Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств спиромезифена и его основного метаболита спиромезифена-енола в воде, почве, огурцах, томатах и томатном соке, яблоках и яблочном соке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3126—13

Издание официальное

Москва • 2014

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств спиромезифена и его основного метаболита спиромезифена-енола в воде, почве, огурцах, томатах и томатном соке, яблоках и яблочном соке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3126—13

Колбы конические (плоскодонные) с пришлифованной пробкой вместимостью 250—300 см³ Колбы круглодокные на шлифе (для упаривания) вместимостью 50 и 250 см³ Мембраны микропористые капроновые, размер пор 0,45 мкм

Набор для фильтрации растворителей через мембрану

Насос водоструйный вакуумный Патроны концентрирующие для твердофазной экстракции, 60 мг гидрофильно-липофильно сбалансированного обращенно-фазного сорбента, на основе сополимера N-винилпирролидона и дивинилбензола (патрон № 1)

Патроны концентрирующие для твердофазной экстракции, 360 мг гидрофобного сорбента с привитыми монофункциональными полярными группами С18 (патрон № 2)

Рекгификационная колонна с числом теоретических тарелок не менее 30 Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, обеспечивающим вакуум до 10 мбар Стаканы химические, вместимостью 100 и 400 см“ ГОСТ 25336-82 Стекловата Стеклянные палочки Сита лабораторные (набор)

Термометр с диапазоном измерений от 0 до

55 °С и ценой деления 0,1 °С    ГОСТ    28498—90

Установка для перегонки растворителей

Фильтры бумажные средней плотности    ТУ 2642-001-05015242—07

Холодильник водяной обратный    ГОСТ    9737—93

Хроматографическая колонка стальная,

длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм,

заполненная обращенно-фазным сорбентом с

привитыми монофункциональными полярными

группами С18, зернением 5 мкм

Предколонка стальная, длиной 12,5 мм,

внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная

обращенно-фазным сорбентом с привитыми

монофункциональными полярными группами

С18, зернением 5 мкм

10

МУК 4.1.3126—13

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50—100 мм³ Шприц медицинский инъекционный одно-    ГОСТ 24861-91

кратного применения вместимостью 10 см³    (ИСО 7886—84)

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007—76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313—03 и ГН 2.2.5.2308—07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе и подтвердившего соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смеси для экстракции, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, подготовка концентрирующих патронов № 1 и 2.

МУК 4.1.3126—13

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1.    Ацетонитрил

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пектоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.1.2.    Этилацетат

1 А.2Л. Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5 %.

Навеску (25 ± ОД) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в бидистиллированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

7.1.2.2. Очистка растворителя. Растворитель промывают последовательно 5 %-м водным раствором натрия углекислого, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над прокаленным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Хранят в темноте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

7.2. Приготовление смеси этилацетам-циклогексан, объемное соотношение 15: 85

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 150 см³ этил-ацетата и 850 см³ циклогексана, перемешивают. Смесь хранят в темном месте (в емкости Из темного стекла) не более месяца.

7.3. Приготовление раствора уксусной кислоты с массовой долей 2,5 % (1,5 %~йраствор)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³, содержащую 500— 600 см³ дистиллированной воды, помещают 15 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.4. Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с массовой долей 0,1 % (0,1 %-й раствор)

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 500—600 см³ бидистиллированной или деионизованной воды, вносят 1 см³ ортофос-фориой кислоты, доводят водой до метки, перемешивают.

Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 7 дней.

12

МУК 4.1.3126—13

7.5. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ В мерную колбу вместимостью 1 ООО см³ помещают 500 см³ ацетонитрила, добавляют 500 см³ ОД %-го раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Подвижную фазу хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

7.6. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.5) при скорости подачи растворителя 0,8 см³/мин до установления стабильной базовой линии.

7.7. Приготовление смеси растворителей для экстракции В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 800 см³ ацетонитрила, 200 см³ деионизованной воды, перемешивают. Смесь хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

7.8. Подготовка концентрирующих патронов Ml и 2

Патрон устанавливают на аллонж с прямым отводом для вакуума и промывают последовательно 5 см³ ацетонитрила, 5 см³ бидистиллиро-ванной воды, затем 10 см³ 1,5 %-го раствора уксусной кислоты в воде. Скорость потока растворителей через патрон не должна превышать

2    см³/мин, при этом нельзя допускать высыхания поверхности патрона. Патрон готовят непосредственно перед использованием.

