МУК 4.1.2668-10
Определение остаточных количеств клотианидина в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Федеральная сдужба по напору к сфере защиты нрав но ■ребнгедей и бдагонодучия чедовека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды

Методические указания МУК 4Л .2668—10,4.1.2675—4Л .2679—10,

4.1.2683—4.1.2684— 10,4.1.2687—10, 4.1.2690— 10, 4.1.2706—4.1.2709—10,4.1.2768—10

МУК 4.1.2668—10

В круглодонную колбу вместимостью 10 см³ помещают 0.2 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/см³ в ацетонитриле, раствор упаривают досуха, остаток растворяют в 3 см³ этилацетата. помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.4. Промывают колонку 40 см этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 40 см³ ацетонитрила, отбирая последовательно по 5 см³ элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 ем³ ацетонитрила, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. вносят 2 см³ подвижной фазы, подготовленной по 8.2. перемешивают. а затем хроматографируют. Условия хромтографнрования - в соответствии с 7.2.

По результатам обнаружения клотианидина в каждой из фракций определяют объем ацетонитрила, необходимый ятя полного вымывания клотианидина с колонки.

8.6. Приготовление градуировочных растворов

8.6.1 Приготовление исходного раствора клотианидина для градуировки с массовой концентрацией 100 мкг/см³

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0.010 ±0.0002) г клотианидина. растворяют в (40—50) см³ ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре нс выше (-18) °С. Срок хранения нс более 3-х месяцев.

8.6.2. Приготовление раствора клотианидина для градуировки с массовой концентрацией 10 мкг/см³ (раствор № 1)

В мерную колбу вместимостью 1 (К) см³ помещают 10 см³ исходного раствора клотианидина с массовой концентрацией 100 мкг/см³ (8.6.1). разбавляют ацетонитрилом до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2—5.

Для приготовления проб воды, почвы, зеленой массы, семян, ботвы. корнеплодов и масла с внесением при оценке полноты извлечения клотианидина из исследуемых образцов используют ацетоновые растворы клотианидина с массовой концентрацией 1 и 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновые растворы клотианидина хранят в морозильной камере при температу ре не выше (-18) °С. Срок хранения нс более 1 месяца.

11

8.6.3 Приготовление градуировочных растворов клотианидина с массовой концентрацией 0,05—0,5 мкг/см³ (растворы № 2—5)

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помешают 0.5. 1.0. 2.5 и 5.0 см³ градуировочного раствора № 1 клотианидина с массовой концентрацией 10 мкг/см³. доводят до метки подвижной фатой, приготовленной по 8.2. тщательно перемешивают. Получают растворы с массовой концентрацией клотианидина 0.05.0.10.0.25 и 0.5 мкг/см³, соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

8.7. Гцаду правка хроматографа

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мм²) от массовой концентрации клотианидина в растворе (мкг/см³). устанавливают методом абсолютной градуировки по 4-м растворам.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора (8.6.3) и анализируют при условиях 7.2. Каждый раствор хроматографируют дважды. Расхождение между параллельными определениями нс должно превышать предела повторяемости г.

По полученным данным строят градуировочную характеристику.

8.8. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят нс реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если хы каждого контрольного образца выполняется условие (1)

^— ‘Чй    -

■— --100 < L_M . где    (1)

S_UIU, S_ep - значение площади пика клотианидина в образце для контроля. измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно. усл.ех:

Кгр - норматив контроля. К,_р = 0.5 • 8. где

± 8- границы относительной погрешности. %. (табл. 1).

Если условие стабильности нс выполняется только для одного образца. то повторно анализируют этот образец хтя исключения результата. содержащего грубую ошибку.

12

МУК 4.1.2668—10

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

9. Отбор, подготовка и хранение проб

Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды хм определения микроколичеств пестицидов» (№2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб». 1743.01—83 «Почвы. Общие требования к отбору проб». 26950—89 «Почвы. Отбор проб». 10852—86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». 8988—77 «Масло рапсовое. ТУ», 17421—82 «Свекла сахарная для промышленной переработки. Требования при заготовках».

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре (-18) °С не более 2-х недель.

Образцы почвы подсушивают при комнатной температу ре в течение 24 часов на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре (4—6) °С не более 4-х недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температу ре (-18) °С.

