Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование _Российской    Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств изоксадифен-этила и изоксадифена в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2547—09

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств изоксадифен-этила и изоксадифена в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2547—09

МУК 4.1.2547—09

Стекловата

Фильтры бумажные «красная лента»,

Обеззоленные    ТУ    6-09-2678

Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60—80 меш (Мерк, Германия)

Шприц для ввода образцов для газового Хроматографа вместимостью 1—10 мм³ (Hamilton, США)

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313—03 «Предельно-допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

•    процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ±5 ) °С и относительной влажности не более 80 %;

•    выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

МУК 4.1.2547—09

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонки с флоризилом, установление градуировочной характеристика

7.L Приготовление рабочих растворов и материалов

7.1.1.    Приготовление 10%- и 40%-ного растворов гидроксида калия. Растворы готовят под тягой, строго соблюдая технику безопасности.

В химический стакан вместимостью 250 см³ помещают соответственною или 40 г гидроксида калия, приливают 90 или 60 см³ дистиллированной воды и осторожно перемешивают до полного растворения осадка.

1.1.2.    Приготовление 5 %-го раствора серной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1 000 cm^j помещают 500^-600 см³ дистиллированной воды, по каплям вносят 52,5 см³ концентрированной серной кислоты, перемешивают, доводят объем водой до метки и вновь перемешивают.

7.1.3.    Приготовление 0,1М водного раствора ацетата аммония. В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ помещают 7,71 г ацетата аммония, приливают 200 см³ дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения осадка. В раствор вносят 2 см³ ледяной уксусной кислоты, доводят объем водой до метки и перемешивают.

7.1.4.    Приготовление 0_}1 N раствора соляной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1 000 см³ , содержащую 200—300 см³ дистиллированной воды, добавляют 8,5 см³ соляной кислоты (уд. вес 1,18), перемешивают и доводят объем водой до метки.

7.1.5.    Приготовление 1%-ного раствора уксусной кислоты. Переносят 10 см³ ледяной уксусной кислоты в мерную колбу вместимостью 1 000 см³, добавляют 500 см³ дистиллированной воды, перемешивают и доводят объем водой до метки.

7.1.6.    Очистка флоризипа. Флоризил встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и зат$м фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Сорбент на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 ч.

7.1.7.    Приготовление эфирного раствора диазометана. В двугорлой круглодонной колбе вместимостью 100 см³, снабженной капельной воронкой, растворяли 5 г Ы-метил-Н-нитрозо-п-толуолсульфонамида в 30 см³ смеси диэтилового эфира и метанола (1 : 1, по объему). Колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого снабжен аллонжем с отводом, погруженным в слой диэтилового эфира (100 см³) в

11

МУК 4.1.2547—09

приемной колбе, охлаждаемой смесью льда и соли. В воронку помеща-ют 15 см³ 40 %-го раствор^ гидроксида калия. Реакцию начинают добавлением в реакционный сосуд раствора гидроксида калия по каплям, избегая бурного вскипания реакционной массы. Об окончании реакции судят по прекращению выделения диазометана в диэтил овый эфир. Раствор диазометана хранят § колбе с притертой пробкой в холодильнике не более пяти дней.

7.2 Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8—П1 мм помещают тампон из стекловаты и затем в нее выливают суспензию 5 г фл<зр_Изила в 10 см³ гексана. Дают растворителю стечь до верхнего слоя сорбента и помещают на него слой безводного сернокислого натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 см³ гексана, после чего она готова к работе.

