фруктовых деревьев.

В России для лрогексадиона-кальция установлены гигиенические нормативы для плодовых семечковых культур - МДУ 0,5 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности /> = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) Показатель повторяемости (относительное средне-квадратическое отклонение повторяемости), оп % Показатель внугр и лабораторной прецизионности, % Показа тель воспро- изводи- мосги. Or, % Показатель точности*3 (границы относительной погрешности), ±6, % Зерно 0,025—0,5 7 9 12 23 Солома 0,25—2,5 7 8 11 22

МУК 4.2.3234—14

*) соответствует расширенной неопределенности U_0Th- при коэффициенте охвата к - 2.

Таблица 2 Полнота извлечения прогексадиоиа, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р= 0,95

Анализи руемый объект Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S Доверительный интервал среднего результата, ±% Зерно 0,025 0,025—0,5 80,2 6,6 5,5 Солома 0,25 0,25—2,5 79,5 6,7 5,6

2. Метод измерения

Методика основана на определении прогексадиона-кальция по свободной кислоте прогексадиону методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового (УФ) детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем с последующей очисткой экстрактов на концен грирующих патронах для твердофазной экстракции, заполненных ионобменной смолой.

Идентификация прогексадиоиа проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки. Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерении Жидкостный хроматограф с быстроскани-рующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы аналитические с пределом взвешивания

до 210 г и пределом допустимой погрешности

0,2 мг    ГОСТ 24104-01

Весы технические с пределом взвешивания до

400 г и допустимой погрешностью 0,1 г    ГОСТ 24104- -01

Колбы мерные на 10, 100 и 1 000 см³    ГОСТ 23932-90

Микродозаторы одноканальные переменного

объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³

5

МУК 4.1.3234—14

Пипетки градуированные объемом 1,2, 5 и

10 см³    ГОСТ    29227—91

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ 23932-90

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетонитрил, класс 5, осч Натрий фосфорнокислый 1-замещенный 2-водный (дигидрофосфат натрия), ч Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) Хлористый метилен, хч н-Гексан, хч Метанол, хч Натрия гидроксид, чда Натрий хлористый, чда Натрий серно-кислый безводный, хч Серная кислота, осч Ортофосфорпая кислота, хч Муравьиная кислота, ч Стандарт прогексадиона с содержанием основного компонента 99,6 % Трифторуксусная кислота, ч

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи С18, (100 х 2,1) мм, 1,7 мкм

Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции Ванна ультразвуковая Воронки лабораторные В-75-110 Воронки делительные объемом 250 и 500 см³ Воронка Бюхнера Гомогенизатор

6

МУК 4.2.3234—14

Колбы плоскодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС    ГОСТ 25336-82

Колбы-концентраторы емкостью 100 и 250 см³ ГОСТ 25336-82 Насос водоструйный    ГОСТ 10696-75

Патроны анионообменные для твердофазной экстракции, масса сорбента 0,5 г Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар

Стаканы химические объёмом 100,200 и

500 см³    ГОСТ 25336-82

Центрифуга с максимальной рабочей частотой

вращения 4 000 об./мин

Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см³

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Opi-анизация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками необходимо соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать норм, установленных ГЫ 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалисг-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвер-

7

ливший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.7. Кондиционирование колонки

Перед началом работы аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,3 см³/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    Приготовление 0,005 Мраствора ортофосфорной кислоты: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 200 см³ воды для лабораторного анализа, прибавляют 0,5 г 98 %~й ортофосфорной кислоты и доводят объем до метки водой.

7.2.2.    Приготовление подвижной фазы: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 250 см³ ацетонитрила и доводят объем до метки раствором 0,005 М ортофосфорной кислоты.

7.2.3.    Приготовление 2,5Мраствора серной кислоты.

В мерную колбу объёмом 1 дм³ добавляют 800 см³ бидистиллиро-ванной воды, 141,24 см³ серной кислоты и доводят до метки бидистил-лированной водой.

7.2.4.    Экстракционная смесь.

В мерную колбу объёмом 1 дм³ помещают 990 см³ ацетонитрила и добавляют 10 см³ 2,5М раствора серной кислоты.

7.2.5.    Приготовление 5%-го раствора фосфорно-кислого натрия.

В мерную колбу объёмом 1 дм³ помещают 50 г натрия фосфорнокислого 1-замещенного 2-водного, растворяют при перемешивании в 600 см³ дистиллированной воды и доводят объём раствора до метки.

7.2.6.    Приготовление ЮМ раствора ортофосфорной кислоты.

В мерную колбу объёмом 200 см³ добавляют 95,18 см³ бидистилли-рованной воды, затем осторожно добавляют 104,82 см³ концентрированной ортофосфорной кислоты.

7.2.7.    Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

МУК 4.2.3234—14

В мерную колбу объёмом 1 дм³ помещают 320 г кристаллического хлористого натрия, растворяют при перемешивании в 600 см³ бидистил-лированной воды и доводят объём раствора до метки.

7.2.8.    Приготовление 0,1 н раствора гидроксида натрия.

В мерную колбу объёмом 1 дм³ помещают 4 г кристаллического гидроксида натрия и растворяют при перемешивании в 800 см³ бидис-тиллированной воды, доводя объём раствора до метки.

7.2.9.    Приготовление элюента № 1 (метанол - 0,1 н гидроксид натрия в соотношении 20 : 80).

В мерной колбе объёмом 100 см³ смешивают 20 см³ метанола и 80 см³ 0,1 н раствора гидроксида натрия. Полученную смесь перемешивают.

7.2.10.    Приготовление элюента № 2 (1 %-й водный раствор муравьиной кислоты).

В мерную колбу объёмом 1 дм³ помещают 990 см³ бидистиллиро-ванной воды и добавляют 10 см³ муравьиной кислоты при перемешивании.

7.2.11.    Приготовление 50 %-го раствора метанола.

В мерную колбу объёмом 100 см³ вносят 50 см³ метанола и доводят до метки бидистиллированной водой, полученную смесь перемешивают.

7.2.12.    Приготовление элюента Mp3 (1 %-й раствор муравьиной кислоты в 50 %-ом метаноле).

В мерную колбу объёмом 100 см³ помещают 99 см³ смеси метанол-вода в соотношении 50 : 50 по объёму и добавляют 1 см³ муравьиной кислоты.

7.2.13.    Приготовление элюента № 4 (1 %-й раствор муравьиной кислоты в метаноле).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ добавляют 99 см³ метанола и при перемешивании добавляют 1 см³ муравьиной кислоты.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,1 мг/см³: точную навеску прогексадиона (10 ± 0,1 мг) помешают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

Градуировочные растворы с концентрациями 0,125, 0,25, 0,5, 1,0 и 2,5 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы.

73.2.?аствор № 1 с концентрацией 2,5 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 2,5 см³ основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

9