Пробы зеленой массы, ботвы и корнеплодов хранят в холодильнике при температу ре (0—1) °С нс более суток; хтя длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре (-18) °С.

Пробы семян подсушивают при комнатной температуре до влажности в соответствии ГОСТ 10852-86 и хранят в бумажных или тканевых мешочках в хорошо проветриваемом шкафу.

Масло хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температу ре (0—4) °С. Допускается получение масла из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями.

Перед анализом образцы воды фильтруют через бумажный фильтр, образцы почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм. семена размалывают на мельнице, а ботву и корнеплоды измельчают ножницами. ножом или с помощью терки.

13

9.1. Экстракция клотианидима

9.1.1.    Экстракция клотианидима из образцов воды

100 см³ предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 30 см³ хлористого метилена и интенсивно встряхивают вороню в течение 2-х минут. После разделения фаз нижний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют хлористым метиленом еще дважды порциями по 30 см³. Объединенную дихлормстановую фракцию упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Далее проводят очистку экстракта от коэкстрактивных примесей по 9.3.

9.1.2.    Экстракция клотианидима из образцов почвы

Образец воздушно-сухой почвы массой 25 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³. добавляют 125 см³ смеси мсга-нол-вода (9 : 1, по объему), перемешивают и колбу помещают на встря-хи вате ль на 1 час. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Почву повторно экстрагируют 75 см³ указанной выше смесью в течение 30 минут при встряхивании и фильтруют. Осадок на фильтре промывают 50 см³ метанола. Экстракты и промывную жидкость объединяют. измеряют объем раствора и 1/5 часть экстракта (эквивалентна 5 г образца) переносят в круглодонную колбу. Дальнейшую очистку экстракта от коэкстрактивных примесей проводят по 9.2.

9.1.3. Экстракция клотианидима из образцов зеленой массы, ботвы, корнеплодов

Навеску (25 г) измельченного растительного материала помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см³, приливают 125 см³ смеси ацетон-вода (3:1. по объему) и гомогенизируют 3 минуты при 8 000об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ смеси ацетон-вода (3 : 1). Экстракт и промывну ю жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/5 его часть (эквивалентна 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Дальнейшую очистку экстракта от коэкстрактивных примесей проводят по 9.2.

9.1.4. Экстракция клотианидима из образцов семян

Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонну ю колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетон-вода

МУК 4.1.2668—10

(3 : 1, по объему) и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 40 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентна 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Дальнейшую очистку экстракта от коэкстрактивных примесей проводят по 9.2.

9.1.5. Экстракция клотианидина из образцов масла

Образец масла массой 5 г вносят в делительную воронку вместимостью 100 см³, добавляют 15 см³ гексана, перемешивают. К раствору добавляют 50 см³ 80 %-го водного метанола и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После разделения фаз декантируют водно-мстанольный слой в круглодонную колбу через слой в<ггы. помещенной в конусную воронку. Маслянистый остаток повторно обрабатывают 50 см³ 80 %-го водного метанола и водно-мстанольныс экстракты объединяют. Дальнейшую очистку экстракта от коэкстрактивных примесей проводят по 9.2.

Приготовление водного раствора метанола с массовой долей 80 %.

В мерну то колбу вместимостью 500 ем³ количественно переносят 400 см³ метанола. Объем раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой.

Срок хранения - 1 неделя.

9.2. Очистка жстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Отобранные аликвоты экстрактов почвы и растительного материала (9.1.2. 9.1.3 и 9.1.4). а также экстракт масла (9.1.5) у паривают на ротационном ваку умном испарителе до водного остатка объемом 3—5 см³ при температуре 40 °С. К водному остатку приливают 20 см³ деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительну ю воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2-х мину т. После разделения фаз нижний органический слой собирают в делительну ю воронку вместимостью 250 см³, а водну то фазу экстрагируют еще дважды, использу я по 30 см³ хлористого метилена. К объединенной дихлорметановой фракции в делительной воронке приливают 25 см³ водного раствора углекислого калия с молярной концентрацией 0.05 моль/дм³. содержимое интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После разделения фаз нижний органический слой фильтру ют через слой безводного су льфата натрия в круг-

лодонную колбу и затем упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температу ре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.3.