7.9. Приготовление смеси растворителей для подготовки градуировочных растворов и растворения образцов В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 500 см³ ацетонитрила, 500 см³ деионизованной воды, перемешивают. Смесь хранят в

3    емном месте (в емкости из темного стекла) не более месяца.

7.10. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7,10.1. Исходные растворы спиромезифена и спиромезифена-енола для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0100 г спиромезифена или спиромезифена-енола, добавляют 50—70 см³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Растворы хранят в холодильнике (4—6 °С) в течение 6 месяцев.

Растворы № 1—5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

13

7.10.2.    Растворы № 1 спиромезифена и спиромезифена-енола для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/'см³).

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора спиромезифена или спиромезифена-енола с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.10.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Растворы хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

Растворы с концентрацией 10 мкг/см³ используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом «внесено-найдено», а также контроле качества результатов измерений методом добавок.

7.10.3.    Рабочие растворы № 2—5 спиромезифена и спиромезифена-енола для градуировки (концентрация каждого вещества по 0,1—

1.0    мкг/см³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ градуировочных растворов № 1 с концентрацией спиромезифена и спиромезифена-енола 10 мкг/см³ (п. 7.10.2), доводят до метки смесью ацетонитрил-вода (1 : 1, по объему), приготовленной по п. 7.9, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №2—5 с концентрацией спиромезифена и спиромезифена-енола по 0,1; 0,2; 0,5 и

1.0    мкг/см' соответственно.

Растворы хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.11, Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации спиромезифена и спиромезифена-енола в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 50 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТами: вода - ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; почва - ГОСТ 17.4.3.01-83 «Охрана природы. Почвы, Общие требования к отбору проб», ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб»; томаты - ГОСТ 1725-85 «Томаты свежие. Технические условия», ГОСТ Р 51810-2001 «Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети. Технические условия»; огурцы - ГОСТ 1726-85 «Огурцы свежие. Технические условия»; яблоки - ГОСТ 16270-70 «Яблоки свежие ранних сортов созревания. Технические условия», ГОСТ

14

МУК 4.1.3126—13

27572—87 «Яблоки свежие для промышленной переработки»; виноград - ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. Технические условия»; ГОСТ 26313-84 «Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб»; «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (№2051—79 от 21.08.79).

Отобранные пробы воды хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Почву подсушивают в темноте до постоянного веса и хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре не более месяца. Пробы растительной продукции хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 7 суток. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, почвы - просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, плодов огурцов, томатов, яблок, ягод винограда - измельчают.

9* Выполнение определения

9.1. Вода

Образец отфильтрованной воды объемом 200 см³ помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250—300 см³, вносят 3 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают.

Подготовленную пробу вносят на концентрирующий патрон № 1, подготовленный по п. 7.8, со скоростью пропускания раствора 3—5 капель в секунду, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. Элюат отбрасывают. Патрон промывают 2 см³ смеси ацетонитрил-1,5 %-я уксусная кислота (1 : 9, по объему), элюат отбрасывают. Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 5 мин. Вещества элюируют с патрона 3 см³ ацетонитрила, собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 см³. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 1 см³ смеси растворителей, приготовленной по п. 7.9, и анализируют содержание веществ по п. 9.4.

9.2. Почва, огурцы, томаты, яблоки, ягоды винограда 9.2А. Экстракция

Образец почвы, измельченных огурцов, томатов, яблок, винограда массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250—

15

МУК 4.1.3126—13

300 см³, добавляют 120 см³ смеси для экстракции (ацетонитршивода в объемном соотношении 8 :2), приготовленной по п. 7.7, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 1 мин, затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 мин.

Пробам дают отстояться, затем надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной бумажный фильтр средней плотности. Остаток на фильтре промывают 30 см³ смеси для экстракции (дважды по 1$ см³), раствор также фильтруют на воронке Бюхнера. Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см³, доводят объем до 150 см³, перемешивают, Vi часть раствора, эквивалентную Юг пробы, переносят в колбу для упаривания на 250 см³. Упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 ° С до водного остатка (около 15 см³), очищают в системе несмешивающихся растворителей по п. 9.2.2.

