МУК 4.1.2784-10
Определение остаточных количеств дифеноконазола в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и б. iai оно.|учия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник МУК 4Л .2777—4Л.2786—10

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 20И.—179 с.

< Росно ipcona. пор. 2011 С Федеральный пен ip гигиены н энндемнологнн Росно ipcoiia.i юра, 2011

МУК 4.1.2784—10

Расход газов: газа-носителя (азот) 2.5 см³/мин; поддувочного газа через детектор 25 см Умин.

Деление потока: 1:1.

Время удерживания дифеноконазола: (8.5 ± 0.2) мин.

Линейный диапазон детектирования: (0.02—0.25) иг.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

7.1. Очистка органических растворите.iей

7.1.1.    Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. перегоняют над поташом.

7.1.2.    Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г КМпО., и 2 г К_:СОз).

7.1.3. Очистка силикагеля

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1.5 объемом ацетона. высушивают в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 5—6 ч и затем активируют при температу ре 130 °С в течение 5 ч.

7.2. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и. нс подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 290 °С и скорости газа-носителя 2 смУмин в течение 8—10 часов.

129

7.3.    Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего

патрона Диапак-диол для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 3 г силикагеля I степени активности в 15 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 см смеси гексан-ацетон (1 : 1. по объему) и 6 см³ смеси гексан-ацетон (9 : 1, по объему) со скоростью 5 см³/мнн. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.    Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания дифенокошпола ич колонки с силикагелем

При отработке методики или поступлении новой партии силикагеля проводят определение объема элюента. необходимого для полного вымывания дифеноконазола из колонки с силикагелем.

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ в смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) (п. 7.6.2). Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.3. Промывают колонку 30 см³ смеси гексан-ацетон (7 : 3. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку прот екают 40 см³ смеси гексан-ацетон (1 : 1. по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре нс выше 40 °С. сухие остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2.

По результатам обнаружения дифеноконазола в каждой из фракци-ий определяют объем смеси гексан-ацетон (1 : 1. по объему), необходимый для полного вымывания фунгицида с колонки.

МУК 4.1.2784—10

7.5. Определение объема злюента, необходимого дли полного вымывания дифеноконазола из патрона Диапак-диол

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ в смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему) (п. 7.6.2). Отду вают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (9 : 1. по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на патрон Диапак-диол. подготовленный по п. 8.3. Промывают патрон 2 см³ смеси гексан-ацетон (9: 1. по объему) со скоростью 1—2 капли в секу нду, элюат отбрасывают. Затем через патрон пропу скают 20 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему ), отбирая последовательно по 3 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают на ротационном ваку умном испарителе при температуре нс выше 40 °С. сухие остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему). помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. и затем хроматографируют в соответствии с п. 6.2.

По резу льтатам обнару жения дифеноконазола в каждой из фракций определяют объем смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему ), необходимый для полного вымывания фунгицида из патрона.

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1. Исходный раствор дифеноконазола для градуировки с массовой концентрацей 100.мкг/см³

В мерну ю колбу вместимостью 100 см³ помещают (0.010 ± 0.0001) г дифеноконазола. растворяют в 40—50 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему). доводят объем раствора этой же смесью до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре нс выше (-18) °С в течение 3-х месяцев.

7.6.2. Градуировочный раствор дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см¹ (раствор N° 1)

В мерну ю колбу вместимостью 100 см³ помещают 2 см³ исходного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.6.1). разбавляют смесью гексан-ацетон (8 : 2. по объему ) до метки. Этот раствор использу ют для приготовления рабочих градуировочных растворов № 2—5.

Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температу ре нс выше (-18) °С в течение месяца.

131

7.6.3. Градуировочные растворы дифеноконазола с массовой концентрацией (0,02—0,2) мкг/см³ (растворы № 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают 1.0, 2.0. 5.0 и 10.0 см³ градуировочного раствора дифеноконазола с массовой концентрацией 2 мкг/см³ (п. 8.6.2). доводят до метки смесью гексан-ацетон (8 : 2. по объем\). тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2—5 с концентрацией дифеноконазола 0.02.0.04.0.1 и 0.2 мкг/см³. соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.7. Градуировка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ • с) от массовой концентрации дифеноконазола в растворе (мкг/см³). устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м градуировочным растворам (п. 7.6.3).

В испаритель (инжектор) хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора (п. 7.6.3) и анализируют при условиях п. 6.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных определений. Расхождение между параллельными определениями нс должно превышать предела повторяемости г.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

7.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят нс реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Граду ировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

гит “ «Яр|

j-;——-100 £ К_гр. где

$гр

Sujm, S_ep - значение площади пика дифеноконазола в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно, уел. ед.:

К_гр - норматив контроля. К_гр = 0.5 -S. где

132

МУК 4.1.2784—10

±S- границы относительной погрешности. %. (табл. 1).

