Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и б. iai оно.|учия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Сборник МУК 4Л .2777—4Л.2786—10

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды: Сборник.—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора. 20И.—179 с.

< Росно ipcona. пор. 2011 С Федеральный пен ip гигиены н энндемнологнн Росно ipcoiia.i юра, 2011

МУК 4.1.2782—10

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре О—4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения карбендазима в зерне гороха и масле рапса используют ацетонитрильные растворы вещества.

7.4.1. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика -концентрация карбендазима в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм³ градуировочных растворов (нс менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, нс менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации карбендазима в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

C = KS. где

S- площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0.99.

Градуировочную характеристик) необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

\C-CA

С — аттестованное значение массовой концентрации карбендазима в градуировочном растворе:

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации карбендазима в градуировочном растворе;

Контр - норматив контроля градуировочного коэффициента. %. (Я™т,= 10%при/> = 0,95).

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб зерна гороха проводят в соответствии с ГОСТ 28674— 90 «Горох. Требования по заготовке и поставке».

101

МУК 4.1.2782—10

Среднюю пробу зерна гороха измельчают, перемешивают и выделяют аналитические пробы. Для длительного хранения аналитические пробы зерна гороха помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Отбор проб семян рапса для получения масла проводят в соответствии с ГОСТ 0852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0—4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.

9. Проведение определения

9.1. Определение карбенда шма в зерне гороха 10 г измельченных семян гороха помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, прибавляют 5 см³ воды и 50 см³ этилацстата. Экстрагируют в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Массу фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «красная лента» и экстракцию повторяют с 50 см³ этилацетата. Объединенный экстракт помешают в делительную воронку и отделившийся водный слой отбрасывают. Из органического экстракта карбендазим экстрагируют 30 см³ 0.1 М раствора кислоты хлористоводородной. Водный слой отделяют. Экстракцию повторяют еще 2 раза. Объединенный водный экстракт промывают последовательно дважды по 30 см³ гексана и дважды по 20 см³ этилацетата*. Органические слои отбрасывают, а водный подщелачивают 1 М раствором гидроксида натрия до pH 10 и экстрагируют карбендазим 30 см³ этилацетата. Экстракцию повторяют еще дважды, доводя pH водной фазы до 10 перед каждой экстракцией. Эгилацетат-ный экстракт помещают в делительную воронку, выделившийся водный (нижний) слой отбрасывают, а органический промывают 25 см³ воды, доведенной до pH 10 1 М раствором гидроксида натрия. Промывку отбрасывают. Органический экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе при температу ре бани нс выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1.25 см³ подвижной фазы. 10 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф.

Повторную экстракцию нужно проводить только после полного разделения фаз. Для ускорения процесса разделения можно в делительную воронку добавить 1 —2 см³ этилом» го спирта.

МУК 4.1.2782—10

9.2. Определение карбеидачима в масле рапса 10 г масла растворяют в 90 см³ гексана, помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³ и экстрагируют 30 см³ 0.1 М раствора кислоты хлористоводородной. Экстракцию повторяют еще два раза. Гексан отбрасывают. Объединенный водный экстракт промывают последовательно дважды по 30 см³ гексана и дважды по 20 см³ этилацета-та. Органические слои отбрасывают, а водный подщелачивают 1 М раствором гидроксида натрия до pH 10 и экстрагируют карбендазим 30 см³ этилацетата. Экстракцию повторяют еще дважды, доводя pH водной фазы до 10 перед каждой экстракцией. Объединенный этилацетатный экстракт промывают 25 см³. доведенной до pH 10 1 М раствором гидроксида натрия. Промывку отбрасывают, а органический экстракт фильтруют чере з слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани нс выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1.25 см³ подвижной фазы. 10 мм³ полученного раствора вводят в хроматограф.

9.3. Условия хроматографирования Ультраэффсктивный жидкостной хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-дстсктором. снабженный дегазатором. автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2.1 * 100) мм. 1.7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1)°С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,05% трифторуксусной кислоты в соотношении 10 : 90. Скорость потока элюента: 0.2 см³/мин. Рабочая длина волны УФ-дстектора 280 нм. Объем вводимой пробы 10 мм³.

