МУК 4.1.2786-10
Определение остаточных количеств дифеноконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и б. iai оно.|учия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник МУК 4Л .2777—4Л.2786—10

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 20И.—179 с.

< Росно ipcona. пор. 2011 С Федеральный пен ip гигиены н энндемнологнн Росно ipcoiia.i юра, 2011

МУК 4.1.2786—10

• относительная влажность воздуха нс более 80 %.

6.2. Условия хроматографического анализа Температу ра термостата испарителя 275 °С:

Температура детектора 320 °С.

Режим программирования температуры колонки: начальная температура 200 °С (2 мин), скорость подъема температуры до 270 °С (0 мин) 20 °С/мин;

от 270 до 280 °С (10 мин), скорость подъема температуры 5 °С/мин. Расход газов:

газа-носителя (азот) 2.5 см³/мин; поддувочного газа через детектор 25 см³/мин.

Деление потока: 1:1.

Объем вводимой пробы: 1 мм³.

Время удерживания дифено ко назола: 8 мин 20 с ± 2 %.

Линейный диапазон детектирования: (0.02—0.4) нг.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

7.1. Очистка органических растворите.леи

7.1.1.    Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над поташом.

7.1.2.    Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO.j и 2 г К_:СОз).

7.1.3. Очистка силикагеля Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1.5 объемом ацетона. высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в тсчс-

ние 5—6 часов и затем активируют при температуре 130 °С в течение 5 часов.

7.2. Подготовка и кондиционирование хроматографической ко. тики

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, нс подсоединяя к детектору, кондиционируют при температу ре 280 °С и скорости газа-носителя 2 см³/мин в течение 8—10 часов.

7.3.    Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего

патрона Диапак-диол для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля I степени активности в 15 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 см³ ацетона и 6 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) со скоростью 5 см³/мин.

7.4.    Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания д и фен о кон азола из колонки с силикагелем

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента. необходимого для полного вымывания дифеноконазола из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ градуировочного раствора № 1 дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ в смеси гексан-ацетон (8 : 2, по объему) (п. 7.6.2). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.3. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-ацетон (7 : 3. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 40 см³ смеси гексан-ацетон (1 : 1. по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 40 °С, сухие остатки растворяют в 1 см³смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему).

168

МУК 4.1.2786—10

помещая в ультразвуновую ванну на 1 мин. и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2.

По результатам обнаружения дифеноконазола в каждой фракции определяют объем смеси гексан-ацетон (1 : 1. по объему), необходимый для полного вымывания фунгицида с колонки.

7.5. Определение объема злюента, необходимого для полного вымывания дифеноконазола из патрона Диапак-диол

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ градуировочного раствора № 1 дифеноконазола с концентрацией 2 мкг/см³ в смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) (п. 7.6.2). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (9 : 1. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на патрон Диапак-диол. подготовленный по п. 7.3. Промывают патрон 2 см³ смеси гексан-ацетон (9 : 1. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через патрон пропускают 20 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 40 °С. сухие остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему ), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2.

По результатам обнару жения дифеноконазола в каждой фракции определяют объем смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему ), необходимый хтя полного вымывания фу нгицида из патрона.

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1. Исходный раствор дифеноконазола для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/см³

В мерну ю колбу вместимостью 100 см³ помещают (0.010 ± 0.0001) г дифеноконазола. растворяют в 40—50 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), доводят объем раствора этой же смесью до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температу ре не выше (-18) °С в течение З-.х месяцев.

169

7.6.2. Градуировочный раствор дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ (раствор Ns I)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 2 см³ исходного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.6.1). разбавляют смесью гексан-ацетон (8 : 2. по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №№ 2—5.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре нс выше (-18) °С в течение месяца.

7.6.3. Градуировочные растворы дифеноконазола с массовой концентрацией (0,02—0,2) мкг/см³ (растворы NsNs 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1.0. 2.0. 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора № 1 дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ (п. 7.6.2). доводят до метки смесью гексан-ацетон (8 : 2. по объему), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2—5 с концентрацией дифеноконазола 0.02. 0.04. 0.1 и 0.2 мкг/см³. соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.7. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристик), выражающую зависимость площади пика (мВ • с) от концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/см³). устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м градуировочным растворам (п. 7.6.3).

