Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование ___Российской Федерации_

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств проквиназида в воде, почве, ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2268—07

Издание официальное

Москва • 2009

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств проквиназида в воде, почве, ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания

МУК 4.1.2268- 07

МУК 4.1.2268- 07

По окончании встряхивания пробу центрифугируют 5 минут при 4000 об./мин. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 см³ через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 см³ ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35°С.

Далее проводят очистку экстракта как описано в пункте 9.3.2..

9.3. Ягоды винограда

9.3.1. Экстракция

Навеску размятых ягод 10 г помещают в полипропиленовую банку, добавляют 50 см³ ацетонитрила и помещают на ультразвуковую ванну на 10 минут. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 см³ через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 см³ ацетонитрила, помещая на ультразвуковую ванну каждый раз по 10 минут. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35°С.

9.3.2. Очистка экстракта

К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 см³ ацетонитрила, омывают концентратор и помещают на 2 минуты на ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 100 мл воды, ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку.

Добавляют в воронку 5 граммов хлорида натрия, растворяют его путем встряхивания. Приливают 50 см³ диэтилового эфира и интенсивно встряхивают смесь в течение 1-2 мин. После разделения слоёв нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний эфирный переносят в чистый концентратор емкостью 250 см³, пропуская через воронку с безводным сульфатом натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют ещё дважды, используя для этого каждый раз 50 см³ диэтилового эфира. Эфирные экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на

11

МУК 4.1.2268- 07

ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35°С досуха.

Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 см³ и аликвоту 1 мм³ вводят в хроматограф.

9.4. Сок винограда

9.4,1. Экстракция

Навеску сока 10 г помещают в полипропиленовую банку. Растворяют 5 г хлористого натрия в 100 см³ воды, приливают раствор в банку с соком. Добавляют 50 см³ диэтилового эфира и помещают на ультразвуковую ванну на 10 минут. Далее экстракцию продолжают на встряхивателе в течение еще 10 минут. Экстракт переносят в делительную воронку и после полного разделения слоев нижний водный слой собирают в полипропиленовую банку, а верхний эфирный - в чистый концентратор объемом 250 см³, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 см³ диэтилового эфира, помещая на ультразвуковую ванну и встряхиватель каждый раз по 10 минут. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35°С.

Далее проводят очистку экстракта как описано в пункте 9.3.2..

9.5, Условия хроматографирования

Высокоэффективный газовый хроматограф «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4х 10 ^м г/см³ и приспособлениями для капиллярной колонки.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5 % фенилсилоксана и 95 % метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 300°С, испарителя - 260°С, программированный нагрев колонки с 220°С (выдержка 2 минуты) по 5 град/мин до 260°С.

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 20 см/с, давление 101,8 кПа.

Газ 2 (гелий) - 40 см³/мин: расход 0,5 см³/мин, сброс 1:80.

МУК 4.1.2268- 07

Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 см³/мин.

Абсолютное время удерживания Проквиназида - 8 мин 10 сек.

± 2%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах - 1,0 -0,02 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы почвы, ягод и сока винограда, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Проквиназида 0,2 мкг/см³, соответственно разбавляют. Образцы воды, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Проквиназида 1,0 мкг/см³, соответственно разбавляют.

Количественное определение Проквиназида проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Проквиназида с концентрацией 0,02 -1,0 мкг/см³.

10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Проквиназида рассчитывают по формуле:

Snp-А- V

Х= -хР

100- Sct•m

где X - содержание Проквиназида в пробе, мг/кг;

Sct - высота (площадь) пика стандарта, мВ;

Snp - высота (площадь) пика образца, мВ;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,

см³;

ш - масса анализируемого образца, г;

Р - содержание Проквиназида в аналитическом стандарте, %.

13

МУК 4.1.2268- 07

И. ПРОВЕРКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПАРАЛЛЕЛЬНЫХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

2|Х,-Х₂|100 (Х,+Х₂) -^г

где X), Х₂- результаты параллельных определений, мг/кг;

г- значение предела повторяемости (таблица 1), при этом г = 2.8

о_г.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Результат анализа представляют в виде:

(Х± А) мг/кг при вероятности Р= 0.95,

где X- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = 6*Х/100,

б - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее 0,02мг/кг»*

* - 0.02 мг/кг - предел обнаружения.

13. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-

МУК 4.1.2268-07

2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1.    Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2.    Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_л должна удовлетворять условию:

С_д= Д_л5с ⁺ АдЗс'»

где ± Д _njC(±Д „У) - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

Д*= ± 0,84 Д,

где Д - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

Д = 5*Х/100,

6 - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К, = Х'- Х-С_я,

где X', X, С_я среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

К = ^Л\х'+Л^/,Гх

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|KJ<K,    (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют.

При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, при-

15

МУК 4.1.2268-07

водящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R)

2-1Х,-Х₂|-100 (Xi + X₂)    "

где Х|, Х₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости ( в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

14. РАЗРАБОТЧИКИ

Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Калинина Т.С., ст. н. сотр., канд. с-х. наук, Рыбакова О.И. науч. сотр., Третьякова О.А., инженер.

ФГОУ ВПО Российский Государственный Аграрный Университет - МСХА имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (495) 976-37-68, факс: (495) 976-43-26.

16

МУК 4.1.2268- 07

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

24 сентября 2007 г.

Дата введения: 10 декабря 2007 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ, ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств проквиназида в воде, почве, ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Методические указания МУК 4.1.2268-07

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Проквиназида в воде в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/л; в почве, в ягодах и соке винограда в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Проквиназид.

Название по ИЮПАК: б-йодо-2-пропокси-З-пропил-ЗН-хиназо-лин-4-он.

Эмпирическая формула: C14H17IN2O2. Молекулярная масса: 372,21.

Агрегатное состояние: кристаллы.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

Давление насыщенного пара 9,0*10'²мПа при 24°С. ¹

МУК 4.1.2268- 07

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при 25°С: Ko_W lgP= 5,6.

Растворимость в органических растворителях: в ацетоне, ди-хлорметане, этилацетате, н-гексане >250, ацетонитриле 154+2,1 (все в

г/дм¹).

Проквиназид гидролитически стабилен при pH 4, 7, 9 , но быстро разлагается на свету с периодом полураспада DT₅₀ 0,03 дня.

Краткая токсикологическая характеристика: Проквиназид относится к мало опасным веществам по острой пероральной (ЛД50 для крыс - 4846 мг/кг), к умеренно опасным веществам по ингаляционной [ЛК₅₀ (4 час) для крыс >6100 мг/м¹ воздуха] и к мало опасным веществам по накожной (ЛД50 для кроликов > 5000 мг/кг) токсичности. Не раздражает кожу и слизистые оболочки глаз. Имеются ограниченные доказательства канцерогенного эффекта при хроническом воздействии.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,003 мг/кг/сут; ПДК в воде - 0,006 мг/дм¹; ОДК в почве -0,1 мг/кг; МДУ в винограде - 0,04 мг/кг.

Проквиназид - фунгицид контактного действия со специфичной активностью против ложномучнисторосяных грибов таких, как миль-дью на виноградной лозе.

Рекомендуется к применению в России для борьбы с мильдью на винограде с нормой расхода по действующему веществу до 50 г/га путем опрыскивания.

1. МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в Таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

4

МУК 4.1.2268- 07

Таблица /. Метрологические параметры для Проквиназида

Анализи руемый объект Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Показатель точности (граница относительной погрешности), ±6, % Р=0,95 Стандартное отклонение повторяемости, Or, % Предел повторяемости, г, % Предел воспроизводимости, R, % Вода Ниже 0,005 150 7 19 22 0,005 -0,01 100 5 14 17 0,01-0,1 50 3 9 11 Почва 0,02-0,1 50 3 9 11 0,1-0,2 25 3 9 11 Виноград ягоды 0,02-0,1 50 3 9 11 0.1-ОД 25 2 6 7 Виноград сок 0 S 1 о 50 3 9 11 0.1 -0,2 25 3 9 11

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (п = 20) приведены в Таблице 2.