9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Водный остаток в колбе, полученный по п. 9.2.1, находящийся в колбе для упаривания, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 80 см³ деионизованной воды, предварительно обмыв ею колбу, в которой находилась проба, 5 см³ ледяной уксусной кислоты, перемешивают.

В делительную воронку вносят 70 см³ смеси этилацетат-циклогек-сан (15 : 85, по объему), приготовленной по п. 7.2, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия толщиной 1,5 см, помещенный в конусной воронке, носик которой уплотнен тампоном из стекловаты. Процедуру экстракции водной фазы смесью этилацетат-циклогексан (15 : 85, по объему) повторяют еще дважды порциями по 70 см³. Объединенный органический экстракт, пропущенный через безводный сульфат натрия, упаривают при температуре 35 °С на ротацитонном вакуумном испарителе досуха. Остаток в колбе растворя!рт в 0,5 см³ ацетонитрила, вносят 9,5 см" 1,5 %-го раствора уксусной кислоты, перемешивают, подвергают последовательной очистке на концентрирующих патронах № 1 по п. 9.2.3, затем на патронах №2 по п. 9.2.4.

16

МУК 4.1.3126—13

9.2.3.    Очистка экстракта на концентрирующем патроне Ns 1

Пробу, полученную по п. 9.2.2, вносят с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон № 1, подготовленный по п. 7.8, со скоростью пропускания раствора 2—3 капли в секунду. Патрон промывают 2 см³ смеси ацетонитрил-1,5 % уксусная кислота (1 :9, по объему), элюат отбрасывают. Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 3 мин. Вещества элюируют с патрона 3 см³ ацетонитрила, собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 см³. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С досуха. Остаток растворяют в 0,5 см³ ацетонитрила, вносят 9,5 см³ 1,5 %-го раствора уксусной кислоты, перемешивают, подвергают очистке на концентрирующем патроне № 2 по п, 9.2.4.

9.2.4.    Очистка экстракта на концентрирующем патроне Ns 2

Пробу, полученную по п. 9.2.3, вносят с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, на концентрирующий патрон №2, подготовленный по п. 7.8, со скоростью пропускания раствора 2—3 капли в секунду. Патрон промывают 2 см³ смеси ацетонитрил-1,5 % уксусная кислота (1 : 9, по объему), элюат отбрасывают. Высушивают патрон пропусканием воздуха (с использованием вакуума) в течение 3 мин. Вещества элюируют с патрона 3 см³ ацетонитрила, собирая элюат в круглодонную колбу для упаривания вместимостью 50 см³. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С досуха.

При анализе проб почвы, плодов огурцов и томатов остаток растворяют в 5 см³, яблок, ягод винограда, яблочного и виноградного сока -2 см³ смеси растворителей (ацетонитрил-вода в объемном соотношении 1:1), приготовленной по п. 7.9, и анализируют содержание спиромези-фена и спиромезифена-енола по п. 9.4.

9.3. Томатный, яблочный и виноградный соки

Образец сока массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250—300 см³, добавляют 120 см³ смеси для экстракции (ацетонитрил-вода в объемном соотношении 8 :2), приготовленной по п. 7.7, интенсивно встряхивают (или гомогенизируют) в течение 3 мин, затем помещают в холодильник (4—6 °С) на 1 ч.

Надосадочную жидкость фильтруют на воронке Бюхнера с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, через двойной фильтр средней плотности. Остаток на фильтре промывают 30 см³ смеси

17

МУК 4.1.3126—13

для экстракции (дважды по 15 см³), раствор также фильтруют на воронке Бюхнера. Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в мерный цилиндр с пришлифованной пробкой вместимостью 250 см³, доводят объем до 150 см\ перемешивают, Vi часть раствора, эквивалентную 10 г пробы, переносят в колбу для упаривания на 250 см³. Упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до водного остатка (около 15 см³), очищают в системе не-смешивающихся растворителей по п. 9.2.2, затем на концентрирующих патронах № 1 по п. 9.2.3 и № 2 по п. 9.2.4.

9.4. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Жидкостный хроматограф с быстросканирующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником, термостатом колонки и системой градиентного элюирования.

Рабочие длины волн: 250 и 230 нм (режим сканирования спектров поглощения в диапазоне 190—320 нм)*.

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: 35 °С.

Скорость потока элюента: 0,8 см³/мин.

Объем вводимой пробы: 50 мм³.