В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.6.3) и анализируют при условиях п. 6.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями нс должно превышать предела повторяемости г.

7,8. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят нс реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменения условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристик) считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

МУК 4.1.2786—10

^s“” ^S‘^p 100йК_гр, где

$гр

и S_ip - значение площади пика дифсноконазола в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике, соответственно, уел. ед.;

К_гр - норматив контроля. К_гр = 0.5 Д. где

±6 - границы относительной погрешности. % (табл. 1).

Если условие стабильности нс выполняется только для одного образца. то повторно анализируют этот образец хзя исключения результата. содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для граду ировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

8. Отбор, подготовка и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения мнкроколи-чсств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.1979) и правилами, определенными ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб» и ГОСТ 8988-2002 «Масло рапсовое. Технические условия».

Пробы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня: для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре (-18) °С до анализа. Пробы семян высушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре нс выше 4 °С.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракции дифснокотпо.ш

9. /. I. Зеленая масса. Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода (8 : 2, по объему) и гомогенизируют 3 мин при 10 ООО об./мин. Раствор (с осадком) фильтруют под ваку умом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вме-

171

стимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ смеси ацетон-вода (8 : 2. по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/10 объема экстракта (эквивалентную 2 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и добавляют 20 см³ дистиллированной воды. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.2.    Семена. Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 70 см³ смеси метанол-вода (8 : 2. по объему) и помещают на аппарат хзя встряхивания на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 30 ем³ смеси метанол-вода (8 : 2. по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают. измеряют объем раствора и /г его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, куда приливают 20 см³ гексана. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после разделения фаз гексановую фракцию отбрасывают, а водно-мста-нольную фракцию переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 ем³. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.1.3.    Масло. К образцу масла массой 5 г. помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, приливают 50 см³ ацетонитрила. перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в химический стакан через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 25 см³ ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации ацетонитрильного слоя вату промывают 10 см³ ацетонитрила. Измеряют объем объединенного ацетонитрильного экстракта и 2/5 его части (эквивалентные 2 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. куда приливают 15 см³ гексана. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после разделения фаз ацетонитрильную фракцию переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре нс выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.3.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе неси сшивающихся растворителей

Экстракты, полученные по пп. 9.1.1 и 9.1.2 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (5—10 см³) при температуре нс выше 40 °С. К водному

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифеноконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2786—10

МУК 4.1.2786—10

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фитопатологии (Л. В. Дубовая. А. М. Макеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

160

МУК 4.1.2786—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|)срс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 ноября 2010 г.

Дата введения: с момента утверждения.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств днфеноконазола в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.2786—10_

Общие положения

Свидетельство об аттестации методики № 0037.16.07.10 от 19.07.2010.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств днфеноконазола в семенах рапса в диапазоне 0.02—

0.2 мг/кг. в зеленой массе и масле рапса в диапазоне 0.05—0.5 мг/кг.

Название вещества по ИСО: Дифсноконазол

Название веществ;! по ИЮПАК: 4-хлорфсннловый эфир cis.trans-3-хлор-4-|4-метил-2-( 1Н-1.2.4-триазол-1 -илмстил)-1.З-диоксолан-2-ил] фенила

C19H1-CI2N3O3

161

Мол. масса: 406.3.

Кристаллическое вещество от белого до светло-бежевого цвета. Температура плавления: 78.6 °С. Давление паров при 25 °С: 3.3 ^х К)⁵ мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log Р = 4.20. Растворимость (г/дм³) при 25 °С: этанол - 330. ацетон - 610. толуол - 490. н-гсксан - < 3.4. н-октанол - 95. вода - 0.015.

Вещество устойчиво к гидролизу и фотолизу (при естественном солнечном свете DTjo = 145 дней).