7.2 Проверка хроматографического поведения изоксадифен-этила изоксадифен-мемила на колонке с флоризилом При отработке методики или поступлении новой партии флоризила проводят изучение поведения анализируемых веществ на колонке. В стакан вместимостью 50 см³ помещают 1 см³ стандартного раствора изоксадифен-этила в смеси гексан-этилацетат (1 : 1, по объему) с концентрацией 10 мкг/см , добавляют 4 см³ гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 30 см³ гексана со скоростью 1—2 кап./сек., элюат отбрасывают. Затем через колонку пропускают 40 см³ смеси гексан-этилацетат (85 : 15, по объему), отбирая последовательно по 5 см³ элюа-та. Каждую фракцию выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С Досуха, остатки растворяют в 1 см³ смеси гексан-этилацетат (1:1), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание изоксадифен-этила по п, 9.5. По результатам обнаружения изоксадифен-этила в каждой фракции определяют объем смеси гексан-этилацетат (§5 : 15, до объему), необходимый для полного вымывания антидота с колонки.

Аналогичным образов проводится проверка хроматографического поведения метильного производного изоксадифена (изоксадифен-метил) на колонке с флоризилом.

12

МУК 4.L2547—09

7.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа, и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °С и скорости газа-носителя 2 см³/мин в течение 8—10 ч.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1.    Исходный раствор изоксадифен-этила для градуировки (концентрация 200 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0, 020 г изоксадифен-этила (аналитический стандарт), растворяют в 40—50 см³ ацетона, доводят объем этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше — 18 °С в течение 3 месяцев.

7.5.2.    Раствор изоксадифен-этила № 1 для градуировки (концентрация 20 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора изоксадифен-этила с концентрацией 200 мкг/см³(п. 7.5.1), разбавляют смесью гексан-этилацетат (1:1, по объему) до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов №№ 2—5.

Для приготовления проб воды, почвы, зеленой массы и зерна с внесением при оценке полноты извлечения изоксадифен-этила из исследуемых образцов используют ацетоновые растворы антидота с концентрациями 1 и 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и ацетоновые растворы изоксадифен-этила хранят в морозильной камере при температуре не выше - 18 °С в течение месяца.

7.5.3.    Рабочие растворы №№ 2—5 изоксадифен-этила для градуировки (концентрация (0,2—2,0мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³помещают 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см³ градущэовочного раствора № 1 изоксадифен-этила с концентрацией 20 мкг/см³ (п. 7.5.2), доводят объем смесью гексан-этилацетат (1 : 1) до метки, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы №№ 2—5 с концентрацией антидота 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 мкг/см³ соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.5.4.    Исходный раствор изоксадифена для градуировки (концентрация 500 мкг/см ). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0, 051 г изоксадифена (аналитический стандарт), растворяют в 40— 50 см³ метанола, доводят объем этим же растворителем до метки, тща-

тельно перемешивают. Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше - 18 °С в течение месяца.

7.5.5.    Раствор изоксадифена № 1 для градуировки (концентрация 200 мкг/см⁵). В мерную колбу вместимостью 50 см³ помещают 20 см³ исходного раствора изоксадифена с концентрацией 500 мкг/см³(п. 7.5.4), разбавляют метанолом до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов метильного производного изоксадифена.

Для приготовления проб воды, почвы, зеленой массы и зерна с внесением при оценке полноты извлечения изоксадифена из исследуемых образцов используют растворы метаболита в смеси метанол-1 %-ный раствор СН₃СООН (1:1, по объему) с концентрациями 1 и 10 мкг/см³, а для приготовления проб масла используют ацетоновые растворы изоксадифена с концентрациями 1 и 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор № 1 и метанольные растворы изоксадифена хранят в морозильной камере при температуре не выше - 18 °С в течение месяца, а ацетоновые растворы в течение трех дней.