Режим элюирования (градиентный), пробег 20 мин (табл. 3):

Таблица 3 Режим элюирования

Время, мин Содержание растворителя в подвижной фазе, % (по объему) ацетонитрил 0,1% ортофосфорная кислота 0,0 50 50 8,5 50 50 8,6 85 85 16,5 85 85 16,6 50 50

* Примечание. Сканирование поглощения веществ повышает надежность идентификации.

Линейный диапазон детектирования 5—50 нг

18

МУК 4.1.3126—13

Для достоверности идентификации спиромезифена и спиромезифена-енола их детектирование возможно при длине волны 230 нм, поскольку в данной области интенсивность поглощения веществ - в 2 (спиромезифен-енол) или 3 (спиромезифен) раза выше, чем при 250 нм. Соблюдение соотношения площадей пиков при этих волнах подтверждает наличие остаточных количеств действующего вещества и его метаболита в пробе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют смесью растворителей, приготовленной по п. 7.9 (не более чем в 50 раз).

10. Обработка результатов анализа

10.1. Вода

Содержание спиромезифена в пробах воды с учетом его основного метаболита спиромезифена-енола в эквиваленте действующего вещества (X, мг/дм³) рассчитывают по формуле:

А, Б - концентрации спиромезифена и спиромезифена-енола, соответственно, найденные по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

V- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

W— объем анализируемого образца, см³;

К ~ коэффициент пересчета содержания метаболита спиромезифена-енола на эквивалент спиромезифена, по соотношению молекулярных масс (равен 1,36).

10.2. Почва, огурцы, томаты, томатный сон, яблоки, яблочный сок, виноград, виноградный сок Содержание спиромезифена в пробах почвы, огурцов, томатов, томатного сока, яблок, яблочного сока, винограда и виноградного сока с учетом его основного метаболита спиромезифена-енола в эквиваленте действующего вещества (Х₉ мг/кг) рассчитывают по формуле:

(А + Б ■ К) V • С т

19

ББК 51.23 060

060 Определение остаточных количеств спнромезифена и его основного метаболита спиромезифена-енола в воде, почве, огурцах, томатах и томатном соке, яблоках и яблочном соке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Методические указания.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014.—23 с.

ISBN 978—5—7508—1300—1

1.    Разработаны ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (В. Н. Ракитский, Т. В. Юдина,

Н. Е. Федорова, В. II. Волкова).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. № 3).

3.    Утверждены врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А. Ю. Поповой 6 ноября 2013 г.

4.    Введены впервые.

ББК 51.23

ISBN 978—5—7508—1300—1

© Роспотребнадзор, 2014 © Федеральный центр гигиены и

эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014

МУК 4.1.3126—13

Л, Б - концентрации спиромезифена и спиромезифена-енола, соответственно, найденные по градуировочным графикам в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, мкг/см³;

V- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

т - масса анализируемого образца, г;

С - коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа, С = 2;

К - коэффициент пересчета содержания метаболита спиромезифе-на-енола на эквивалент спиромезифена, по соотношению молекулярных масс (равен 1,36).

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

Хи Х₂ - результаты параллельных определений, мг/дм³, мг/кг; г - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом г *= 2,8<г_г. При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± А) мг/дм³, мг/кг при вероятности Р = 0,95, где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/дм³, мг/кг;

А - граница абсолютной погрешности, мг/дм³, мг/кг;

100

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %,

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание спиромезифена и спиромезифена-енола в пробах воды - менее 0,0005 мг/дм*, почвы, огурцов, томатов, томатного сока-ме-

20

МУК 4.1.3126—13

УТВЕРЖДАЮ Врио руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

А. Ю. Попова

6 ноября 2013 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств спиромезифена и его основного метаболита спиромезифена-енола в воде, почве, огурцах, томатах и томатном соке, яблоках и яблочном соке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.3126—13

Свидетельство об аттестации МВИ №01.00282-2008/0164.29.04.13 от 29.04.13.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации спиромезифена и его основного метаболита спиромезифена-енола в воде, почве, огурцах, томатах и томатном соке, яблоках и яблочном соке, винограде и виноградном соке в диапазоне 0,0005—0,005 мг/дм³ (вода), 0,05—0,5 мг/кг (почва, огурцы, томаты и томатный сок); 0,02—0,2 мг/кг (яблоки и яблочный сок, виноград и виноградный сок).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: спиромезифен (BSN 2060).

