Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения

Методические указания МУК 4.1.3142-13

ББК 51.23 М54

М54 Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения: Методические указания. —М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.-12 с.

1.    Разработаны ФГБУ «НИИ питания» РАМН (О. И. Передеряев,

М. Н. Богачук, А. Д. Малинкин, И. Б. Перова, М. А. Макаренко, В. В. Бессонов, К. И. Эллер,).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому надзору Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. № 3 ).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защите прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 26 ноября 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

© Роспотребнадзор, 2014 © Федеральный центр гигиены

и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3142-13 Таблица 2

Параметр Значение Источник ионизации Электростатическое распыление Режим работы Регистрация дочерних положительных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация «перехода») Материнские ионы 309,4 Да Дочерние ионы 160,3 и 120,1 Да Напряжение на фрагменторе 110 В Энергия разрушения 25 В для 160,3/172,3 и 30 В для 120,1/132,1

93. Идентификация фенилбутазона

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения с абсолютным временем удерживания стандарта фенилбутазона. Абсолютное время удерживания стандарта

Рис. Хроматограмма исследуемого образца с добавлением фенилбутазона на уровне 0,100 мг/кг (верхняя линия - переход 309,4—160,3, нижняя - переход 309,4—120,1)

11

фенилбутазона устанавливают анализируя рабочий раствор стандарта фенилбутазона.

Пример получаемой хроматограммы приведен на рисунке.

10. Обработка результатов измерения

При обнаружении в предлагаемых условиях на обоих предлагаемых переходах пиков, соответствующих по времени удерживания стандартному образцу фенилбутазона, делается вывод о его наличии в исследуемом образце.

11. Оформление результатов измерений

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде следующей записи: «В исследуемом образце (ах) ... фенилбутазон не обнаружен (предел обнаружения метода 0,05мг/кг)» или «В исследуемом образце(ах) ... обнаружен фенилбутазон (предел обнаружения метода 0,05мг/кг)».

Документ или запись удостоверяет лицо, проводившее измерения, а при необходимости — руководитель организации (предприятия), подпись которого заверяют печатью организации (предприятия).

МУК 4 Л. 3142-13

Содержание

1.    Метод измерений........................................................................... 5

2.    Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и

материалы....................................................................................... 5

3.    Требования техники безопасности............................................... 7

4.    Требования к квалификации персонала....................................... 7

5.    Условия измерений........................................................................ 8

6.    Отбор проб..................................................................................... 8

7.    Подготовка к определению........................................................... 8

8.    Извлечение фенилбутазона........................................................... 9

9.    Обнаружение фенилбутазона........................................................ 10

10.    Обработка результатов измерения................................................ 12

11.    Оформление результатов измерений............................................ 12

3

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

26 ноября 2013 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения

Методические указания МУК 4.1.3142-13

Настоящие методические указания устанавливают порядок качественного определения фенилбутазона в мясе и субпродуктах убойных животных и птицы, а также продуктах их переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спекгро-метрией (предел обнаружения 0,05 мг/кг).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: фенилбутазон.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-бутил-1,2-- дифенил -3,5- пиразол идин -3,5 -дион.

С AS №: 50-33-9.

Молекулярная масса: 308,37.    Структурная    формула:

Фенилбутазон является производным пиразолона и относится к нестероидным противовоспалительным средствам. Применяется в медицинской практике как противовоспалительное, анальгезирующее и жаропонижающее средство. Доступен в России как лекарственное средство под торговым наименованием бутадион.

Фенилбутазон также применяется в ветеринарии как нестероидное противовоспалительное и обезболивающее лекарственное средство. В пищевых продуктах фенилбутазон не должен обнаруживаться в пределах обнаружения метода (0,05 мг/кг). Обнаружение фенилбутазона в пищевых продуктах связано с несоблюдением регламента его использования.

МУК 4.1.3142-13

Физические свойства: белый кристаллический порошок, без запаха, температура плавления 105 °С, растворимость в воде (~0,7 мг/см³), в этаноле (~ 50 мг/ см³), свободно растворим в диэти-ловом эфире и ацетоне. Максимум поглощения в подкисленном этаноле 239,5 нм (коэффициент экстинции 15488).

1. Метод измерений

Метод основан на определении фенилбутазона методом обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с тандемной масс-спекгрометрией.

2. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

2.7. Средства измерений

Система жидкостной хроматографии, оснащенная насосом с возможностью градиентного элюирования и масс-спектрометрическим детектором (тройной квадруполь)

Хроматографическая колонка для обращенно-фазовой хроматографии с силикагелем, химически связанным с октадецилсиланом (линейные размеры 250 х 4,6 мм, размер частиц 5 мкм)

Весы лабораторные общего назначе- ГОСТ 24104 ния с наибольшим пределом взвешивания 100 г и погрешностью +0,0001 г

Весы лабораторные общего назначе- ГОСТ 24104 ния с наибольшим пределом взвешивания 3 000 г и погрешностью ±0,1 г

Колбы мерные наливные объемом    ГОСТ 1770

50, 100, 200 и 500 см³

Цилиндры мерные лабораторные    ГОСТ 1770

с носиком 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 500 см³

Пипетка 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5 ГОСТ 29227

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

5

2.2. Реактивы

Фенилбутазон (содержание основного вещества не менее 95 %)

Ацетонитрил, осч

Диэтиловый эфир, хч

Петролейный эфир, ч Этанол

Раствор аммиака 25 %-й, осч

Кислота соляная, осч

Кислота муравьиная, ч

Тетрагидрофуран (содержание основного вещества 99,9 %), импортный

Гексан, хч

Азот, осч, 1-й сорт (объемная доля азота 99,999 %),

Вода дистиллированная

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

2.3. Вспомогательные устройства, материалы

Центрифуга для пробирок объемом не менее 50 см³ и относительной силой центрифугирования не менее 4 000