7.5.5.    Приготовление градуировочных растворов метильного производного изоксадифена. Стандартные растворы метильного производного изоксадифена используют для построения градуировочного графика. В грушевидную колбу вместимостью 50 см³ отбирают 1 см³ градуировочного раствора изоксадифена Х° 1, приливают 4 см³ эфирного раствора диазометана (п. 7.1.7), перемешивают и колбу закрывают пробкой. Колбу периодически встряхивают. Через 30 мин содержимое колбы упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. К сухому остатку приливают 10 см³ смеси гексан-этилацетат (1:1, по объему), перемешивают и раствор метильного производного изоксадифена переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³. Грушевидную колбу обмывают еще два раза порциями по 10 см³ смеси гексан-этилацетат (1 ; 1, по объему), которые также переносят в мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят этой же смесью до метки и получают рабочий раствор с концентрацией 4,0 мкг/см³ (по изоксадифену). Из него последовательным разбавлением в смеси гексан-этилацетат (1 : 1) готовят рабочие растворы для градуировки с концентрациями 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 мкг/см³. Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ*с) от концентрации изоксадифен-этила и изоксадифена в

14

МУК 4.1.2547—09

растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 рабочим растворам для градуировки (пл. 7.5.3, 7.5.6).

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб.

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79 г.) и правилами, определенными ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 26950—89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ Р 50436-92 «Зерновые. Отбор проб зерна».

Пробы воды анализируют в день отбора или замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре - 18 °С не более 2 недель. Образцы почвы подсушивают на воздухе в темноте, помещают в герметичную полиэтиленовую тару и хранят в холодильнике при температуре 4—6 °С не более 4 недель. Для длительного хранения образцы почвы замораживают и хранят при температуре - 18 °С. Пробы зеленой массы кукурузы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при - 18 °С. Пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0—4 °С.

Перед анализом образцы воды фильтруют через неплотный бумажный фильтр, образцы почвы просеивают через сито с диаметром отверстий 1 мм, зерно размалывают на мельнице, а зеленую массу измельчают ножом или ножницами.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция изоксадифен-этила и изоксадифена

9J.L Вода. 200 см³ предварительно отфильтрованной воды (pH < 6) помещают в делительную воронку вместимостью 500 см³, добавляют 30 см³ гексана и интенсивно встряхивают воронку в течение 2 мин. После разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют

15

через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу. Водную фазу экстрагируют гексаном еще дважды порциями по 30 см³. Объединенную гексановую фракцию, содержащую изоксадифен-этил, упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Далее проводят очистку экстракта по п. 9.4.

Водную фазу, оставшуюся после экстракции гексаном, переносят в химический стакан вместимостью 500 см\ подкисляют 5 %-ной H₂S0₄ до pH 1 и переносят в делительную воронку вместимостью 500 см³. Добавляют 30 см³ хлористого метилена и интенсивно встряхивают воронку в течение 1 мин. После разделения фаз органический слой отделяют и фильтруют через слой ваты в круглодонную колбу вместимостью 250 см\ а оставшуюся водную фазу еще дважды обрабатывают хлористым метиленом порциями по 30 см³. Объединенную дихлорметановую фракцию, содержащую изоксадифен, упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Для удаления следов влаги к остатку двукратно приливают по 2 см³ ацетонитрила и упаривают досуха при указанных выше условиях. Дальнейшую обработку экстракта проводят по п. 9.3.

9.1.2.    Почва. Образец воздушно-сухой почвы массой 20 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетонитрил-0,1М раствор ацетата аммония (7:3, по объему), перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см^. Осадок переносят в колбу и повторно экстрагируют 50 см³ смеси ацетонитрил-0,1М раствор ацетата аммония (7 : 3) в течение 30 мин при встряхивании. Суспензию фильтруют и осадок на фильтре промывают 50 см³ ацетонитрила. Экстракты и промывную жидкость объединяют, переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 см³ и упаривают на роторном вакуумном испарителе до водного остатка (около 30 см³). К водному остатку приливают деионизованную воду до объема 40 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.1.3.    Зеленая масса. Навеску (20 г) измельченного растительного материала помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 см\ приливают 100 см³ смеси ацетонитрил-0,Ш НС1 (8 : 2, по объему) и гомогенизируют 3 мин при 10 000 об/мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 100 см³ приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его

16

МУК 4.1.2547—09

часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 10 см³ гексана, интенсивно встряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 см³, упаривают до водного остатка (5—7 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. К водному остатку добавляют деионизованную воду до объема 40 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.1.4.    Зерно. Образец размолотого зерна массой Юг помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 100 см³ смеси ацетонитрил-0,Ш НС1 (8 :2, по объему) и колбу помещают на аппарат для встряхивания на 40 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу Бунзена вместимостью 250 см³. Осадок на фильтре промывают 50 см³ приведенной выше смеси. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 10 см³ гексана, интенсивно встряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в круглодонную колбу вместимостью 100 см³, упаривают до водной фазы (7—10 см³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. К водному остатку добавляют деионизованную воду до объема 40 см³. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.2.