Название действующего вещества по ИЮПАК: 3-мезитил-2-оксо-1-оксаспиро[4,4]нон-3-ен-4-ил 3,3-диметилбунатоат.

Структурная формула:

3

МУК 4.1.3126—13

Эмпирическая формула: С23Н30О4.

Молекулярная масса: 370,49.

Бесцветное кристаллическое вещество с характерным запахом. Температура плавления 98,7 °С. Давление паров 1* 10~³ мПа (20 °С), 7 • 10~³ мПа (при 25 °С). Растворимость в органических растворителях (при 20 °С, в г/дм³): ацетон, этилацетат, ацетонитрил, ксилол - более 250; 2-пропанол - 110; 1-октанол - 60; н-гептан - 23. Растворимость в воде при 20 °С - 0,13 мг/дм\ Коэффициент распределения в системе н-октаноп-вода K_QW logP = 4,55.

Основным продуктом метаболитической деградации спиромезифе-на в растениях, воде и почве является спиромезифен-енол (BSN 2060-enol).

Спиромезифен-енол (BSN 2060-enol).

1-оксаспиро[4,4]нои-3-еи-2-он, 4-гидрокси-3-(2,4,6-триметилфенил) (ШРАС).

Эмпирическая формула: С₁₇Н₂₀О₃.

Молекулярная масса: 272,3.

Область применения претрата

Спиромезифен - несистемный инсектицид класса кетоенолов, обладающий и акарицидной активностью, рекомендуется для борьбы с широким спектром насекомых на различных сельскохозяйственных культурах (фрукты, овощи, виноград и др.).

МУК 4.1.3126—13

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и её составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Опреде ляемое вещество Диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг Показатель точности (границы относительной погрешности, Р=0,95), ± 5, % Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), <т„ % Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости), Cr,% Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), г, % Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %(Р~ 0,95) 1 2 3 4 5 6 7 Вода Спироме- зифен 0,0005— 0,005 мг/дм3 50 4,0 5,6 11 16 Спироме- зифен-енол 0,0005— 0,005 мг/дм3 50 2,5 3,5 7 10 Почва Спироме- зифен 0,05—0,5 мг/кг 50 3,8 7,6 11 21 Спироме- зифен-енол 0,05—0,5 мг/кг 50 2,8 5,6 8 16 Огурцы Спироме- зифен 0,05—0,5 мг/кг 50 4,2 5,9 12 17 Спироме- зифен-енол 0,05—0,5 мг/кг 50 3,4 4,8 10 14 Томаты Спироме- зифен 0,05—0,5 мг/кг 50 3,8 5,3 11 15 Спироме- зифен-енол 0,05—0,5 мг/кг 50 3,7 5,0 10 14

Продолжение табл. 1

1 2 3 1_5_I 1_$_ 7 Томатный сок Спироме- зифен 0,05—0,5 мг/кг 50 3,1 4,3 9 12 Спироме- зифен-енол 0,05—0,5 мг/кг 50 2,8 3,9 8 П Яблоки Спироме- зифен 0,02—0,2 мг/кг 50 4Д 5,7 11 16 Спироме- зифен-енол 0,02—0,2 мг/кг 50 3,9 5,5 11 15 Яблочный сок Спироме- зифен 0,02—0,2 мг/кг 50 3,8 5,3 И 15 Спироме- зифен-енол 6,02—0,2 мг/кг 50 4,2 5,9 12 17 Виноград Спироме- зифен 0,02—0,2 мг/кг 50 3,6 5,0 10 14 Спироме- зифен-енол 0,02—0,2 мг/кг 50 3,6 5,0 10 14 Виноградный сок Спироме- зифен 0,02—0,2 мг/кг 50 3,5 4,9 10 14 Спироме- зифен-енол 0,02—0,2 мг/кг 50 4,2 5,9 12 17

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (п - 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Определяемое вещество Метрологические параметры, Р - 0,95, п - 20 Предел обнаружения, мг/дм\ мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/дм , мг/кг Средняя- полнота извлечения, % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднего результата, % 1 2 3 4 5 6 Вода Спироме- зифен 0,0005 0,0005—0,005 92,4 4,06 ±2,13

