Федеральная служба но напору в сфере защиты нрав iioipeOine.ien и O.iaioiio.ivMiiH человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточного содержания пестицидов в воде, почве и сельскохозяйственных культурах

Сборник методических указаний по методам контроля МУК 4.1.2913—11; 4.1.2914—11; 4.1.2920—4.1.2922—11; 4.1.2937—11

ББК 51.21+51.23 060

060 Определение остаточного содержания пестицидов в воде, почве и сельскохозяйственных культурах: Сборник методических указаний по методам контроля.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 2012.—88 с.

1.    Разработаны 1 всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии.

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия че.ювека (проюкол от 2.06.2011 № 1).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21+51.23

Редактор Н. Е. Акопова Технический редактор Е. В. Ломанова

11однисано в печать 07.02.12 Формат 60x88 16    Печ.    л.    5.5

Тираж 200 экз.    Заказ    5

Федеральная служба но надзору в сфере запри ы прав потребителей и благополучия человека 127994. Москва. Вадковский пер., д. 18. cip. 5. 7

Оришнал-макст подготовлен к печати и in ражи ро ван отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105. Москва. Варшавское ш.. 19а Отделение реализации, тел. факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2012 © Федеральный центр гигиены н эпидемиологин Роспотребнадзора, 2012

МУК 4.1.2921—11

разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2—5.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 18 °С. Срок хранения - не более 1 месяца.

8.6.3. Градуировочные растворы клотианидина с массовой концентрацией 0,02—0,2 мкг/см³ (растворы Х° 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 0.2; 0,4; 1.0 и 2.0 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/см³. доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 8.2. тщательно перемешивают. Получают растворы с массовой концентрацией клотианидина 0,02; 0.04; 0.1 и 0.2 мкг/см³ соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.7. Градуировка хроматографа

Граду про вочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мкВ • с) от концентрации клотианидина в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 8.6.3) и анализируют при условиях п. 7.2. Осуществляют не менее 3 параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями нс должно превышать предела повторяемости г.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Граду ировочную характеристик) считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

Ц——100 < Ё_м. где    (1)

Sgp - значение площади пика клотианидина в образце для контроля. измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно. усл.ед.;

55

МУК 4.1.2921—11

К_гр - норматив контроля. К_гр = 0.5 • 8. где

±б- границы относительной погрешности. % (табл. 1).

Если условие стабильности нс выполняется только для одного обратна. то повторно анализируют этот образец для исключения результата. содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов хзя градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

9. Отбор, подготовка и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения мнкроколн-чсств пестицидов» (от 21.08.79 №2051—79) и правилами, определенными ГОСТ 13586.3-83 «Зерно. Правила приемки и методы отбора проб». Р 50436—92 «Зерновые. Отбор проб зерна», 27262—87 «Корма растительного происхождения. Методы отбора проб».

Пробы зерна и соломы высушивают до стандартной влажности (в соответствии с ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

9.1. Экстракции клотшпшдина

9.1.1.    Зерно. Образец размолотого зерна массой Юг помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³. добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода (3 : 1. по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхнватсль на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Остаток на фильтре промывают 50 см⁵ приведённой выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и /₂ его часть, эквивалентную 5 г образца, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.1.2.    Солома. Образец измельченного растительного материала массой 5 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода (3 : 1. по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Остаток на фильтре промывают 50 см³ при-

МУК 4.1.2921—11

веденной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Отобранные аликвоты экстрактов растительного материала, полученные по пп. 9.1.1 и 9.1.2 и помешенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка объемом 3—5 см³ при температуре нс выше 40 °С. К водному остатку приливают 20 см³ деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную вороню вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой собирают в делительную вороню вместимостью 250 см³, а водную фазу экстрагируют еще дважды, используя по 30 см³ хлористого метилена. К объединенной дихлорметано-вой фракции в делительной воронке приливают 25 см³ водного раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0.05 моль/дм³, содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой, содержащий клотнанндин. фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

9.3. Очистка жстрак/па па колонке с флоры зилом

Сухой остаток экстрактов зерна и соломы, полученный по п. 9.2. растворяют в 2 см³ этилацетата. помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 8.4. Колбу обмывают 3 см³ этилацетата. который также наносят на колонку. Колонку промывают 40 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Клотнанндин элюируют из колонки 25 см³смеси этилацетат-ацетонитрил (1 : 1. по объёму) непосредственно в грушевидную колбу. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 40 °С. Сухой остаток экстракта зерна растворяют в 5 см³, а соломы - в 12,5 см³ подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 8.2). раствор помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин и анализируют на содержание клотианидина по п. 10.

Полнота извлечения клотианидина при проведении всех операций подготовки пробы не менее 82 %.