9.1.5.    Масло. К образцу масла массой 5 г, помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 см³, добавляют 10 cm^j гексана и 50 см³ ацетонитрила, перемешивают и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Эмульсию переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³ и после разделения фаз декантируют ацетонитрильный слой в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 30 см³ ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации ацетонитрильного слоя вату промывают 10 см³ ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фазу, содержащую изоксадифен, переносят в делительную воронку вместимостью 250 см³, добавляют 15 см³ гексана и воронку встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 см³, упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. К остатку приливают 2 см³ метанола, перемешивают в течение минуты и раствор декантируют в грушевидную колбу вместимостью

50 см³. Маслянистый остаток еще дважды обрабатывают метанолом порциями по 2 см³. Объединенный метанольный раствор упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую обработку экстракта проводят по п. 9.3.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Водный остаток, полученный по пп. 9.1.2, 9.1.3 и 9.1.4, переносят в химический стакан вместимостью 100 см³, доводят его pH до ~5 путем добавления 5 % H₂S0₄ или 10 % КОН и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. В воронку вносят 30 см³ гексана и смесь интенсивно встряхивают в течение 1 мин. После разделения фаз верхний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 см³. Экстракцию водной фазы повторяют еще два раза, используя 30 и 20 см³ гексана. Объединенную гексановую фракцию, содержащую изоксадифен-этил, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °С, Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 9.4.

Оставшуюся после обработки гексаном водную фазу переносят в химический стакан, подкисляют 5 % H₂S0₄ до pH 1 и переносят в делительную воронку вместимостью 100 см³. Приливают 30 см³ хлористого метилена и воронку встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют дихлорметановую фракцию, которую фильтруют в круглодонную колбу вместимостью 100 см³ через слой ваты, помещенный в конусную воронку. Экстракцию водной фазы повторяют еще два раза, используя 30 и 20 см³ хлористого метилена. Объединенный ди-хлорметановый экстракт, содержащий изоксадифен, упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Для удаления следов влаги к остатку двукратно приливают по 2 см³ ацетонитрила и упаривают досуха при указанных выше условиях. Дальнейшую обработку экстракта проводят по п. 9.3.

9.3. Метилирование

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по пп. 9.1.1,

9.1.5, 9.2 и содержащий изоксадифен, растворяют в 1 см³ метанола, добавляют 4 см³ эфирного раствора диазометана (п. 7.1.7), перемешивают и колбу закрывают пробкой. Колбу периодически встряхивают. Через 30 мин содержимое колбы упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С и остаток подвергают очистке на колонке с флоризилом по п. 9.4.

18

МУК 4.1.2547—09

9.4. Очистка экстракта на колонке с флоризилом Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по пп. 9.1.1, 9.2. и 9.3, растворяют в 3 см³ смеси гексан-этилацетат (9 : 1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и раствор наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают 2 см³ приведенной выше смеси, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 30 см³ гексана со скоростью 1—2 кап./сек, элюат отбрасывают. Изоксадифен-этил и метильное производное изоксадифена (изоксади-фен-метил) элюируют с колонки 30 см³ смеси гексан-этилацетат (85 : 15, по объему), собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 50 см³. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухие остатки экстрактов воды и почвы растворяют в 1 см³, зерна в 1,25 см³, зеленой массы и масла в 2,5 см³ смеси гексан-этилацетат (1 : 1, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин, и анализируют на содержание изоксадифен-этила и изоксадифен-метила по п. 9.5.