Если условие стабильности нс выполняется только для одного обратна. то повторно анализируют этот образец для исключения результата. содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

8. Отбор, подготовка и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколи-чсств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.1979) и правилами, определенными ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ» и ГОСТ 25892—83 «Сок виноградный. ТУ».

Пробы ягод хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня: для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температу ре (-18) °С до анализа. Сок получают из ягод непосредственно перед проведением анализа. Перед анализом ягоды измельчают.

9. Проведение определения

9.1. Экстракция дифепокоиа юла

9.1. /. Ягоды. Образец измельченного растительного материала массой 25 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, добавляют 100 см³ ацетона и гомогенизируют 3 мин при 10 000 об./мин. Гомогенат переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 мин при 5 000 об./мин. Надосадочную жидкость переносят в химический стакан, а осадок в центрифужной пробирке промывают 50 см³ ацетона и суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу. Экстракт и промывную жидкость объединяют. перемешивают, измеряют объем раствора. Отбирают 1/5 объема экстракта (эквивалентную 5 г образца), переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ и добавляют 30 см³ дистиллированной воды. Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 40 °С до водной фазы, которую переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

133

9.1.2. Сок. Навеску (10 г) свсжсвыжатого виноградного сока помещают в химический стакан вместимостью 100 см³, приливают 60 см² дистиллированной воды, перемешивают, измеряют объем раствора и Vi его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную вороню вместимостью 100 см³. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.

9.2. Очистка экстракта п ерераспредел сп и си в системе несиешивающихся растворителей

К экстрактам, полученным по пп. 9.1.1 и 9.1.2 и помещенным в делительные воронки, приливают по 30 см³ смеси гсксан-диэтиловый эфир (4 : 1. по объему), и содержимое интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 см³ смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1. по объему). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температу ре нс выше 30 °С. Далее проводят очистку по п. 9.3.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2. растворяют в 0.4 см³ ацетона, помещая в ультразвуковую ванн\ на 1 мин. добавляют 1.6 см³ гексана, перемешивают, вновь помещают в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.3. Колбу обмывают 1 см³ смеси гексан-ацетон (8 : 2. по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 20 см³ смеси гексан-ацетон (7 : 3. по объему) со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Дифсноконазол элюируют с колонки 30 см³ смеси гексан-ацетон (1:1, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью ИХ) см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температу ре не выше 30 °С и окончательную очистку экстрактов проводят по п. 9.4.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак-диол Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3. растворяют с помощью ультразвуковой ванны в 2 см³ смеси гексан-ацетон (9 : 1. по объему) и переносят в подготовленный концентрирующий патрон Диапак-диол (п. 7.3). Патрон промывают 2 см³ смеси гексан-ацетон

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств днфеноконазола в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2784—10

МУК 4.1.2784—10

1. Разработаны Всероссийским научно-исследовательским институтом фиIонтологии (Л. В. Дубовая. Л. М. Макеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере защиты погреби!елей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

122

МУК 4.1.2784—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|)срс «пииты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 ноября 2010 г.

Дата введения: с момента утверждения.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифеноконазола

в ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания _МУК 4.1.2784—10_

Общие положения

Свидетельство об аттестации методики № 0036.16.07. К) от 19.07.2010.

Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли дифеноконазола в ягодах винограда в диапазоне 0.02— 0.2 мг/кг. в виноградном соке в диапазоне 0.01—0.1 мг/кг методом капиллярной газожидкостной хроматографии.

Название вещества по ИСО: Дифеноконазол

Название вещества но ИЮПАК: 4-хлорфсннловый эфир cis.trans-3-хлор-4-|4-метил-2-( 1Н-1.2.4-триазол-1 -илмстил)-1.3-диоксолан-2-ил] фенила

С₁₉Н_гС1₂Ы₃Оз

123

МУК 4.1.2784—10

Мол. масса: 406.3.

Кристаллическое вещество от белого до светло-бежевого цвета. Температура плавления: 78.6 °С. Давление паров при 25 °С: 3.3 * 10 ⁵ мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log Р = 4.20. Растворимость (г/дм³) при 25 °С: этанол - 330. ацетон - 610. толуол - 490. н-гсксан - < 3,4. н-октанол - 95. вода - 0.015.

Вещество устойчиво к гидролизу и фотолизу (при естественном солнечном свете DT*, = 145 дней).

Дифеноконазол быстро сорбируется почвой и медленно разрушается.