57

10. Выполнение измерений

10.1.    В инжектор хроматографа вводят 5 мм³ очищенного экстракта анализируемой пробы (пп. 9.1—9.3). анализируют при условиях (п. 7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2.    Для каждого образца повторяют операции по пп. 9.1—9.3.

10.1.

11. Обработка результатов измерений

11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программное обеспечение «Breeze».

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах. С, мкг/с.м³. Массовую долю клотианидина .V, (мг/кг) в образцах зерна и соломы рассчитывают по (|юрмуле (2)

С - значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах. мкг/см³;

Ужтр - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования. см³:

/// - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с флоризилом и последующего хроматографинчсского определения, г:

0.82 - коэффициент извлечения клотианидина. учитывающий все процедуры подготовки пробы.

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3)

А'/, Х₂ - результаты параллельных определений массовой доли клотианидина. мг/кг:

г - значение предела повторяемости. % (табл. 1).

МУК 4.1.2921—11

Если условие (3) нс выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

11.3. Результат анализа в документах, предусматривающих его использование. представляют в виде:

X ± 0,01 S • X. при Р = 0.95. где

X - среднее арифметическое значение результатов п определений, признанных приемлемыми по п. 11.2, мг/кг;

± б - границы относительной погрешности измерений. % (табл. 1).

В случае если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:

«.кассовая боля клотианидина в зерне менее 0,02мг/кг (более 0,20 мг/кг)»:

«.массовая боля клотианидина в соломе менее 0,05 мг/кг (более 0,50 мг/кг)».

Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал клотианидина. превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 0.2 мкг/см³. разбавляют и анализируют в соответствии сданной методикой.

12. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

12.1.    Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а)    при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями:

б)    при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

12.2.    Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

12.3.    Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях. оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CDo,95 по формуле (4)

59

МУК 4.1.2921—11

C_Cph С_ср: - средние значения массовой доли, полученные в первой и второй лабораториях, мг/кг;

CD0,95 - значение критической разности. % (табл. 1).

Если критическая разность нс превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры. изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 («Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений»). используя контроль стабильности средне квадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6— 2002 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеств) лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так. чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работ) оператора.

14. Разработчики

Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии (авторы: Микитюк О. Д.. Назарова Т. А.. Макеев А. М.).

60

Методика измерений остаточного содержания флуопирама в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2913—11..........................................4

Методика измерений остаточного содержания >тифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе хлебных злаков методом капиллярной

газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2914—11........................................18

Методика измерений остаточного содержания флуоксастробина в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2920—11...........32

Методика измерений оста точного содержания клотианидииа в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2921—11 ..............................................48

Определение остаточных количеств тефлутрина в луке репке методом

капиллярной газожидкостной хроматографии: МУК 4.1.2922—11.................61

Методика измерений остаточного содержания тиаклоприда в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2937—11................................................................................................75

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

12 июля 2011 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Методика измерений остаточного содержания клотианидина в зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2921—11

Введение

Клотианидин - инсектицид нервно-паралитического действия, обладает широким спектром активности против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, рисе, кукурузе и рапсе. Вещество обладает системной активностью и может использоваться как в качестве протравителя, так и для обработки почвы и надземных органов растений.

Применяется в России в качестве инсектицида для предпосевного протравливания зерна злаковых культу р при норме расхода 375 г д.в./т семян, а также в качестве составного компонента комбинированных протравителей.

1. Общие положения

Свидетельство о метрологической аттестации от 11.01.2011 №01.00225/2—11.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли клотианидина в зерне в диапазоне 0.02—0.20 мг/кг. в соломе в диапазоне 0.05—0.50 мг/кг методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Название вещества но ИСО: Клотианидин.

48

МУК 4.1.2921—11

Название вещества но ИЮПАК: (Е)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илме-тил)-3-мети л-2-нитрог\ан идин.

N0₂

CHT^NHr^N'

NH

^чсн:

C_r>H₈ClN₅0:S.

Мол. масса: 249.7.

Бесцветный порошок бет запаха. Температура плавления: 176.8 °С. Давление паров при 25 °С: 1.3 х 10 мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: Kow log Р = 0.7 (при 25 °С). Растворимость (г/дм³) при 20 °С: ацетон - 15.2; метанол - 6.26; этилацстат - 2.03; ди-хлормстан - 1.32; гептан - 0.001; вода - 0.327.

В почве в аэробных условиях клотианидин разрушается очень медленно: DT5o= 148—1 155 дней.

2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и се составляющих) результатов измерений нс превышает значений, приведенных в табл. 1.