9.4. Условия хроматографирования

Хроматограф «Кристалл 2 000М» с термоионным детектором на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х Ю'^и г/см³ или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1 (типа SE-30), длина 20 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, фирма Phenomenex (США).

Температура термостата колонки программированная: от 150 °С (2 мин) со скоростью 20 °С/мин до 230 °С (0 мин.); со скоростью 5 °С/мин до 240 °С (5 мин.); со скоростью 20 °С/мин до 260 °С (10 мин).

Температура испарителя - 270 °С, детектора - 300 °С.

Расход газов: газа-носителя (азот) - 2,2 см³/мин; подцувочного газа через детектор - 36 см³/мин; водорода и воздуха к ТИД - 12 и 180 см³/мин соответственно

Деление потока: 1 : 0,9.

Время удерживания изоксадифен-этила: 7,54 мин ± 2 %.

Время удерживания изоксадифен-метила: 7,25 мин ± 2 %.

Объем вводимой пробы: 1 мм.

Минимально детектируемое количество изоксадифен-этила (а также изоксадифен-метила): 0,2 нг.

Линейный диапазон детектирования; 0,2—2,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

19

ББК 51.21 060

060 Определение остаточных количеств изоксадифен-этила и изоксадифена в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии:,—М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009.—24 с.

1.    Разработаны Всероссийским Научно-исследовательским институтом фитопатологии (Л. В. Дубовая, А. М. Макеев).

2.    Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 июня 2009 г. Ка 2).

3.    Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г. Г. Онищенко 9 сентября 2009 г.

4.    Введены в действие с 1 декабря 2009 г.

5.    Введены впервые.

ББК 51.21

Технический редактор А В. Терентьева

Подписано в печать 11.11.09 Формат 60x88/16    Печ.    л.    1,5

Тираж 200 экз.

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 127994, Москва, Вадковский пер., д. 18/20

Оригинал-макет подготовлен к печати и тиражирован отделом издательского обеспечения Федерального центра гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора 117105, Москва, Варшавское ш., 19а Отделение реализации, тел ./факс 952-50-89

© Роспотребнадзор, 2009 © Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2009

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,0 мкг/см³, разбавляют смесью гексан-этилацетат (1 : 1).

10. Обработка результатов анализа

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик », версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание изоксадифен-этила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

^-содержание изоксадифен-этила в пробе, мг/дм³, мг/кг;

Stf- - площадь пика стандарта, мВ*с;

S_nP - площадь пика образца, мВ*с;

А - концентрация стандартного раствора изоксадифен-этила, мкг/см³;

V- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; т - масса анализируемой части образца (см³, г) /для воды -200 см³; для почвы - 20 г,

для зеленой массы, зерна и масла - 5 г.

Содержание изоксадифена рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

X- содержание изоксадифен-этила в пробе, мг/дм³, мг/кг;

S_CT - площадь пика стандарта, мВ*с;

S_np - площадь пика образца, мВ*с;

А - концентрация стандартного раствора изоксадифен-этила, мкг/см³;

V- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³; т - масса анализируемой части образца (см³, г) /для воды - 200 см³; для почвы - 20 г,

для зеленой массы, зерна и масла - 5 г.

При расчете содержания изоксадифена в эквивалентах изоксадифен-этила полученное значение ^умножают на 1,10.