Центрифуга для пробирок объемом не менее 1,5 см³ и относительной силой центрифугирования не менее 10 000

Шейкер для встряхивания пробирок объемом не менее 50 см³

Лабораторная мельница для измельчения проб мяса и субпродуктов убойных животных и птицы, а также продуктов их переработки массой не менее 150 г

МУК 4.1.3142-13

Секундомер, обеспечивающий измерение времени с точностью не менее Юс

Ротационный испаритель

Стаканы вместимостью 50 и 500 см³ ГОСТ 25336

Колбы для выпаривания остроконечные объемом 50 см³

Автоматические пипетки с переменным объемом 0,1—1,0 см³

Полимерные пробирки объемом 50 см³ с герметичной крышкой

Полимерные пробирки объемом 1,5 см³ с герметичной крышкой

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

3. Требования техники безопасности

3.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электро безопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф и масс-спектрометрический детектор.

3.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004-90.

4. Требования к квалификации персонала

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектро-метрическим детектором.

7

5. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

6. Отбор проб

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов, следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией по отбору проб для определения токсичных элементов для каждого конкретного вида продукции.

7. Подготовка к определению

7.7. Приготовление основного раствора стандарта фенилбутазона с концентрацией 50 мкг/см³

Навеску фенилбутазона, массой 0,010 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, помещают в мерную колбу вместимостью 200 см³, добавляют 120 см³ этанола, перемешивают до полного растворения, доводят объем до метки этанолом и тщательно перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °С в течение 12 месяцев.

7.2. Приготовление рабочего раствора стандарта фенилбутазона с концентрацией 1 мкг/см³

Мерной пипеткой переносят 2 см³ основного раствора стандарта фенилбутазона в мерную колбу на 100 см³, доводят объем до метки этанолом и перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °С в течение 3 месяцев.

7.2. Приготовление компонента А подвижной фазы

В стакан объемом 500 см³ добавляют 400 см³ дистиллированной воды и, тщательно перемешивая, прибавляют 0,5 см³ муравьиной кислоты. Содержимое переносят в мерную колбу на 500 см³, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

7.4. Приготовление 7,5 %-гораствора аммиака

В стакан объемом 50 см³ мерным цилиндром вместимостью 50 см³ вносят 15 см³ 25 %-го раствора аммиака и 35 см³ дистиллированной воды.

МУК 4.1.3142-13

7.5. Приготовление 6Н соляной кислоты

В стакан объемом 50³ мерным цилиндром вместимостью 50 см³ отмеривают 30 см³ кислоты соляной и 20 см³ дистиллированной воды.

7.6. Приготовление смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240)

В цилиндр объемом 500 см³ отмеривают 240 см³ гексана и доводят объем до 300 см³ тетрагидрофураном.

7.7. Приготовление смеси ацетонитрил—водный раствор муравьной кислоты (1:1)

В мерную колбу вместимостью 50 см³ мерным цилиндром вместимостью 25 см³ отмеривают 25 см³ ацетонитрила, пипеткой вместимостью 1 см³ отмеривают 0,2 см³ муравьиной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

8. Извлечение фенилбутазона

Исследование каждого образца проводится в двух параллельных измерениях.

А. Измельчение и гомогенизация пробы

•    Подвергают измельчению в лабораторной мельнице 150 г образца пищевого продукта.

Б. Извлечение фенилбутазона и очистка

•    В пробирку объемом 50 см³ отвешивают 5,0 г (навеска с точностью 0,1 г) гомогенизированной пробы.

•    Добавляют 5 см³ дистиллированной воды и 0,5 см³ 7,5 %-го раствора аммиака и встряхивают в течение 20 с.

•    В пробирку добавляют 10 см³ диэтилового эфира, закрывают и встряхивают в течение 10 с.

•    В пробирку добавляют 10 см³ петролейного эфира, закрывают и встряхивают в течение 30 с.

•    Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3 000 в течение 5 мин при комнатной температуре.

•    Органический слой отбрасывают, оставшееся содержимое пробирки встряхивают в течение 10 с.

•    Добавляют 1 см³ 6Н соляной кислоты и перемешивают.

•    Добавляют 20 мл смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240) и встряхивают на шейкере 10 мин.

•    Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3 000 в течение 5 мин при комнатной температуре.

9

•    Упаривают 10 см³ полученного экстракта под вакуумом досуха при температуре 50 °С.

•    Сухой остаток перерастворяют в 500 мкл смеси ацетонитрил—водный раствор муравьиной кислоты (1: 1).

•    Получившийся раствор центрифугируют в течение 5 мин при 10 000, надосадочную жидкость отделяют и исследуют.

9. Обнаружение фенилбутазона 9.1. Условия проведения ВЭЖХ Условия разделения методом ВЭЖХ приведены в табл. 1.

Таблица 1

Параметр Значение Насос Состав подвижной фазы Компонент А — 0,1 %-й водный раствор муравьиной кислоты, компонент В — ацетонитрил Условия градиентного элюирования Время, мин Содержание компонента В, % 0 50 10 95 15 95 15,5 50 22 50 Скорость потока 0,5 см3/мин Инжектор Объем ввода 0,010 см3 Термостат колонок Температура 25 °С Хроматографические характеристики методики Коэффициент емкости (к') Должен составлять не менее 2,5

9.2. Условия детектирования на тандемном масс-спектрометрическом детекторе

Условия детектирования на тандемном масс-спектрометрическом детекторе приведены в табл. 2.

10