Кроткая гигиеническая характеристика

Острая пероральная токсичность (LDso) для крыс - 1 453. для мышей - > 2 000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD») язя кроликов - >2 010 мг/кг: острая ингаляционная токсичность (LC$o) для крыс ->3 300 мг/м³ воздуха. LCso язя рыб 0.8—1,2 мг/дм³ (96 ч). Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел и дождевых червей.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0.01 мг/кг массы тела человека: МДУ в яблоках, грушах, сахарной свекле - 0.1 мг/кг. в зерне хлебных злаков - нс допускается в пределах чувствительности метода контроля.

Область применения препарата

Дифеноконазол - системный фунгицид и протравитель семян. Обладает длительным защитным и лечебным действием против широкого круга растительных патогенов из классов аскомицетов. базидиомицетов. дсйтсромицстов. включая возбудителей альтернариоза. сспторноза. цсркоспороза. парши, антракноза. ржавчины, мучнистой росы, а также некоторых патогенов, обитающих на семенах пшеницы, сахарной свеклы. картофеля, семечковых плодовых и овощных культур.

Применяется в России в качестве составного компонента комбинированных протравителей для предпосевной обработки семян сахарной свеклы, зерновых колосовых культур и рапса при норме расхода 45— 60 г д.в./т семян, а также используется язя обработки вегетирующих растений сахарной и столовой свеклы, картофеля, моркови и рапса, яблоневых и грушевых садов с нормой расхода до 100 г д.в./га.

1. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и се составляющих) результатов измерений нс превышает значений, приведенных в табл. 1.

МУК 4.1.2784—10

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, довери

тельные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в табл. 2. Таблица 1

Анализируемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±б, %Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемо сти, <7„% Предел повто ряемо сти, г,% Предел воспроиз водимо сти, R, % Ягода вино1рада от 0,02 до 0,10 вкл. 50 2,4 7 8 св. 0,10 до 0,20 25 1,9 5 6 Сок винограда от 0,01 до 0,1 вкл. 50 3,5 10 12

Таблица 2

Метрологические параметры, Р = 0,95, // = 20 тируе мый объект Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг 11олнота извлечения вещества, % Стандартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднею результата, ±% Ягода 0,02 0,02—ОД 88,6 3,7 ±3,4 Сок 0,01 0,01—0,1 90,4 2,7 ±2,6

2. Метод измерений

Метод основан на экстракции дифеноконазола из ягод ацетоном, из сока смесью гексан-диэтиловый эфир (4:1. по объему), очистке экстрактов. содержащих дифеноконазол. от коэкстрактивных компонентов перераспределением их в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диала к-диол. с последующим измерением содержания дифеноконазола в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с электронозахватным детектором (ЭЗД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

125

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства и смерен и и

Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ЭЗД (СКБ «Хроматэк», Россия)

Весы аналитические Saitorius 6110 с наибольшим пределом взвешивания до 1 К) г и погрешностью 0.0001 г

Весы лабораторные Metier Р-160 с наибольшим пределом взвешивания до 160 г и пределом допустимой погрешности 0.005 г Набор гирь

Колбы мерные вместимостью 2-1(Х)-2; 2-1(ХХ)-2 Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0Л ; П-2-10-0,2 Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000

Микрошприц МШ-1А

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт дифеноконазола (СAS 119446-68-3) с содержанием основного вещества 99.1 % (Сингента. Швейцария). Ацетон, квалификации ч.д.а.

Вода дистиллированная или деионизированная

н-Гсксан. квалификации хч

Калий углекислый, квалификации хч

Калия перманганат, квалификации хч

Кислота серная, квалификации хч

Натрия сульфат, безводный, квалификации хч

Эфир диэтиловый. квалификации хч

3.3. Вспо.ногате.1Ы1ые устройства, матершиы Азот газообразный (баллон), квалификации осч ГОСТ 9293-74 Ванна ультразвуковая, модель D-50. фирма Branson Instr. Со. (США)

126

4. Требования безопасности

4.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76. ГОСТ 12.1.005-88.

4.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83.

4.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019—79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

4.4.    Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточновытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГЫ 2.2.51313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование. опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия выполнения измерений

6.1.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

•    температура воздуха (20 ± 5) °С:

•    атмосферное давление (84—106) кПа:

•    относительная влажность воздуха нс более 80 %.

6.2.    Условия хроматографического анализа

Температура термостата испарителя 265 °С.

Температура детектора    300    °С.

Режим программирования температуры колонки:

начальная температу ра 200 °С (2 мин), скорость подъема температуры до 275 °С (7 мин) 20°/мин:

от 275 °С до 290 °С (5 мин), скорость подъема температуры 10 °С/мин.