МУК 4.1.2547—09

Содержание

1.    Метрологическая характеристика метода.............................................................6

2.    Метод измерений....................................................................................................7

3* Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и

материалы................................................................................................................8

3.1.    Средства измерений...............................................................................8

3.2.    Реактивы.......................................................................... 8

3.3.    Вспомогательные устройства, материалы...............................................9

4.    Требования безопасности.....................................................................................10

5.    Требования к квалификации операторов............................................................10

6.    Условия измерений...............................................................................................10

7.    Подготовка к выполнению измерений................................................................11

7.1.    Приготовление рабочих растворов и материалов...................................11

7.2.    Подготовка колонки с флоризилом для очистки экстракта....................12

7.3.    Проверка хроматографического поведения изоксадифен-этила

изоксадифен-метила на колонке с флоризилом....................................12

7.4.    Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки..........13

7.5.    Приготовление градуировочных растворов...........................................13

7.6.    Установление градуировочной характеристики.....................................14

8.    Отбор и хранение проб.........................................................................................15

9.    Выполнение определения.....................................................................................15

9.1.    Экстракция изоксадифен-этила и изоксадифена....................................15

9.2.    Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся

растворителей.....................................................................................18

9.3.    Метилирование....................................................................................18

9.4.    Очистка экстракта на колонке с флоризилом.........................................19

9.4.    Условия хроматографирования.............................................................19

10.    Обработка результатов анализа.........................................................................20

11.    Проверка приемлемости результатов параллельных определений................21

12.    Оформление результатов....................................................................................21

13.    Контроль качества результатов измерений.......................................................22

14.    Разработчики.......................................................................................................23

Приложение J. Полнота определения изоксадифен-этила в модельных

матрицах (п = 5)..............................................................................23

Приложение 2. Полнота определения изоксадифена в модельных

матрицах (п = 5)..............................................................................24

3

УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г. Г. Оншценко

9 сентября 2009 г.

Дата введения: 1 декабря 2009 г

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств изоксадифен-этила и изоксаднфена в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4 Л .2547—09

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации изоксадифен-этила и изоксадифена в воде в диапазоне 0,001— 0,01 мг/дм³, в почве в диапазоне 0,01—0,1 мг/кг, в зерне кукурузы в диапазоне 0,05—0,5 мг/кг, в зеленой массе и масле кукурузы в диапазоне 0,1—1,0 мг/кг.

Название вещества по ИСО: изоксадифен-этил.

Название вещества по ИЮПАК: этил-5,5-дифенил-2-изоксазолин-3-карбоксилат.

О

Эмпирическая формула: С^Н^ЫОз, Молекулярная масса:295,3.

МУК 4,1.2547—09

Химически чистый изоксадифен-этил представляет собой белый порошок. Температура плавления: 86—87 °С. Давление паров при 20 °С:

2,2 х 10'⁶ Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода:    #_ow

IogP^ 3,8. Растворимость (г/дм³) при 20 °С: н-гептан - 3,7, метанол -25—30, ацетон - 200—300, этил ацетат - 200—300.

Вещество стабильно при комнатной температуре, гидролитически нестабильно в нейтральной и в щелочной среде (DT₅₀ составляет 2,3 и 0,02 дня при pH 7 и 9).

В биологически активных почвах в аэробных условиях изоксадифен-этил быстро разрушается (DT₅₀ - 3,2—11,4 дня).

В воде, почве и растительном материале изоксадифен-этил быстро разрушается до более стабильного вещества - изоксадифена.

Краткая гигиеническая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD₅₀) для крыс 1 600—1900 мг/кг, острая дермальная токсичность (LD₅₀) для крыс > 2 000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность (LC₅o) для крыс > 5,04 мг/дм³ воздуха. Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки глаз кролика.

В России установлены следующие гигиенические нормативы.

ДСД - 0, Г мг/кг массы тела человека; ПДК в воде водоемов -0, 005 мг/дм³; ПДК в почве - 0,02 мг/кг; МДУ в зеленой массе, зерне и масле - 0,05 мг/кг.

Основной метаболит изоксадифен-этила: изоксадифен.

Название вещества по ИЮПК: 5,5-дифенил-2-изоксазолин-3-карбоновая кислота.

Эмпирическая формула: C^H^NO^

Молекулярная масса: 267,3.

Область применения.