Время удерживания карбендазима (5.1 ± 0.1) мин.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,4—1.0 мкг/см³.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание карбендазима в зерне гороха или масле рапса (.Y, мг/кг) вычисляют по формуле:

S_x - площадь пика карбендазима на хроматограмме испытуемого образца, мм² (AU);

103

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости:

К-объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа. см³:

Р - навеска анализируемого образца, г:

/- полнота извлечения карбендазима. приведенная в табл. 2. %.

Содержание остаточных количеств карбендазима в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор карбендазима с концентрацией 4.0 мкг/см³. разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2-\Х. -ЛГ₂|-100 ——---< г. где

(*.+*>)

Х\ и Л2 - результаты параллельных определений, мг/кг:

г значение предела повторяемости (г = 2.8<т_г).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(Л' ± А) мг/кг при вероятности Р = 0.95. где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг:

А - граница абсолютной погрешности, мг/кг.

S-X

1(H)

А - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

104

МУК 4.1.2782—10

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0.05 мг/кг*. где * - 0.05 мг/кг - предел обнаружения карбендазима в зерне гороха и масле рапса).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

^С^^Д.7.,"^+Д«-^ГДС

±Д.гх- (±ДдхО - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному⁷ значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг: при этом

Д_т = ± 0,84 • Д. где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

Д - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций). %.

Результат контроля процедуры К,. рассчитывают по формуле:

К_к-Х -X- С_д, где Х\ XС_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки. соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по форму ле:

105

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств карбендазима в зерне гороха и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4Л.2782—10

МУК 4.1.2782—10

1.    Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений (В. И. Довженко. И. Л. Цибульская, И. К.Журкович, Н. В. Лу-говкина. Н. Г. Ковров).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе но надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 № 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы но надзору в сфере защиты потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4.    Введены в действие с момента утверждения.

5.    Введены впервые.

94

МУК 4.1.2782—10

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в с(|>ерс защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

24 ноября 2010 г.

Дата введения: с момента утверждения.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств карбендазима в зерне гороха и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания _МУК    4.1.2782—10_

Общие положения

Свидетельство об аттестации методики № 01.5.04.673 от 25.06.2010. Настоящий документ устанавливает методик) определения остаточных количеств карбендазима в зерне гороха и масле рапса в диапазоне концентраций 0.05—0.5 мг/кг.

Действующее вещество: Карбсндазим.

^—Ш1С0,СН₃

Метилбензимидазол-2-илкарбамат (IUPAC).

Молекулярная масса: 191.2.

Брутто формула: C9H9N3O2.

Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок без цвета и запаха.

Температу ра плавления 302—307 °С (с разложением).

Давление пара 0.09 мРа (20 °С); 0,15 мРа (25 °С); 1.3 мРа (50 °С). Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода K^lgP = 1.38 (pH 5); 1.51 (pH 7); 1.49 (pH 9).

95

Растворимость в воде (мг/дм³, 24 °С): 29 (pH 4): 8 (pH 7); 7 (pH 8).

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, 24 °С): димс-тилформамид - 5: ацетон - 0.3. этанол - 0.3: хлороформ -0.1; этилаце-тат - 0.135: дихлормстан - 0.068: бензол - 0.036; циклогексан и диэти-ловый эфир - < 0,01; н-гсксан - 0,0005.

Субстанция карбендазима стабильна по крайней мере в течение 2 лет при температуре хранения ниже 50 °С. а также после 7 дней интенсивного облучения светом (20 000 люкс). В щелочных растворах медленно разлагается. При 22 °С DT*> превышает 350 дней (pH 5 и 7) и равен 124 дням (pH 9). Будучи слабым основанием (рК_а 4.2). в кислых растворах образует стабильные водорастворимые соли.

Кроткая токсикологическая характеристика, острая оральная токсичность - LD» для крыс - 6 400 мг/кг: для собак - более 2 500 мг/кг: дермальная - LD50 для кроликов более 10 000 мг/кг; для крыс - более 2 000 мг/кг; нс оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз; ингаляционная - при использовании водной суспензии 10 г/л эффект не обнаружен хзя крыс, кроликов, морских свинок и кошек. Период наблюдения 4 часа.