Таблица 1

Анали зируе мый обыжт	Диапазон измерений массовой доли кло-тианидина (мг/кг)	Показатель точности (границы относительной погрешности), ±6, % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), <7Г, %	Показатель воспроизводимости (относительное средне-квадратическое отклонение воспроизводимости), aR, %	Предел повторяемости, rt %. Р = 0,95, /1 = 2	Критическая разность для |хп\ лыатов анализа, по 1\ ченных в двух лабораториях. CDo.95,% (п,= п:=2)
Зерно	От 0,02 до 0,10 вкл.	50	12	16	33	38
	Св. 0,10 до 0,20 вкл.	39	8	12	22	29
Солома	От 0,05 до 0,10 вкл.	65	14	21	39	51
	Св. 0,10 до 0,5 вкл.	45	9	14	25	35

3. Метод измерений

Метод основан на экстракции клотианидина из зерна и соломы пшеницы водным ацетоном, очистке экстрактов, содержащих клотиани-дин. от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с флорнзилом. с последующим измерением содержания клотианидина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4. /. Средства измерений Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирма «Waters».CLLIA) (номер Госрссстра 15311-02)

Весы аналитические Sartorius 6110 2-го класса точности, погрешность взвешивания 0,0001 г Весы лабораторные Metier Р-160 2-го класса точности, погрешность взвешивания 0.005 г Набор гирь

Колбы мерные вместимостью 2-100-2,2-1 000-2 Пипетки градуироваиные 1-1-2-1; 1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0.2 Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0.2 Микрошприц МШ-1Ф

4.2. Реактивы Клотианидин (CAS 210880-92-5) с содержанием основного вещества 99.4 %, аналитический стандарт (Байер. Германия)

Ацетон, квалификации чда Ацетонитрил для хроматографии, квалификации хч

Стекловата

Установка для перегонки растворителей    с    ГОСТ 97.37-93

дефлегматором    (ИСО 641 -75)

Фильтры бумажные «красная лента».

обезболенные    ТУ 6-09-2678—77

Фильтры мембранные, диаметром 47 мм с размером пор 0.45 мкм. фирма Pall Согр. (США)

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками, аналогичными приведенным в разделе 4.

5. Требования безопасности

5.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76. 12.1.005—88.

5.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила элсктробсзопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019—79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4.    Помещение лаборатории до.тжно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны нс должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.51313—03 и 2.2.5.2308—07.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование. опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

7. Требования к условиям измерении

При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

7.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу

-    температура воздуха (20 ± 5) °С;

-    атмосферное давление (84—106) кПа.

-    относительная влажность воздуха нс более 80 %.

МУК 4.1.2921 — 11

7.2. Условия хроматографического aiuuu ta

Температура колонки: 27 °С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (с объёмным соотношением компонентов 20 :80).

Скорость потока элюента: 0.8 см³/мин.

Рабочая длина волны: 270 нм.

Чувствительность: 0.00075 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 5 мм³.

Время удерживания клотианидина: (8.0 ± 0.2) мин.

Линейный диапазон детектирования: 0.1—1,0 нг.

8. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. подготовка колонки с флоризилом. кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа.

8.1. Приготовление раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0,05 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 6.9 г К₂СОз, приливают 100 см³ деионизированной воды, перемешивают до растворения осадка, доводят объем водой до метки, перемешивают. Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помешают 2(Ю см³ ацетонитрила. 800 см³ бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

Срок хранения - 1 неделя.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Хроматографическую колонку Symmetry С18 устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют при температуре 27 °С и скорости потока подвижной фазой 0.8 см³/мин нс менее часа до установления стабильной базовой линии.

8.-1. Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в неё всыпают 10 г сухого флоризила. Колонку' промывают 30 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду. Дают растворителю стечь до верхнего

края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. через колонку пропускают 15 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего колонка готова к работе.

8.5. Определение объёма элюента, необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом

При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объема элюента. необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.

В круглодонную колбу вместимостью К) см³ помещают 0,1 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с концентрацией К) мкг/см³ в ацетонитриле (п. 8.6.2). раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см³ этилацетата. помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с флоризилом. подготовленную по п. 8.4.

Колбу обмывают 3 см³ этилацетата. которые также вносят в колонку. Промывают колонку 50 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 50 см³ смеси этилацетат-ацетоннтрил (1:1. по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 см³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. вносят 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по п. 8.2. перемешивают и хроматографируют в соответствии с условиями п. 7.2.

По результатам обнаружения клотианидина в каждой из фракций определяют объем смеси этилацетат-ацетонитрил (1:1. по объему), необходимый для полного вымывания клотианидина из колонки.

8.6. Приготовление градуировочных растворов

8.6.1. Исходный градуировочный раствор клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0.010 ±0.0002) г клотианидина. растворяют в 40—50 см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре нс выше минус 18 °С. Срок хранения - не более 3 месяцев.

8.6.2. Градуировочный раствор клотианидина с массовой концентрацией Ю мкг/см³ (раствор No I)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 8.6.1),