9.3. Очистка экстракта па колонке с флоризилом

Сухие остатки в круглодонной колбе, полученные по 9.1.1 и 9.2. растворяют в 3 см³ этилацетата. помещая в ультразвуковую ванну на 1 минуту. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.4. Колбу обмывают 5 см³ этилацетата. раствор этилацетата также наносят на колонку. Колонку промывают 35 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Клотианидин элюируют с колонки 25 см³ ацетонитрила непосредственно в грушевидную колбу. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток экстракта почвы растворяют в 1 см³, воды и семян рапса в 2 см³, а ботвы и корнеплодов сахарной свеклы, зеленой массы и масла рапса в 5 см³ подвижной фазы хтя ВЭЖХ. раствор помещают в ультразвуковую ванну на I мину ту и анализируют на содержание клотн-анидина по 10.

Полнота извлечения клотианнднна при проведении всех операций подготовки пробы не менее 84 %.

10. Выполнение измерений

10.1.    В инжектор хроматографа вводят 20 мм³ очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1.1—9.1.5), анализируют при условиях (7.2) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.

10.2.    Дтя каждого образца воды, почвы, зеленой массы рапса, ботвы и корнеплодов сахарной свеклы, семян и масла рапса повторяют операции по 9.1—9.3. 10.1.

11. Обработка результатов измерений

11.1. Дтя обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации «МультиХром хтя Windows», версия 1.5х.

Альтернативная обработка результатов.

По градуировочной характеристике находят значение массовой концентрации клотианидина в экстрактах. С. мкг/см³.

Массовую концентрацию клотианидина .V. мг/дм³. в образцах воды рассчитывают по формуле (2)

МУК 4.1.2668—10,4.1.2675—4.1.2679—10, 4.1.2683—10, 4.1.2684—10, 4.1.2687—10, 4.1.2690—10, 4.1.2706—4.1.2709—10,4.1.2768—10 Содержание

Определение остаточных кол и мест кж>1ианилина в воде, почве, зеленой массе, семенах и масле рапса, ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2668    10.....................4

Методика выполнения измерений остаточного содержания грифлоксистро-бина и его метаболита в ягодах и соке винограда методом высокоэффективной

жидкостной хромаю! рафии: МУК 4.1.2675—10......................................................20

Методика выполнения измерений остаточного содержания тиаклоприда в зеленой массе, семенах и масле рапса, ягодах и соке винограда методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2676—10...................37

Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса

методом капиллярной газожидкостной хромаю! рафии: МУК 4.1.2677—10.........53

Определение остаточных количеств Псноксулама в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии:

МУК 4.1.2678—10.......................................................................................................70

Определение остаточных количеств гидразида малеиновой кислоты

(малеинового гидразида) в почве методом высокоэффективной жидкостной

хроматографии: МУК4.1.2679—10 ........................................................................... 89

Методика выполнения измерений остаточного содержания гриадимснола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2683—10.........................................................................103

Методика выполнения измерений остаточного содержания тебуконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2684    10.........................................................................117

Методика выполнения измерений остаточного содержания мезосульфурон-метила в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хрома юг рафии:

МУК'4.1.2687—10.....................................................................................................131

Методика выполнения измерений остаточного содержания спироксамина в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК 4.1.2690—10.........................................................................149

Определение остаточных количеств эмамектина (эмамектина бензоата) в воде, почве, капусте, томатах, ягодах винограда и виноградном соке методом

высоко эф<|)ек1 и иной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2706— 10.................163

Измерение концентраций пикокеистробина в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом капиллярной газожидкостной

хроматографии: МУК4.1.2707—10.........................................................................180

Определение остаточных количеств шрама в растительном масле методом

газохроматографического парофазного анализа: МУК 4.1.2708- 10....................192

Измерение концентраций квинмерака в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операюров методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии: МУК 4.1.2709—10.................204

Определение остаточных количеств имидаклоприда в соке яблок и черной смородины, в масле кукурузы высокоэффективной жидкостной хромаю! рафии: МУК 4.1.2768—10.........................................................................216

3

МУК 4.1.2668—10

Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 176.8 °С. Давление паров при 25 °С: 1.3 х К) мПа. Коэффициент распределения в системе н-октанол/вода: Kow log Р = 0.7 (при 25 °С). Растворимость (г/дм³) при 20 °С: ацетон - 15.2: метанол - 6.26: этилацегат - 2.03: ди-хлорметан - 1.32: гептан - 0.001: вода - 0,327.