Дифеноконазол быстро сорбируется почвой и медленно разрушается.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD$o) для крыс - 1 453. ятя мышей - > 2 ООО мг/кп острая дермальная токсичность (LD_V.) для кроликов - >2 010 мг/кг: острая ингаляционная токсичность (LC50) для крыс ->3 300 мг/м³ воздуха. LC» для рыб 0,8—1.2 мг/дм³ (96 ч). Фунгицид нетоксичен ятя птиц, пчел и дождевых червей.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0.01 мг/кг массы тела человека: МДУ в свекле сахарной, яблоках и грушах - 0.1 мг/кг. в зерне хлебных злаков - нс допускается в пределах чувствительности метода контроля.

Область применения препарата

Дифеноконазол - системный фунгицид и протравитель семян. Обладает длительным защитным и лечебным действием против широкого круга растительных патогенов из классов аскомицетов. базндиомнцстов. дсйтсромицстов. включая возбудителей альтернариоза. сспториоза. цсркоспороза. парши, антракноза. ржавчины, мучнистой росы, а также некоторых патогенов, обитающих на семенах пшеницы, сахарной свеклы. картофеля, семечковых плодовых и овощных культур.

Применяется в России в качестве составного компонента комбинированных протравителей для предпосевной обработки семян сахарной свеклы, зерновых колосовых культу р и рапса при норме расхода 45— 60 г д.в./т семян, а также используется для обработки вегетирующих растений сахарной и столовой свеклы, картофеля, моркови и рапса, яблоневых и грушевых садов с нормой расхода до 100 г дв./га.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и се составляющих) результатов измерений нс превышает значений, приведенных в табл. 1.

МУК 4.1.2786—10

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2. Таблица 1

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точное™ (граница относительной погрешности), ±6,%Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, (Тп% Предел повторя емости, г,% Предел воспро изводи мости, /?,% Зеленая масса от 0,05 до 0,1 вкл. 50 1,9 5 6 более 0,1 до 0,5 25 2,5 7 8 Семена от 0,02 до 0,1 вкл. 50 3,2 9 11 более 0,1 до 0,2 25 2,6 7 9 Масло от 0,05 до 0,1 вкл. 50 2,2 6 7 более 0,1 до 0,5 25 2,3 6 8

Таблица 2

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п = 20 Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Полнота извлечения вещества, % Стан-дартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднего результата, ±% Зеленая масса 0,05 0,05—0,5 85,3 2,9 ±2,7 Семена 0,02 0,02—ОД 85,5 3,1 ±2,9 Масло 0,05 0,05—0,5 84,7 2,9 ±2,7

2. Метод измерений

Методика основана на определении вещества с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с элсктронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль дифеноконазола в матрицах осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из зеленой массы водным ацетоном, из семян водным метанолом и из масла ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе нссмсшивающнхся

163

растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак-диол.

Идентификация вещества проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства и смерении

Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с    номер Госрссстра

ЭЗД (СКВ «Хроматэк». Россия)    № 14516—95

Весы аналитические Sartorius 6110 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и пределом

допустимой погрешности 0.0001 г    ГОСТ 24104-2001

Весы .лабораторные Metier Р-160 с наибольшим пределом взвешивания до 160 г и пределом

допустимой погрешности 0.005    г    ГОСТ 24104-2001

Набор гирь    ГОСТ 7328-2001

Колбы мерные вместимостью 2-100-2; 2-1000-2 ГОСТ 1770-74 Пипетки градуированные 1-1-2-1: 1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10    ГОСТ 29227-91

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0.2 Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000

Микрошприц МШ-1А

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт днфеноконазола (СAS 119446-68-3) с содержанием основного вещества 99.5 % (Сингента. Швейцария) Ацетон, квалификации чда Ацетонитрил, квалификации хч Вода дистиллированная или деионизированная н-Гексан. квалификации хч Калий углекислый, квалификации хч Калия перманганат, квалификации хч Кислота серная, квалификации хч Натрия сульфат, безводный, квалификации хч Спирт метиловый (метанол), квалификации хч

164