Область применения: фунгицид системного действия с длительным защитным и целебным эффектом. Эффективно подавляет развитие заболеваний растений, вызываемых грибами из родов Septoria, Fusarium, Erysiphe и Pseudocercosprella на зерновых культурах; Sclerotinia, Alter-naria и Cylindrosporium на семенах рапса.

В России для карбендазима установлены следующие гигиенические нормативы:

•    ПДК в воде - 0.1 мг/дм³;

•    ОДК в почве - 0.1 мг/кг:

•    МДУ (мг/кг) - корнеплоды сахарной свеклы 0.1; зерно хлебных злаков 0.2.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 нс превышает значений, приведенных в табл. 1. для соответствующих диапазонов концентраций.

МУК 4.1.2782—10 Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Норматив точности (границы относительной погрешностях ±6,% Относительное стандартное отклонение повторяемое™, <гг,% Предел повторяемости, г, % Предел воспро изводи мое™, я, % зерно 0,05—0,1 <50 6,9 19 36 гороха 0,1—0,5 <25 3,6 10 30 масло 0,05—0,1 й 50 3,9 11 28 рапса 0,1—0,5 <i 25 3,4 9 20

По.ик»га и{влечении карбендазима, сiaiuapiнос отклонение, доверительный интервал среднего результата для и = 20, Р = 0,95

Таблица 2

Объект анализа Предел обнару жения. мг/кг Диапазон определяе-мых концентраций, мг/кг Среднее значение определе ния, % Стандартное отклонение. S Доверительный интервал среднею результата. ±% Зерно гороха 0,05 0,05—0,5 85,9 10,3 20 Масло рапса 0,05 0,05—0,5 95,7 9,2 18

2. Метод измерения

Методика основана на определении карбендазима методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта путем перераспределения кислотно-основных форм карбендазима между двумя нссмсшивающн-мися фазами.

Идентификация карбендазима проводится по времени удерживания. количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с бьютросканирующим УФ-дстекгором.

97

снабженном дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки Весы аналитические ВЛА-200    ГОСТ

Весы технические ВЛКТ-500    ГОСТ

pH-метр фирмы Hanna Instrument мод. Р212 Колбы мерные на 10. 50. 100. 1 000 см³    ГОСТ

Микро дозаторы Лен пи пет переменного объема от 200 до 1 000 мм³ и от 1 до 5 см³.

Пипетки градуированные    ГОСТ

Цилиндры мерные на 50 и 100 см³    ГОСТ

Допускается использование средств измерения с лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Допускается использование реактивов квалификацией нс ниже указанных.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100 х 2.1) мм. 1.7 мкм (Waters)

Воронки лабораторные В-75-110    ГОСТ 25336-82

Бидистиллятор

Ротационный вакуумный испаритель фирмы BUCHI. мод. R 205

Ультразвуковая баня УЗВ-1.3    ГОСТР МЭК60335-2-15—98

Фильтры бумажные «красная лента»    ТУ 6.091678—86

МУК 4.1.2782—10

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками нс хуже указанных.

4. Требования безопасности

4.1.    При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2.    Помещение лаборатории должно бьггь оборудовано приточновытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе нс должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методик) и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности нс более 80 %;

•    выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

99

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (Acquity ВЕН С18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0.1—0.2 cmVmiih) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1.    0,05 % раствор трифторуксусной кислоты: 0.5 см³ свсжспс-регнанной трифторуксусной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1 дм³, растворяют в бидистиллнрованной воде и доводят объем до метки.

7.2.2.    Приготовление подвижной фазы: в мерную колбу вместимостью 1 дм³ помещают 100 см³ ацетонитрила и доводят объем до метки 0.05 % раствором трифторуксусной кислоты.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1.    Основной раствор с концентрацией 1,0мг см³: точную навеску карбендазима (50 ± 0.5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 50 см³, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.

Градуировочные растворы с концентрациями 0.4. 0.8. 1,2, 2,0 и 4.0 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы.

7.3.2.    Раствор М 1 с концентрацией 4,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0,4 см³ основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.3.    Раствор М 2 с концентрацией 2,0 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят 0.2 см³ основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.4.    Раствор М3 с концентрацией 1,2мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 3 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.5.    Раствор М 4 с концентрацией 0,8 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2.0 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.6.    Раствор М5 с концентрацией 0,4 мкг/см³: в мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

100