Продолжение табл. 2

1 2 3 4 5 6 Спироме- зифен-енол 0,0005 0,0005—0,005 97,6 2,48 ± 1,32 Почва Спироме- зифен 0,05 0,05—0,5 87,5 3,82 ±2,02 Спироме- зифен-енол 0,05 0,05—0,5 95,2 2,83 ± 1,51 Огурцы Спироме- зифен 0,05 0,05—0,5 86,2 4,18 ±2,23 Спироме- зифен-енол 0,05 0,05—0,5 93,8 3,37 ±1,80 Томаты Спироме- зифен 0,05 0,05—0,5 85,8 3,82 ±2,04 Спироме- зифен-енол 0,05 0,05—0,5 96,7 3,68 ± 1,80 Томатный сок Спироме- зифсн 0,05 0,05—0,5 92,4 3,05 ± 1,62 Спироме- зифен-енол 0,05 0,05—0,5 93,1 2,81 ±1,50 Яблоки Спироме- зифен 0,02 0,02—0,2 88,3 4,10 ±2,18 Спироме- зифен-енол 0,02 0,02—0,2 93,8 3,86 ±2,06 Яблочный сок Спироме- зифен 0,02 0,02—0,2 91,7 3,76 ±2,00 Спироме- зифен-енол 0,02 0,02—0,2 93,3 4,24 ±2,26 Виноград Спироме- зифен 0,02 0,02—0,2 89,8 3,60 ± 1,92 Спироме- зифен-енол 0,02 0,02—0,2 87,7 3,61 ± 1,92 Виноградный сок Спиромс- зифен 0,02 0,02—0,2 91,3 3,49 ± 1,86 Спироме- зифен-енол 0,02 0,02—0,2 93,4 4,18 ±2,23

7

МУК 4.1.3126—13

2. Метод измерений

Методика основана на определении веществ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором. Контроль спиромезифена в образцах осуществляется по содержанию действующего вещества и его основного метаболита спи-ромезифена-енола после экстракции из анализируемых проб почвы, растительной продукции и соков смесью ацетонитрил-вода, последовательной очистки аликвоты экстракта перераспределением в системе не-смешивающихся растворителей, затем на концентрирующих патронах для твердофазной экстракции. Для концентрирования образцов воды используются патроны для твердофазной экстракции.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф с быстроскани-рующим ультрафиолетовым детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки с возможностью работы в градиентном режиме Весы лабораторные аналитические, наибольший предел взвешивания 110 г, предел допустимой погрешности ± 0,2 мг    ГОСТ Р 53228-08

Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г, класс точности высокий (И)    ГОСТ Р 53228-08

Колбы мерные вместимостью 2-50-2, 2-100-2,

2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2    ГОСТ 1770-74

Меры массы    ГОСТ 7328-01

Пипетки градуированные 2-го класса точности

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10,0 см³    ГОСТ 29227-91

Пробирки градуированные с пришлифованной

пробкой вместимостью 10 см³    ГОСТ    1770—74

Цилиндры мерные 2-го класса точности

вместимостью 25, 50, 100,250, 500 и 1 000 см³ ГОСТ 1770-74

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

МУК 4.1.3126—13

3.2. Реактивы

Спиромезифен, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,4 % Спиромезифен-енол, аналитический стандарт с содержанием основного компонента 99,9 % Ацетонитрил для хроматографии, хч Вода для лабораторного анализа (деионизованная, бидистилированная)

Калий углекислый (карбонат калия, поташ), хч, прокаленный

Кальций хлористый (хлорид кальция), хч, насыщенный водный раствор Кислота ортофосфорная, хч, 85 %

Кислота уксусная, ледяная, хч Натрий серно-кислый (сульфат натрия) безводный, хч

Натрий углекислый (карбонат натрия), хч Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксвд фосфора), хч Циклогексан, чда

Этиловый эфир уксусной кислоты (этилаце-тат), хч

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройства и материалы

Аллонж прямой с отводом для вакуума (для работы с концентрирующими патронами) Аппарат для встряхивания, об./мин, орбита до 10 мм

Барометр-анероид с диапазоном измерения атмосферного давления 5—790 мм рт. ст. Воронка Бюхнера

Воронка делительная вместимостью 250 см³ Воронки стеклянные конусные диаметром 36—40 мм и 56—60 мм Гигрометр с диапазоном измерений относительной влажности от 30 до 90 %

Груша резиновая Колба Бунзена

9