Изоксадифен-этил является антидотом и используется для ослабления фитотоксического действия некоторых гербицидов из класса сулфо-нилмочевин на культурные растения. Механизм его действия связан с активизацией разрушения гербицидов в сельскохозяйственных культурах. Антидот входит в состав гербицидных препаратов, содержащих

5

МУК 4.1.2547—09

сульфонилмочевины, применяемых для уничтожения однолетних и многолетних злаковых и широколистных сорняков в посевах кукурузы. Расход антидота не превышает 45 г д.в./га.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п - 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±5, % Р = 0,95 Стандартное отклонение повторяемости, от, % Предел повторяемости, г, % Предел воспроиз водимости, р,% изо ксадифен-этил Вода от 0,001 до 0,01 вкл. 100 3,2 9,0 13,9 Почва от 0,01 до 0,1 вкл. 50 2,5 7 10,8 Зеленая масса от 6,1 до 1,0 вкл. 25 3,9 10,9 16,9 Зерно от 0,05 до 0,1 вкл. 50 4,1 11,5 17,8 более 0,1 до 0,5 25 2,8 7,8 12,1 изоксадш )ен Вода от 0,001 до 0,01 вкл. 100 2,8 7,8 12,1 Почва от 0,01 до 0,1 вкл. 50 4,0 11,2 17,3 Зеленая масса от 0,1 до 1,0 вкл. 25 3,3 9,2 14,3 более 0,1 до 0,5 25 2,3 6,5 10,0 Масло от 0,1 до 1,0 вкл. 25 2,9 8,1 12,6

б

МУК 4.1.2547—09

Таблица 2

Анализи руемый объект Метрологические параметры, Р = 0,95, п~ 20 Предел обнаружения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, 5,% Доверительный интервал среднего результата, ±, % изоксадифен-этил Вода 0,001 0,001—0,01 90,2 3,2 ±3,0 Почва 0,01 0,01—0,1 85,5 3,0 ±2,8 Зеленая ; масса 0,1 0,1—1,0 84,7 3,6 ±3,4 Зерно 0,05 0,05—0,5 84,3 3;5 ±3,3 изоксадифен Вода 0,001 0,001—0,01 88,5 2,9 ±2,7 Почва 0,01 0,01—0,1 85,5 4,0 ±3,8 Зеленая масса 0,1 0,1—1,0 83,9 3,3 ±3,1 Зерно 0,05 0,05—0,5 85,1 3,4 ±3,2 Масло о,! 0,1—1,0 ■ 82,2 2,8 ±2,7

2. Метод измерений

Методика основана на определении изоксадифен-этила и изокса-дифена с помощью капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД). Контроль изоксадифен-этила и его метаболита (в виде метального производного) в образцах осуществляется по содержанию веществ после их экстракции из воды соответственно гексаном и хлористым метиленом, из почвы, зеленой массы и зерна ку-курузы подкисленным водным ацетонитрилом, из масла ацетонитрилом, предварительной очистки экстракта перераспределением в системе не-смешивающихся растворителей, метилирования метаболита диазометаном и окончательной очистки экстрактов на колонке с флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

7

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3./. Средства измерений

Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ТИД (СКВ «Хроматэк», Россия)

Весы аналитические ВЛА-200 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ± 0,036 г ГОСТ 7328 Колбы мерные вместимостью

2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2    ГОСТ    1770

Меры массы    ГОСТ    7328

Пипетки градуированные 2 класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см³    ГОСТ    29227

Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5 см³    ГОСТ    1770

Цилиндры мерные 2 класса точности

вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1 000 см³    ГОСТ    1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Изоксадифен-этил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,7 % (Байер, Германия)

Изоксадифен, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 98,3 % (Байер, Г ермания)

Аммония ацетат

Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.

Вода дистиллированная или деионизованная н-Гексан, х.ч.

Калия гидроксид, ч.

Кислота серная концентрированная, х.ч. Кислота уксусная ледяная, ч.д.а.

Кислота хлористоводородная, х.ч. К-метил-К-нитрозо-п-толуолсульфонамид (Мерк, Г ермания) или N-нитрозо-метилмочевина