В почве в аэробных условиях клотианидин разрушается очень медленно: DT₅₀= 148—1 155 дней.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - > 5 000 млн ¹ (мг/кг): острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс - > 2 000 млн ¹ (мг/кг):    острая    ингаляционная    токсичность (LC50) для крыс -

>6 141 мг/м³ воздуха. Клотианидин не оказывает раздражающего действия на кожу кролика. LC50 для рыб - >100 мг/дм (96 ч).

Инсектицид нетоксичен для птиц, дафний, земляных червей, почвенных микроорганизмов и опасен для пчел при прямом контакте.

Гигиенические нормативы для клотианидина в России:

ПДК в воде - 0.5 мг/дм³: ОДК в почве - 0.1 млн ¹ (мг/кг); МДУ в семенах рапса - 0.04 млн ¹ (мг/кг). корнеплодах сахарной свеклы -0.5 млн ¹ (мг/кг). масле рапса - 0.1 млн ¹ (мг/кг).

Облает ь применения

Клотианидин - инсектицид нервно-паралитического действия, обладает широким спектром активности против сосущих, грызущих и почвенных насекомых на овощных культурах, фруктовых и цитрусовых деревьях, рисе, кукурузе и рапсе. Вещество обладает системной активностью и может использоваться как в качестве протравителя, так и для обработки почвы и надземных органов растений.

Применяется в России в качестве инсектицида для предпосевного протравливания семян сахарной свеклы и рапса при норме расхода 20 и 10 кг д.в./т семян, соответственно, а также в качестве составного компонента комбинированных протравителей.

2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и се составляющих) результатов измерений нс превышает значений, приведенных в табл. 1.

5

Таблица 1

Дна in ш- руемый объект Диапазон измерений содержания клотианилина., млн'г 11оказа-тель точности (границы относительной iioipein-ности), ±6,% при Р - 0,95 1 Указатель повторяемости (относительное сред-иеквадра-шческое отклонение повторяемости), &г> % 11оказатсль восироиз-води мости (относи-тельное среднеквад-ратическое отклонение воспроизводимости), oR, % 11 редел повторяемости, г, %, Р = 0.95 п = 2 Критическая разность дтя результатов анализа, полученных в двух лабораториях. CDo,95, % (///=/ь= 2) Вода От 0,0010 до 0,005 вкл. (мг/дм3) 60 15 22 42 53 Св. 0,005 до 0,010 вкл. (мг/дм3) 55 12 16 33 38 11очва От 0,010 до 0,05 вкл. 60 15 22 42 53 Св. 0,05 до 0,10 вкл. 56 9 18 25 47 Зеленая масса рапса От 0,05 до 0,10 вкл. 57 13 20 36 49 Св. 0,10 до 0,5 вкл. 35 8 12 22 29 Семена рапса Or 0,020 до 0,10 вкл. 47 10 15 28 37 Св. 0,10 до 0,20 вкл. 29 6 11 17 28 Масло рапса От 0,05 до 0,10 вкл. 50 12 21 33 53 Св. 0,10 до 0,5 вкл. 25 7 11 19 27 Ьо та сахарной свеклы От 0,05 до 0,10 вкл. 48 14 21 39 51 Св. 0,10 до 0,5 вкл. 30 10 15 28 37 Корне плоды сахарной свеклы От 0,05 до 0,10 вкл. 58 16 24 44 59 Св. 0,10 до 0,5 вкл. 30 9 14 25 35

МУК 4.1.2668—10

3. Метод измерении

Метод основан на экстракции клотианидина из воды хлористым метиленом, из почвы и масла рапса водным раствором метанола, из ботвы и корнеплодов сахарной свеклы, зеленой массы и семян рапса водным ацетоном, очистке экстрактов, содержащих клотианидин. от коэкс-трактивных компонентов перераспределением их в системе нссмсшива-ющихся растворителей, а также на колонке с флоризилом, с последующим измерением содержания клотианидина в очищенных экстрактах на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектированием и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.1. Средства и чмерений Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирма «Кпаиег». Германия)

Весы лабораторные общего назначения модели ВЛА-2(Х) с наибольшим пределом взвешивания 200 г

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г Набор гирь

Колбы мерные 2-100-2. 2-1000-2 Пипетки градуироваиные 1-1-2-1; 1-1-2-2;