Таблица 2. Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Проквиназида

Анализируемый объект Метрологические параметры, Р » 0,95, п = 20 Предел обнару жения, мг/кг Диапазон определяемых концентраций, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение, S, % Доверительный интервал среднего результата, А* . Вода 0,003 0,003 - 0,1 97,7 2,6 ±1,2 Почва 0,02 0.02 - 0,2 85,9 3,3 ±1,3 _ Виноград ягоды 0,02 0.02-0,2 86,4 4,1 ±1,7 Виноград сок 0,02 0,02 - 0,2 87,5 3.1 _±11_

5

МУК 4.1.2268- 07

2. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ

Метод основан на определении Проквиназида методом капиллярной ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из воды и сока винограда диэтиловым эфиром, из почвы и ягод винограда - ацетонитрилом, и очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

3. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ

3.1. Средства измерений

Весы аналитические «OHAUS», 111140.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности ± 0,038 г «ACCULAB» V600.

Колбы мерные на 25, 50, 100 см³, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц на 10 мм³, ТУ 2.833.106.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 см³, ГОСТ 20292-74.

Хроматограф газовый «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов (ЭЗД) с пределом детектирования по Линдану 4х 10‘¹⁴ г/см³ и приспособлениями для капиллярной колонки.

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 см³, ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Аналитический стандарт Проквиназид с содержанием 98,0 % д.в. (фирма Дюпон).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

6

МУК 4.1.2268- 07

Ацетон х.ч., ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Диэтиловый эфир, х.ч. ГОСТ 6262-79. н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Гелий, очищенный марки “А”, ТУ 51-940-80.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стандартный раствор Проквиназида в ацетоне - 1 мг/см³ (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

33. Вспомогательные устройства, материалы

8613-75.

Воронки делительные на 250 и 500 см³, ГОСТ 10054-75. Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма Буши;

Концентраторы грушевидные (конические) 250 см³, ГОСТ

10394-72

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5 % фенилсилоксана и 95 % метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард.

Насос диафрагменный FT. 19 фирмы KNF Neu Laboport.

Стаканы стеклянные на 100 см³, ГОСТ 6236-72.

Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см⁵, MPW Med.instraments.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

7

МУК 4.1.2268- 07

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

4.1.    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2.    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельнодопустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРОВ

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

При выполнении измерений соблюдают следующие условия: -процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20±5)°С и относительной влажности не более 80%.

-выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

8

МУК 4.1.2268- 07

7. ПОДГОТОВКА К ОПРЕДЕЛЕНИЮ

7.1. Приготовление рабочих растворов 7.7.7. Приготовление стандартных растворов

100 мг Проквиназида (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор № 1, концентрация 1 мг/ см³). Раствор хранится в холодильнике не более 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора № 1 ацетоном готовят стандартный раствор № 2 с концентрацией

10.0    мкг/см³, который может храниться в холодильнике не более 30 суток. Из стандартного раствора №2 путем последовательного разбавления готовят рабочие растворы для установки градуировочной характеристики с концентрациями: 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/см³.

7.2. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Проквиназида в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-и растворам для градуировки с концентрацией 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5;

1.0    мкг/см³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1).

8. ОТБОР ПРОБ И ХРАНЕНИЕ

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», № 2051-79 от 21.08.79 г., а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору

9

МУК 4.1.2268- 07

проб», ГОСТ 1743.01-83 «Почвы. Общие требования к отбору проб», ГОСТ 26950-89 «Почвы. Отбор проб», ГОСТ 25896-83 «Виноград свежий столовый. ТУ», ГОСТ 25892-83Е «Сок виноградный натуральный. ТУ».

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4°С не более 10 суток.

Пробы вино1рада хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0-4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С до 2-х лет.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

9.1. Вода

9.7.7. Экстракция и очистка экстракта

Пробу воды объемом 300 см³ помещают в делительную воронку, добавляют 50 см³ диэтилового эфира и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения слоев нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 см³, а верхний эфирный собирают в концентратор емкостью 250 см³ через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, используя каждый раз по 50 см³ диэтилового эфира. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35°С. Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 см³ ацетона и аликвоту 1 мм³ вводят в хроматограф.

9.2. Почва 9.2.7. Экстракция

Навеску почвы 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую банку объемом 250 см³, увлажняют 10 см³ воды. Добавляют 50 см³ ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе 45 минут.

1