1-2-2-5; 1-2-2-10

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0.2    ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные 1-25:1-50; 1-100; 1-500;

1-1000    ГОСТ 1770-74

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью 100 мм³, модель Microliter # 1710 («Hamilton».CLLIA)

Клотианидин. с содержанием основного вещества 99.4 % (Байер. Германия)

4.2. Реактивы

Ацетон, квалификации чда Ацетонитрил для хроматографии, квалификации хч

7

Вода бидистиллированная или деионизованная н-Гсксан. квалификации хч Калий углекислый, квалификации хч Метилен хлористый (дихлорметан). квалификации хч

Метиловый спирт (метанол), квалификации хч Натрий сернокислый, безводный, квалификации хч

Этиловый эфир уксусной кислоты, квалификации ч

■4.3. Вспомогательные устройства, материалы Аппарат для встряхивания типа АВУ-бс    ТУ 64-1-2851—78

Ванна ультразвуковая, модель D-50. фирма «Branson Instr. Со.» (США)

Вата медицинская Воронка Бюхнера

Воронки делительные, вместимостью 100. 250 см³ ГОСТ 25336-82 Воронки конусные диаметром 30—37 мм    ГОСТ 25336-82

Г омогенизатор    МРТУ 42-1505—65

Колба Бунзена, вместимостью 250 см³    ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 100 и 250 см³    ГОСТ 9737-93

Колбы плоскодонные, вместимостью 250 см³ ГОСТ 9737-93 Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см и внутренним диаметром 8—

10 мм

Колонка хроматографическая, стальная, длиной 15 см. внутренним диаметром 4 мм. содержащая Диасфср 110-С 18 (5 мкм). (ЗАО «БиоХнмМак СТ». Москва)

Насос водоструйный вакуумный Ротационный вакуумный испаритель или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы «Buchi» (Швейцария)

Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 30—60 меш («Мерк».

Г ермания)

Стаканы химические, вместимостью 100 и 500 см³ ГОСТ 25336-82 Стекловата

Установка для перегонки растворителей

с дефлегматором    ГОСТ 9737-93 (ИСО 641 -75)

МУК 4.1.2668—10

Фильтры бумажные «красная лента».

обезболенные    ТУ 6-09-2678—77

или фильтры из хроматографической бумаги Ватман ЗММ

Примечание: Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологические характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.

5. Требования безопасности

5.1.    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76. ГОСТ 12.1.005-88.

5.2.    При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

5.3.    При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019—79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5.4.    Помещение лаборатории должно бьггь оборудовано приточновытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.51313—03 и ГН 2.2.5.2308—07.

6. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исслсдоватсля с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовкн допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

7. Условия измерений

7.1.    При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в

следующих условиях:

-    температура воздуха (20 ± 5) °С.

-    атмосферное да&тенис (84—106) кПа

-    относительная влажность воздуха нс более 80 %.

7.2.    Условия хроматографического анализа

Температу ра колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (20 : 80. по объему)

Скорость потока элюента: 0.7 см³/мин

9

Время удерживания клотианидина: 9.2 мин Рабочая длина волны: 270 нм Чувствительность: 0.01 сд. абсорбции на шкалу Объем вводимой пробы: 20 мм³ Линейный диапазон детектирования 1—10 нг

8. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. подготовка колонки с флоризилом. кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа.

8.1. Приготовление раствора углекислого ка ши с молярной концентрацией 0,05 моль/дм

В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 6.9 г К₂СОз. приливают 100 см³ деионизованной воды, перемешивают до растворения осадка, доводят объем водой до метки, перемешивают.

Срок хранения - 1 неделя.

8.2. Подготовка подвижной фиш для ВЭЖХ В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 200 см³ ацетонитрила. 800 см³ деионизованной воды, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

Срок хранения - 1 неделя.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки Промывают колонку подвижной фазой, приготовленной по 8.2. при скорости подачи растворителя 1 см/мин не менее часа.

8.-4. Подготовка колонки с флоризилом для очистки жстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—10 мм помещают тампон из стекловаты и затем в нее выливают суспензию 10 г флоризила в 10 см³ этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помешают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 см³ этилацетата со скоростью 1—2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

8.5. Определение объёма имен та, необходимого для полного вымывания к. ютианидина из колонки с флоризилом

При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят определение объёма элюента. необходимого для полного вымывания клотианидина из колонки с флоризилом.